一種含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球及其制備方法，其是以瓊脂糖固體為基質(zhì)，經(jīng)交聯(lián)劑活化后與氨基葡萄糖鹽反應，得到氨基葡萄糖基瓊脂糖，再將其制備成所述瓊脂糖凝膠微球；或以瓊脂糖微球為基質(zhì)，經(jīng)交聯(lián)劑活化后，將其與氨基葡萄糖鹽進行偶聯(lián)，制得所述瓊脂糖凝膠微球。本發(fā)明所得瓊脂糖凝膠微球可作為陰離子交換層析介質(zhì)用于蛋白質(zhì)、核酸等生物活性成分的分離純化，且其具有對生物活性成分安全無毒，配基密度高、機械強度高、孔徑均一、吸附容量大，純化效率高，制備方法簡單、成本低、污染小等優(yōu)點。
【專利說明】
一種含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球及其制備方法
技術領域
[0001]本發(fā)明屬于分離純化介質(zhì)技術領域，具體涉及一種含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球及其制備方法。
【背景技術】
[0002]近年來，國家重點投入發(fā)展生物醫(yī)藥領域和海洋生物資源開發(fā)領域，隨著上游各類生物技術的蓬勃發(fā)展，下游生物大分子的分離純化技術成為生物醫(yī)用材料研究領域的重要課題，其支撐點是要有性能良好的分離介質(zhì)。天然多糖具有優(yōu)良的生物相容性與可降解性，故以其作為生物大分子的分離介質(zhì)具有比合成聚合物更多的優(yōu)勢，因而一直是國內(nèi)外學者研究的重點。瓊脂糖是從石花菜、紫菜、江蘺等大型海洋藻類中分離出的一種天然海洋生物多糖，具有各種生物活性。而瓊脂糖凝膠微球因具有良好的生物相容性、功能基特性、高親水性、多孔性、非特異性等優(yōu)勢而成為一種優(yōu)質(zhì)的生物大分子分離介質(zhì)，其主要應用在蛋白、抗體、酶等生物分子的分離純化。
[0003]對瓊脂糖凝膠微球進行改性，使瓊脂糖接上具有不同生物活性的配基，即可用于不同生化物質(zhì)的分離純化。但現(xiàn)有瓊脂糖凝膠微球改性技術存在制備工藝復雜、不易控制、配基密度低、成本高、污染嚴重等問題，且一般都是將瓊脂糖先制備成微球后，再通過化學反應對微球進行改性，這樣容易影響微球機械強度、表面光滑度與孔徑大小。
[0004]氨基葡萄糖是葡萄糖的一個羥基被一個氨基取代的化合物，市面上的氨基葡萄糖主要分為鹽酸氨糖與硫酸氨糖兩種。氨基葡萄糖是自然界中唯一一種帶氨基的糖，對蛋白質(zhì)安全無毒，不會影響蛋白質(zhì)的活性，其自帶的氨基可用于蛋白子陰離子交換層析。
[0005]可見，將瓊脂糖凝膠微球偶聯(lián)上氨基葡萄糖基，制備成含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球，即可作為一種良好的陰離子交換層析介質(zhì)，分離純化蛋白質(zhì)、核酸等生物分子。目前，尚未出現(xiàn)利用氨基葡萄糖對瓊脂糖凝膠微球進行改性的報道。因此，開發(fā)出一種制備工藝簡單易行、成本低、配基密度高、污染小的含氨基葡萄糖的基瓊脂糖凝膠微球及其制備方法具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球及其制備方法，其所制備的瓊脂糖凝膠微球具有對蛋白質(zhì)、核酸等生物活性成分安全無毒，配基密度高、機械強度高、孔徑均一、吸附容量大，純化效率高，且制備方法簡單、成本低、污染小等優(yōu)點，解決了現(xiàn)有離子交換層析介質(zhì)對蛋白質(zhì)、核酸等生物活性成分吸附容量小、容易影響活性，及現(xiàn)有瓊脂糖凝膠微球改性技術中制備工藝復雜、不易控制、配基密度低、微球機械強度與孔徑均一性差、污染嚴重等問題。
[0007]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案:
一種含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球，是以瓊脂糖固體為基質(zhì)，經(jīng)交聯(lián)劑活化后與氨基葡萄糖鹽反應，得到氨基葡萄糖基瓊脂糖，再將其制備成所述瓊脂糖凝膠微球;其中，所述氨基葡萄糖鹽為氨基葡萄糖鹽酸鹽、氨基葡萄糖硫酸鹽、氨基葡萄糖硫酸鉀鹽、氨基葡萄糖硫酸鈉鹽中的一種或幾種。
[0008]其制備方法包括以下步驟:
I)在瓊脂糖固體中加入一定量超純水混合均勻，制得瓊脂糖溶液；
2 )向步驟I)所得瓊脂糖溶液中緩慢加入NaBH4，再持續(xù)用栗按一定流速加入NaOH溶液，機械攪拌混勻；
3)在攪拌條件下，持續(xù)用栗按一定流速向步驟2)所得溶液中加入交聯(lián)劑，在一定溫度下反應一定時間；其過程中，待反應至0.3-6h時將交聯(lián)劑和NaOH溶液的加入流速調(diào)??；
4)用栗按一定流速向步驟3)所得溶液中加入氨基葡萄糖鹽溶液，并停止加入交聯(lián)劑與NaOH溶液，在一定溫度下反應一定時間；
5)將步驟4)所得溶液用超濾膜過濾、濃縮后干燥，制得氨基葡萄糖基瓊脂糖；
6)將步驟5)所得氨基葡萄糖基瓊脂糖制備成微球。
[0009]其中，步驟I)中所用瓊脂糖固體與超純水的重量比為1:50?8:25，優(yōu)選1:25?4:25。
[0010]步驟2)中NaBH4的加入量為所用瓊脂糖固體重量的0.0001-0.02%，優(yōu)選0.0005-
0.01%;所述NaOH溶液的濃度為lwt%-50wt%，優(yōu)選20wt%-40wt%;機械攪拌的轉速為50-200rpm，優(yōu)選80-150rpm ；
步驟3)中所述交聯(lián)劑為環(huán)氧氯丙烷、環(huán)氧溴丙烷、2，3_ 二溴丙醇、乙二醇二縮水甘油醚或I，4_丁二醇二縮水甘油醚；
同時，步驟2)和步驟3)中，NaOH溶液加入的起始流速控制在0.0lmL?5mL/min，優(yōu)選
0.05mL-4mL/min，之后調(diào)小至起始流速的0.05-0.5倍，加入總時間控制在0.5_12h，優(yōu)選1_8h；
交聯(lián)劑加入的起始流速控制在0.01mL~3mL/min，優(yōu)選0.05mL~2mL/min，之后調(diào)小至起始流速的0.05-0.5倍，加入總時間控制在0.5-12h，優(yōu)選l_8h ；
步驟3)中反應溫度為20-70 0C，優(yōu)選35-65 °C，反應時間為0.5_12h，優(yōu)選l_8h。
[0011 ]步驟4)中氨基葡萄糖鹽的用量為所用瓊脂糖固體重量的0.01-10%，優(yōu)選0.05-8%； 所用氨基葡萄糖鹽溶液的濃度為I Wt%-80wt%，優(yōu)選10wt%-70wt%;
氨基葡萄糖鹽溶液加入的流速控制在0.011111^211117111；[11，優(yōu)選0.0lmL?lmL/min，加入時間控制在0.5-12h，優(yōu)選l-6h;
反應溫度為20-90 0C，優(yōu)選45-85 °C，反應時間為0.5_12h，優(yōu)選l_6h。
[0012]步驟5)中所用超濾膜的型號為8040或4040。
[0013]步驟6)中采用粒徑均一的瓊脂糖凝膠微球生產(chǎn)系統(tǒng)將氨基葡萄糖基瓊脂糖制備成微球;所述粒徑均一的瓊脂糖凝膠微球生產(chǎn)系統(tǒng)包括生產(chǎn)區(qū)和位于生產(chǎn)區(qū)旁側的控制區(qū)，所述生產(chǎn)區(qū)內(nèi)設置有膠磨機和預混加熱釜，所述膠磨機與一微波加熱釜相連接，所述預混加熱釜與一超聲波均一消泡釜相連接，所述微波加熱釜和超聲波均一消泡釜均與一超聲波均質(zhì)釜相連接，所述超聲波均質(zhì)釜與油水分離器相連接，所述油水分離器的油相出口與油品分離純化設備相連接，所述油品分離純化設備還與所述預混加熱釜相連接，所述油水分離器的水相出口與一微球清洗器相連接，所述微球清洗器與一混勻器相連接，所述混勻器與一計量分裝機相連接；
制備時，將所得氨基葡萄糖基瓊脂糖配制成水溶液，通過膠磨機進行處理后，再經(jīng)微波加熱釜充分溶解形成膠液；同時將油相經(jīng)預混加熱釜混合加熱，再經(jīng)超聲均一消泡釜進行均質(zhì)預乳化消泡處理后形成無泡油相;隨后將無泡油相與膠液輸送到超聲波均質(zhì)釜進行混合，然后將混合液輸送到油水分離器，將分離得到的水相輸入微球清洗器進行清洗后，將洗凈的微球進行混勻、包裝。
[0014]另一種含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球，是以瓊脂糖微球為基質(zhì)，經(jīng)交聯(lián)劑活化后，將其與氨基葡萄糖鹽進行偶聯(lián)，制得所述瓊脂糖凝膠微球;其中，所述瓊脂糖微球的粒徑為10-1000微米，其可采用上述粒徑均一的瓊脂糖凝膠微球生產(chǎn)系統(tǒng)制備而成;所述氨基葡萄糖鹽為氨基葡萄糖鹽酸鹽、氨基葡萄糖硫酸鹽、氨基葡萄糖硫酸鉀鹽、氨基葡萄糖硫酸鈉鹽中的一種或幾種。
[0015]其制備方法包括以下步驟:
1)將瓊脂糖微球水洗后瀝干，加入一定量超純水混合均勻，制得瓊脂糖微球溶液；
2)向步驟I)所得瓊脂糖微球溶液中緩慢加入NaBH4，再持續(xù)用栗按一定流速加入NaOH溶液，低頻超聲震蕩混勻；
3)在震蕩條件下，持續(xù)用栗按一定流速向步驟2)所得溶液中加入交聯(lián)劑，在一定溫度下反應一定時間；其過程中，待反應至0.3-6h時將交聯(lián)劑和NaOH溶液的加入流速調(diào)??；
4)用栗按一定流速向步驟3)所得溶液中加入氨基葡萄糖鹽溶液，并停止加入交聯(lián)劑與NaOH溶液，在一定溫度下反應一定時間；
5)將步驟4)所得溶液用濾布過濾，洗凈，得到含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球，將所得微球于20wt%乙醇溶液中貯存。
[0016]其中，步驟I)中所用瓊脂糖微球與超純水的重量比為1:50?1:5，優(yōu)選1:25?1:10。
[0017]步驟2)中NaBH4的加入量為所用瓊脂糖微球重量的0.0001-0.02%，優(yōu)選0.0005-0.01%；
所述NaOH溶液的濃度為lwt%_50wt%，優(yōu)選20wt%_40wt%;所述低頻超聲的頻率為20-40KHz，優(yōu)選25-35KHz。
[0018]步驟3)中所述交聯(lián)劑為環(huán)氧氯丙烷、環(huán)氧溴丙烷、2，3_二溴丙醇、乙二醇二縮水甘油醚或I，4-丁二醇二縮水甘油醚；
同時，步驟2)和步驟3)中，NaOH溶液加入的起始流速控制在0.0lmL?5mL/min，優(yōu)選
0.05mL-4mL/min，之后調(diào)小至起始流速的0.05-0.5倍，加入總時間控制在0.5_12h，優(yōu)選1_8h；
交聯(lián)劑加入的起始流速控制在0.01mL~3mL/min，優(yōu)選0.05mL~2mL/min，之后調(diào)小至起始流速的0.05-0.5倍，加入總時間控制在0.5-12h，優(yōu)選l_8h ；
步驟3 )反應溫度為30-60 0C，優(yōu)選40-50 V，反應時間為1_12h，優(yōu)選2_8h。
[0019]步驟4)中氨基葡萄糖鹽的用量為所用瓊脂糖微球重量的0.01-10%，優(yōu)選0.05-8%; 所用氨基葡萄糖鹽溶液的濃度為I Wt%-80wt%，優(yōu)選10wt%-70wt%;
氨基葡萄糖鹽溶液加入的流速控制在0.011111^211117111；[11，優(yōu)選0.0lmL?lmL/min，加入時間控制在0.5-12h，優(yōu)選l-6h;
反應溫度為30-60 0C，優(yōu)選40-50 0C，反應時間為0.5_12h，優(yōu)選l_6h。
[0020]本發(fā)明所得含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球可用于蛋白質(zhì)、核酸等生物活性成分的分離純化。[0021 ]本發(fā)明具有如下有益效果:
1.本發(fā)明所制備的含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球具有對蛋白質(zhì)、核酸、生物活性小分子等生物活性成分安全無毒的特性，可保證其活性，且具有配基密度高、機械強度高、孔徑均一、穩(wěn)定性好、吸附容量大、純化效率高等優(yōu)點。
[0022]2.本發(fā)明提供了含氨基葡萄糖基瓊脂糖凝膠微球的制備方法，其具有操作簡單、反應條件溫和、成本低、污染小等優(yōu)點，解決了現(xiàn)有瓊脂糖凝膠微球改性技術存在的制備工藝復雜、不易控制、成本高、污染嚴重，及存在的容易影響微球機械強度、表面光滑度與孔徑大小等問題。對我國生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)分離純化技術方面的發(fā)展具有一定的推動作用，具有良好的社會、經(jīng)濟效益。
【附圖說明】
[0023]圖1為本發(fā)明粒徑均一的瓊脂糖凝膠微球生產(chǎn)系統(tǒng)的示意圖(A為系統(tǒng)整體示意圖；B為微波加熱釜構造示意圖；C為超聲波均一消泡釜構造示意圖；D為超聲波均質(zhì)釜構造示意圖)，其中，100-生產(chǎn)區(qū)，200-控制區(qū)，110-微波加熱釜、111-全景攝像頭、112-微波加熱裝置、113-邊攪拌槳、114-分散輪、120-超聲波均一消泡釜、121-乳化頭、122-高頻超聲波發(fā)生、130-超聲波均質(zhì)釜。
[0024]圖2為實施例1制備的氨基葡萄糖基瓊脂糖(A)與未改性的瓊脂糖(B)分離核酸的電泳對比圖。
[0025]圖3為實施例1制備的含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球的顯微圖。
[0026]圖4為實施例2制備的氨基葡萄糖基瓊脂糖(A)與未改性的瓊脂糖(B)分離核酸的電泳對比圖。
[0027]圖5為實施例2制備的含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球的顯微圖。
[0028]圖6為實施例3制備的含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球的顯微圖。
【具體實施方式】
[0029]為了使本發(fā)明所述的內(nèi)容更加便于理解，下面結合【具體實施方式】對本發(fā)明所述的技術方案做進一步的說明，但是本發(fā)明不僅限于此。
[0030]所用粒徑均一的瓊脂糖凝膠微球生產(chǎn)系統(tǒng)，如圖1所示，包括生產(chǎn)區(qū)和位于生產(chǎn)區(qū)旁側的控制區(qū)，所述生產(chǎn)區(qū)內(nèi)設置有膠磨機和預混加熱釜，所述膠磨機與一微波加熱釜相連接，所述預混加熱釜與一超聲波均一消泡釜相連接，所述微波加熱釜和超聲波均一消泡釜均與一超聲波均質(zhì)釜相連接，所述超聲波均質(zhì)釜與油水分離器相連接，所述油水分離器的油相出口與油品分離純化設備相連接，所述油品分離純化設備還與所述預混加熱釜相連接，所述油水分離器的水相出口與一微球清洗器相連接，所述微球清洗器與一混勻器相連接，所述混勾器與一計量分裝機相連接。
[0031]實施例1
稱取40g瓊脂糖固體，加入100mL超純水，混合均勻，制得瓊脂糖溶液，然后緩慢加入NaBH4 0.0004g，再持續(xù)用栗以0.5mL/min的流速加入20wt°/c^Na0H溶液，機械攪拌混勻，攪拌轉速為80rpm;在攪拌條件下，持續(xù)用栗以0.3mL/min的流速加入環(huán)氧氯丙燒，在50°C下反應Ih，反應至0.3h時逐步將環(huán)氧氯丙燒加入的流速調(diào)小至0.03mL/min，將NaOH溶液加入流速調(diào)小至0.05mL/ 111；[11;再用栗以0.0 ImL/min的流速向溶液中加入I Owt%氨基葡萄糖硫酸鹽溶液，并停止加入環(huán)氧氯丙烷與NaOH溶液，55 °C下反應Ih;將所得溶液用4040超濾膜過濾、濃縮后干燥，制得氨基葡萄糖基瓊脂糖。
[0032]圖2為所制備的氨基葡萄糖基瓊脂糖(A)與未改性的瓊脂糖(B)分離核酸的電泳對比圖。由圖中可知，氨基葡萄糖基瓊脂糖分離核酸的條帶比未改性的瓊脂糖分離核酸的條帶更清晰明亮，且各條帶分離度更好。
[0033]采用粒徑均一的瓊脂糖凝膠微球生產(chǎn)系統(tǒng)，將所得氨基葡萄糖基瓊脂糖制備成微球，其具體是將所得氨基葡萄糖基瓊脂糖配制成水溶液，通過膠磨機進行處理后，再經(jīng)微波加熱釜充分溶解形成膠液；同時將油相經(jīng)預混加熱釜混合加熱，再經(jīng)超聲均一消泡釜進行均質(zhì)預乳化消泡處理后形成無泡油相;隨后將無泡油相與膠液輸送到超聲波均質(zhì)釜進行混合，然后將混合液輸送到油水分離器，將分離得到的水相輸入微球清洗器進行清洗后，將洗凈的微球進行混勻、包裝。所得瓊脂糖凝膠微球中氨基葡萄糖基含量為3.05mmo Ι/g。
[0034]圖3為所制備的含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球的顯微圖。從圖中可以看出，所得微球孔徑均勻。
[0035]實施例2
稱取80g瓊脂糖固體，加入100mL的超純水，混合均勻，制得瓊脂糖溶液，緩慢加入NaBH40.008g，再持續(xù)用栗以lmL/min的流速加入30wt%Na0H溶液，機械攪拌混勻，攪拌轉速為10rpm;在攪拌條件下，持續(xù)用栗以0.5mL/min的流速加入乙二醇二縮水甘油醚，在55°C下反應2h，反應至0.5h時逐步將乙二醇二縮水甘油醚加入的流速調(diào)小至0.05mL/min，將NaOH溶液加入流速調(diào)小至0.lmL/min;再用栗以0.02mL/min流速向溶液中加入20wt%氨基葡萄糖鹽酸鹽溶液，并停止加入乙二醇二縮水甘油醚與NaOH溶液，65 °C下反應Ih;將所得溶液用8040超濾膜過濾、濃縮后干燥，制得氨基葡萄糖基瓊脂糖。
[0036]圖4為所制備的氨基葡萄糖基瓊脂糖(A)與未改性的瓊脂糖(B)分離核酸的電泳對比圖。由圖中可知，氨基葡萄糖基瓊脂糖分離核酸的條帶比未改性瓊脂糖分離核酸的條帶更清晰明亮，且各條帶分離度更好。
[0037]按實施例1所述粒徑均一的瓊脂糖凝膠微球生產(chǎn)系統(tǒng)，將所得氨基葡萄糖基瓊脂糖制備成微球。所得瓊脂糖凝膠微球中氨基葡萄糖基含量為3.75mmo Ι/g。
[0038]圖5為所制備的含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球的顯微圖。從圖中可以看出，所得微球孔徑均勻。
[0039]實施例3
稱取60g瓊脂糖微球水洗后瀝干，加入100mL超純水混合均勻，制得瓊脂糖微球溶液，緩慢加入NaBH4 0.0012g，再持續(xù)用栗以0.8mL/min的流速加入40wt%Na0H溶液，低頻超聲震蕩混勻，其超聲頻率為25KHz;在震蕩條件下，持續(xù)用栗以0.4mL/min的流速加入乙二醇二縮水甘油醚，在40 °C下反應8h，反應至4h時逐步將乙二醇二縮水甘油醚加入的流速調(diào)小至
0.03mL/min，將NaOH溶液加入流速調(diào)小至0.06mL/min ；再用栗以0.05mL/min的流速向溶液中加入15?丨%氨基葡萄糖鹽酸鹽溶液，并停止加入乙二醇二縮水甘油醚與NaOH溶液，45°C下反應1.5h;將所得瓊脂糖微球溶液用濾布過濾，洗凈，制得含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球，將所得微球置于20^%乙醇溶液中貯存。所得瓊脂糖凝膠微球中氨基葡萄糖基含量為2.55mmol/g0
[0040]圖6為所制備的含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球的顯微圖。從圖中可以看出，所得微球孔徑均勻。
[0041]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應屬本發(fā)明的涵蓋范圍。
【主權項】
1.一種含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球，其特征在于:以瓊脂糖固體為基質(zhì)，經(jīng)交聯(lián)劑活化后與氨基葡萄糖鹽反應，得到氨基葡萄糖基瓊脂糖，再將其制備成所述瓊脂糖凝膠微球;或以瓊脂糖微球為基質(zhì)，經(jīng)交聯(lián)劑活化后，將其與氨基葡萄糖鹽進行偶聯(lián)，制得所述瓊脂糖凝膠微球； 其中，所述瓊脂糖微球的粒徑為10-1000微米； 所述氨基葡萄糖鹽為氨基葡萄糖鹽酸鹽、氨基葡萄糖硫酸鹽、氨基葡萄糖硫酸鉀鹽、氨基葡萄糖硫酸鈉鹽中的一種或幾種。2.—種如權利要求1所述含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球的制備方法，其特征在于:包括以下步驟: I)在瓊脂糖固體中加入一定量超純水混合均勻，制得瓊脂糖溶液； 2 )向步驟I)所得瓊脂糖溶液中緩慢加入NaBH4，再按一定流速加入NaOH溶液，并以50-200rpm的轉速機械攪拌混勾； 3)在攪拌條件下，按一定流速向步驟2)所得溶液中加入交聯(lián)劑，在一定溫度下反應一定時間；其過程中，待反應至0.3-6h時將交聯(lián)劑和NaOH溶液的加入流速調(diào)??； 4)按一定流速向步驟3)所得溶液中加入氨基葡萄糖鹽溶液，并停止加入交聯(lián)劑與NaOH溶液，在一定溫度下反應一定時間； 5)將步驟4)所得溶液用超濾膜過濾、濃縮后干燥，制得氨基葡萄糖基瓊脂糖； 6)將步驟5)所得氨基葡萄糖基瓊脂糖制備成微球。3.—種如權利要求1所述含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球的制備方法，其特征在于:包括以下步驟: I)將瓊脂糖微球水洗后瀝干，加入一定量超純水混合均勻，制得瓊脂糖微球溶液； 2 )向步驟I)所得瓊脂糖微球溶液中緩慢加入NaBH4，再按一定流速加入NaOH溶液，并以20-40KHZ低頻超聲震蕩混勻； 3)在震蕩條件下，按一定流速向步驟2)所得溶液中加入交聯(lián)劑，在一定溫度下反應一定時間；其過程中，待反應至0.3-6h時將交聯(lián)劑和NaOH溶液的加入流速調(diào)??； 4)按一定流速向步驟3)所得溶液中加入氨基葡萄糖鹽溶液，并停止加入交聯(lián)劑與NaOH溶液，在一定溫度下反應一定時間； 5)將步驟4)所得溶液用濾布過濾，洗凈，得到含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球，將所得微球于20wt%乙醇溶液中貯存。4.根據(jù)權利要求2或3所述含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球的制備方法，其特征在于:步驟I)中所用瓊脂糖固體或瓊脂糖微球與超純水的重量比為1:50?8:25。5.根據(jù)權利要求2或3所述含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球的制備方法，其特征在于:步驟2)中NaBH4的加入量為所用瓊脂糖固體或瓊脂糖微球重量的0.0001-0.02%;所述NaOH溶液的濃度為lwt%-50wt%; 步驟3)中所述交聯(lián)劑為環(huán)氧氯丙烷、環(huán)氧溴丙烷、2，3_ 二溴丙醇、乙二醇二縮水甘油醚或I，4_丁二醇二縮水甘油醚。6.根據(jù)權利要求2或3所述含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球的制備方法，其特征在于:步驟2)和步驟3)中，NaOH溶液加入的起始流速控制在0.01mL~5mL/min，之后調(diào)小至起始流速的0.05-0.5倍，加入總時間控制在0.5-12h ； 交聯(lián)劑加入的起始流速控制在0.01mL~3mL/min，之后調(diào)小至起始流速的0.05-0.5倍，加入總時間控制在0.5-12h。7.根據(jù)權利要求2或3所述含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球的制備方法，其特征在于:步驟3)中反應溫度為20-70 0C，反應時間為0.5-12h。8.根據(jù)權利要求2或3所述含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球的制備方法，其特征在于:步驟4)中氨基葡萄糖鹽的用量為所用瓊脂糖固體或瓊脂糖微球重量的0.01-10%，所用氨基葡萄糖鹽溶液的濃度為lwt%-80wt%; 氨基葡萄糖鹽溶液加入的流速控制在0.0lmL?2mL/min，加入時間控制在0.5_12h; 反應溫度為20-90 0C，反應時間為0.5-12h。9.根據(jù)權利要求2所述含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球的制備方法，其特征在于:步驟6)中采用粒徑均一的瓊脂糖凝膠微球生產(chǎn)系統(tǒng)將氨基葡萄糖基瓊脂糖制備成微球;所述粒徑均一的瓊脂糖凝膠微球生產(chǎn)系統(tǒng)包括生產(chǎn)區(qū)和位于生產(chǎn)區(qū)旁側的控制區(qū)，所述生產(chǎn)區(qū)內(nèi)設置有膠磨機和預混加熱釜，所述膠磨機與一微波加熱釜相連接，所述預混加熱釜與一超聲波均一消泡釜相連接，所述微波加熱釜和超聲波均一消泡釜均與一超聲波均質(zhì)釜相連接，所述超聲波均質(zhì)釜與油水分離器相連接，所述油水分離器的油相出口與油品分離純化設備相連接，所述油品分離純化設備還與所述預混加熱釜相連接，所述油水分離器的水相出口與一微球清洗器相連接，所述微球清洗器與一混勻器相連接，所述混勻器與一計量分裝機相連接； 制備時，將所得氨基葡萄糖基瓊脂糖配制成水溶液，通過膠磨機進行處理后，再經(jīng)微波加熱釜充分溶解形成膠液；同時將油相經(jīng)預混加熱釜混合加熱，再經(jīng)超聲均一消泡釜進行均質(zhì)預乳化消泡處理后形成無泡油相;隨后將無泡油相與膠液輸送到超聲波均質(zhì)釜進行混合，然后將混合液輸送到油水分離器，將分離得到的水相輸入微球清洗器進行清洗后，將洗凈的微球進行混勻、包裝。10.—種如權利要求1所述含氨基葡萄糖基的瓊脂糖凝膠微球在生物活性成分分離純化中的應用，其特征在于:所述生物活性成分包括蛋白質(zhì)、核酸。
【文檔編號】C12M1/00GK105944686SQ201610328568
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年5月18日
【發(fā)明人】郭東旭, 黎泉香, 郭梓林, 蘭旺仁, 稽海峰
【申請人】綠麒（廈門）海洋生物科技有限公司