本發(fā)明涉及一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的分離純化方法，特別是莫西菌素的純化方法。
背景技術(shù)：
莫西菌素，別名莫西克汀，英文名稱為moxidectin，白色或類白色無定形粉末，幾乎不溶于水，極易溶于乙醇（96%），微溶于己烷，是一種新型抗寄生蟲藥，是由鏈霉菌發(fā)酵的單一成分的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。
莫西菌素與其他大環(huán)內(nèi)酯類抗寄生蟲藥如伊維菌素和阿維菌素相比成分單一，有著更高的驅(qū)蟲活性和長效、安全等特性，尤其對(duì)線蟲(成蟲和幼蟲)和節(jié)肢動(dòng)物，在極低的劑量下就有很好的抗蟲活性，對(duì)犬、牛、綿羊、馬的線蟲和節(jié)肢動(dòng)物寄生蟲有高度驅(qū)除活性，已被廣泛用于治療奶牛、豬等動(dòng)物體內(nèi)外寄生蟲病。莫西菌素現(xiàn)有的制備工藝多是多次萃取、層析、結(jié)晶等，操作繁瑣，分離效果差，回收率低。專利《一種通過結(jié)晶作用純化莫西菌素的方法》（專利號(hào)：200410068440.7），采用結(jié)晶的方法純化莫西菌素，步驟繁瑣，要多次用到正己烷、正庚烷等有機(jī)溶劑；專利《莫西菌素的制備方法》（專利號(hào)：201510229838.2）公開的方法中要經(jīng)過保護(hù)反應(yīng)、氧化反應(yīng)、脫保護(hù)反應(yīng)和肟化反應(yīng)后才制得莫西菌素，過程復(fù)雜。因此本領(lǐng)域需要一種操作簡單、快速、高效、綠色環(huán)保的純化莫西菌素的方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種莫西菌素的分離純化方法，采用超臨界流體色譜系統(tǒng)分離純化莫西菌素，解決目前在純化莫西菌素的過程中存在的過程繁瑣等問題。該方法包括以下步驟：
（1）用乙腈溶解莫西菌素粗品，然后用微孔濾膜進(jìn)行過濾；
（2）配制夾帶劑（甲醇、乙醇、乙腈的混合物）；
（3）用超臨界流體色譜系統(tǒng)對(duì)過濾后的粗品進(jìn)行分離純化：色譜柱為內(nèi)徑為4.6mm~50mm，色譜柱內(nèi)裝有硅膠基質(zhì)類填料，流填料粒度5~75μm，流動(dòng)相為帶有一定比例夾帶劑的超臨界co2，用示差檢測器檢測，進(jìn)樣后在目標(biāo)峰處收集目標(biāo)餾分；
（4）將收集的目標(biāo)餾分旋蒸濃縮得到莫西菌素。
本發(fā)明的有益效果是采用超臨界流體色譜分離純化莫西菌素操作簡單、易控制，使用帶有少量夾帶劑的超臨界co2作為流動(dòng)相，綠色環(huán)保，得到的莫西菌素的純度高。
具體實(shí)施方式：
實(shí)施例1
（1）用乙腈溶解莫西菌素粗品，然后用0.45μm微孔濾膜進(jìn)行過濾；
（2）配制甲醇：乙醇：乙腈=40:40:20的夾帶劑；
（3）用超臨界流體色譜系統(tǒng)對(duì)過濾后的粗品進(jìn)行分離純化，具體方法為：色譜柱尺寸為φ10×250mm，柱內(nèi)裝有裸硅膠填料，填料粒度10μm，流動(dòng)相為超臨界co2：夾帶劑=88:12，流速3ml/min，流動(dòng)相體系平衡系統(tǒng)15min，進(jìn)樣1g，洗脫60min后開始接收目標(biāo)組分，然后使用超臨界co2：夾帶劑=60:40的流動(dòng)相進(jìn)行洗脫雜質(zhì)，采用示差檢測器檢測，收集目標(biāo)餾分；
（4）將收集的目標(biāo)餾分旋蒸濃縮得到莫西菌素，經(jīng)檢測純度達(dá)96.8%。
實(shí)施例2
（1）用乙腈溶解莫西菌素粗品，然后用0.45μm微孔濾膜進(jìn)行過濾；
（2）配制甲醇：乙醇：乙腈=38:38:24的夾帶劑；
（3）用超臨界流體色譜系統(tǒng)對(duì)過濾后的粗品進(jìn)行分離純化，具體方法為：色譜柱尺寸為φ20×250mm，柱內(nèi)裝有十八烷基硅烷鍵合硅膠填料，填料粒度15μm，流動(dòng)相為超臨界co2：夾帶劑=92:8，流速12ml/min，流動(dòng)相體系平衡系統(tǒng)15min，進(jìn)樣5g，洗脫62min后開始接收目標(biāo)組分，然后使用超臨界co2：夾帶劑=60:40的流動(dòng)相進(jìn)行洗脫雜質(zhì)，采用示差檢測器檢測，收集目標(biāo)餾分；
（4）將收集的目標(biāo)餾分旋蒸濃縮得到莫西菌素，經(jīng)檢測純度達(dá)96.6%。
實(shí)施例3
（1）用乙腈溶解莫西菌素粗品，然后用0.45μm微孔濾膜進(jìn)行過濾；
（2）配制甲醇：乙醇：乙腈=35:35:30的夾帶劑；
（3）用超臨界流體色譜系統(tǒng)對(duì)過濾后的粗品進(jìn)行分離純化，具體方法為：色譜柱尺寸為φ50×250mm，柱內(nèi)裝有二醇基硅膠填料，填料粒度15μm，流動(dòng)相為超臨界co2：夾帶劑=96:4，流速66ml/min，流動(dòng)相體系平衡系統(tǒng)15min，進(jìn)樣20g，洗脫62min后開始接收目標(biāo)組分，然后使用超臨界co2：夾帶劑=60:40的流動(dòng)相進(jìn)行洗脫雜質(zhì)，采用示差檢測器檢測，收集目標(biāo)餾分；
（4）將收集的目標(biāo)餾分旋蒸濃縮得到莫西菌素，經(jīng)檢測純度達(dá)96.5%。