專利名稱：能防治連作甜瓜枯萎病的拮抗菌及其微生物有機(jī)肥料的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及能防治連作甜瓜枯萎病的拮抗菌及其微生物有機(jī)肥料，屬于農(nóng)業(yè)集
約化生產(chǎn)技術(shù)，專用于克服和消除連作甜瓜枯萎病問題。
二背景技術(shù)：
甜瓜在世界各地均有栽培，是全球十大水果之一，是世界各地人們普遍喜食的 鮮食水果。分布范圍從北緯65。左右到南緯23。左右，遍及五大洲，其中中國的栽培面 積最大。我國南北各地都有廣泛種植，其中新疆、甘肅等西北地區(qū)是薄皮甜瓜的傳統(tǒng)產(chǎn) 區(qū)。甜瓜病蟲害特別是甜瓜枯萎病歷來是影響其生產(chǎn)的重要問題，90年代以來保護(hù)地設(shè) 施化栽培方式逐步推廣，甜瓜枯萎病更趨嚴(yán)重。連作甜瓜枯萎病是由病原真菌(尖孢鐮 刀菌)引起，在連作2茬時(shí)就開始出現(xiàn)，連作3茬以后越發(fā)嚴(yán)重。傳統(tǒng)的化學(xué)防治方法 會對環(huán)境及人類造成負(fù)面影響。我們的研究結(jié)果表明，連作作物枯萎病的關(guān)鍵問題不是 養(yǎng)分缺乏或不平衡，也不是土壤次生鹽漬化問題，而是土壤中的微生物區(qū)系改變及其次 生代謝物的致毒問題。 另一方面，水稻、小麥、玉米、油菜等作物秸稈就地焚燒、規(guī)模化養(yǎng)殖后的畜 禽糞便隨地棄置等不僅嚴(yán)重污染了環(huán)境，也極大地浪費(fèi)了能作為有機(jī)肥和生物有機(jī)肥產(chǎn) 品的原料；大量的養(yǎng)分資源(C、 N、 P、 K、 S及微量元素)流失于土壤-植物系統(tǒng)之外， 明顯地削弱了我國農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的能力。如何將從土壤中因作物收獲而取走的營養(yǎng)元 素最大限度地歸還到土壤中去，唯一的途徑就是將這些固體有機(jī)廢棄物制成商品有機(jī)肥 料再施入土壤。如果將這些固體有機(jī)廢棄物經(jīng)過高溫發(fā)酵合成高品位的有機(jī)堆肥，再用 作功能菌的載體，所制成的微生物有機(jī)肥料功能明確，將會有很好的應(yīng)用前景。
三
發(fā)明內(nèi)容
l.技術(shù)問題 本發(fā)明的目的在于研制一種能防治連作甜瓜枯萎病的微生物有機(jī)肥料，克服或 消除連作甜瓜枯萎病的效率達(dá)到80%以上，使大量的設(shè)施農(nóng)業(yè)土壤和露地甜瓜連作障礙 土壤得到生物修復(fù)，確保集約化農(nóng)業(yè)的順利發(fā)展。
2.技術(shù)方案 兩株能克服或消除連作甜瓜枯萎病的拮抗菌NJY10和NJY-IVI，分別屬于多粘 類芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa)和枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)， 2009年7月9日 保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，NJY10的保藏號為CGMCC N0.3178, NJY-IVI的保藏號為CGMCC N0.3179。 NJY10的主要生物學(xué)特性為革蘭氏染色陽性(G+)，細(xì)胞為桿狀，過氧化氫 酶陽性、淀粉水解陽性、V.P.反應(yīng)陽性，甲基紅試驗(yàn)陰性，纖維素分解陰性，明膠水解 陽性，硝酸鹽還原陽性，吲哚試驗(yàn)陰性，能利用檸檬酸鹽，能產(chǎn)氨，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn) 氣，發(fā)酵木糖、L-阿拉伯糖、甘露糖只產(chǎn)酸。
NJY-IVI的主要生物學(xué)特性為革蘭氏染色陽性(G+)，細(xì)胞為桿狀，過氧化氫酶陽 性、淀粉水解陽性、VP.反應(yīng)陽性，甲基紅試驗(yàn)陰性，纖維素分解陰性，明膠水解陽性， 硝酸鹽還原陽性，吲哚試驗(yàn)陽性，能利用檸檬酸鹽，能產(chǎn)氨，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，發(fā) 酵木糖、L-阿拉伯糖、甘露糖只產(chǎn)酸。 用上述能克服或消除連作甜瓜枯萎病拮抗菌所生產(chǎn)的微生物有機(jī)肥料中含有 1 X 108個(gè)/g以上的拮抗菌NJY10或NJY-IVI，或拮抗菌NJY10和NJY-IVI、全氮含量為 4 5% (90%以上為有機(jī)氮)、總氮磷鉀養(yǎng)分為6 10%、有機(jī)質(zhì)含量為30 35%。其 生產(chǎn)方法包括 1)將拮抗菌NJY10和NJY-IVI分別接種到PDA培養(yǎng)液，分別進(jìn)行液體發(fā)酵生 產(chǎn)，發(fā)酵生產(chǎn)的條件為pH生長范圍自然，培養(yǎng)溫度范圍30 38t:，攪拌速度為180 300轉(zhuǎn)/分鐘，發(fā)酵中后期形成芽孢，使發(fā)酵液中含菌或芽孢量^5Xl()g個(gè)/ml。所用PDA 培養(yǎng)液配制方法為，以配制1L培養(yǎng)基為例用200g土豆削皮后切成小塊放到水里煮， 沸騰后煮30min，經(jīng)過濾后濾液中加20g普通蔗糖，定容至1000ml， pH值調(diào)至7.2-7.4， 121。C滅菌20min。 2)將拮抗菌與腐熟后的豬糞堆肥和菜粕微生物酶解混合物分別進(jìn)行固體發(fā)酵， 每噸固體有機(jī)物料中加入拮抗菌液50L，固體發(fā)酵過程中每天翻堆l次，使固體發(fā)酵溫 度不超過5(TC， 一般發(fā)酵5天后結(jié)束，使拮抗菌含量達(dá)到lX108個(gè)/g以上，獲得拮抗菌 NJY10的豬糞堆肥固體菌劑和菜粕微生物酶解混合物固體菌劑，同樣獲得拮抗菌NJY-IVI 的兩種固體菌劑。所用腐熟后的豬糞堆肥發(fā)芽指數(shù)為98%以上，有機(jī)質(zhì)質(zhì)量比含量 235%，有機(jī)氮質(zhì)量比含量為1.2-2%，含水量質(zhì)量比25-30%。 3)按豬糞堆肥和菜粕的微生物酶解混合物兩類分別將拮抗菌NJYIO固體菌劑和 NJY-IVI固體菌劑以體積比1 : l混合，獲得豬糞堆肥的固體混合菌劑和菜粕微生物酶解 混合物的固體混合菌劑。 4)再將豬糞堆肥的固體單一菌劑、混合菌劑按體積比50-70%分別與菜粕微生 物酶解混合物的固體單一菌劑、混合菌劑按體積比30-50%的比例充分混合，并后熟2-3 天，后熟過程中翻堆2次，最后在溫度不超過6(TC的條件下將微生物有機(jī)肥的含水量蒸 發(fā)至30%以下，分別獲得能防治連作甜瓜枯萎病的拮抗菌NJYIO、 NJY-IVI單菌微生物有 機(jī)肥以及拮抗菌NJY10和NJY-IVI混合微生物有機(jī)肥包裝出廠即為防治連作甜瓜枯萎病 的微生物有機(jī)肥料。 上述微生物有機(jī)肥料可專用于防治連作甜瓜枯萎病。
3.有益效果 本發(fā)明一種能克服或消除連作甜瓜枯萎病的微生物有機(jī)肥料及其生產(chǎn)方法，利 用豬糞堆肥和菜粕微生物酶解氨基酸混合物，再與拮抗菌液混合后制成微生物有機(jī)肥 料，其產(chǎn)品與目前市場上的產(chǎn)品相比具有如下優(yōu)點(diǎn) I)肥料產(chǎn)品中含有抑制甜瓜枯萎病原真菌生長的專一性高效菌株(NJYIO， NJY-IVI)，其抑制效果非常顯著，肥料中該高效菌株的含量達(dá)到lX108個(gè)/g以上，施入 土壤后能形成優(yōu)勢群，并在土壤中存活下來。 2)肥料產(chǎn)品中含有豐富的可溶性有機(jī)碳和有機(jī)氮，能給功能菌提供十分優(yōu)越的 生長環(huán)境，極大地提高了拮抗菌在土壤中的定殖和發(fā)揮功能的能力。
5
3)本發(fā)明產(chǎn)品有機(jī)磷和有機(jī)氮含量特別高，均達(dá)到4%。本產(chǎn)品原料之一為豬糞，總磷含量很高，而且生物有效性特別高，在制成的微生物有機(jī)肥料產(chǎn)品中無需添加任何含磷化肥，使用本產(chǎn)品后能使作物順利度過苗期磷素敏感期。相比之下，含磷化肥施入土壤后生物有效性較差；本產(chǎn)品中有機(jī)氮能達(dá)到4%以上(大部分為氨基酸和小分子多肽)，確保了肥料氮素持續(xù)穩(wěn)定的供應(yīng)，使所種作物生長和抗逆能力大大增強(qiáng)。
4)試驗(yàn)結(jié)果表明，在連作甜瓜的土壤上施用本產(chǎn)品后，能顯著降低枯萎病的發(fā)病率，生物防治率達(dá)80%以上，連續(xù)三年施用本肥料的土壤，連作甜瓜枯萎病的生物防治率更高。
四

圖1拮抗菌株抑菌圈
五具體實(shí)施例方式( — )菌株的分離和鑒定 采集已經(jīng)發(fā)生連作障礙并出現(xiàn)嚴(yán)重甜瓜枯萎病的植株和周圍土壤，樣品低溫保存，采用Kelman 's TTC Agar選擇性培養(yǎng)基分離病原菌。然后以甜瓜枯萎病病原菌為指示菌，從連作甜瓜枯萎病發(fā)病田塊中的健康植株根際土壤中分離拮抗菌。再通過盆栽試驗(yàn)和大田試驗(yàn)最終復(fù)篩出高效拮抗菌株NJYIO， NJY-IVI，鑒定到屬種，菌種于30%甘油中-70°。保存。拮抗菌株NJYIO， NJY-IVI抑菌圈如圖1所示。 拮抗菌NJYIO屬于多粘類芽孢桿菌(Paenibacilluspolymyxa)，其主要生物學(xué)特性為革蘭氏染色陽性(G+)，細(xì)胞為桿狀，過氧化氫酶陽性、淀粉水解陽性、V.P.反應(yīng)陽性，甲基紅試驗(yàn)陰性，纖維素分解陰性，明膠水解陽性，硝酸鹽還原陽性，吲哚試驗(yàn)陰性，能利用擰檬酸鹽，能產(chǎn)氨，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，發(fā)酵木糖、L-阿拉伯糖、甘露糖
只產(chǎn)酸。拮抗菌NJY-IVI屬于枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，其主要生物學(xué)特性為革蘭氏染色陽性(G+)，細(xì)胞為桿狀，過氧化氫酶陽性、淀粉水解陽性、V.P.反應(yīng)陽性，甲基紅試驗(yàn)陰性，纖維素分解陰性，明膠水解陽性，硝酸鹽還原陽性，吲哚試驗(yàn)陽性，能利用檸檬酸鹽，能產(chǎn)氨，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，發(fā)酵木糖、L-阿拉伯糖、甘露糖只產(chǎn)酸。
( 二 )菌劑生產(chǎn) 1)將拮抗菌NJY10和NJY-IVI分別接種到PDA培養(yǎng)液，分別進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵生產(chǎn)的條件為pH生長范圍自然，培養(yǎng)溫度范圍30 38t:，攪拌速度為180 300轉(zhuǎn)/分鐘，發(fā)酵中后期形成芽孢，使發(fā)酵液中含菌或芽孢量^5Xl()g個(gè)/ml。所用PDA培養(yǎng)液配制方法為，以配制1L培養(yǎng)基為例用200g土豆削皮后切成小塊放到水里煮，沸騰后煮30min，經(jīng)過濾后濾液中加20g普通蔗糖，定容至1000ml， pH值調(diào)至7.2-7.4，121。C滅菌20min。 2)將拮抗菌與腐熟后的豬糞堆肥和菜粕微生物酶解混合物分別進(jìn)行固體發(fā)酵，每噸固體有機(jī)物料中加入拮抗菌液50L，固體發(fā)酵過程中每天翻堆l次，使固體發(fā)酵溫度不超過5(TC， 一般發(fā)酵5天后結(jié)束，使拮抗菌含量達(dá)到lX108個(gè)/g以上，獲得拮抗菌NJY10的豬糞堆肥固體菌劑和菜粕微生物酶解混合物固體菌劑，同樣獲得拮抗菌NJY-IVI的兩種固體菌劑。所用腐熟后的豬糞堆肥發(fā)芽指數(shù)為98%以上，有機(jī)質(zhì)質(zhì)量比含量235%，有機(jī)氮質(zhì)量比含量為1.2-2%，含水量質(zhì)量比25-30%。 其中菜粕的微生物酶解混合物制備方法為(公知公用，見發(fā)明專利ZL200610086126.0, —種農(nóng)用氨基酸的生物制取方法及其肥料產(chǎn)品)，將嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)菌株37-l發(fā)酵液加入到菜粕原料中，調(diào)節(jié)含水量55-65%和pH 6.0-7.5，進(jìn)行開放式固體發(fā)酵，待發(fā)酵溫度上升至5(TC時(shí)立即開始翻堆，以后每天翻堆，使堆溫始終維持在35-5(TC共5天，固體發(fā)酵開始后，堆物的pH會不斷上升，每次翻堆時(shí)用含酸液體調(diào)節(jié)含水量和pH，使它們分別維持在55-65%和6.0-7.0，發(fā)酵終止時(shí)再用含酸液體進(jìn)行噴灑，直至堆物pH調(diào)整為5.0左右，再進(jìn)行低溫干燥或自然涼干，即為菜粕的微生物酶解混合物(含氨基酸的混合材料)。 3)按豬糞堆肥和菜粕的微生物酶解混合物兩類分別將拮抗菌NJYIO固體菌劑和NJY-IVI固體菌劑以體積比1 : l混合，獲得豬糞堆肥的固體混合菌劑和菜粕微生物酶解混合物的固體混合菌劑； 4)再將豬糞堆肥的固體單一菌劑、混合菌劑按體積比70%分別與菜粕微生物酶解混合物的固體單一菌劑、混合菌劑按體積比30%的比例充分混合，并后熟2-3天，后熟過程中翻堆2次，最后在溫度不超過6(TC的條件下將微生物有機(jī)肥的含水量蒸發(fā)至30%以下，獲得能防治連作甜瓜枯萎病的單菌微生物有機(jī)肥(分別含拮抗菌NJYIO、NJY-IVI)、混合微生物有機(jī)肥(含拮抗菌NJY10和NJY-IVI)。 用上述拮抗菌所生產(chǎn)的混合微生物有機(jī)肥(防治連作甜瓜枯萎病的微生物有機(jī)肥料)，其中含有1Xl()8個(gè)/g以上的拮抗菌NJY10或NJY-IVI，或拮抗菌NJY10和NJY-IVI、全氮含量為4 5% (90%以上為有機(jī)氮)、總氮磷鉀養(yǎng)分為6 10%、有機(jī)質(zhì)含量為30 35%。
(三)盆栽試驗(yàn) 選取健康水稻土過篩作為育苗土。營養(yǎng)缽采用一次性塑料水杯，每缽裝土300g，微生物肥料施用量為2g/100g土。 大盆每盆裝10kg病原土，病原土采自安徽和縣甜瓜連作大棚內(nèi)(枯萎病發(fā)病率達(dá)到70%以上)。大盆中微生物有機(jī)肥施用量為0.5%，即每盆加入50g微生物有機(jī)肥，肥料與病原土充分混合均勻。待甜瓜幼苗長至3-4片真葉時(shí)移栽入裝有甜瓜枯萎病病原菌病土的大盆缽中。共設(shè)置8個(gè)處理，每處理重復(fù)10次。該盆栽試驗(yàn)與2008年3月至11月在江蘇省宜興工程中心溫室連續(xù)種植三季。
該盆栽試驗(yàn)處理如下 1、營養(yǎng)缽、大盆均施用等量化肥(即對照) 2、營養(yǎng)缽施用普通有機(jī)肥，大盆施等量化肥 3、營養(yǎng)缽施NJY10單菌微生物有機(jī)肥，大盆施等量化肥 4、營養(yǎng)缽施NJY-IVI單菌微生物有機(jī)肥，大盆施等量化肥 5、營養(yǎng)缽施NJY10和NJY-IVI混合菌微生物有機(jī)肥，大盆施等量化肥 6、營養(yǎng)缽施等量化肥，大盆施NJY10和NJY-IVI混合菌微生物有機(jī)肥 7、營養(yǎng)缽施普通有機(jī)肥，大盆施NJY10和NJY-IVI混合菌微生物有機(jī)肥 8、營養(yǎng)缽、大盆均施NJY10和NJY-IVI混合菌微生物有機(jī)肥
自移栽16天時(shí)發(fā)現(xiàn)枯萎病發(fā)病植株，每天觀察植株發(fā)病情況，記錄發(fā)病率，并采集各處理的植株樣和土樣帶回實(shí)驗(yàn)室分析測定。 結(jié)果表明(表l)，處理l、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8甜瓜植株發(fā)病率分別為90%、70%、 20%、 20%、 15%、 70%、 70%、 15%，說明無論營養(yǎng)缽中或大盆中單獨(dú)施用由拮抗菌制成的微生物有機(jī)肥都能使甜瓜枯萎病的發(fā)病率下降，但營養(yǎng)缽中使用微生物有機(jī)肥的效果更明顯，營養(yǎng)缽中使用NJY-IVI單菌微生物有機(jī)肥或NJY10單菌微生物有機(jī)肥，對甜瓜枯萎病的防治率均達(dá)77.8%，而營養(yǎng)缽中使用NJYIO、 NJY-IVI混合菌微生物有機(jī)肥對對甜瓜枯萎病的防治率可達(dá)80%。營養(yǎng)缽中和大盆中均施用混合菌微生物有機(jī)肥料后對甜瓜枯萎病的防治率也達(dá)到80%。施用混合菌對防治甜瓜枯萎病效果最好。
營養(yǎng)缽或者營養(yǎng)缽和大盆均施用混合菌微生物有機(jī)肥都能夠明顯增加植株生物量。處理l(營養(yǎng)缽大盆均施用化肥)植株生物量為10.4g/株，而處理5(營養(yǎng)缽施NJYIO和NJY-IVI混合菌微生物有機(jī)肥，大盆施化肥)、處理8(營養(yǎng)缽、大盆均施NJYIO和NJY-IVI混合菌微生物有機(jī)肥)植株生物量分別為113.9g/株、183.3g/株，植株生物量分別增加了9.9， 16.6倍。同時(shí)，營養(yǎng)缽施用NJYIO、 NJY-IVI單菌微生物有機(jī)肥也都能夠明顯增加植株生物量，植株生物量分別為114.73g/株、93.68g/株，植株生物量分別增加了10倍，8倍。結(jié)果表明營養(yǎng)缽、大盆均施用混合菌微生物有機(jī)肥增產(chǎn)效果最好。
利用尖孢鐮刀菌選擇性培養(yǎng)基對甜瓜植株莖、根系、根圍、根際土壤中病原菌尖孢鐮刀菌進(jìn)行計(jì)數(shù)(表2、 3)，結(jié)果表明不施用微生物有機(jī)肥時(shí)植株莖、根系、根際病原菌數(shù)量分別達(dá)到104， 105以上，植株發(fā)病率達(dá)到90%以上；而營養(yǎng)缽施用微生物有機(jī)肥后，病原菌在植株及土壤中的數(shù)量均在103， 104水平上，這表明施用微生物有機(jī)肥能夠顯著降低土壤、植株中病原菌的數(shù)量，從而改善連作土壤中微生物的種群結(jié)構(gòu)，起到防治連作甜瓜枯萎病的生防作用。
表1甜瓜盆缽試驗(yàn)發(fā)病率和植株生物量
細(xì)發(fā)病率植禱重(g/株)
營謂脅燭似巴爆10.4土2.91d
營鍵有嫌+誠化肥70%32,16 ±5加
20%114.73士18.99bc
營,NJY-IVI單菌微生鵬棚E+細(xì)W巴20%93.6S:』16.67c
營辦混合菌微生鵬匿+爐似巴,113.粉± l蠻bc
營糊相巴+雄昆合菌徽生鵬棚巴70%11.19士3.27d
營,有鍵十她混合菌徵生鵬棚巴70%128.6 土 15.12b
營辦、±^鵬混合菌微生滅棚巴15%183.3 土37.87a
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表2植株莖、根系病原菌數(shù)量
處理植株麯原菌數(shù)量植株脇病原菌數(shù)量
(X104 efu/g FW)(X10' cfu/g FW)
營辦徹巴+燭艦8.17± 1.26b3.67 ±2.08 a
營##^棚巴+ 徹巴14.33 ±6.77 a3.63 ±1.52 a
0.24 ± ().OS cl,07±0.31b
營辦雨-M單菌微生糖柳巴+爐德1.33 ± 0.58 e1,70 ± 0,46 b
營繊昆合菌微生械棚巴+爐 0.23 ± 0,12 c1.20 ± 0.26 b
營辦娜爐昆合菌勝物有棚巴8.03 +4.53 b2,67±U5ab
營辦有棚巴+她混合菌徽生物有彭鵬3.77 ± 1.04 be1.47 土 0.50 b
營養(yǎng)缽、^a^鵬混合菌徽生鵬棚巴0.13 ± 0.06 c0.67 ±0,2 lb 表3根表土、根際土病原菌數(shù)量
處理根表病原菌數(shù)量根際病原菌數(shù)量
(X104 efu/g FW)(X10' cfu/g FW)
營辦麵雄徹巴18±2.7bc9.5土3.6bc
營辦有棚巴+燭 巴35.3 ± 10.2 a25.8 ±7.4 a
營辦NJYIO單菌敝物有棚E15,2 ± 3/7 c6.85 ± 1.0 c
營髒NJY-M單菌徵生被柳巴+爐七肥16.8士2,4c7.64 ± 1.1 c
營養(yǎng)缽混合菌徵生wr棚巴+戰(zhàn)似巴3,4 ± 0.9 d7.5 土 1.2 c
營養(yǎng)缽化肥十 混合菌微生物有 24,0 ± 5,4 b13.3 ± 2,9 b
營,有棚巴+燭混合菌微生鵬棚巴40±0,9d
營舞、戰(zhàn)均鵬混合菌敝喊棚巴63士l,2d1,5 士 0.4 d
權(quán)利要求
能防治連作甜瓜枯萎病的拮抗菌，包括菌株NJY10和菌株NJY-IVI，分別屬于多粘類芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa)和枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，于2009年7月9日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，NJY10的保藏號為CGMCC NO.3178，NJY-IVI的保藏號為CGMCC NO.3179；NJY10的主要生物學(xué)特性為革蘭氏染色陽性G+，細(xì)胞為桿狀，過氧化氫酶陽性、淀粉水解陽性、V.P.反應(yīng)陽性，甲基紅試驗(yàn)陰性，纖維素分解陰性，明膠水解陽性，硝酸鹽還原陽性，吲哚試驗(yàn)陰性，能利用檸檬酸鹽，能產(chǎn)氨，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，發(fā)酵木糖、L-阿拉伯糖、甘露糖只產(chǎn)酸；NJY-IVI的主要生物學(xué)特性為革蘭氏染色陽性G+，細(xì)胞為桿狀，過氧化氫酶陽性、淀粉水解陽性、V.P.反應(yīng)陽性，甲基紅試驗(yàn)陰性，纖維素分解陰性，明膠水解陽性，硝酸鹽還原陽性，吲哚試驗(yàn)陽性，能利用檸檬酸鹽，能產(chǎn)氨，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，發(fā)酵木糖、L-阿拉伯糖、甘露糖只產(chǎn)酸。
2. 用權(quán)利要求1所述拮抗菌生產(chǎn)的微生物有機(jī)肥料。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的微生物有機(jī)肥料，其特征在于該肥料中含有1 X 108個(gè)/g 以上的拮抗菌NJYIO或NJY-IVI，或拮抗菌NJYIO和NJY-IVI、全氮質(zhì)量比含量為4 5%、全氮中質(zhì)量比90%以上為有機(jī)氮、總氮磷鉀養(yǎng)分質(zhì)量比為6 10%、有機(jī)質(zhì)質(zhì)量比 含量為30 35%。
4. 權(quán)利要求2或3所述微生物有機(jī)肥料的生產(chǎn)方法，包括1) 將拮抗菌NJYIO和NJY-IVI分別接種到PDA培養(yǎng)液，分別進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā) 酵生產(chǎn)的條件為pH生長范圍自然，培養(yǎng)溫度范圍30 38t:，攪拌速度為180 300轉(zhuǎn) /分鐘，發(fā)酵中后期形成芽孢，使發(fā)酵液中含菌或芽孢量^5X109個(gè)/ml;2) 將拮抗菌與腐熟后的豬糞堆肥和菜粕的微生物酶解混合物分別進(jìn)行固體發(fā)酵，每 噸固體有機(jī)物料中加入拮抗菌液50L，固體發(fā)酵過程中每天翻堆l次，使固體發(fā)酵溫度 不超過5(TC， 一般發(fā)酵5天后結(jié)束，使拮抗菌含量達(dá)到lX108個(gè)/g以上，獲得拮抗菌 NJY10的豬糞堆肥固體菌劑和NJY-IVI的菜粕微生物酶解混合物固體菌劑，同樣獲得拮抗 菌NJY-IVI的兩種固體菌劑；3) 按豬糞堆肥和菜粕的微生物酶解混合物兩類分別將拮抗菌NJY10固體菌劑和 NJY-IVI固體菌劑以體積比1 : l混合，獲得豬糞堆肥的固體混合菌劑和菜粕微生物酶解 混合物的固體混合菌劑；4) 再將豬糞堆肥的固體單一菌劑、混合菌劑按體積比50-70%分別與菜粕微生物酶 解混合物的固體單一菌劑、混合菌劑按體積比30-50%的比例充分混合，并后熟2-3天， 后熟過程中翻堆2次，最后在溫度不超過6(TC的條件下將微生物有機(jī)肥的含水量蒸發(fā)至 30%以下，分別獲得能防治連作甜瓜枯萎病的拮抗菌NJYIO、 NJY-IVI單菌微生物有機(jī)肥 以及拮抗菌NJY10和NJY-IVI混合微生物有機(jī)肥，包裝出廠即為防治連作甜瓜枯萎病的 微生物有機(jī)肥料。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述微生物有機(jī)肥料的生產(chǎn)方法，其中步驟1)所用PDA培養(yǎng)液配 制方法為，以配制1L培養(yǎng)基為例用200g土豆削皮后切成小塊放到水里煮，沸騰后煮30min，經(jīng)過濾后濾液中加20g普 通蔗糖，定容至1000ml， pH值調(diào)至7.2-7.4， 12rC滅菌20min。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述微生物有機(jī)肥料的生產(chǎn)方法，其中步驟2)所用腐熟后的豬 糞堆肥發(fā)芽指數(shù)為98%以上，有機(jī)質(zhì)質(zhì)量比含量235%，有機(jī)氮質(zhì)量比含量為1.2-2%， 含水量質(zhì)量比25-30%。
7. 權(quán)利要求2或3所述微生物有機(jī)肥料的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及能防治連作甜瓜枯萎病的拮抗菌及其生產(chǎn)的微生物有機(jī)肥料，屬于農(nóng)業(yè)集約化生產(chǎn)技術(shù)。本發(fā)明分離到了兩株對連作甜瓜枯萎病病原真菌有顯著拮抗作用的拮抗菌(多粘芽孢桿菌NJY10和枯草芽孢桿菌NJY-IVI)，拮抗菌與有機(jī)肥混合制成微生物有機(jī)肥料，肥料中含有1×108個(gè)/g以上的拮抗菌、全氮含量為4～5％，總氮磷鉀養(yǎng)分為6～10％、有機(jī)質(zhì)含量為30～35％。試驗(yàn)表明，這種微生物有機(jī)肥料施入土壤后能夠使拮抗菌迅速繁殖，在土壤中形成優(yōu)勢群，在甜瓜枯萎病嚴(yán)重的的連作土壤中對甜瓜枯萎病的生物防治率達(dá)80％以上。在還沒有形成連作障礙的土壤中長期施用本微生物有機(jī)肥料能在很大程度上防治甜瓜枯萎病的發(fā)生。
文檔編號C05G3/04GK101691549SQ20091003542
公開日2010年4月7日 申請日期2009年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月28日
發(fā)明者冉偉, 徐陽春, 楊興明, 沈其榮, 趙青云 申請人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)