免疫層析分析試劑盒、免疫層析分析裝置以及免疫層析分析方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及免疫層析分析試劑盒、免疫層析分析裝置以及免疫層析分析方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 測定血液、尿等檢體中所含的各種成分臨床上在把握患者的健康狀態(tài)方面極其重 要，一直以來，對應(yīng)該成分采用了各種測定方法。作為其一，已知通過免疫反應(yīng)使檢體中所 含的被檢測物質(zhì)發(fā)色，并確認該發(fā)色信號的免疫層析分析裝置以及分析方法。
[0003] 免疫層析分析裝置的最簡單的結(jié)構(gòu)為樣本添加部、標(biāo)記物保持部、擔(dān)載有檢測部 的層析介質(zhì)、以及吸收部互相連接的結(jié)構(gòu)。
[0004] 另一方面，2011年世界的糖尿病患者數(shù)存在3億6600萬人，據(jù)預(yù)測，2030年將達 到5億5200萬人（成人人口的約10%)。另外，據(jù)認為所謂的糖尿病預(yù)備軍也在其同等以 上。
[0005] 一直以來，是通過測定血糖值來進行糖尿病的診斷，但是近年來，由于血中的血 紅蛋白上結(jié)合有糖的糖化血紅蛋白（糖化~壬夕口匕' > )(糖化血紅蛋白（夕y 3~壬 夕口匕' y ))、特別是血紅蛋白0鏈的N末端纈氨酸殘基糖化的血紅蛋白Ale(以下，稱為 "HbAlc"）相對于總血紅蛋白量的濃度反映過去1至2個月的平均血糖值，因此正作為適于 糖尿病的診斷或糖尿病的追蹤觀察的指標(biāo)使用。
[0006] 然而一直以來，HbAlc的測定通過HPLC法、毛細管電泳法、酶法、免疫學(xué)測定方法 等來實施，但是因為這些方法需要針對特定的裝置或分析的專業(yè)知識，因此存在這樣的問 題：在小規(guī)模的醫(yī)院或家庭等中不能簡單獲知HbAlc的值。
[0007] 另外，關(guān)于HbAlc的血中濃度，由于血中成分存在個人差異，因此通過同時測定 HbAlc以外的血紅蛋白并掌握HbAlc量相對于HbAlc和HbAlc以外的血紅蛋白的總血紅蛋 白量的比率，來判斷糖尿病的陰性或陽性，但在此情況下還存在這樣的問題：需要通過上述 方法分別測定HbAlc和HbAlc以外的血紅蛋白，因此測定的繁雜程度進一步惡化。
[0008] 這里，（例如）專利文獻1提出了簡單測定HbAlc的方法。該方法首先將所采血 液與使血紅蛋白0鏈的N末端在蛋白質(zhì)表面露出的成分（N末端露出劑（露出剤））混合， 使HbAlc的抗原決定基在血紅蛋白蛋白質(zhì)的表面露出從而制備樣本液，之后向樣本添加部 滴加。通過毛細管現(xiàn)象使樣本液在抗體固定化膜上展開，在抗體固定化膜上展開的樣本液 到達抗HbAlc抗體涂布部，在這里僅樣本液中的HbAlc發(fā)生反應(yīng)并被檢測。
[0009] 接著，進一步在抗體固定化膜上展開的樣本液到達抗HbAO抗體涂布部，僅樣本液 中的HbAO發(fā)生反應(yīng)并被檢測，其他血紅蛋白不發(fā)生反應(yīng)而是移動至吸水墊。
[0010] 由此分別檢測樣本液中的HbAO以及HbAlc。與HPLC法、毛細管電泳法、酶法、免 疫學(xué)測定法等不同，該方法不需要針對特定的裝置或分析的專業(yè)知識，因此可簡單地獲知 HbAlc的值。
[0011][現(xiàn)有技術(shù)文獻]
[0012] [專利文獻]
[0013] [專利文獻1]日本特開2012-251789號公報

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] [發(fā)明要解決的課題]
[0015] 然而，專利文獻1中記載的方法是測定血液檢體中的HbAlc的方法，因此存在這樣 的問題：樣品不可避免地來自指血等，采血時使用針，每次都伴隨著疼痛和精神壓力。
[0016] 在不使用針就可采集的唾液檢體中，雖然能夠測定諸如血紅蛋白那樣的比較不需 要靈敏度的物質(zhì)，但是測定諸如HbAlc那樣的需要高靈敏度的極少量物質(zhì)則是困難的。另 外，在免疫層析分析中，由于唾液成分的存在，還存在靈敏度進一步降低的問題。
[0017] 因此，本發(fā)明的目的在于提供一種免疫層析分析試劑盒、免疫層析分析裝置以及 免疫層析分析方法，其能夠解決上述課題，即使對于不使用針而從口腔內(nèi)微量采集血液成 分得到的含有唾液等夾雜物的血液檢體，也能夠通過實現(xiàn)高靈敏度的檢測，從而在不感受 到疼痛和壓力的情況下進行免疫層析分析。
[0018] [解決課題的手段]
[0019] 本發(fā)明人經(jīng)過深入研宄，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在免疫層析分析中，通過在檢測部的展開方向 的上游含有烷基葡糖苷類以及陰離子型表面活性劑，即使是從口腔內(nèi)采集的含有唾液等夾 雜物的血液檢體，也能夠通過實現(xiàn)高靈敏度的檢測，從而在不感受到疼痛和壓力的情況下 實施免疫層析分析，并由此完成了本發(fā)明。
[0020] SP，本發(fā)明如下所述。
[0021] 1. 一種免疫層析分析試劑盒，其含有用于稀釋并展開從口腔內(nèi)采集的血液檢體的 檢體稀釋液和免疫層析分析裝置，該免疫層析分析裝置包括樣本添加部、標(biāo)記物保持部、擔(dān) 載有檢測部的層析介質(zhì)部以及吸收部。
[0022] 2.前述1中記載的免疫層析分析試劑盒，其中在所述檢體稀釋液以及所述檢測部 的展開方向上游的至少一者中含有烷基葡糖苷類以及陰離子型表面活性劑。
[0023] 3.前述1或2中記載的免疫層析分析試劑盒，其中所述血液檢體中的被檢測物質(zhì) 為血液中的糖化蛋白質(zhì)。
[0024] 4.前述3中記載的免疫層析分析試劑盒，其中所述糖化蛋白質(zhì)為HbAlc。
[0025] 5.前述2~4中任意一項記載的免疫層析分析試劑盒，其中所述烷基葡糖苷類為 含有碳數(shù)為5~15的烷基的烷基葡糖苷或者烷基麥芽苷。
[0026] 6.前述2~5中任意一項記載的免疫層析分析試劑盒，其中所述陰離子型表面活 性劑為選自由十二烷基磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉以及聚氧乙烯月桂基醚硫酸鈉組成的組 中的一種以上。
[0027] 7.前述2~6中任意一項記載的免疫層析分析試劑盒，其中在所述檢測部的展開 方向上游含有1~1700 y g的所述烷基葡糖苷類、和8~800 y g的所述陰離子型表面活性 劑。
[0028] 8.前述1~7中任意一項記載的免疫層析分析試劑盒，其特征在于，使用牙間刷從 口腔內(nèi)采集血液檢體。
[0029] 9. -種免疫層析分析裝置，其用于檢測從口腔內(nèi)采集的血液檢體中的被檢測物 質(zhì)，并且包括樣本添加部、標(biāo)記物保持部、擔(dān)載有檢測部的層析介質(zhì)部以及吸收部，其中在 所述檢測部的展開方向上游含有烷基葡糖苷類以及陰離子型表面活性劑。
[0030] 10. -種免疫層析分析方法，其為這樣一種方法：使用包括樣本添加部、標(biāo)記物保 持部、擔(dān)載有檢測部的層析介質(zhì)部以及吸收部的免疫層析分析裝置，對從口腔內(nèi)采集的血 液檢體中所含的被檢測物質(zhì)進行檢測，該方法包括以下工序（1)~（4):
[0031] (1)向樣本添加部中添加檢體處理液的工序，該檢體處理液通過檢體稀釋液對所 述血液檢體進行稀釋而得到；
[0032] (2)通過標(biāo)記物保持部中所保持的標(biāo)記物識別被檢測物質(zhì)的工序；
[0033] (3)在烷基葡糖苷類以及陰離子型表面活性劑的存在下，將所述血液檢體以及標(biāo) 記物作為移動相在層析介質(zhì)部中展開的工序；
[0034] (4)用檢測部檢測展開后的移動相中的被檢測物質(zhì)的工序。
[0035][發(fā)明效果]
[0036] 本發(fā)明的免疫層析分析試劑盒、免疫層析分析裝置以及免疫層析分析方法通過在 檢體稀釋液以及檢測部的展開方向上游的至少一者中含有烷基葡糖苷類，在被檢測物質(zhì)到 達檢測部之前，被檢測物質(zhì)與烷基葡糖苷類接觸并使從口腔內(nèi)采集的含有唾液的血液檢體 中的被檢測物質(zhì)穩(wěn)定化，因此可以以高靈敏度檢測被檢測物質(zhì)。
[0037] 另外，通過在檢體稀釋液以及檢測部的展開方向上游的至少一者中含有烷基葡糖 苷類并含有陰離子型表面活性劑，可有助于抑制由唾液成分引起的檢測反應(yīng)的反應(yīng)性降 低。
[0038] 附圖簡要說明
[0039][圖1]圖1(a)和圖1 (b)示出了免疫層析分析裝置的結(jié)構(gòu)。
[0040][圖2]圖2示出了含有唾液的血液檢體（檢體處理液1)和血液檢體（檢體處理 液2)的發(fā)色度變化率的評價。
[0041] [圖3]圖3示出了含有唾液的血液檢體（檢體處理液1)和血液檢體（檢體處理 液2)的發(fā)色度變化率的評價。
[0042][圖4]圖4示出了含有唾液的檢體（檢體處理液1'）和不含唾液的檢體（檢體 處理液2'）的發(fā)色度變化率的評價。
[0043][符號說明]
[0044] 1免疫層析分析裝置
[0045] 11塑料制粘合片
[0046]12樣本添加部
[0047] 13標(biāo)記物保持部
[0048] 14層析介質(zhì)部
[0049] 15吸收部
[0050] 16涂布有抗HbAlc抗體的抗HbAlc抗體涂布部
[0051] 17涂布有抗血紅蛋白抗體的抗HbAO抗體涂布部
[0052] 18作為對照物的涂布有抗IgG抗體的抗IgG抗體涂布部
【具體實施方式】
[0053] 下面，進一步詳細說明本發(fā)明。
[0054] 本發(fā)明中所用的血液檢體為（例如）從口腔內(nèi)采集的諸如血液、血漿或者血清之 類的血液樣本，特別是含有唾液的檢體。
[0055] 作為本發(fā)明的被檢測物質(zhì)，可列舉（例如）a-胎蛋白（AFP)以及癌胚抗原（CEA) 等腫瘤標(biāo)記物、鐵蛋白、前列腺特異抗原（PSA)以及免疫球蛋白G(IgG)等血清蛋白質(zhì)、類風(fēng) 濕因子、生長激素（GH)以及促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH)等激素相關(guān)物質(zhì)、流感病毒、腺病毒、 衣原體抗原以及A群溶血性鏈球菌抗原等細菌抗原、以及衍生自血紅蛋白的蛋白質(zhì)等。
[0056] 這些當(dāng)中，優(yōu)選的是血液中的被檢測物質(zhì)，可列舉（例如）衍生自血紅蛋白的蛋白 質(zhì)、血漿蛋白、脂蛋白、分泌蛋白、激素、補體、脂質(zhì)、膽固醇、糖、其他生物體內(nèi)成分、生物體 內(nèi)給藥及其代謝產(chǎn)物等。其中，從本發(fā)明的效果的觀點出發(fā)，優(yōu)選為血液中的糖化白蛋白或 糖化血紅蛋白等糖化蛋白質(zhì)，更優(yōu)選為HbAlc。
[0057] 以下