本發(fā)明屬于生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種提取紅曲酒中桔霉素毒素的方法。
背景技術(shù)：
：桔霉素主要是由青霉屬、曲霉屬、紅曲霉屬所產(chǎn)生的一種真菌毒素。桔霉素分布廣泛，主要存在于小麥、玉米、燕麥等谷物產(chǎn)品，以及蘋果、梨等水果的加工制品中。桔霉素具有良好的抑菌性，能抑制枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、灰色鏈霉菌等，但由于桔霉素有很強(qiáng)的腎毒性而沒有廣泛應(yīng)用，而且其污染問題越來越受到人們的關(guān)注，并被國際生命科學(xué)院自然毒素檢測委員會歐洲分會列為必須檢測的毒素之一。中國是世界上紅曲生產(chǎn)與應(yīng)用最早、最廣的國家，而紅曲酒在我國也已經(jīng)有了一千多年的歷史，其品種多、品質(zhì)好、功能強(qiáng)，逐漸受到國內(nèi)外的廣泛關(guān)注。紅曲酒中桔霉素毒素含量也成為我國紅曲酒出口檢驗(yàn)檢疫的主要內(nèi)容。國內(nèi)外基于不同的檢測方法對農(nóng)產(chǎn)品、食品、飼料中所含的桔霉素毒素含量設(shè)立了不同的限制標(biāo)準(zhǔn)，隨著hplc技術(shù)的不斷完善，檢測工作日趨簡單，而樣品的前處理成了技術(shù)關(guān)鍵和難點(diǎn)。目前對于桔霉素毒素分離純化方法較為復(fù)雜，普遍都是通過濃縮、過柱、萃取實(shí)現(xiàn)桔霉素毒素分離，最后通過tlc或者h(yuǎn)plc進(jìn)行定性定量檢測。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種提取紅曲酒中桔霉素毒素的方法。本發(fā)明提供的提取紅曲酒中桔霉素毒素的方法包括如下步驟：將紅曲酒與甲醇混勻，反應(yīng)，得到產(chǎn)物，即得到桔霉素毒素。上述方法中，所述紅曲酒和甲醇的體積比為1：(0.7-2)；所述紅曲酒和甲醇的體積比具體為1：1。上述方法中，所述甲醇為色譜級甲醇。上述方法中，所述反應(yīng)的條件為室溫、200rpm振蕩30-120min；所述振蕩時(shí)間具體為60min。上述方法中，所述將紅曲酒與甲醇溶液混勻前還包括將紅曲酒充分混勻的步驟。上述方法中，所述方法還包括對所述產(chǎn)物進(jìn)行hplc檢測的步驟。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述方法的新用途。本發(fā)明提供了上述方法在檢測紅曲或其相關(guān)產(chǎn)品中桔霉素毒素含量中的應(yīng)用。上述應(yīng)用中，所述紅曲或其相關(guān)產(chǎn)品為紅曲酒。本發(fā)明的最后一個(gè)目的是提供一種檢測紅曲酒中桔霉素毒素含量的方法。本發(fā)明提供的檢測紅曲酒中桔霉素毒素含量的方法包括如下步驟：用上述方法提取紅曲酒中桔霉素毒素，得到桔霉素毒素待測樣品，采用高效液相色譜法對所述桔霉素毒素待測樣品進(jìn)行檢測，得到紅曲酒中桔霉素毒素含量。上述方法或上述應(yīng)用中，所述紅曲酒具體可為市售紅曲酒和造酒廠中未售紅曲原酒。本發(fā)明利用桔霉素易溶于乙腈、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等有機(jī)溶劑的理化性質(zhì)，發(fā)明了一種更為簡便的提取紅曲酒中桔霉素毒素的方法，有利于推動(dòng)紅曲以及紅曲酒業(yè)的發(fā)展。經(jīng)試驗(yàn)證明，本發(fā)明的方法能夠快速提取紅曲酒中桔霉素毒素，且效率高、耗時(shí)少、成本低、回收率高(<100ng/ml，回收率范圍在60-120％；100-1000ng/ml，回收率范圍在80-110％)，符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范-食品理化檢測標(biāo)準(zhǔn)(gb/t27404)，另外，此方法也極大簡便了紅曲及其相關(guān)產(chǎn)品中桔霉素毒素的提取，具有極高的推廣和應(yīng)用價(jià)值。附圖說明圖1為桔霉素毒素含量檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線圖譜。圖2為2000ng/ml桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品的hplc圖譜。圖3為紅曲酒樣品a的hplc圖譜及在紅曲酒樣品a中加入100μl不同濃度的桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品后的hplc圖譜。其中，圖3a為紅曲酒樣品a的hplc圖譜；圖3b為在紅曲酒樣品a中加入100μl2000ng/ml桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品后的hplc圖譜；圖3c為在紅曲酒樣品a中加入100μl1000ng/ml桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品后的hplc圖譜；圖3d為在紅曲酒樣品a中加入100μl500ng/ml桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品后的hplc圖譜。具體實(shí)施方式下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。下述實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。下述實(shí)施例中的桔霉素標(biāo)準(zhǔn)品是sigma公司(美國)的產(chǎn)品。下述實(shí)施例中的色譜級甲醇是fisher公司(美國)的產(chǎn)品。桔霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作方法如下所示：用1ml色譜級甲醇溶1mg固體桔霉素標(biāo)準(zhǔn)品，配制成1000mg/l桔霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，再用色譜級甲醇溶液分別配制成2000ng/ml，1000ng/ml，500ng/ml，100ng/ml，50ng/ml，10ng/ml標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液。采用高效液相色譜法對不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液進(jìn)行hplc定量檢測，并以桔霉素濃度作橫坐標(biāo)，以保留時(shí)間前后0.05min處的峰面積作縱坐標(biāo)，根據(jù)濃度與峰面積的關(guān)系進(jìn)行線性回歸，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。其中，高效液相色譜法條件：色譜柱：agilenttc-c18，4.6×250mm，5μm；流動(dòng)相：乙腈/異丙醇/磷酸(0.08mol/l)(35/10/55，v/v/v)；熒光檢測器：安捷倫g1321；檢測波長：331nm和500nm；流速：1.0ml/min；柱溫40℃；進(jìn)樣量：50μl。繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y＝0.15375654x-1.8281142(y為峰面積，x為桔霉素毒素含量)，r2＝0.99987。圖2為2000ng/ml桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品的hplc圖譜。桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液回收率的檢測方法如下所示：用移液器準(zhǔn)確量取1.9ml色譜級甲醇后，置于10ml離心管內(nèi)，分別加入100μl的濃度為2000ng/ml，1000ng/ml，500ng/ml桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品，上下顛倒數(shù)次至混合均勻后，轉(zhuǎn)至2ml微量進(jìn)樣瓶中，進(jìn)行hplc定量檢測，以外標(biāo)法定量進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。每種桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)添加標(biāo)準(zhǔn)品重復(fù)3次，取平均值。結(jié)果表明：1ml樣品中理論添加桔霉素毒素含量分別為200ng/ml，100ng/ml，50ng/ml，實(shí)際檢測平均值(即為下述實(shí)施例中的添加桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品的實(shí)際檢測值)分別為177.30ng/ml，94.23ng/ml，59.01ng/ml，回收率分別為88.65％，94.23％，118.01％。實(shí)施例1、一種提取紅曲酒中桔霉素毒素的方法及桔霉素毒素含量的檢測分別對紅曲酒樣品a(市售紅曲酒)進(jìn)行原始紅曲酒中桔霉素毒素提取和桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)添加樣品中桔霉素毒素提取，然后進(jìn)行hplc定量檢測。具體步驟如下：1、原始紅曲酒中桔霉素毒素提取用移液器準(zhǔn)確量取1ml已充分混勻的紅曲酒樣品a，置于10ml離心管內(nèi)，加入1ml色譜級甲醇，室溫放置搖床上，200rpm劇烈震蕩60min之后，轉(zhuǎn)至2ml微量進(jìn)樣瓶中，采用高效液相色譜法(hplc)對樣品液進(jìn)行高效液相色譜分析，以外標(biāo)法定量進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。紅曲酒樣品a重復(fù)3次，取平均值。高效液相色譜法條件：色譜柱：agilenttc-c18，4.6×250mm，5μm；流動(dòng)相：乙腈/異丙醇/磷酸(0.08mol/l)(35/10/55，v/v/v)；熒光檢測器：安捷倫g1321；檢測波長：331nm和500nm；流速：1.0ml/min；柱溫40℃；進(jìn)樣量：50μl。收集與桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間(保留時(shí)間約0.05min)一致的峰的洗脫液，得到原始紅曲酒樣品a中的桔霉素毒素含量。圖3a為紅曲酒樣品a的hplc圖譜。2、桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)添加樣品中桔霉素毒素提取用移液器準(zhǔn)確量取1ml已充分混勻的紅曲酒樣品a，置于10ml離心管內(nèi)，分別加入100μl的濃度為2000ng/ml，1000ng/ml，500ng/ml桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品，上下顛倒數(shù)次至混合均勻后，再加入0.9ml色譜級甲醇，室溫放置搖床上，200rpm劇烈震蕩60min之后，轉(zhuǎn)至2ml微量進(jìn)樣瓶中。采用高效液相色譜法(hplc)分別對樣品液進(jìn)行高效液相色譜分析，以外標(biāo)法定量進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，分別得到桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)添加樣品中的桔霉素毒素含量，再分別計(jì)算回收率。每種桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)添加紅曲酒樣品重復(fù)3次，取平均值。檢測結(jié)果如表1所示。其中，實(shí)際含量(ng/ml)為紅曲酒樣品中桔霉素毒素含量的實(shí)際平均檢測值；理論含量(ng/ml)為紅曲酒樣品中分別加入0，2000ng/ml，1000ng/ml，500ng/ml桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品后的理論含量；回收率(％)為實(shí)際含量/理論含量*100％。當(dāng)加標(biāo)濃度為0時(shí)，桔霉素毒素含量為30.90ng/ml(即為原始紅曲酒樣品a中的桔霉素毒素平均含量)；當(dāng)加標(biāo)濃度為2000ng/ml時(shí)，桔霉素毒素含量為216.27ng/ml，理論含量為230.90ng/ml(200.00ng/ml+30.90ng/ml)，回收率為93.66％(216.27ng/ml/230.90ng/ml)。當(dāng)加標(biāo)濃度為1000ng/ml時(shí)，桔霉素毒素含量為127.77ng/ml，理論含量為130.90ng/ml(100.00ng/ml+30.90ng/ml)，回收率為97.61％(127.77ng/ml/130.90ng/ml)。當(dāng)加標(biāo)濃度為500ng/ml時(shí)，桔霉素毒素含量為79.22ng/ml，理論含量為80.90ng/ml(50.00ng/ml+30.90ng/ml)，回收率為97.92％(97.92ng/ml/80.90ng/ml)。以上加標(biāo)回收率均符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范-食品理化檢測標(biāo)準(zhǔn)(gb/t27404)(加標(biāo)濃度<100ng/ml，回收率范圍在60-120％；100-1000ng/ml，回收率范圍在80-110％)，說明本發(fā)明提取的桔霉素毒素的方法是可行的，且該方法更加簡便。圖3b為在紅曲酒樣品a中加入100μl2000ng/ml桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品后的hplc圖譜；圖3c為在紅曲酒樣品a中加入100μl1000ng/ml桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品后的hplc圖譜；圖3d為在紅曲酒樣品a中加入100μl500ng/ml桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品后的hplc圖譜。表1紅曲酒樣品a中桔霉素毒素含量檢測加標(biāo)濃度(ng/ml)實(shí)際含量(ng/ml)理論含量(ng/ml)回收率(％)030.9030.902000216.27230.9093.661000127.77130.9097.6150079.2280.9097.92實(shí)施例2、一種提取紅曲酒中桔霉素毒素的方法及桔霉素毒素含量的檢測分別對紅曲酒樣品b(市售紅曲酒)進(jìn)行原始紅曲酒中桔霉素毒素提取和桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)添加樣品中桔霉素毒素提取，然后進(jìn)行hplc定量檢測。具體步驟如下：1、原始紅曲酒中桔霉素毒素提取用移液器準(zhǔn)確量取1ml已充分混勻的紅曲酒樣品b，置于10ml離心管內(nèi)，加入1ml色譜級甲醇，室溫放置搖床上，200rpm劇烈震蕩60min之后，轉(zhuǎn)至2ml微量進(jìn)樣瓶中，采用高效液相色譜法(hplc)對樣品液進(jìn)行高效液相色譜分析，以外標(biāo)法定量進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。紅曲酒樣品b重復(fù)3次，取平均值。高效液相色譜法條件：色譜柱：agilenttc-c18，4.6×250mm，5μm；流動(dòng)相：乙腈/異丙醇/磷酸(0.08mol/l)(35/10/55，v/v/v)；熒光檢測器：安捷倫g1321；檢測波長：331nm和500nm；流速：1.0ml/min；柱溫40℃；進(jìn)樣量：50μl。收集與桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間(保留時(shí)間約0.05min)一致的峰的洗脫液，得到原始紅曲酒樣品b中的桔霉素毒素含量。2、桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)添加樣品中桔霉素毒素提取用移液器準(zhǔn)確量取1ml已充分混勻的紅曲酒樣品b，置于10ml離心管內(nèi)，分別加入100μl的濃度為2000ng/ml，1000ng/ml，500ng/ml桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品，上下顛倒數(shù)次至混合均勻后，再加入0.9ml色譜級甲醇，室溫放置搖床上，200rpm劇烈震蕩60min之后，轉(zhuǎn)至2ml微量進(jìn)樣瓶中。采用高效液相色譜法(hplc)分別對樣品液進(jìn)行高效液相色譜分析，以外標(biāo)法定量進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，分別得到桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)添加樣品中的桔霉素毒素含量，再分別計(jì)算加標(biāo)回收率。每種桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)添加紅曲酒樣品重復(fù)3次，取平均值。檢測結(jié)果如表2所示。當(dāng)加標(biāo)濃度為0時(shí)，桔霉素毒素含量為30.39ng/ml(即為原始紅曲酒樣品b中的桔霉素毒素平均含量)；當(dāng)加標(biāo)濃度為2000ng/ml時(shí)，桔霉素毒素含量為210.73ng/ml，理論含量為230.39ng/ml(200.00ng/ml+30.39ng/ml)，回收率為91.47％(210.73ng/ml/230.39ng/ml)。當(dāng)加標(biāo)濃度為1000ng/ml時(shí)，桔霉素毒素含量為119.87ng/ml，理論含量為130.39ng/ml(100.00ng/ml+30.39ng/ml)，回收率為91.93％(119.87ng/ml/130.39ng/ml)。當(dāng)加標(biāo)濃度為500ng/ml時(shí)，桔霉素毒素含量為75.44ng/ml，理論含量為80.39ng/ml(50.00ng/ml+30.39ng/ml)，回收率為93.84％(75.44ng/ml/80.39ng/ml)。以上加標(biāo)回收率均符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范-食品理化檢測標(biāo)準(zhǔn)(gb/t27404)(加標(biāo)濃度<100ng/ml，回收率范圍在60-120％；100-1000ng/ml，回收率范圍在80-110％)，說明本發(fā)明提取的桔霉素毒素的方法是可行的，且該方法更加簡便。表2紅曲酒樣品b中桔霉素毒素含量檢測加標(biāo)濃度(ng/ml)實(shí)際含量(ng/ml)理論含量(ng/ml)回收率(％)030.3930.392000210.73230.3991.471000119.87130.3991.9350075.4480.3993.84實(shí)施例3、一種提取紅曲酒中桔霉素毒素的方法及桔霉素毒素含量的檢測分別對紅曲酒樣品c(市售紅曲酒)進(jìn)行原始紅曲酒中桔霉素毒素提取和桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)添加樣品中桔霉素毒素提取，然后進(jìn)行hplc定量檢測。具體步驟如下：1、原始紅曲酒中桔霉素毒素提取用移液器準(zhǔn)確量取1ml已充分混勻的紅曲酒樣品c，置于10ml離心管內(nèi)，加入1ml色譜級甲醇，室溫放置搖床上，200rpm劇烈震蕩60min之后，轉(zhuǎn)至2ml微量進(jìn)樣瓶中，采用高效液相色譜法(hplc)對樣品液進(jìn)行高效液相色譜分析，以外標(biāo)法定量進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。紅曲酒樣品c重復(fù)3次，取平均值。高效液相色譜法條件：色譜柱：agilenttc-c18，4.6×250mm，5μm；流動(dòng)相：乙腈/異丙醇/磷酸(0.08mol/l)(35/10/55，v/v/v)；熒光檢測器：安捷倫g1321；檢測波長：331nm和500nm；流速：1.0ml/min；柱溫40℃；進(jìn)樣量：50μl。收集與桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間(保留時(shí)間約0.05min)一致的峰的洗脫液，得到原始紅曲酒樣品c中的桔霉素毒素含量。2、桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)添加樣品中桔霉素毒素提取用移液器準(zhǔn)確量取1ml已充分混勻的紅曲酒樣品c，置于10ml離心管內(nèi)，分別加入100μl的濃度為2000ng/ml，1000ng/ml，500ng/ml桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品，上下顛倒數(shù)次至混合均勻后，再加入0.9ml色譜級甲醇，室溫放置搖床上，200rpm劇烈震蕩60min之后，轉(zhuǎn)至2ml微量進(jìn)樣瓶中。采用高效液相色譜法(hplc)分別對樣品液進(jìn)行高效液相色譜分析，以外標(biāo)法定量進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，分別得到桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)添加樣品中的桔霉素毒素含量，再分別計(jì)算加標(biāo)回收率。每種桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)添加紅曲酒樣品重復(fù)3次，取平均值。檢測結(jié)果如表3所示。當(dāng)加標(biāo)濃度為0時(shí)，桔霉素毒素含量為28.74ng/ml(即為原始紅曲酒樣品c中的桔霉素毒素平均含量)；當(dāng)加標(biāo)濃度為2000ng/ml時(shí)，桔霉素毒素含量為208.56ng/ml，理論含量為228.74ng/ml(200.00ng/ml+28.74ng/ml)，回收率為91.18％(208.56ng/ml/228.74ng/ml)。當(dāng)加標(biāo)濃度為1000ng/ml時(shí)，桔霉素毒素含量為118.25ng/ml，理論含量為128.74ng/ml(100.00ng/ml+28.74ng/ml)，回收率為94.99％(118.25ng/ml/128.74ng/ml)。當(dāng)加標(biāo)濃度為500ng/ml時(shí)，桔霉素毒素含量為73.54ng/ml，理論含量為78.74ng/ml(50.00ng/ml+28.74ng/ml)，回收率為93.40％(73.54ng/ml/78.74ng/ml)。以上加標(biāo)回收率均符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范-食品理化檢測標(biāo)準(zhǔn)(gb/t27404)(加標(biāo)濃度<100ng/ml，回收率范圍在60-120％；100-1000ng/ml，回收率范圍在80-110％)，說明本發(fā)明提取的桔霉素毒素的方法是可行的，且該方法更加簡便。表3紅曲酒樣品c中桔霉素毒素含量檢測加標(biāo)濃度(ng/ml)實(shí)際含量(ng/ml)理論含量(ng/ml)回收率(％)028.7428.742000208.56228.7491.181000118.25128.7491.8550073.5478.7493.40實(shí)施例4、一種提取紅曲酒中桔霉素毒素的方法及桔霉素毒素含量的檢測分別對紅曲酒樣品d(造酒廠中未售紅曲原酒)進(jìn)行原始紅曲酒中桔霉素毒素提取和桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)添加樣品中桔霉素毒素提取，然后進(jìn)行hplc定量檢測。具體步驟如下：1、原始紅曲酒中桔霉素毒素提取用移液器準(zhǔn)確量取1ml已充分混勻的紅曲酒樣品d，置于10ml離心管內(nèi)，加入1ml色譜級甲醇，室溫放置搖床上，200rpm劇烈震蕩60min之后，轉(zhuǎn)至2ml微量進(jìn)樣瓶中，采用高效液相色譜法(hplc)對樣品液進(jìn)行高效液相色譜分析，以外標(biāo)法定量進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。紅曲酒樣品d重復(fù)3次，取平均值。高效液相色譜法條件：色譜柱：agilenttc-c18，4.6×250mm，5μm；流動(dòng)相：乙腈/異丙醇/磷酸(0.08mol/l)(35/10/55，v/v/v)；熒光檢測器：安捷倫g1321；檢測波長：331nm和500nm；流速：1.0ml/min；柱溫40℃；進(jìn)樣量：50μl。收集與桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間(保留時(shí)間約0.05min)一致的峰的洗脫液，得到原始紅曲酒樣品d中的桔霉素毒素含量。2、桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)添加樣品中桔霉素毒素提取用移液器準(zhǔn)確量取1ml已充分混勻的紅曲酒樣品d，置于10ml離心管內(nèi)，分別加入100μl的濃度為2000ng/ml，1000ng/ml，500ng/ml桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品，上下顛倒數(shù)次至混合均勻后，再加入0.9ml色譜級甲醇，室溫放置搖床上，200rpm劇烈震蕩60min之后，轉(zhuǎn)至2ml微量進(jìn)樣瓶中。采用高效液相色譜法(hplc)分別對樣品液進(jìn)行高效液相色譜分析，以外標(biāo)法定量進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，分別得到桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)添加樣品中的桔霉素毒素含量，再分別計(jì)算加標(biāo)回收率。每種桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)添加紅曲酒樣品重復(fù)3次，取平均值。檢測結(jié)果如表4所示。當(dāng)加標(biāo)濃度為0時(shí)，桔霉素毒素含量為74.39ng/ml(即為原始紅曲酒樣品d中的桔霉素毒素平均含量)；當(dāng)加標(biāo)濃度為2000ng/ml時(shí)，桔霉素毒素含量為260.94ng/ml，理論含量為274.39ng/ml(200.00ng/ml+74.39ng/ml)，回收率為95.10％(260.94ng/ml/274.39ng/ml)。當(dāng)加標(biāo)濃度為1000ng/ml時(shí)，桔霉素毒素含量為166.60ng/ml，理論含量為174.39ng/ml(100.00ng/ml+74.39ng/ml)，回收率為95.53％(166.60ng/ml/174.39ng/ml)。當(dāng)加標(biāo)濃度為500ng/ml時(shí)，桔霉素毒素含量為121.46ng/ml，理論含量為124.39ng/ml(50.00ng/ml+74.39ng/ml)，回收率為97.64％(121.46ng/ml/124.39ng/ml)。以上加標(biāo)回收率均符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范-食品理化檢測標(biāo)準(zhǔn)(gb/t27404)(加標(biāo)濃度<100ng/ml，回收率范圍在60-120％；100-1000ng/ml，回收率范圍在80-110％)，說明本發(fā)明提取的桔霉素毒素的方法是可行的，且該方法更加簡便。表4紅曲酒樣品d中桔霉素毒素含量檢測加標(biāo)濃度(ng/ml)實(shí)際含量(ng/ml)理論含量(ng/ml)回收率(％)074.3974.392000260.94274.3995.101000166.60174.3995.53500121.46124.3997.64當(dāng)前第1頁12