本發(fā)明涉及新型多孔微球緩釋給藥的制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及載紫杉醇PLGA多孔微球的可控制備。

背景技術(shù)：

多孔微球作為一種藥物新劑型，在藥物新制劑的研發(fā)以及新劑型的改造方面應(yīng)用廣泛。目前，現(xiàn)有制備多孔微球的方法主要有乳化劑分散溶劑揮發(fā)法、噴霧干燥法、相分離法和熔融法等，其中最常用的是致孔劑聯(lián)合乳化分散溶劑揮發(fā)法，且致孔劑多采用NH₄HCO₃、蔗糖、NaHCO₃等。此種方法在制備多孔微球時(shí)往往微球的尺寸不可控，且孔徑的直徑也較大，平均孔徑能達(dá)到20微米以上，從而影響了多孔微球的比表面積，降低藥物吸附在多孔微球的表面或孔道內(nèi)部的含量，最終影響微球制成速釋或緩釋制劑的藥效。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供一種可控制備載紫杉醇PLGA多孔微球的方法。本發(fā)明以蛋白分子為致孔劑，通過(guò)控制蛋白分子的含量、成球材料的性質(zhì)可控制多孔微球的直徑與孔徑，達(dá)到優(yōu)化載藥微球的性能的目的。本發(fā)明以抗腫瘤藥物紫杉醇為模型藥物，聚乳酸羥基乙酸(poly(lactic-co-glycolic acid)，PLGA)為載體，以牛血清白蛋白(BSA)為致孔劑，采用復(fù)乳溶劑揮發(fā)法，制備PLGA多孔微球，同時(shí)可將藥物吸附于多孔微球的表面或孔道內(nèi)部，對(duì)孔結(jié)構(gòu)的控制可實(shí)現(xiàn)藥物釋放速度的可控。另外PLGA微球中孔道結(jié)構(gòu)的存在可降低微球密度，調(diào)節(jié)微球粒徑和孔徑可獲得較為理想空氣動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，便于吸入給藥，提高藥物在肺部的沉積從而延長(zhǎng)藥物作用濃度與時(shí)間，有望用于腫瘤的吸入式給藥治療。

本發(fā)明所述一種可控制備載紫杉醇PLGA多孔微球的方法，是采用復(fù)乳溶劑揮發(fā)法，以BSA為致孔劑，PLGA為載體，將紫杉醇包裹于微球內(nèi)部；將水洗沉淀物離心冷凍干燥后，最后得到載紫杉醇PLGA多孔微球。

具體包括以下步驟：

1)PLGA固體和紫杉醇固體按照一定比例溶于少量二氯甲烷溶液中，再按照一定的比例稱取BSA固體溶于少量去離子水，混合后探針型超聲冰浴(20s)，再倒入4％PVA溶液中；

2)用均質(zhì)機(jī)將混合溶液在室溫條件下攪拌5min。再將上述溶液倒入0.4％PVA溶液中，在室溫下機(jī)械攪拌并過(guò)夜。

3)第二天早上將混合溶液離心，水洗沉淀物，取其上清液備用最后將沉淀物冷凍干燥，獲得載紫杉醇PLGA多孔微球固體粉末。

本發(fā)明所述步驟1)中，先將PLGA固體充分溶于二氯甲烷中，再加入紫杉醇充分溶于上述溶液。目的是先使PLGA在二氯甲烷中分散均勻，再將紫杉醇加入到二氯甲烷溶液中，可提高混物的均勻性。

所述步驟1)中，PLGA與紫杉醇的質(zhì)量比為10:3。在此比例下，紫杉醇的載藥率較10:1高，且藥物釋放速率和MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示都具有良好的藥效。

所述步驟1)中，BSA與PLGA的質(zhì)量比為0.6。此質(zhì)量比例制備的PLGA多孔微球性能最優(yōu)。

所述步驟1)中，BSA/PLGA的比值可調(diào)節(jié)為0.2，0.4，0.6。不同比例條件下，控制PLGA的分子量，LA/GA的比值不變，通過(guò)BSA/PLGA的比值改變微球粒徑和孔徑的大小，并考察對(duì)非小細(xì)胞型肺癌(A549)細(xì)胞的MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果。當(dāng)BSA/PLGA為0.2時(shí)，如實(shí)施例一；當(dāng)BSA/PLGA為0.4時(shí)，如實(shí)施例二；當(dāng)BSA/PLGA為0.6時(shí)，如實(shí)施例三。

所述步驟1)中，當(dāng)BSA/PLGA為0.6時(shí)。在此條件下，載紫杉醇PLGA多孔微球能夠明顯抑制非小細(xì)胞型肺癌(A549)細(xì)胞的生長(zhǎng)。

本發(fā)明方法簡(jiǎn)單、環(huán)保；與現(xiàn)有載紫杉醇PLGA微球緩釋給藥系統(tǒng)相比，載紫杉醇PLGA多孔微球，因其比表面積的增大，可實(shí)現(xiàn)藥物的高效負(fù)載。除此此外，本發(fā)明的關(guān)鍵點(diǎn)在于通過(guò)控制致孔劑的濃度，PLGA的分子量、LA/GA的比例，可有效控制微球的尺寸及孔徑大小，以解決現(xiàn)有技術(shù)與手段制備的多孔微球尺寸及孔徑偏大的現(xiàn)狀，為紫杉醇的可控負(fù)載與有效緩釋提供了物質(zhì)與結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。本發(fā)明優(yōu)化條件后得到的PLGA微球粒徑在5-6μm左右，微球孔徑為0.12-0.24μm左右，載藥率為13.74％，包封率為51.10％。采用本發(fā)明制備載紫杉醇PLGA多孔微球，不僅粒徑較均勻，而且多孔結(jié)構(gòu)可以控制釋放速度，便于吸入給藥，可以有效延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間。

附圖說(shuō)明

圖1為采用本發(fā)明方法制備的載紫杉醇PLGA多孔微球的SEM圖。

圖2為采用本發(fā)明方法制備的載紫杉醇PLGA多孔微球的X-射線衍射圖。

圖3為采用本發(fā)明方法制備的載紫杉醇PLGA多孔微球的釋放曲線圖。

圖4為采用本發(fā)明方法制備的載紫杉醇PLGA多孔微球MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖，與實(shí)際載紫杉醇的量乘以第一天釋放速率所得的紫杉醇的量作對(duì)照比較。

具體實(shí)施方式

一、制備工藝：

1、實(shí)施例1：

1)先將50mgPLGA固體溶于1ml二氯甲烷溶液中，再將15mg紫杉醇溶于其中，稱取10mg BSA溶于0.2mL去離子水，混合后探針型超聲冰浴(20s)，再倒入5mL的4％PVA溶液中。

2)用均質(zhì)機(jī)(轉(zhuǎn)速為8000)將混合溶液在室溫條件下攪拌5min。再將上述溶液倒入100mL的0.4％PVA溶液中，在室溫下機(jī)械攪拌，轉(zhuǎn)速為800，并過(guò)夜。

3)第二天早上將混合溶液離心，轉(zhuǎn)速為6000，水洗沉淀物5次，取其上清液備用。最后將沉淀物冷凍干燥，條件為-60攝氏度，獲得載紫杉醇PLGA多孔微球固體粉末。

2、實(shí)施例2：

1)先將50mg PLGA固體溶于1ml二氯甲烷溶液中，再將15mg紫杉醇溶于其中，稱取20mg BSA溶于0.2mL去離子水，混合后探針型超聲冰浴(20s)，再倒入5mL的4％PVA溶液中。

2)用均質(zhì)機(jī)，轉(zhuǎn)速為8000將混合溶液在室溫條件下攪拌5min。再將上述溶液倒入100mL的0.4％PVA溶液中，在室溫下機(jī)械攪拌，轉(zhuǎn)速為800，并過(guò)夜。

3)第二天早上將混合溶液離心，轉(zhuǎn)速為6000，水洗沉淀物5次，取其上清液備用。最后將沉淀物冷凍干燥，條件為零下60攝氏度，獲得載紫杉醇PLGA多孔微球固體粉末。

3、實(shí)施例3：

1)先將50mg PLGA固體溶于1mL二氯甲烷溶液中，再將15mg紫杉醇溶于其中，稱取30mg BSA溶于0.2mL去離子水，混合后探針型超聲冰浴(20s)，再倒入5mL的4％PVA溶液中。

2)用均質(zhì)機(jī)，轉(zhuǎn)速為8000將混合溶液在室溫條件下攪拌5min。再將上述溶液倒入100mL的0.4％PVA溶液中，在室溫下機(jī)械攪拌，轉(zhuǎn)速為800，并過(guò)夜。

3)第二天早上將混合溶液離心，轉(zhuǎn)速為6000，水洗沉淀物5次，取其上清液備用。最后將沉淀物冷凍干燥，條件為-60攝氏度，獲得載紫杉醇PLGA多孔微球固體粉末。

二、產(chǎn)物特性：

圖1為采用本發(fā)明方法制備的載紫杉醇PLGA多孔微球的SEM圖，從圖中看出，載藥微球大小分布，粒徑孔徑較為均一。

圖2為采用本發(fā)明方法制備的載紫杉醇PLGA多孔微球的X-射線衍射圖，根據(jù)X-射線衍射結(jié)果可知，紫杉醇以分子形式包裹于PLGA多孔微球內(nèi)部。

圖3為采用本發(fā)明方法制備的載紫杉醇PLGA多孔微球的釋放曲線圖，從圖中可以看出不同投藥比的載紫杉醇PLGA多孔微球釋放完全約9-10天，說(shuō)明載藥微球具有緩釋功能。

圖4為采用本發(fā)明方法制備的載紫杉醇PLGA多孔微球MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖，與實(shí)際載紫杉醇的量乘以第一天釋放速率所得的紫杉醇的量作對(duì)照比較。從結(jié)果可以看出，較BSA/PLGA的比值為0.2，0.4條件下，BSA/PLGA的比值為0.6的載紫杉醇PLGA多孔微球?qū)549細(xì)胞有明顯的抑制作用，并且與實(shí)際載藥量乘以釋放速率的紫杉醇對(duì)照組作比較，更加說(shuō)明本設(shè)計(jì)的緩釋載藥微球具有一定的藥效。