專利名稱：一種提高利福霉素sv發(fā)酵產(chǎn)量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種利福霉素的制備方法，特別是ー種提高利福霉素SV發(fā)酵產(chǎn)量的方法。
背景技術(shù)：
做為結(jié)核病治療的大宗抗生素原料藥，國(guó)內(nèi)利福霉素SV發(fā)酵單位一直徘徊在5000 U/mL左右。エ業(yè)大生產(chǎn)水平菌體生理狀態(tài)與エ藝控制密切相關(guān)，糖酵解、磷酸戊糖途徑、三羧酸循環(huán)途徑和利福霉素合成前體合成途徑碳流存在互作效應(yīng)，確定后者與具體代謝瓶頸的對(duì)應(yīng)關(guān)系將使指導(dǎo)利福霉素SV發(fā)酵生產(chǎn)エ藝優(yōu)化指標(biāo)化、具體化，對(duì)于提高生產(chǎn)效率的操控性和執(zhí)行カ具有重要現(xiàn)實(shí)意義。微生物的碳氮代謝途徑彼此交織成為代謝網(wǎng)絡(luò)，碳、氮流在代謝節(jié)點(diǎn)的分配比例決定著目標(biāo)產(chǎn)物的合成量。對(duì)于柔性代謝節(jié)點(diǎn)而言，調(diào)控該節(jié)點(diǎn)代謝流分配可能會(huì)導(dǎo)致整個(gè)代謝網(wǎng)絡(luò)代謝流分配的結(jié)構(gòu)性調(diào)整(比如通過增強(qiáng)前體合成代謝流或減少旁路代謝流)，從而有可能使碳氮源代謝以最佳的比例流向目標(biāo)產(chǎn)物，而宏觀尺度操作變量的改變可以跨尺度的影響產(chǎn)生菌微觀尺度生理變量的優(yōu)化。因此，通過糖酵解途徑、磷酸戊糖途徑、莽草酸途徑以及三羧酸循環(huán)之間碳代謝流分配比例的調(diào)整可以促進(jìn)三大前體的合成供量，促進(jìn)利福霉素合成。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)提高利福霉素生物合成效率的研究較多，包括菌種改良、エ藝優(yōu)化、廉價(jià)原材料替換等方面，然而，經(jīng)科技查新，有關(guān)將最適濃度的こニ酸鹽、豆油一起在最適時(shí)間補(bǔ)入地中海擬無枝酸菌發(fā)酵培養(yǎng)物中，調(diào)控利福霉素SV前體合成代謝流，提高其合成效率的研究和應(yīng)用還未見相關(guān)文獻(xiàn)及公開專利報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供ー種提高利福霉素SV發(fā)酵產(chǎn)量的方法。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下
(1)發(fā)酵培養(yǎng)
按種子和發(fā)酵培養(yǎng)基配方配置培養(yǎng)液，濕熱滅菌后降溫至28°C，按3%-5%的接種量將地中海擬無枝酸菌的合瓶種子液接入ー級(jí)種子罐。一級(jí)種子罐溫控制在28°C，無菌空氣流量按O. 8 vvm控制，攪拌轉(zhuǎn)速為160 r/min，罐壓控制在O. 03-0. 04 MPa，培養(yǎng)48h后無菌操作補(bǔ)入ニ級(jí)種子罐；ニ級(jí)種子罐溫控制在28°C，無菌空氣流量按O. 8 vvm控制，攪拌轉(zhuǎn)速為160 r/min,罐壓控制在O. 03-0. 04 MPa,培養(yǎng)48h后無菌操作補(bǔ)入三級(jí)發(fā)酵罐；三級(jí)發(fā)酵罐溫按28°C控制，轉(zhuǎn)速為160 r/min,無菌空氣流量控制在O. 5-0. 8 vvm,罐壓控制在O. 03-0. 05 MPa，培養(yǎng)周期為 136 h ；
(2)補(bǔ)料エ藝
三級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)周期在60-80 h時(shí)，將終濃度為O. 2-0. 5 g/L的こニ酸鹽和2_5 mL/L的豆油無菌補(bǔ)入三級(jí)發(fā)酵罐內(nèi)，即可提高利福霉素SV產(chǎn)量。
本發(fā)明的有益效果在于
1)所使用的補(bǔ)料物質(zhì)均為エ農(nóng)業(yè)大宗產(chǎn)品，可購(gòu)性強(qiáng)；
2)所使用的操作エ藝簡(jiǎn)單，可控性強(qiáng)，適宜于大批量發(fā)酵生產(chǎn)；
3)利用該補(bǔ)料方法，增產(chǎn)效果穩(wěn)定，利福霉素SV效價(jià)平均提高3.0%，放罐十億平均提高5. 4%，減少了 17%的補(bǔ)糖量，每罐原材料成本節(jié)約360元；
4)該補(bǔ)料方法符合國(guó)家關(guān)于發(fā)酵エ業(yè)節(jié)能降耗的綠色發(fā)展要求。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I
I發(fā)酵培養(yǎng)· 按種子和發(fā)酵培養(yǎng)基配方配置培養(yǎng)液，濕熱滅菌后降溫至28°C，按3%-5%的接種量將地中海擬無枝酸菌的合瓶種子液接入ー級(jí)種子罐。一級(jí)種子罐溫控制在28°C，無菌空氣流量按O. 8 vvm控制，攪拌轉(zhuǎn)速為160 r/min，罐壓控制在O. 03-0. 04 MPa，培養(yǎng)48h后無菌操作補(bǔ)入ニ級(jí)種子罐；ニ級(jí)種子罐溫控制在28°C，無菌空氣流量按O. 8 vvm控制，攪拌轉(zhuǎn)速為160 r/min,罐壓控制在O. 03-0. 04 MPa,培養(yǎng)48h后無菌操作補(bǔ)入三級(jí)發(fā)酵罐；三級(jí)發(fā)酵罐溫按28°C控制，轉(zhuǎn)速為160 r/min,無菌空氣流量控制在O. 5-0. 8 vvm,罐壓控制在O. 03-0. 05 MPa，培養(yǎng)周期為 136 h ；
2補(bǔ)料エ藝
發(fā)酵培養(yǎng)周期在60 h時(shí)，將終濃度為O. 2 g/L的こニ酸鹽、5 mL/L的豆油無菌補(bǔ)入三級(jí)發(fā)酵罐內(nèi)。實(shí)施例2 I發(fā)酵培養(yǎng) 同實(shí)施例I
2補(bǔ)料エ藝
發(fā)酵培養(yǎng)周期在80 h時(shí)，將終濃度為O. 5 g/L的こニ酸鹽、2 mL/L的豆油無菌補(bǔ)入三級(jí)發(fā)酵罐內(nèi)。實(shí)施例3 I發(fā)酵培養(yǎng) 同實(shí)施例I
2補(bǔ)料エ藝
發(fā)酵培養(yǎng)周期在70 h時(shí)，將終濃度為O. 35 g/L的こニ酸鹽、3 mL/L的豆油無菌補(bǔ)入三級(jí)發(fā)酵罐內(nèi)。
權(quán)利要求
1.ー種提高利福霉素SV發(fā)酵產(chǎn)量的方法，其操作步驟如下 (1)發(fā)酵培養(yǎng) 按種子和發(fā)酵培養(yǎng)基配方配置培養(yǎng)液，濕熱滅菌后降溫至28°C，按3%-5%的接種量將地中海擬無枝酸菌的合瓶種子液接入ー級(jí)種子罐；一級(jí)種子罐溫控制在28°C，無菌空氣流量按O. 8 vvm控制，攪拌轉(zhuǎn)速為160 r/min，罐壓控制在O. 03-0. 04 MPa，培養(yǎng)48h后無菌操作補(bǔ)入ニ級(jí)種子罐；ニ級(jí)種子罐溫控制在28 V，無菌空氣流量按O. 8 vvm控制，攪拌轉(zhuǎn)速為160 r/min,罐壓控制在O. 03-0. 04 MPa,培養(yǎng)48h后無菌操作補(bǔ)入三級(jí)發(fā)酵罐；三級(jí)發(fā)酵罐溫按28°C控制，轉(zhuǎn)速為160 r/min,無菌空氣流量控制在O. 5-0. 8 vvm,罐壓控制在O. 03-0. 05 MPa，培養(yǎng)周期為 136 h ； (2)補(bǔ)料エ藝 三級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)周期在60-80 h時(shí)，將終濃度為O. 2-0. 5 g/L的こニ酸鹽和2_5 mL/L的豆油無菌補(bǔ)入三級(jí)發(fā)酵罐內(nèi)，即可提高利福霉素SV產(chǎn)量。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種提高利福霉素SV發(fā)酵產(chǎn)量的方法。在發(fā)酵培養(yǎng)的過程中，將終濃度為0.2-0.5g/L的乙二酸鹽、2-5mL/L的豆油無菌補(bǔ)入發(fā)酵培養(yǎng)地中海擬無枝酸菌周期在60-80h的發(fā)酵罐內(nèi)。利福霉素SV效價(jià)平均提高3.0%，放罐十億平均提高5.4%，減少了17%的補(bǔ)糖量，每罐原材料成本節(jié)約360元。該方法所使用的補(bǔ)料物質(zhì)均為工農(nóng)業(yè)大宗產(chǎn)品，可購(gòu)性強(qiáng)，且操作工藝簡(jiǎn)單，可控性強(qiáng)，適宜于大批量發(fā)酵生產(chǎn)，增產(chǎn)效果穩(wěn)定，符合國(guó)家關(guān)于發(fā)酵工業(yè)節(jié)能降耗的綠色發(fā)展要求。
文檔編號(hào)C12R1/01GK102660598SQ20121017617
公開日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2012年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月31日
發(fā)明者史詠華, 彭麗, 李曉鈴, 李盤欣, 林樂, 王培英, 王志, 馬向東, 黃亞男 申請(qǐng)人:河南省南街村(集團(tuán))有限公司