莫西菌素的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及莫西菌素的生產(chǎn)制備領(lǐng)域，具體地，涉及一種莫西菌素的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]莫西菌素是一種新型抗寄生蟲藥是由鏈霉菌發(fā)酵的單一成分的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。其作為一種抗寄生蟲藥普遍應(yīng)用于畜牧業(yè)、養(yǎng)殖業(yè)等基礎(chǔ)農(nóng)業(yè)中，且隨著農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域的發(fā)展，國(guó)際抗寄生蟲藥的需求一直保持持續(xù)增長(zhǎng)。目前該產(chǎn)品市場(chǎng)年需求量約為10噸，市場(chǎng)規(guī)模超過2億美元。
[0003]1970年代至80年代，我國(guó)曾合成生產(chǎn)六氯對(duì)二甲苯、硝硫氰胺、硫雙二氯酚、氯硝柳胺等藥物，使我國(guó)普遍發(fā)生的家畜寄生蟲病得到了有效的防治。1990年代以來，我國(guó)進(jìn)行了阿佛菌素和依維菌素抗寄生蟲新藥的研制開發(fā)對(duì)我國(guó)畜牧業(yè)、養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展產(chǎn)生了積極作用。目前世界上抗寄生蟲藥物最廣泛的為依維菌素，其次是阿佛菌素、多拉菌素等。不過，經(jīng)過十多年的應(yīng)用，阿佛菌素、依維菌素等產(chǎn)品不同程度地產(chǎn)生了耐藥性，藥效下降較為明顯，銷售價(jià)格也呈下降趨勢(shì)。
[0004]新西蘭一項(xiàng)關(guān)于牛羊寄生蟲耐藥性的全球性調(diào)查報(bào)告顯示，阿佛菌素等老一代抗寄生蟲藥耐藥性問題正迅速擴(kuò)大，產(chǎn)品療效持續(xù)下降。而常規(guī)的莫西菌素的生產(chǎn)工藝往往較為復(fù)雜，因而很難滿足大規(guī)模的需求。
[0005]因此，提供一種生產(chǎn)方式比較簡(jiǎn)便，且產(chǎn)量較高的莫西菌素的制備方法是本發(fā)明亟需解決的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中寄生蟲對(duì)于常規(guī)抗寄生蟲藥已具有較高的耐藥性，使得藥性明顯下降，而新的抗寄生蟲藥往往生產(chǎn)較為復(fù)雜，產(chǎn)量較低，成本較為昂貴，無法滿足大規(guī)模需求的問題，從而提供一種生產(chǎn)方式比較簡(jiǎn)便，且產(chǎn)量較高的莫西菌素的制備方法。
[0007]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種莫西菌素的制備方法，其中，所述制備方法包括:
[0008]I)將菌種接種于菌種培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到孢子懸浮液Ml ;
[0009]2)將所述孢子懸浮液Ml接種于種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)，制得種子液M2 ;
[0010]3)將所述種子液M2接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到初提液M3 ;
[0011 ] 4)將初提液M3經(jīng)過上保護(hù)反應(yīng)、氧化反應(yīng)、脫保護(hù)反應(yīng)和肟化反應(yīng)后制得莫西菌素；其中，
[0012]所述菌種為藍(lán)灰鏈霉菌(Streptomyces cyaneogriseus)和/或吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)。
[0013]通過上述技術(shù)方案，本發(fā)明通過將藍(lán)灰鏈霉菌(Streptomyces cyaneogriseus)和/或吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)接種于菌種培養(yǎng)基上制得孢子懸浮液M1，然后將孢子懸浮液Ml接種于種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)，制得種子液M2，再將種子液M2接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，得到初提液M3，最后將初提液M3經(jīng)過上保護(hù)反應(yīng)、氧化反應(yīng)、脫保護(hù)反應(yīng)和肟化反應(yīng)后制得莫西菌素，從而通過上述方式使發(fā)酵過程較為簡(jiǎn)單，且得到的莫西菌素產(chǎn)量較高，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)了生產(chǎn)方式比較簡(jiǎn)便，且產(chǎn)量較高的效果。
[0014]本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的【具體實(shí)施方式】部分予以詳細(xì)說明。
【具體實(shí)施方式】
[0015]以下對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的【具體實(shí)施方式】?jī)H用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。
[0016]本發(fā)明提供了一種莫西菌素的制備方法，其中，所述制備方法包括:
[0017]I)將菌種接種于菌種培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到孢子懸浮液Ml ;
[0018]2)將所述孢子懸浮液Ml接種于種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)，制得種子液M2 ;
[0019]3)將所述種子液M2接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到初提液M3 ;
[0020]4)將初提液M3經(jīng)過上保護(hù)反應(yīng)、氧化反應(yīng)、脫保護(hù)反應(yīng)和肟化反應(yīng)后制得莫西菌素；其中，
[0021]所述菌種為藍(lán)灰鏈霉菌(Streptomyces cyaneogriseus)和/或吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)。
[0022]上述設(shè)計(jì)通過將藍(lán)灰鏈霉菌(Streptomyces cyaneogriseus)和/或吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)接種于菌種培養(yǎng)基上制得孢子懸浮液Ml，然后將孢子懸浮液Ml接種于種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)，制得種子液M2，再將種子液M2接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，得到初提液M3，最后將初提液M3經(jīng)過上保護(hù)反應(yīng)、氧化反應(yīng)、脫保護(hù)反應(yīng)和肟化反應(yīng)后制得莫西菌素，從而通過上述方式使發(fā)酵過程較為簡(jiǎn)單，且得到的莫西菌素產(chǎn)量較高，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)了生產(chǎn)方式比較簡(jiǎn)便，且產(chǎn)量較高的效果。所述上保護(hù)反應(yīng)、氧化反應(yīng)、脫保護(hù)反應(yīng)和肟化反應(yīng)可以按照本領(lǐng)域常規(guī)操作方式進(jìn)行操作，在此不多作贅述。
[0023]上述所述的菌種培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基可以按照常規(guī)方式進(jìn)行配制，例如在本發(fā)明中，所述菌種培養(yǎng)基可以包括酵母粉、葡萄糖、玉米粉、氯化鈉、鉬酸鈉、醋酸鈉、磷酸二氫鉀和磷酸氫二鉀，所述種子培養(yǎng)基可以包括葡萄糖、麥芽糊精、淀粉、酵母膏和黃豆餅粉，所述發(fā)酵培養(yǎng)基可以包括葡萄糖、乳糖、棉籽粉餅、豆油、發(fā)酵消泡劑、碳酸鈣和硫酸鎂。當(dāng)然，其他本領(lǐng)域常規(guī)使用的培養(yǎng)基在此也可以使用，各原料之間的成分可以根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行配置，在此不多作贅述。
[0024]步驟I)中的培養(yǎng)可以按照本領(lǐng)域常規(guī)培養(yǎng)方式進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間和培養(yǎng)溫度可以根據(jù)實(shí)際需要調(diào)節(jié)，例如，在本發(fā)明的一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，為了使得菌種培養(yǎng)效果更好，得到的孢子懸浮液中孢子含量更高，步驟I)中的培養(yǎng)時(shí)間可以進(jìn)一步選擇為216-264h，培養(yǎng)溫度選擇為25-30°C。
[0025]同樣地，在本發(fā)明的另一優(yōu)選的實(shí)施方式中，步驟2)中的培養(yǎng)時(shí)間為20_30h，培養(yǎng)溫度為25-30 °C。
[0026]為了使種子液M2在發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵更好，在本發(fā)明的一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，步驟3)中還可以包括將種子液M2置于溫度為25-30°C的條件下培養(yǎng)45_65h后接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中。
[0027]同樣地，在本發(fā)明的一種更為優(yōu)選的實(shí)施方式中，步驟3)中的培養(yǎng)時(shí)間為200-300h，培養(yǎng)溫度為 25-30 °C。
[0028]為了使制得的莫西菌素的產(chǎn)量更高，在本發(fā)明的一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，步驟4)還可以包括將初提液M3過濾、洗脫、萃取和濃縮后再進(jìn)行上保護(hù)反應(yīng)。
[0029]所述過濾操作可以按照本領(lǐng)域常規(guī)使用的過濾操作方式進(jìn)行操作，例如，在本發(fā)明的一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，為了使得過濾效果更好，所述過濾過程可以包括將初提液M3經(jīng)過珍珠巖過濾。
[0030]同樣地，在本發(fā)明的另一優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述洗脫過程可以包括將過濾后的初提液M3經(jīng)過樹脂進(jìn)行洗脫。
[0031]所述濃縮過程可以按照本領(lǐng)域常規(guī)的濃縮方式進(jìn)行操作，例如可以為常壓蒸餾等方式，當(dāng)然，為了使?jié)饪s效果更好，在本發(fā)明的一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述濃縮過程可以為減壓濃縮。例如，可以為減壓蒸餾。其他可以實(shí)現(xiàn)的方式在此也可進(jìn)行使用，不多作贅述。
[0032]所述肟化反應(yīng)可以按照本領(lǐng)域常規(guī)采用的方式進(jìn)行操作，當(dāng)然，在本發(fā)明的一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，為了使肟化反應(yīng)后產(chǎn)量更高，所述肟化反應(yīng)可以限定為置于20-25?的環(huán)境下反應(yīng)15_30h。
[0033]同樣地，為了使制得的莫西菌素的產(chǎn)量更高，在本發(fā)明的另一優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述肟化反應(yīng)后還可以包括減壓濃縮。
[0034]為了避免在操作過程中引入新的細(xì)菌，使得產(chǎn)物出現(xiàn)偏差，在本發(fā)明的一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述菌種培養(yǎng)基、所述種子培養(yǎng)基和所述發(fā)酵培養(yǎng)基在使用前還可以包括進(jìn)行殺菌操作。所述殺菌操作按照本領(lǐng)域常規(guī)采用的方式進(jìn)行操作，在此不一一說明。
[0035]以下將通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。以下實(shí)施例中，所述藍(lán)灰鏈霉菌為常規(guī)市售品，所述酵母粉、葡萄糖、玉米粉、氯化鈉、鉬酸鈉、醋酸鈉、磷酸二氫鉀和、磷酸氫二鉀、麥芽糊精、淀粉、酵母膏、黃豆餅粉、乳糖、棉籽粉餅、豆油、發(fā)酵消泡劑、碳酸鈣、硫酸鎂、珍珠巖和樹脂為常規(guī)市售品。所述菌種培養(yǎng)基按照制備例I的制備方法進(jìn)行制備；所述種子培養(yǎng)基按照制備例2的制備方法進(jìn)行制備，所述發(fā)酵培養(yǎng)基按照制備例3的制備方法進(jìn)行制備。
[0036]制備例I
[0037]將3g酵母粉、1g葡