一種檢測(cè)白酒中甲基苯酚類物質(zhì)含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析檢測(cè)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種檢測(cè)白酒中甲基苯酪類物質(zhì)含量的方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 中國傳統(tǒng)固態(tài)發(fā)酵工藝中，酒糟在發(fā)酵過程中會(huì)生成酒精和眾多的微量香味物 質(zhì)，其中就包含了種類眾多的酪類物質(zhì)。4-甲基苯酪、2-甲基苯酪和3-甲基苯酪具有相似的 酪類氣味，據(jù)研究運(yùn)=類物質(zhì)在白酒中的含量雖然很少，但是它們的氣味闊值很低，很容易 對(duì)白酒的整體氣味產(chǎn)生嚴(yán)重的影響。目前對(duì)于白酒中酪類物質(zhì)的研究主要集中在4-甲基苯 酪上，而對(duì)于2-甲基苯酪和3-甲基苯酪的研究則沒有見到相關(guān)報(bào)告。
[0003] 現(xiàn)有檢測(cè)白酒中甲基苯酪類物質(zhì)主要有W下幾種方法：
[0004] 1、國內(nèi)輕工業(yè)部食品發(fā)酵研究所1980年W茅臺(tái)酒為主要研究對(duì)象，采用化學(xué)衍生 法結(jié)合GC-FID/GC-MS對(duì)白酒中揮發(fā)性酪元化合物進(jìn)行的分析研究中，需要進(jìn)行大量的萃取 前處理，并且還需要進(jìn)行衍生化步驟，最終也只對(duì)白酒中的4-甲基苯酪進(jìn)行了估算。
[0005] 2、1990年青島大學(xué)、中國醫(yī)科院藥研所和山東大學(xué)陸懸巧、劉春勝、閣長泰用溶劑 萃取法提取白酒中的6種揮發(fā)酪(青島大學(xué)學(xué)報(bào)，1990,3(1)，1〇2~105)，此方法的大致步驟 為:取50mL酒樣，用2N化OH調(diào)節(jié)pH值為12.5，轉(zhuǎn)移到交換柱上，W5-10/min流速通過柱子， 用25mL化OH的甲醇溶液及25mL水淋洗除去雜質(zhì)，用25mL 4N HCl及2mL水洗脫，收集后用 3xl0mL二氯甲燒萃取;再用50mL丙酬-水(4:1，V/V)洗脫，收集后用3xl0mL二氯甲燒萃取;合 并萃取液，用IOmL 2 %化H(X)3溶液洗涂除去有機(jī)酸，W無水化2S化脫水后濃縮至0.5mL，取 0.20血濃縮液于ImL反應(yīng)瓶中，加0.5血衍生化試劑和數(shù)粒K2CO3，于60~70°C水洛回流2.化， 用化吹干，加0.5mL正己燒溶解殘留物，進(jìn)行氣相色譜分析。由此可見，該方法前處理步驟相 當(dāng)繁瑣，而且只在摸擬酒樣進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，6種揮發(fā)酪平均回收率為79%，苯酪的回收率為 65 %，6種揮發(fā)酪平均RSD值為6.1 %，不能達(dá)到檢測(cè)方法回收率為80~120 %，RSD值<5 %的 要求，因此沒有建立白酒中揮發(fā)性酪的分析檢測(cè)方法。
[0006] 3、2010年江南大學(xué)生物工程學(xué)院朱燕.、范來文、徐巖應(yīng)用浸入固相微萃取(DI-SPME)與氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)DI-SPME和GC-MS分析白酒中游離酪類化合物(食 品與發(fā)酵工業(yè)，2010,36(10) :138-143)對(duì)白酒中揮發(fā)性酪類化合物進(jìn)行了分析，該方法需 要采用DI-SPME技術(shù)進(jìn)行前處理過程，并且該方法只能檢測(cè)白酒中的4-甲基苯酪。
[0007] 4、2011年楊敏、尋思穎、馮永渝、彭駭榮、董眷、耿平蘭、孫棟在《白酒中揮發(fā)性酪類 化合物的高效液相色譜測(cè)定方法》中采用的方法是利用高效液相-巧光檢測(cè)器對(duì)甲基苯酪 類物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)。此方法同樣需要對(duì)樣品進(jìn)行前處理過程：取50~IOOmL酒樣，用CHsCb或 CHCb進(jìn)行液液萃取，每次萃取劑的用量為酒樣的體積百分比為20~30%vol，萃取3次，合 并有機(jī)相形成萃取液，所得的萃取液于35°C0.075MPa條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，至不再有饋出 液流出，濃縮液用1%冰醋酸定容至25或50mL，過0.45皿濾膜后，才能進(jìn)行樣品分析;并且液 相流動(dòng)相的配制也比較復(fù)雜:流動(dòng)相A為冰醋酸/0-環(huán)糊精水溶液=1/100;流動(dòng)相B為冰醋 酸/乙臘/e-環(huán)糊精水溶液=1/40/60，e-環(huán)糊精水溶液(6-環(huán)糊精濃度為:7.05 X 1(T3-8.81 X 該方法整個(gè)液相色譜的分析時(shí)間也超過了 40min，并且白酒樣品的酒精度也需要 調(diào)整到45-53度，操作較繁瑣。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 針對(duì)上述方法檢測(cè)甲基苯酪類化合物所存在的缺陷，本發(fā)明提供了一種檢測(cè)白酒 中甲基苯酪類物質(zhì)含量的方法。該方法具有操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。
[0009] -種檢測(cè)白酒中甲基苯酪類物質(zhì)含量的方法，包括W下步驟：
[0010] a、用高效液相-S重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀分別檢測(cè)梯度濃度的2-甲基苯酪溶液、3-甲基苯酪溶液、4-甲基苯酪溶液，根據(jù)各濃度對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜強(qiáng)度峰面積分別繪制得到2-甲基 苯酪的濃度-峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線、3-甲基苯酪的濃度-峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線、4-甲基苯酪的濃度-峰 面積標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[001。 b、用甲醇水溶液稀釋待測(cè)白酒，得待測(cè)樣品；
[0012] C、用高效液相-S重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)待測(cè)樣品，根據(jù)出峰時(shí)間和母離子-子 離子對(duì)確定出待測(cè)白酒中所含甲基苯酪種類，再根據(jù)相應(yīng)的濃度-峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出 濃度，最后再根據(jù)步驟b稀釋的倍數(shù)計(jì)算出待測(cè)白酒中所含每種甲基苯酪的含量。
[0013] 優(yōu)選的，上述檢測(cè)白酒中甲基苯酪類物質(zhì)含量的方法步驟a中，所述梯度濃度的2-甲基苯酪溶液、3-甲基苯酪溶液、4-甲基苯酪溶液的具體配制方法為:用體積分?jǐn)?shù)60%的乙 醇水溶液分別配制Img/mL的2-甲基苯酪溶液、3-甲基苯酪溶液、4-甲基苯酪溶液，再用體積 分?jǐn)?shù)20%的甲醇水溶液分別將上述Img/mL的2-甲基苯酪溶液、3-甲基苯酪溶液、4-甲基苯 酪溶液稀釋至0.01~化g/mL即可。
[0014] 優(yōu)選的，上述檢測(cè)白酒中甲基苯酪類物質(zhì)含量的方法步驟a或C中，所述的高效液 相色譜條件為:流動(dòng)相條件為:A為甲醇，B為水，0~3min: 20 % A、80 % B，流速為1血/min; 3~ 6111111:60%4、40%8，流速為111117111111;6~8111111:60%4、40%8，流速為0.4血/111111;8~9.5111111: 20 %A、80 %B，流速為 1.5血/min;色譜柱為:ZORBAX Ec 1 ipse XDB-Cl8;柱溫為25°C ;進(jìn)樣量 為 laiL。
[0015] 優(yōu)選的，上述檢測(cè)白酒中甲基苯酪類物質(zhì)含量的方法步驟a或C中，所述的=重四 級(jí)桿質(zhì)譜條件為：碰撞氣體溫度為320 °C，碰撞氣體流量為3.3L/min;霧化器壓力為 16.5psi;MSl 溫度為 110°C;MS2 溫度為 110°C。
[0016] 優(yōu)選的，上述檢測(cè)白酒中甲基苯酪類物質(zhì)含量的方法步驟a或C中，所述的=重四 級(jí)桿質(zhì)譜條件中，4-甲基苯酪的母離子選擇為107.0,子離子選擇為59.7;2-甲基苯酪的母 離子選擇為107.0,子離子選擇為77.0:3-甲基苯酪的母離子選擇為107.0,子離子選擇為 89.4。
[0017] 更進(jìn)一步的，上述檢測(cè)白酒中甲基苯酪類物質(zhì)含量的方法步驟a或C中，所述的= 重四級(jí)桿質(zhì)譜條件中，4-甲基苯酪的裂解電壓選擇為90v，碰撞能選擇為19v，極性選擇負(fù)離 子;2-甲基苯酪的裂解電壓選擇為90v，碰撞能選擇為21v，極性選擇負(fù)離子;3-甲基苯酪的 裂解電壓選擇為90 V，碰撞能選擇為17 V，極性選擇負(fù)離子。
[0018] 優(yōu)選的，上述檢測(cè)白酒中甲基苯酪類物質(zhì)的方法步驟b中，所述的甲醇水溶液是按 體積比甲醇:水=1:4將兩者混勻后所得到的。
[0019] 優(yōu)選的，上述檢測(cè)白酒中甲基苯酪類物質(zhì)的方法步驟b中，所述的稀釋為將白酒稀 釋10倍。
[0020] 本發(fā)明方法控制了合適的液相條件，在排除過多雜質(zhì)干擾的前提下，又控制了合 適的質(zhì)譜條件，從而能夠同時(shí)準(zhǔn)確地檢測(cè)出白酒中的2-甲基苯酪、3-甲基苯酪、4-甲基苯酪 S種物質(zhì)的含量，檢測(cè)限可低至PPb級(jí)別，遠(yuǎn)超過氣相色譜，極大地增加了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性;同 時(shí)，本發(fā)明方法對(duì)白酒無需任何前處理，檢測(cè)耗時(shí)僅需9.5min，且可適用于任一度數(shù)的白 酒，不用對(duì)白酒進(jìn)行降度或升度處理的前處理步驟。
【附圖說明】
[0021] 圖1 4-甲基苯酪MRM圖譜
[0022] 圖2 3-甲基苯酪MRM圖譜
[0023] 圖3 2-甲基苯酪MRM圖譜
【具體實(shí)施方式】
[0024] 針對(duì)現(xiàn)有檢測(cè)甲基苯酪類化合物所存在的缺陷，根據(jù)甲基苯酪類化合物的理化性 質(zhì)和在白酒中的含量，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)可W選擇=重四級(jí)桿質(zhì)譜儀對(duì)白酒進(jìn)行檢測(cè)，但是由于 白酒中除可能含有甲基苯酪類化合物外，還含有大量的水、乙醇，W及其它醋、酸、醇、醒等 成百上千種呈香呈味物質(zhì)，不將運(yùn)些物質(zhì)分離除去，必然會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生很大的影響，所 W，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)可W在=重四級(jí)桿質(zhì)譜儀之前添加高效液相色譜，用高效液相色譜重四 級(jí)桿質(zhì)譜化PLC-QQQ)聯(lián)用對(duì)甲基苯酪類化合物進(jìn)行檢測(cè)可W得到很好的效果。
[0025] =重四級(jí)桿質(zhì)譜是由=個(gè)四級(jí)桿質(zhì)譜分析器串聯(lián)而成的，每個(gè)質(zhì)譜分析器都有單 獨(dú)的作用：第一個(gè)四級(jí)桿質(zhì)譜（Ql)根據(jù)設(shè)定的質(zhì)荷比掃描范圍來選擇所需的離子（母離 子）；第二個(gè)四級(jí)桿分析器(Q2)叫作碰撞池，內(nèi)部充滿了碰撞氣體，它的作用是讓經(jīng)過第一 個(gè)四級(jí)桿選擇的離子與運(yùn)些氣體分子碰撞，從而產(chǎn)生不同的離子碎片；第=個(gè)四級(jí)桿質(zhì)譜 分析器(Q3)用于檢測(cè)來自第二個(gè)質(zhì)譜分析器所產(chǎn)生的離子碎片(子離子）。本發(fā)明方法中， 待測(cè)白酒樣品經(jīng)過高效液相色譜分離后，采用=重四級(jí)桿質(zhì)譜的多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM) 來監(jiān)測(cè)樣品的流出成分，所檢測(cè)的目標(biāo)分別為目標(biāo)物的母離子和子離子;每種化合物在合 適的條件下，經(jīng)過=級(jí)質(zhì)譜的篩選后，只能產(chǎn)生特定的母離子和子離子，所W使用運(yùn)種方法 幾乎可W完全排除其它成份的干擾，可W在非常復(fù)雜的混合物中檢測(cè)某種特定的物質(zhì)，運(yùn) 樣大大提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性，非常適合于檢測(cè)白酒運(yùn)樣復(fù)雜體系中的物質(zhì)。
[0026] 所W，根據(jù)甲基苯酪類物質(zhì)的性質(zhì)和儀器特點(diǎn)，本發(fā)明提供了一種檢測(cè)白酒中甲 基苯酪類物質(zhì)含量的方法，包括W下步驟：
[0027] 曰、用2-甲基苯酪、3-甲基苯酪、4-甲基苯酪標(biāo)準(zhǔn)品分別配制梯度濃度的2-甲基苯 酪溶液、3-甲基苯酪溶液、4-甲基苯酪溶液，用高效液相重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀分別檢測(cè) 上述梯度濃度的2-甲基苯酪溶液、3-甲基苯酪溶液、4-甲基苯酪溶液得到各濃度對(duì)應(yīng)的質(zhì) 譜強(qiáng)度峰面積，從而繪制得到2-甲基苯酪、3-甲基苯酪、4-甲基苯酪濃度-峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0028] b、用甲醇水溶液稀釋待測(cè)白酒，得待測(cè)樣品；
[0029] C、用高效液相重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)待測(cè)樣品，根據(jù)出峰時(shí)間和母離子-子 離子對(duì)確定出待測(cè)白酒中所含甲基苯酪種類，再根據(jù)相應(yīng)的濃度-峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出 濃度，最后再根據(jù)步驟b稀釋的倍數(shù)計(jì)算出待測(cè)白酒中所含每種甲基苯酪的含量。
[0030] 由于白酒酒度一般在50%vol左右，為了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，步驟a中，用體積分?jǐn)?shù) 60%的乙醇水溶液將2-甲基苯酪、3-甲基苯酪、4-甲基苯酪標(biāo)準(zhǔn)品分別進(jìn)行稀釋配制成 Img/血的2-甲基苯酪溶液、3-甲基苯酪溶液、4-甲基苯酪溶液;并且又由于甲基苯酪類物質(zhì) 在白酒中的含量非常少，為了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，再用體積分?jǐn)?shù)20%的甲醇水溶液將上述 2-