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用于細(xì)胞核制備的裝置及方法與流程

文檔序號(hào):11159593閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種裝置(1),其包括:

(i)容器(2),其具有開(kāi)口的上端(3)和密封的下端(4),以及由室壁(6)限定在其間的室(5);

(iii)插棒(7),其包括由插棒壁(9)限定的中空插棒本體(8),其中所述壁(9)具有對(duì)應(yīng)于所述室(5)的形狀和小于所述室(5)的直徑,密封所述插棒本體(8)的頂端(11a)的隔膜蓋(10),以及跨越所述插棒本體(8)的直徑(d)的固體支承物(12)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的裝置(1),其特征在于,所述容器(2)包括中空管(13)和可除去的底座(14)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的裝置(1),其特征在于,所述室容納溶解試劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的裝置(1),其特征在于,所述溶解試劑為紅細(xì)胞溶解試劑。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的裝置,其特征在于,所述紅細(xì)胞溶解試劑為蔗糖-聚氧乙烯醚類緩沖液。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的裝置,其特征在于,所述溶解試劑為水。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的裝置(1),其特征在于,所述溶解試劑為陰離子表面活性劑。

8.根據(jù)權(quán)利要求3至權(quán)利要求7中任一項(xiàng)所述的裝置(1),其特征在于,所述室還包含收集緩沖液。

9.根據(jù)權(quán)利要求1至權(quán)利要求8中任一項(xiàng)所述的裝置(1),其特征在于,所述固體支承物(12)為可滲透的膜。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的裝置(1),其特征在于,所述固體支承物(12)為選自由聚酯膜、聚酰胺膜、聚碳酸酯膜和纖維素膜構(gòu)成的組的可滲透的膜。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的裝置(1),其特征在于,所述固體支承物(12)為聚酯膜。

12.根據(jù)權(quán)利要求1至權(quán)利要求11中任一項(xiàng)所述的裝置(1),其特征在于,所述固體支承物(12)位于所述插棒本體(8)的底端(11b)處。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的裝置(1),其特征在于,所述插棒本體(8)的所述底端(11b)密封所述容器(2)的所述上端(3),并且其中所述室(5)包括真空。

14.一種方法,其包括:

(i)將細(xì)胞樣本(15)引入到容器(2)中,其中所述容器(2)具有開(kāi)口的上端(3)和密封的下端(4),以及由室壁(6)限定在其間的室(5),其中所述容器(2)容納收集緩沖液,其包括溶解試劑,所述溶解試劑在足以選擇性地溶解存在于所述細(xì)胞樣本(15)中的細(xì)胞質(zhì)膜和小比例的核膜并且使大比例的細(xì)胞核完好的濃度下;

(ii)將插棒(7)插入到所述容器(2)的所述上端(3)中,其中所述插棒(7)包括由插棒壁(9)限定的中空插棒本體(8),其中所述壁(9)具有對(duì)應(yīng)于所述室(5)的形狀和小于所述室(5)的直徑,密封所述插棒本體(8)的頂端(11a)的隔膜蓋(10),以及跨越所述插棒本體(8)的直徑(d)的固體支承物(12);

(iii)朝所述容器(2)的所述下端(4)壓制所述插棒(7),以使所述固體支承物(12)穿過(guò)所述細(xì)胞樣本(15),并且所述細(xì)胞核和其它細(xì)胞組分粘合于所述固體支承物,留下濾液;以及

(iv)除去所述濾液。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法,其特征在于,所述溶解試劑為紅細(xì)胞溶解試劑。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法,其特征在于,所述紅細(xì)胞溶解試劑為蔗糖-聚氧乙烯醚類緩沖液。

17.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法,其特征在于,所述溶解試劑為水。

18.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法,其特征在于,所述溶解試劑為陰離子表面活性劑。

19.根據(jù)權(quán)利要求14至權(quán)利要求18中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述細(xì)胞樣本(15)具有大于1ml的體積。

20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法,其特征在于,所述細(xì)胞樣本(15)具有大于5ml的體積。

21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法,其特征在于,所述細(xì)胞樣本(15)具有大于10ml的體積。

22.根據(jù)權(quán)利要求14至權(quán)利要求21中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述完好的細(xì)胞核包含核酸。

23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法,其特征在于,所述核酸包括脫氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)。

24.根據(jù)權(quán)利要求14至權(quán)利要求23中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述方法還包括在周圍溫度下將所述完好的核儲(chǔ)存在所述固體支承物(12)上的步驟(v)。

25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法,其特征在于,所述方法包括在所述除去步驟(iv)之后和所述儲(chǔ)存步驟(v)之前將所述固體支承物(12)浸沒(méi)在有機(jī)溶劑中的附加步驟。

26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法,其特征在于,所述有機(jī)溶劑為酒精。

27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法,其特征在于,所述酒精為乙醇或異丙醇。

28.根據(jù)權(quán)利要求14至權(quán)利要求27中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述固體支承物(12)在所述儲(chǔ)存步驟(v)之前被空氣干燥。

29.根據(jù)權(quán)利要求14至權(quán)利要求28中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述固體支承物(12)為可滲透的膜。

30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法,其特征在于,所述固體支承物(12)為選自由聚酯膜、聚酰胺膜、聚碳酸酯膜和纖維素膜構(gòu)成的組的可滲透的膜。

31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法,其特征在于,所述固體支承物(12)為聚酯膜。

32.根據(jù)權(quán)利要求14至權(quán)利要求31中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述方法包括從所述完好的核回收所述核酸的附加步驟(vi)。

33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法,其特征在于,所述回收步驟(vi)包括溶解所述固體支承物(12)上的所述完好的核。

34.根據(jù)權(quán)利要求32或權(quán)利要求33所述的方法,其特征在于,所述回收步驟(vi)包括離心分離。

35.根據(jù)權(quán)利要求14至權(quán)利要求34中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述回收步驟前接被動(dòng)清洗所述固體支承物(12)。

36.根據(jù)權(quán)利要求14至權(quán)利要求35中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述細(xì)胞樣本(15)直接從受驗(yàn)者引入到所述容器(2)中。

37.一種套件,其包括根據(jù)權(quán)利要求1至權(quán)利要求13中任一項(xiàng)所述的裝置,以及用于執(zhí)行根據(jù)權(quán)利要求14至權(quán)利要求36中任一項(xiàng)所述的方法的指令。

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