一種氟唑菌酰胺殘留量的gc-ms/ms測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種氣挫菌酷胺殘留量的GC-MS/MS測(cè)定方法，更具體地說(shuō)是采用氣相 色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)定性定量測(cè)定糧谷、豬肉、牛肉、羊肉、雞肉等動(dòng)物肌肉及制品等 復(fù)雜基質(zhì)的動(dòng)植物源性食品中殘留的氣挫菌酷胺含量的方法，屬于農(nóng)藥殘留量的測(cè)定技術(shù) 領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 氣挫菌酷胺(f Iuxapyroxad)是由己斯夫公司開(kāi)發(fā)的班巧酸脫氨酶抑制劑類殺菌 劑?；瘜W(xué)名稱:3-二氣甲基-1-甲基-N-(3'，4'，5'-S氣聯(lián)苯-2-基)-lH-化挫-4-甲酯胺;分 子式:Cl細(xì)12F5N30;相對(duì)分子質(zhì)量:381.3;烙點(diǎn)：157 °C ;相對(duì)密度：1.42。溶劑中的溶解度 (g/L，20°C):丙酬>250、乙臘168、乙酸乙醋123、甲醇53.4、甲苯20.0。氣挫菌酷胺的化學(xué)結(jié) 構(gòu)式如下：
[0003] 氣挫菌酷胺具有高效、廣譜、持效、優(yōu)異的內(nèi)吸傳導(dǎo)性、同時(shí)具有預(yù)防和治療作用 等優(yōu)點(diǎn)。它能抑制抱子發(fā)芽、芽抱管伸長(zhǎng)、菌絲體生長(zhǎng)和抱子形成，可有效防治谷物、大豆、 玉米、油菜和特種作物等的主要病害。該產(chǎn)品通過(guò)葉面和種子處理來(lái)防治一系列真菌病害， 如谷物、大豆、果樹(shù)和蔬菜上由殼針抱菌（Septoria)、灰葡萄抱菌（Bot巧tis)、白粉菌 化rySiphe)、尾抱菌（Cercospora)、柄誘菌（Puccinia)、絲核菌（RhiZOCtonia)、核腔菌 (Pyreno曲ora SPP.)等引起的病害。其特別適用于豆類植物，防治由鏈格抱菌(Alternaria spp.)引起的灰霉病(Bot巧tis cinerea)、誘病、白粉病和殼針抱菌引起的病害，大豆誘病 (化akopsora)，棉花上由立枯絲核菌(化izoctonia solani)引起的病害W及向日葵和油巧 菜上由鏈格抱菌引起的病害等。在所有試驗(yàn)劑量下，對(duì)所有作物非常安全。氣挫菌酷胺適配 性強(qiáng)，可與化挫酸菌醋、=挫類殺菌劑和己斯夫其他產(chǎn)品復(fù)配使用。研究表明，氣挫菌酷胺 比市售的酷胺類殺菌劑具有更好的活性，該產(chǎn)品無(wú)論在活性、多功能性，還是在內(nèi)吸性和耐 雨水沖刷性等方面都為現(xiàn)代殺菌劑建立了新標(biāo)桿。己斯夫打算將氣挫菌酷胺引入世界上50 多個(gè)國(guó)家，用于100多種作物上。2011年，氣挫菌酷胺首先在英國(guó)登記和上市，現(xiàn)登記和上市 的國(guó)家包括澳大利亞、美國(guó)、加拿大、歐盟13國(guó)、己西和中國(guó)等。公司預(yù)測(cè)，該產(chǎn)品的年峰值 銷售額可達(dá)6億歐元。運(yùn)是所有SDHI類殺菌劑中，開(kāi)發(fā)公司寄予的期望值最高的產(chǎn)品。
[0004] 隨著氣挫菌酷胺的登記、推廣和使用，作為我國(guó)主要出口市場(chǎng)的美國(guó)、加拿大等國(guó) 家制定了其在蔬菜、水果、糧谷和畜產(chǎn)品等食品農(nóng)產(chǎn)品中的最大允許殘留量(M化），如美國(guó) 規(guī)定氣挫菌酷胺在果蔬中的MRL為0.5~30mg/kg，在畜產(chǎn)品及水產(chǎn)品等動(dòng)物源性食品中MRL 為O . Olmg/kg，在堅(jiān)果及糧谷中脈L為0.06~15mg/kg;加拿大規(guī)定氣挫菌酷胺在果蔬中的 M化為0.02~2mg/kg，在畜產(chǎn)品及水產(chǎn)品等動(dòng)物源性食品中脈L為0.0 l~0.05mg/kg，在堅(jiān)果 及糧谷中ML為0.01~3mg/kg;歐盟、日本等國(guó)家規(guī)定若田間使用農(nóng)藥沒(méi)有在該國(guó)家登記， 沒(méi)有制定相應(yīng)的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，出口至其國(guó)家的食品農(nóng)產(chǎn)品包括畜禽肉等動(dòng)物源性食品 中殘留限量均實(shí)行O.Olmg/L的"一律標(biāo)準(zhǔn)"。
[0005] 現(xiàn)階段，對(duì)氣挫菌酷胺殘留量測(cè)定方法的研究較少，報(bào)道的檢測(cè)方法主要為蔬菜 和水果中氣挫菌酷胺殘留檢測(cè)方法，運(yùn)些檢測(cè)方法均采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)測(cè) 定蔬菜和水果中氣挫菌酷胺殘留量的檢測(cè)方法，使用LC-MS/MS測(cè)定食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留 具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但由于其價(jià)格較昂貴，很多檢測(cè)機(jī)構(gòu)、企業(yè)或科研院所未 配置該儀器或配置臺(tái)數(shù)較少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS檢測(cè)時(shí)，需使用不同的流動(dòng) 相或色譜柱，運(yùn)樣需要不斷更換色譜柱、流動(dòng)相并耗費(fèi)比較長(zhǎng)的時(shí)間對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行平衡，運(yùn)一 定程度上制約了 LC-MS/MS的應(yīng)用。使用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)分析食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng) 藥殘留具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高、選擇性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，可實(shí)現(xiàn)幾百種農(nóng)藥的多殘留分析，但迄 今為止未見(jiàn)食品農(nóng)產(chǎn)品中氣挫菌酷胺殘留量的GC-MS/MS檢測(cè)方法的報(bào)道，由于糧谷、動(dòng)物 源性食品等食品農(nóng)產(chǎn)品基質(zhì)比較復(fù)雜，須建立凈化效果良好的樣品前處理方法和儀器分析 條件才能滿足檢測(cè)要求，因此，建立氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)定性和定量分析糧谷和 動(dòng)物源性食品中氣挫菌酷胺殘留量的檢測(cè)方法具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種氣挫菌酷胺殘留量的GC-MS/MS測(cè)定方法，主要用于測(cè)定 糧谷、動(dòng)物源性食品等復(fù)雜基質(zhì)食品農(nóng)產(chǎn)品中氣挫菌酷胺殘留量。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)W上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種氣挫菌酷胺殘留量的GC-MS/ MS測(cè)定方法，包括如下步驟：
[000引（1)提取 稱取混勻樣品于具塞離屯、管中，加入適量水復(fù)蘇后，定量加入乙臘或含1%乙酸的乙臘 溶液均質(zhì)或振蕩超聲提取，然后加入氯化鋼或乙酸鋼中的一種和無(wú)水硫酸儀，劇烈滿旋 Imin后離屯、。
[0009] (2)凈化 移取一定體積樣品提取液，濃縮至ImL左右，經(jīng)Cis/PSA固相萃取柱凈化，乙臘洗脫，收 集洗脫液，取部分洗脫液濃縮至干后，用體積比為1/1的丙酬/正己燒混合溶劑溶解定容，過(guò) 膜后，待氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)檢測(cè)。
[0010] (3)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 將不含氣挫菌酷胺的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理時(shí)，得樣品提取凈 化殘?jiān)?，加入適量溶劑和標(biāo)準(zhǔn)溶液，滿旋混勻，配制成至少3個(gè)濃度的氣挫菌酷胺系列標(biāo)準(zhǔn) 工作液。
[0011] (4)氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)測(cè)定 將步驟(3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行GC-MS/MS測(cè)定，W標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰 面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化后的 樣品液注入GC-MS/MS進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得樣品液中氣挫菌酷胺的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)工作曲 線，得到樣品液中氣挫菌酷胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到樣品中氣 挫菌酷胺殘留量。若上機(jī)溶液中氣挫菌酷胺殘留量超過(guò)線性范圍上限，需用定容溶劑將上 機(jī)溶液濃度稀釋至線性范圍之內(nèi)。
[0012] 步驟(1)中樣品若為含水量較少的樣品，提取前須加適量水充分浸潤(rùn)。
[0013] 步驟(1)中采用乙臘提取時(shí)加入氯化鋼鹽析，采用含1%乙酸的乙臘溶液提取時(shí)加 入乙酸鋼鹽析。
[0014] 步驟(2)中進(jìn)行Cis/PSA固相萃取凈化，乙臘洗脫時(shí)，洗脫體積為6~8血。
[0015] 步驟(4)中氣相色譜條件為:色譜柱:HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.25mm， 膜厚0.25皿;進(jìn)樣口溫度250°C ;載氣：He，不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量：1化;恒流模式，流速 1.2mL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，W每分鐘20°C的速度升至200°C，然后W每分鐘2 °C的速度升至220°C，再W每分鐘20°C的速度升至280°C，保持IOmin;傳輸線溫度:290°C。
[0016] 步驟(4)中質(zhì)譜條件為：電離模式：電子轟擊電離化I，70eV);離子源溫度280°C;碰 撞氣:氣氣;多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描方式MRM，監(jiān)測(cè)參數(shù)為：
[0017] 步驟(4)中測(cè)定樣液和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液時(shí)，若樣液中農(nóng)藥色譜峰保留時(shí)間與標(biāo) 準(zhǔn)溶液中相應(yīng)農(nóng)藥保留時(shí)間相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均 出現(xiàn)，而且離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在運(yùn)種農(nóng)藥;若 上述兩個(gè)條件不能同時(shí)滿足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0018] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0019] 本發(fā)明利用分散固相萃取技術(shù)，建立了簡(jiǎn)便、快速并能有效避免樣品中基質(zhì)干擾 的樣品前處理方法，將此前處理方法結(jié)合GC-MS/MS應(yīng)用于糧谷、動(dòng)物源性食品中氣挫菌酷 胺定性確證和定量檢測(cè)，平均回收率為87.4%~95.0%，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為3.8% ~6.9%，檢出限低于0.08化g/kg，具有操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。 能滿足美國(guó)、歐盟、日本等國(guó)家對(duì)相應(yīng)產(chǎn)品安全檢測(cè)的技術(shù)要求，為保障我國(guó)人民食品安全 及對(duì)外出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【附圖說(shuō)明】
[0020] 圖1為添加在空白豬肉基質(zhì)中的氣挫菌酷胺標(biāo)液的GC-MS/MS選擇離子色譜圖。
[0021] 圖2為不含氣挫菌酷胺的豬肉空白樣品的GC-MS/MS選擇離子色譜圖。
[0022] 圖3為W不含氣挫菌酷胺的豬肉空白樣品為基質(zhì)配制的氣挫菌酷胺標(biāo)準(zhǔn)工作曲 線。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 現(xiàn)W W下實(shí)施實(shí)例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明，但并不是限制本發(fā)明的范圍。
[0024] 實(shí)施例中使用的儀器與試劑
[0025] TlSBasic均質(zhì)器（IKA，Germany) ;CR21G虹離屯、機(jī)（日立Japan) ;MS3基本型旋滿混 合器（IKA，Germany);TurboVapLV型樣品自動(dòng)濃縮儀（Caliper，USA);7890N氣相色譜-5977C質(zhì)譜儀(Agilent,USA) ;Cis/PSA固相萃取柱(6mL，500mg/500mg)購(gòu)于天津博納艾杰爾 科技有限公司。
[0026] 試劑
[0027]乙臘、丙酬、正己燒（HPLC級(jí)，Merke，Germany);乙酸（HPLC級(jí)，CNW，Germany);無(wú)水 硫酸儀、氯化鋼和乙酸鋼為分析純，均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[00巧]標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度99.5%，購(gòu)自德國(guó)化.E虹enstorfer公司。
[0029] 實(shí)施例1:小麥中氣挫菌酷胺殘留量的檢測(cè)
[0030] (1)樣品前處理
[0031] 提取 稱取經(jīng)充分混勻的5g小麥樣品（研磨成面粉)于50mL離屯、管中，加入20mL水復(fù)蘇30min 后，準(zhǔn)確加入20mL含1 %乙酸的乙臘溶液，振蕩提取20min，超聲提取5min，加入3g無(wú)水硫酸 儀和2g乙酸鋼，滿旋Imin后，7000;r/min離屯、5min。離屯、后，取SmL乙臘提取液于40°C旋蒸或 氮?dú)獯抵两?，加入ImL乙臘滿旋后，待凈化。
[0032] 凈化 用5mL乙臘預(yù)洗Cis/PSA固相萃取柱，當(dāng)液面到達(dá)吸附劑的頂部時(shí)，將上述提取溶液轉(zhuǎn) 入柱中，用2mL乙臘洗涂試管，并將洗涂液移入SPE柱中，待溶液達(dá)到吸附劑頂部時(shí)，加入4mL 乙臘至柱子上進(jìn)行洗脫，洗脫液全部接收到定量試管中，用乙臘定容至lOmL，取ImL凈化液 用氮?dú)獯蹈珊螅?