專利名稱：青枯雷爾氏菌種下分化脂肪酸型的分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種青枯雷爾氏菌種下分化脂肪酸型的分析方法。
背景技術(shù)：
細菌性青枯病是一種由青枯雷爾氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的毀滅性土傳病害。如文獻“Bacterial wilt of groundnut”所述青枯雷爾氏菌可危害44個科300多種植物，造成農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)巨大經(jīng)濟損失。青枯雷爾氏菌在寄主范圍、地理分布、致病特征、流行特征、種下分化等方面存在較大的差異，具有明顯的多態(tài)性。青枯雷爾氏菌的種下分化復雜，傳統(tǒng)鑒定方法主要從生理小種(race)見文獻“Identification of open reading frames unique to a selectagent”、生化型(biovar)見文獻“Survi val of Ralstoniasolanacearum biovar 2 in canal water in Egypt”、血清型(serotype)見文獻“Serological and molecular size characterization offlagellins of Pseudomonas syringae pathovars and relatedbacteria”、溶源型(lysotype)見文獻“Studies on the comparisonof serotyping and other methods of typing of Pseudomonassolanacearum from mulberry”、基因型(genetype)見文獻“Highlyspecific PCR-diagnosis to determine Pseudomonas solanacearumstrains of different geographic origins”等方面研究。然而，前人的研究認為，傳統(tǒng)的種下分化的分析方法與青枯雷爾氏菌的致病性無特定的相關(guān)性，同一個生理小種的青枯雷爾氏菌中存在著不同的致病性菌株。文獻“The selection of new eggplant F1 hybrid’Xiangqie 2”和文獻“Studies on occurrence and pathogenidentification of bacterial wilt of tobacco in ShandongProvince”中分析了湖南省煙草青枯雷爾氏菌的生化型，認為青枯雷爾氏菌致病力的強弱與生化型沒有直接的相關(guān)性。如文獻“Genomicfingerprinting of Ralstonia solanacearum biovar 3 in Thai landby using pulsed-field gel electrophoresis”，“Studies onclassification and antiserotypes of monoclonal antibodiesagainst Pseudomonas solanacearum”和“Studies on the comparisonof serotyping and other methods of typing of Pseudomonassolanacearum from mulberry”中指出血清型、溶源型、基因型的分析，無法區(qū)別不同致病力的青枯雷爾氏菌菌株。
微生物學研究表明細菌的細胞結(jié)構(gòu)中普遍含有的脂肪酸成分與細菌的DNA具有高度的同源性，各種細菌具有其特征性的細胞脂肪酸指紋圖譜，見文獻“Determination of fatty acid composition ofisolates of Pseudomonas solanacearum and Erwiniachrysanthemi”，建立了脂肪酸細菌鑒定系統(tǒng)方法，見文獻“Identification of Ralstonia solanacearum isolated fromwilted tobacco plant by fatty acid profiles and PCR-RFLPanalysis”。而脂肪酸是構(gòu)成青枯雷爾氏菌生物膜的重要物質(zhì)，作為細胞表面物質(zhì)與細胞識別、種下特異性和細胞免疫等有密切關(guān)系，所以如何解決青枯雷爾氏菌種下分化脂肪酸型的分析方法中對青枯雷爾氏菌脂肪酸因子篩選，以及判別模型建立，成為本發(fā)明的重點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種青枯雷爾氏菌種下分化脂肪酸型的分析方法，此分析方法能清楚直接的鑒別青枯雷爾氏菌菌株的脂肪酸型以及其致病性和致病力的強弱，為與致病性相關(guān)的青枯雷爾氏菌種下分化脂肪酸型的鑒別提供理論基礎(chǔ)。
為了達到上述目的，本發(fā)明的解決方案是青枯雷爾氏菌脂肪酸分層因子的篩選及其判別模型的建立，通過篩選三個特征因子，建立如下判別模型Y1＝-16.3353+0.0012X1+0.0056X9-0.0016X13Y2＝-3.4928+0.0002X1+0.0003X9+0.0025X13Y3＝-9.1550-0.0003X1+0.0039X9+0.0042X13。
所述的青枯雷爾氏菌脂肪酸分層因子的篩選中脂肪酸的提取包括菌落收集，然后放入培養(yǎng)基后細菌細胞皂化釋放脂肪酸、脂肪酸的甲基化、脂肪酸甲酯萃取和基本洗滌這幾個步驟。
所述的提取試劑包括，脂肪酸甲酯混合物標樣、菌落收集培養(yǎng)基為TSB培養(yǎng)基，為胰蛋白胨大豆肉湯、瓊脂和水組成，皂化試劑為氫氧化鈉和甲醇混合溶液，甲基化試劑為鹽酸和甲醇混合液，萃取試劑為正已烷和甲基叔丁基乙醚混合液，洗滌試劑為氫養(yǎng)化鈉溶液。
所述的色譜分析采用氣相色譜。
所述的青枯雷爾氏菌脂肪酸分層因子的篩選中青枯雷爾氏菌致病性測定是通過測定弱化指數(shù)和回接發(fā)病率，將上述青枯雷爾氏菌作為研究對象，在TZC平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)青枯雷爾氏菌單細胞菌落，建立弱化指數(shù)的測定方法，測定供試菌株的弱化指數(shù)(N＝D1/D2，其中N為弱化指數(shù)，D1和D2分別表示在TTC平板培養(yǎng)基上青枯雷爾氏菌細胞單菌落的紅斑半徑和菌落半徑)。同時進行番茄組培苗回接，每個菌株回接30株組培苗，設(shè)清水對照，將回接的組培苗放置于28～30℃的人工氣候箱內(nèi)培養(yǎng)，10天后觀察發(fā)病率。根據(jù)弱化指數(shù)和回接發(fā)病率，確定其致病類型。比較青枯雷爾氏菌脂肪酸多態(tài)性與其致病性之間是否存在相對應的關(guān)系。
所述的青枯雷爾氏菌脂肪酸分層因子的篩選中青枯雷爾氏菌脂肪酸特征圖譜分析是通過選擇青枯雷爾氏菌脂肪酸指紋圖譜匹配率最高菌株的圖譜作為模式圖譜，來確定青枯雷爾氏菌脂肪酸種類、特征、種類鑒定參數(shù)，然后對被測的菌株特征峰值，用DPS軟件進行方差分析。
所述的青枯雷爾氏菌脂肪酸分層因子的篩選中青枯雷爾氏菌脂肪酸多態(tài)性的聚類分析，以脂肪酸種類為指標，以菌株為樣本，構(gòu)建聚類分析數(shù)據(jù)矩陣，以歐氏距離為相關(guān)尺度，用類平均法為聚類方法，得出系統(tǒng)樹圖，利用LGS軟件對青枯雷爾氏菌脂肪酸色譜結(jié)果進行聚類分析，分析脂肪酸特點的菌株脂肪酸型類別，與菌株致病性指標弱化指數(shù)和發(fā)病率進行比較，闡明菌株脂肪酸型與致病性的相互關(guān)系。
所述的青枯雷爾氏菌種下分化脂肪酸型的判別模型是通過將色譜峰進行系統(tǒng)聚類，用主成分分析選擇色譜峰組中的特征脂肪酸，提供給判別模型分析用，用貝葉撕判別模型，根據(jù)分層因子篩選法選出的脂肪酸因子建立青枯雷爾氏菌脂肪酸型判別模型來分析青枯雷爾氏菌的致病性即首先選擇被測菌株的脂肪酸色譜峰值數(shù)據(jù)，以菌株為指標，以色譜峰值為樣本，構(gòu)建分析矩陣，以馬氏距離為相關(guān)尺度，用類平均法為聚類方法，將色譜峰進行系統(tǒng)聚類，分成不同的色譜峰組，同一色譜峰組的脂肪酸峰具有同質(zhì)性；其次，用主成分分析選擇色譜峰組中的主要成分，以累計特征值大于90％為指標，在因子得分矩陣中，從各色譜峰組中選擇一個因子得分最高的色譜峰，組成色譜峰組特征脂肪酸；最后，以選出的特征脂肪酸為指標(Xj)，被測的青枯雷爾氏菌菌株(Xi)為樣本，青枯雷爾氏菌脂肪酸型級別(Y)為測定值，以組建判別分析數(shù)據(jù)矩陣如下X11X12...X1jY1X21X22...X2jY2...............Xi1Xi2...XijYi]]>其中j為脂肪酸峰序號，i為菌株脂肪酸型級別序號。用貝葉撕(Bayes)逐步判別方法建摸，多組逐步判別分析是按照Bayes準則，用WILKS統(tǒng)計量從M個因子中，根據(jù)各因子判別能力大小的顯著性檢驗結(jié)果，精選出若干判別能力大的且配合較好的因子，建立建立Bayes判別函數(shù)。并可判別新的樣本是屬于哪一組。Bayes判別函數(shù)方程yi(x)=c0i+Σj=1pcijxj,(i=1,2,...,p)]]>其中c0i=-Σk=1pcjkxij]]>cij=(n-m)Σk-1pxikWkj(l+1)]]>當yi(x)=max1≤i≤p[yi(x)],]]>則將個體x劃入第i類。判別值的后驗概率為
p(yi)=eyi(x)Σh=1peyi(x)]]>本發(fā)明中青枯雷爾氏菌種下分化脂肪酸型的分析方法主要利用與青枯雷爾氏菌致病力相關(guān)的指標-弱化指數(shù)和回接發(fā)病率，通過聚類分析建立不同致病性菌株脂肪酸模式類型，對菌株的脂肪酸種類進行聚類分析，通過主成分分析，找到不同類型脂肪酸的主要成分，用判別分析建立青枯雷爾氏菌脂肪酸型判別模型，解決了傳統(tǒng)的種下分化的分析方法中存在的無法區(qū)別不同致病力的青枯雷爾氏菌菌株的問題，從而能清楚直接的鑒別青枯雷爾氏菌菌株的脂肪酸類型以及其致病性和致病力的強弱，為與致病性相關(guān)的青枯雷爾氏菌種下分化脂肪酸型的鑒別提供了理論基礎(chǔ)，同時有利于計算機自動化判定技術(shù)的建立。


圖1是本發(fā)明的青枯雷爾氏菌脂肪酸氣相色譜典型的模式圖。
圖2是本發(fā)明的40株供試青枯雷爾氏菌菌株脂肪酸的聚類分析。
圖3是本發(fā)明的青枯雷爾氏菌脂肪酸種類聚類結(jié)果。
具體實施例方式
一、青枯雷爾氏菌脂肪酸分層因子的篩選1、青枯雷爾氏菌脂肪酸的提取和氣相色譜分析脂肪酸提取所用的試劑包括脂肪酸甲酯混合物標樣、菌落收集培養(yǎng)基(TSB培養(yǎng)基)，為胰蛋白胨大豆肉湯、瓊脂和水組成，皂化試劑為氫氧化鈉和甲醇混合溶液，甲基化試劑為鹽酸和甲醇混合液，萃取試劑為正已烷和甲基叔丁基乙醚混合液，洗滌試劑為氫養(yǎng)化鈉溶液。
首先收集菌落、用皂化試劑皂化細菌細胞后釋放脂肪酸、再用甲基化試劑甲基化脂肪酸、然后用脂肪酸甲酯萃取后經(jīng)基本洗滌完成40株青枯雷爾氏菌脂肪酸的提取，在下述氣相色譜條件下平行分析脂肪酸甲酯混合物標樣和待檢樣本石英毛細管柱及氫火焰離子化檢測器，先升高柱溫，170℃起始，5℃/min升至260℃，而后40℃/min升溫至310℃，維持90S；汽化室溫度250℃、檢測器溫度300℃；載氣為氫氣(2mL/min)、尾吹氣為氮氣(30mL/min)；柱前壓10.00psi(1psi＝6.895kPa)；進樣量1μl，進樣分流比100∶1。
2、青枯雷爾氏菌致病性測定將上述40株青枯雷爾氏菌作為研究對象，在TZC平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)青枯雷爾氏菌單細胞菌落，建立弱化指數(shù)的測定方法，測定40株供試菌株的弱化指數(shù)(N＝D1/D2，其中N為弱化指數(shù)，D1和D2分別表示在TTC平板培養(yǎng)基上青枯雷爾氏菌細胞單菌落的紅斑半徑和菌落半徑)。同時進行番茄組培苗回接，每個菌株回接30株組培苗，設(shè)清水對照，將回接的組培苗放置于28～30℃的人工氣候箱內(nèi)培養(yǎng)，10天后觀察發(fā)病率。根據(jù)弱化指數(shù)和回接發(fā)病率，確定其致病類型，測定結(jié)果如表1所示。
菌株的致病性區(qū)間劃分如下弱化指數(shù)＜0.60時，菌株回接發(fā)病率為100％，定義為強致病力菌株；弱化指數(shù)＞0.80時，菌株回接發(fā)病率為0，定義為無致病性菌株；弱化指數(shù)介于0.60和0.80之間的，菌株的致病性為不確定性，定義為過渡性菌株。從表7可以看出，脂肪酸I型菌株的弱化指數(shù)＞0.80，菌株回接發(fā)病率為0，為無致病性菌株；脂肪酸III型的弱化指數(shù)＜0.60，菌株回接發(fā)病率為100％，為強致病性菌株；脂肪酸II型的弱化指數(shù)介于0.60和0.80之間，菌株回接發(fā)病率在6.7％～100％之間變動，為過渡性菌株。由測定結(jié)果表明青枯雷爾氏菌脂肪酸多態(tài)性與致病性之間存在著相關(guān)性。
3、青枯雷爾氏菌脂肪酸特征圖譜分析選擇青枯雷爾氏菌脂肪酸指紋圖譜匹配率最高菌株的圖譜作為模式圖譜，說明青枯雷爾氏菌脂肪酸種類、特征、種類鑒定參數(shù)等。對被測的40株菌株特征峰值，用DPS軟件進行方差分析。圖譜見圖1所示。
從圖中可以看出，除第一個溶劑波峰外，其余每一個波峰代表一種脂肪酸，青枯雷爾氏菌具有6個特征性色譜峰，其它波峰為非優(yōu)勢脂肪酸。6個特征性色譜峰分別為(1)-C14:0、(2)-C14:0 3OH/C16:1ISO I、(3)-C16:1ω7c/C15:0 ISO 2OH、(4)-C16:0、(5)-C18:1ω7c、(6)-C18:12OH。青枯雷爾氏菌脂肪酸含量最高的三種分別是(3)-C16:1ω7c/C15:0 ISO 2OH、(4)-C16:0和(5)-C18:1ω7c，三種脂肪酸所占的總百分比含量為總脂肪酸的60％以上。
4、青枯雷爾氏菌脂肪酸多態(tài)性的聚類分析以脂肪酸種類為指標，以菌株為樣本，構(gòu)建聚類分析數(shù)據(jù)矩陣，以歐氏距離為相關(guān)尺度，用類平均法為聚類方法，利用LGS軟件對40株青枯雷爾氏菌脂肪酸色譜結(jié)果進行聚類分析，得出系統(tǒng)樹圖，如圖2所示。從圖2可以看出，當λ＝6.00時，40株青枯雷爾氏菌分成3個脂肪酸型類群，可用脂肪酸I、II、III型(Group I、II、III)表示。
三個類群脂肪酸之間的主要差異如圖1和表2所示，平均脂肪酸種類Group I最多，有22種，Group II最少，有17種，Group III介于兩者之間，有19種。主要脂肪酸的平均含量三個類群中含量最低的脂肪酸都是C18:1ω7c，而在Group III中其含量(16.23％)明顯的低于其在Group I(20.21％)和Group II(21.14％)中的含量；含量最高的脂肪酸，在Group I和Group II中是C16:1ω7c/C15:0 ISO2OH含量最高，在Group III中則是C16:0含量最高；C16:1ω7c/C15:0ISO 2OH和C16:0含量的差值，Group I(9.01％)明顯大于Group II(4.54％)。在Group I中，第三個特征性色譜峰C16:1ω7c/C15:0 ISO2OH和第四個特征性色譜峰C16:0之間出現(xiàn)一個小的波峰，而在Group II和Group III中則沒有。代表非優(yōu)勢脂肪酸的小波峰，在GroupI中，主要集中在第一個特征性色譜峰C14:0和第二個特征性色譜峰C14:0 3OH/C16:1 ISO I之間以及第四個特征性色譜峰C16:0和第五個特征性色譜峰C18:1ω7c之間，而在Group II和Group III中，只有第四個特征性色譜峰C16:0和第五個特征性色譜峰C18:1ω7c之間比較多。
二、青枯雷爾氏菌種下分化脂肪酸型的判別模型的建立首先選擇40株被測菌株的脂肪酸色譜18個峰值數(shù)據(jù)，以菌株為指標，以色譜峰值為樣本，構(gòu)建分析矩陣，以馬氏距離為相關(guān)尺度，用類平均法為聚類方法如表3所示，將色譜峰進行Q型系統(tǒng)聚類，分成不同的色譜峰組，分析結(jié)果如圖3所示，當λ＝10.84時，脂肪酸種類可以分為三組，第一組包括了1-7序號的脂肪酸種類，第二組包括了8-11序號的脂肪酸種類，第三組包括了12-18序號的脂肪酸種類，同一色譜峰組的脂肪酸峰具有同質(zhì)性。
其次，用主成分分析選擇色譜峰組中的主要成分，以累計特征值大于90％為指標，在因子得分矩陣中，從各色譜峰組中選擇一個因子得分最高的色譜峰，組成色譜峰組特征脂肪酸。分析結(jié)果如表4所示。前三個主成分的特征值的累計百分比達90.8217％，表明前三個主成分代表了總體信息量的90％以上。
前三個主成分的因子得分按脂肪酸色譜峰組歸類如表5、表6、表7所示。從各脂肪酸組中選擇一個因子得分總和最高的成分，作為判別模型建立的因子。在表5中選擇Y(i，1)，即十四碳脂肪酸(14:0)因子；在表6中選擇Y(i，9)，即十七碳脂肪酸因子(17:00)；在表7中選擇Y(i，16)，即十八碳脂肪酸因子(18:0)。
最后，以選出的特征脂肪酸為指標(Xi)，被測的青枯雷爾氏菌菌株(Xi)為樣本，青枯雷爾氏菌脂肪酸型級別(Y)為測定值，以組建判別分析數(shù)據(jù)矩陣如表8所示。當Fa臨界值＝5.00時，各個因子分類均值如表9所示。類內(nèi)離差(W)矩陣和總離差(T)矩陣如表10所示，兩兩分類間判別效果檢驗如表11所示。計算結(jié)果建立的判別模型如下Y1＝-16.3353+0.0012X1+0.0056X9-0.0016X13；Y2＝-3.4928+0.0002X1+0.0003X9+0.0025X13；Y3＝-9.1550-0.0003X1+0.0039X9+0.0042X13；式中X1代表十四碳脂肪酸，X9代表十七碳脂肪酸，X13代表十八碳脂肪酸，Yi代表第i類脂肪酸型。計算后分類和后驗概率如表12所示。模型對青枯雷爾氏菌脂肪酸型的判別準確率達92.50％，判別效果如表13所示，對于40個菌株的脂肪酸型的判別，錯誤3個，分別是7、34、37號菌株，判別錯誤的原因都是將原來屬于脂肪酸型III的判別成脂肪酸型II，判錯的級別不算太高，因為脂肪酸型II屬過渡型，其中存在著致病性菌株，模型的判別精確度可以滿足青枯雷爾氏菌脂肪酸型歸類。模型的用法為，對于一個未知脂肪酸型的青枯雷爾氏菌菌株，首先測定脂肪酸圖譜，取出X1(十四碳脂肪酸)、X9(十七碳脂肪酸)、X13(十八碳脂肪酸)，代入方程，計算Yi，當1≤Yi≤2時，歸為脂肪酸型I，當2≤Yi≤3時，歸為脂肪酸型II，當Yi＜3時，歸為脂肪酸型III。利用此分析方法能清楚直接的鑒別青枯雷爾氏菌菌株的脂肪酸類型以及其致病性和致病力的強弱，為與致病性相關(guān)的青枯雷爾氏菌種下分化脂肪酸型的鑒別提供理論基礎(chǔ)。
表1 青枯雷爾氏菌致病性測定結(jié)果


表2 青枯雷爾氏菌脂肪酸類群的特點

表3 聚類過程

表4 青枯雷爾氏菌脂肪酸種類主成分分析特征值

表5 脂肪酸第一組色譜峰組主成分分析因子得分

表6 脂肪酸第二組色譜峰組主成分分析因子得分

表7 脂肪酸第二組色譜峰組主成分分析因子得分


表8 青枯雷爾氏菌脂肪酸型判別分析矩陣


表9 各因子分類均值

表10 類內(nèi)離差(W)矩陣和總離差(T)矩陣

表11 兩兩分類間判別效果檢驗

表12 計算后分類和后驗概率


表13 判別效果矩陣分析

權(quán)利要求
1.一種青枯雷爾氏菌種下分化脂肪酸型的分析方法，其特征在于青枯雷爾氏菌脂肪酸分層因子的篩選及其判別模型的建立，通過篩選三個特征因子，建立如下判別模型Y1＝-16.3353+0.0012X1+0.0056X9-0.0016X13；Y2＝-3.4928+0.0002X1+0.0003X9+0.0025X13；Y3＝-9.1550-0.0003X1+0.0039X9+0.0042X13。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青枯雷爾氏菌種下分化脂肪酸型的分析方法，其特征在于所述的青枯雷爾氏菌脂肪酸分層因子的篩選中脂肪酸的提取包括菌落收集，然后放入培養(yǎng)基后細菌細胞皂化釋放脂肪酸、脂肪酸的甲基化、脂肪酸甲酯萃取和基本洗滌這幾個步驟。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的脂肪酸的提取，其特征在于所述的提取試劑包括，脂肪酸甲酯混合物標樣、菌落收集培養(yǎng)基為TSB培養(yǎng)基，為胰蛋白胨大豆肉湯、瓊脂和水組成，皂化試劑為氫氧化鈉和甲醇混合溶液，甲基化試劑為鹽酸和甲醇混合液，萃取試劑為正己烷和甲基叔丁基乙醚混合液，洗滌試劑為氫養(yǎng)化鈉溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青枯雷爾氏菌種下分化脂肪酸型的分析方法，其特征在于所述的色譜分析采用氣相色譜。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青枯雷爾氏菌種下分化脂肪酸型的分析方法，其特征在于所述的青枯雷爾氏菌脂肪酸分層因子的篩選中青枯雷爾氏菌致病性測定是通過測定弱化指數(shù)和回接發(fā)病率，來確定其致病類型。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青枯雷爾氏菌種下分化脂肪酸型的分析方法，其特征在于所述的青枯雷爾氏菌脂肪酸分層因子的篩選中青枯雷爾氏菌脂肪酸特征圖譜分析是通過選擇青枯雷爾氏菌脂肪酸指紋圖譜匹配率最高菌株的圖譜作為模式圖譜，來確定青枯雷爾氏菌脂肪酸種類、特征、種類鑒定參數(shù)，然后對被測的菌株特征峰值，進行方差分析。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青枯雷爾氏菌種下分化脂肪酸型的分析方法，其特征在于所述的青枯雷爾氏菌脂肪酸分層因子的篩選中青枯雷爾氏菌脂肪酸多態(tài)性的聚類分析，以脂肪酸種類為指標，以菌株為樣本，構(gòu)建聚類分析數(shù)據(jù)矩陣，以歐氏距離為相關(guān)尺度，用類平均法為聚類方法，得出系統(tǒng)樹圖。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青枯雷爾氏菌種下分化脂肪酸型的分析方法，其特征在于所述的青枯雷爾氏菌種下分化脂肪酸型的判別模型是通過將色譜峰進行系統(tǒng)聚類，用主成分分析選擇色譜峰組中的特征脂肪酸，提供給判別模型分析用，用貝葉撕判別模型，根據(jù)分層因子篩選法選出的脂肪酸因子建立青枯雷爾氏菌脂肪酸型判別模型來分析青枯雷爾氏菌的致病性。
全文摘要
本發(fā)明公開一種青枯雷爾氏菌種下分化脂肪酸型的分析方法，包括青枯雷爾氏菌脂肪酸分層因子的篩選及其判別模型的建立，通過篩選三個特征因子，建立如下判別模型Y
文檔編號G01N30/00GK101020921SQ20061013536
公開日2007年8月22日 申請日期2006年12月22日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月22日
發(fā)明者劉波, 藍江林, 朱育菁, 車建美, 林營志, 林抗美, 蘇明星, 阮傳清, 葛慈斌, 周先治, 劉蕓 申請人:福建省農(nóng)業(yè)科學院生物技術(shù)研究所