一種丹酚酸a化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于包括將含丹酚酸B和/或紫草酸成分的原料在金屬Lewis酸催化劑存在下、在pH值1-6的緩沖液中經(jīng)加熱化學(xué)轉(zhuǎn)化成丹酚酸A的步驟。通過采用本發(fā)明的方法，能在顯著提高轉(zhuǎn)化率的同時(shí)，還能有效抑制丹酚酸A的降解及副產(chǎn)物的生成，并以較高的產(chǎn)率實(shí)現(xiàn)從丹酚酸B到丹酚酸A的轉(zhuǎn)化。
【專利說明】
一種丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 丹參多酚酸類化合物是傳統(tǒng)活血化瘀中藥丹參中的水溶性有效成分，有顯著的抗 氧化、抗肝臟損傷、抗動(dòng)脈粥樣硬化及抗細(xì)胞凋亡等作用，在臨床上得到了廣泛應(yīng)用。丹酚 酸A(Salvianolic acid A，SAA)是其中的代表性成分之一，但由于丹酸酸A植物來源很低 (占丹參藥材的〇. 01 - 〇. 06% )，限制了其進(jìn)一步的研究開發(fā)應(yīng)用。因此，一直以來，尋求 有效的方法來解決丹酚酸A的資源短缺問題備受人們關(guān)注。
[0003] 最初，人們主要嘗試?yán)锰崛》蛛x的制備方法來實(shí)現(xiàn)丹酚酸A工業(yè)化生產(chǎn)。例如， 中國(guó)專利CN101041620A公開了一種采用水溫浸、離心、樹脂層析、萃取、濃縮干燥制備丹酚 酸A的制備方法，但因其最終提取物得率僅為3%。而沒有工業(yè)化生產(chǎn)價(jià)值。后來，人們嘗試 采用半合成的方法，以生源相近且植物含量豐富的丹酚酸B和紫草酸為原料，在弱酸條件 下加熱轉(zhuǎn)化，并最終分離得到丹酚酸A。例如，中國(guó)專利CN101121658A公開了一種采用水 提取、高溫高壓反應(yīng)、樹脂層析、萃取、真空干燥或冷凍干燥制備丹酚酸A的方法。又如，中 國(guó)專利申請(qǐng)CN101311160A公開了一種以丹酚酸B為原料，在將pH值調(diào)節(jié)為3. 5 - 6. 0之 后高溫高壓反應(yīng)/微波加熱反應(yīng)、大孔樹脂層析、聚酰胺層析后濃縮干燥制備丹酚酸A的方 法。再如，中國(guó)專利CN103044252A公開了一種采用水/乙醇提取、金屬氯化物催化下高溫 高壓反應(yīng)、離心、樹脂層析、葡萄糖凝膠LH-20/0DS-C18/聚酰胺層析、萃取、硅膠層析、真空 干燥/噴霧干燥/微波干燥制備丹酚酸A的方法。
[0004] 通過對(duì)現(xiàn)有丹酚酸A的制備技術(shù)分析研究我們發(fā)現(xiàn)：丹酚酸B提取并化學(xué)轉(zhuǎn)化成 丹酚酸A的過程是制約丹酚酸A產(chǎn)率的重要環(huán)節(jié)。雖然現(xiàn)有的提取轉(zhuǎn)化技術(shù)到目前為止已 經(jīng)有了較大進(jìn)步，但是仍然有很多問題有待解決。如：主要原料丹酚酸B轉(zhuǎn)化率較低、主產(chǎn) 物丹酚酸A的產(chǎn)率也較低（〈50%)等缺點(diǎn)。因此，尋找一種在低成本的條件下進(jìn)一步提高 丹酚酸A產(chǎn)率的制備方法仍值得人們期待。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種以高產(chǎn)率獲得丹酚酸A的方法，該方法通過將原 料中的丹酚酸B和/或紫草酸在緩沖液的存在下化學(xué)轉(zhuǎn)化生成丹酚酸A。相比于現(xiàn)有技術(shù) 的丹酚酸A產(chǎn)率（通常小于50%)，本發(fā)明的方法不僅顯著提高了丹酚酸A產(chǎn)率（可高達(dá) 60% )，還能有效抑制丹酚酸A的降解及副產(chǎn)物的生成。進(jìn)一步地，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在甘氨酸緩 沖液的存在下進(jìn)行化學(xué)轉(zhuǎn)化能夠使丹酚酸B達(dá)到尤其高的轉(zhuǎn)化率。
[0006] 因此，本發(fā)明的一個(gè)方面涉及丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，包括如下步驟：將含 丹酸酸B和/或紫草酸成分的原料在pH值1-6的緩沖液中、在金屬Lewis酸催化劑存在下 經(jīng)加熱化學(xué)轉(zhuǎn)化成丹酚酸A。根據(jù)一些實(shí)施方案，所述加熱轉(zhuǎn)化于100 - 140°C的溫度下進(jìn) 行，通常進(jìn)行1 一 24小時(shí)。
[0007] 適合用于本發(fā)明方法中的緩沖溶液選自：甘氨酸緩沖液、醋酸_醋酸鈉緩沖液、磷 酸二氫鹽緩沖液（包括磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、氯化鈉和/或氯化鉀）、鄰苯二甲酸-鹽酸 緩沖液、檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液、檸檬酸-氫氧化鈉-鹽酸緩沖液。為獲得60%以上的顯 著更高的丹酚酸A產(chǎn)率，優(yōu)選使用甘氨酸緩沖液和醋酸-醋酸鈉緩沖液。緩沖液的pH值范 圍優(yōu)選為2-5,更優(yōu)選3-4,最優(yōu)選約為4。
[0008] 根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方案，制備方法中所用的金屬Lewis酸催化劑是ZnBr2、 ZnC10 4、Zn(0Ac)2、ZnS04、CuBr2、CuBr、Cu(0Ac) 2、CeCl3、MnCl2、NiCl2、Fe2(S0 4)3和 FeCl 2中 的一種或幾種。
[0009] 進(jìn)一步地，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過在pH值處于一定范圍內(nèi)的緩沖液中進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)， 對(duì)反應(yīng)液的組成沒有特別的要求。本發(fā)明中采用的包含丹酚酸B和/或紫草酸的原料可以 是其純度較高的從丹參藥材醇水提取物中獲得的總酚酸富集物，也可以是丹參藥材醇水提 取物，甚至可以是丹參藥材，均可以以高產(chǎn)率制備丹酚酸A。因此，本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及 原料適用范圍廣且穩(wěn)定可控的丹酚酸A制備方法。更特別地，本發(fā)明的制備方法可以使用 丹參藥材作為起始原料，以高產(chǎn)率直接制備丹酚酸A。在一個(gè)優(yōu)化的實(shí)施方案中，以丹參藥 材為原料，采用緩沖液作為轉(zhuǎn)化反應(yīng)液，經(jīng)轉(zhuǎn)化并提取后，以超過65%的產(chǎn)率得到了丹酚酸 A提取物。
【附圖說明】
[0010] 為了進(jìn)一步對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案和效果進(jìn)行說明，本申請(qǐng)?zhí)峁┮韵赂綀D。這些附 圖的結(jié)果不應(yīng)以任何方式理解為限制本發(fā)明的范圍。具體而言：
[0011] 圖1為丹酚酸A對(duì)照品高效液相色譜圖；
[0012] 圖2為丹酚酸B對(duì)照品高效液相色譜圖；
[0013] 圖3為丹酚酸B轉(zhuǎn)化丹酚酸A工藝比較的高效液相色譜圖（實(shí)驗(yàn)例1實(shí)驗(yàn)組1);
[0014] 圖4為丹酚酸B轉(zhuǎn)化丹酚酸A工藝比較的高效液相色譜圖（實(shí)驗(yàn)例1實(shí)驗(yàn)組2);
[0015] 圖5為回流反應(yīng)條件下，丹酚酸B轉(zhuǎn)化丹酚酸A的高效液相色譜圖（實(shí)施例1);
[0016] 圖6為140°C反應(yīng)條件下，丹酚酸B轉(zhuǎn)化丹酚酸A的高效液相色譜圖（實(shí)施例2);
[0017] 圖7為大孔樹脂分離丹酚酸A產(chǎn)品的高效液相色譜圖（實(shí)施例10)。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 通過研究丹酚酸B至丹酚酸A的反應(yīng)的過程以及副產(chǎn)物發(fā)現(xiàn)，該反應(yīng)主要經(jīng)歷第 一階段的丹酚酸B (Sal-B)選擇性水解，從而脫去一分子丹參素形成紫草酸，以及第二階段 的苯并二氫呋喃環(huán)開環(huán)，同時(shí)脫去一個(gè)片斷，最終得到目標(biāo)產(chǎn)物丹酚酸A (Sal-A)。
[0020] 現(xiàn)發(fā)現(xiàn)，反應(yīng)過程pH值發(fā)生變化易導(dǎo)致丹酚酸A的降解及副產(chǎn)物的產(chǎn)生，即使在 進(jìn)行化學(xué)轉(zhuǎn)化反應(yīng)前將反應(yīng)液的pH值控制在合適的酸性條件下，仍會(huì)導(dǎo)致丹酚酸A的產(chǎn)率 下降。而控制反應(yīng)過程中pH值的變化使得能夠抑制副產(chǎn)物生成并顯著提高丹酚酸A的產(chǎn) 率。
[0021] 基于此，本發(fā)明提供了一種通過化學(xué)轉(zhuǎn)化制備丹酚酸A的方法。
[0022] 本發(fā)明的化學(xué)轉(zhuǎn)化制備丹酚酸A的方法包括將含丹酚酸B和/或紫草酸成分的原 料在金屬Lewis酸催化劑存在下、在pH值1-6的緩沖液中經(jīng)加熱化學(xué)轉(zhuǎn)化成丹酸酸A的步 驟。加熱轉(zhuǎn)化一般在100 - 140°C的溫度下進(jìn)行，優(yōu)選進(jìn)行1 一 24小時(shí)，更優(yōu)選進(jìn)行4 一 16小時(shí)，最優(yōu)選進(jìn)行10 - 16小時(shí)。
[0023] 可用于本發(fā)明化學(xué)轉(zhuǎn)化方法中的催化劑是金屬Lewis酸催化劑，優(yōu)選該催化劑是 選自 ZnBr2、ZnC104、Zn (OAc) 2、ZnS04、CuBr2、CuBr、Cu (OAc) 2、CeCl3、MnCl2、NiCl2、Fe 2 (S04) 3 和FeCl2*的一種或多種。該催化劑的用量沒有特別的限制，只要能夠有效地催化反應(yīng)的 進(jìn)行即可。但當(dāng)采用的催化劑占丹酚酸B的摩爾百分比為1 一 100%、優(yōu)選30 - 60%，更 優(yōu)選40 - 50 %時(shí)，可以獲得出色的丹酚酸B轉(zhuǎn)化率。
[0024] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，緩沖液選自：甘氨酸緩沖液、醋酸-醋酸鈉緩沖液、 磷酸二氫鈉緩沖液、鄰苯二甲酸鹽酸緩沖液、檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液、檸檬酸-氫氧化 鈉-鹽酸緩沖液。優(yōu)選的緩沖液為甘氨酸緩沖液或醋酸-醋酸鈉緩沖液；最優(yōu)選甘氨酸緩 沖液。緩沖液的合適的pH值為2 - 5,優(yōu)選為3 - 4,更優(yōu)選為約4。
[0025] 制備緩沖液的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，也可以從市場(chǎng)上購買得到。
[0026] 本發(fā)明中使用的甘氨酸緩沖液包括甘氨酸-HBr或甘氨酸-HC1，任選地進(jìn)一步包 含NaBr或NaCl，例如可以為HC1-甘氨酸-NaBr、HCl-甘氨酸-NaCl、HBr-甘氨酸-NaBr或 HBr-甘氨酸-NaCl。由此獲得的轉(zhuǎn)化反應(yīng)的反應(yīng)溶液的pH為2. 0-5. 0,更優(yōu)選3. 0-4. 0,最 優(yōu)選約為4. 0。
[0027] 適用于本發(fā)明中的含丹酚酸B和/或紫草酸成分的原料可以是丹參藥材、丹參藥 材提取物（特別是醇水提取物）、或者丹參藥材提取物的總酚酸富集物。
[0028] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，原料為丹參總酚酸富集物。丹參總酚酸富集物總體 上可以按照下述方法制備：將丹參藥材醇水提取物濃縮過濾后，經(jīng)大孔樹脂分離，〇 - 60% 醇水溶液洗脫，收集并濃縮得到丹參總酚酸富集物。具體的制備方法可以參見，例如中國(guó)專 利申請(qǐng) No. 200910060299. 9、No. 200710070020. 6、20061003913L 6 等。丹參總酚酸提取物 中總酚酸含量為5 - 100重量％，其中，丹酚酸B和/或紫草酸的含量占全部總酚酸含量 的5 - 100重量％。隨后，將所獲得的丹參總酚酸富集物在金屬Lewis酸催化劑存在下、在 pH值1-6的緩沖液中經(jīng)加熱化學(xué)轉(zhuǎn)化成丹酚酸A。
[0029] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，制備丹參總酚酸富集物所用大孔樹脂填料選自下 列樹脂中的一種或多種：HP20、HPD-80、HPD-100、HPD-100B、HPD-200A、HPD-300、HPD-450、 HPD-722、HPD-826、ADS-5、ADS-8、ADS-21、D101、AB-8、1300-I 及 RA 型樹脂。這些樹脂是市 售可得的，例如可以獲自羅門哈斯公司（Rohm and Haas)、Organo三菱化成公司、南開大學(xué) 化工廠、天津市海光化工有限公司、天津南開和成科技有限公司華東理工大學(xué)華昌聚合物 有限公司等。
[0030] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，原料為丹參藥材提取物，特別是醇水提取物。丹參藥 材醇水提取物通過將丹參藥材放入乙醇或乙醇-水溶液中在常溫下進(jìn)行提取，過濾獲得上 清液。例如，可以參見中國(guó)專利申請(qǐng)No. 200710170506. 7、No. 200710044039. 3等。之后，將 獲得的丹參藥材醇水提取物在金屬Lewis酸催化劑存在下、在pH值1-6的緩沖液中經(jīng)加熱 化學(xué)轉(zhuǎn)化成丹酚酸A。
[0031 ] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，含丹酚酸B和/或紫草酸成分的原料為丹參藥材。丹 參藥材既可以先通過前述方法獲得丹參提取物作為本發(fā)明方法的原料，也可以任選地進(jìn)一 步得到總酸酸富集物作為本發(fā)明的原料。另一方面，丹參藥材也可以直接在金屬Lewis酸 催化劑存在下在pH值1-6的緩沖液中經(jīng)加熱將所含有的丹酚酸B化學(xué)轉(zhuǎn)化成丹酚酸A，然 后提取純化丹酚酸A。在后一種方案中，任選地可以在提取和純化過程中包括額外的本發(fā)明 方法的化學(xué)轉(zhuǎn)化步驟。
[0032] 在一個(gè)實(shí)施方案中，由丹參藥材獲得丹酚酸A的方法包括：將丹參藥材用pH值為 1-6的緩沖液浸泡，在金屬Lewis酸催化劑的存在下進(jìn)行反應(yīng)轉(zhuǎn)化，所獲得的反應(yīng)液過濾， 收集濾渣（即反應(yīng)液的固體部分）并用醇水提取，提取液濃縮過濾后，經(jīng)大孔樹脂分離，〇 - 60%醇水溶液洗脫，收集并濃縮得到丹酚酸A。
[0033] 通過本發(fā)明的上述任一方法制備的含丹酚酸A的反應(yīng)液可以進(jìn)行進(jìn)一步提取和 /或純化，所述提取和/或純化可以使用大孔樹脂，例如選自下列樹脂中的一種或幾種： HP20、HPD-80、HPD-100、HPD-100B、HPD-200A、HPD-300、HPD-450、HPD-722、HPD-826、ADS-5、 ADS-8、ADS-21、D101、AB-8、1300-I 及 RA 型樹脂。
[0034] 在一個(gè)更【具體實(shí)施方式】中，含丹酚酸A的反應(yīng)液或提取液可以進(jìn)一步純化。所述 純化步驟例如可以包括將丹酚酸A轉(zhuǎn)化液過濾，濾液經(jīng)大孔樹脂分離，依次用水洗脫約3個(gè) 柱體積、20 - 30 %醇水洗脫約3個(gè)柱體積，40 - 60 %醇水洗脫約6個(gè)柱體積，收集40%以 上部分并減壓濃縮至干，得到丹酚酸A固體。
[0035] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所使用的醇水溶液優(yōu)選為(^一 C 4的醇水溶液，特別 優(yōu)選乙醇水溶液。
[0036] 通過采用本發(fā)明的方法，能在顯著提高轉(zhuǎn)化率（高達(dá)90%以上）的同時(shí)，還能有 效抑制丹酚酸A的降解及副產(chǎn)物的生成，并以較高的產(chǎn)率（約60% )實(shí)現(xiàn)從丹酚酸B到丹 酚酸A的轉(zhuǎn)化。因此，本發(fā)明在提高目標(biāo)產(chǎn)物得率和生產(chǎn)質(zhì)量控制方面，取得了顯著技術(shù)效 果。
[0037] 本發(fā)明還首次提供了一種以丹參藥材為原料，通過一鍋法同步實(shí)現(xiàn)了丹酚酸B提 取并轉(zhuǎn)化成丹酚酸A的方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：提取轉(zhuǎn)化一次就能以較高的產(chǎn)率（約60% ) 得到丹酚酸A ;尤其以甘氨酸緩沖液為轉(zhuǎn)化溶劑，在pH = 4和40%催化劑的條件下反應(yīng)16 小時(shí)取得丹酚酸A的最佳轉(zhuǎn)化。明顯的，本發(fā)明進(jìn)一步簡(jiǎn)化了操作流程，縮短生產(chǎn)周期和降 低了生產(chǎn)成本。
[0038] 發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，ZnBr2、ZnC104、Zn (OAc) 2、ZnS04、CuBr2、CuBr、Cu (OAc) 2、CeCl3、MnCl2、 〇124 62(304)3或？冗12等金屬路易斯酸作為催化劑能顯著提高丹酚酸8轉(zhuǎn)化丹酚酸八的 反應(yīng)速度。且實(shí)驗(yàn)表明，催化劑用量對(duì)丹酚酸A產(chǎn)率影響相對(duì)較小。
[0039] 綜上所述，本發(fā)明通過對(duì)丹酚酸B轉(zhuǎn)化丹酚酸A的反應(yīng)機(jī)理和丹酚酸類化合物性 質(zhì)的深入研究，經(jīng)過不斷摸索，發(fā)現(xiàn)了一條低成本、易產(chǎn)業(yè)化和高效的制備丹酚酸A的工藝 方法，總得率可達(dá)到2% (以生藥計(jì)）。
[0040] 本發(fā)明的方案現(xiàn)通過以下實(shí)施例進(jìn)行說明，應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅為示例的目的， 并不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0041] 實(shí)施例
[0042] 實(shí)施例中采用如下丹酚酸B、丹酚酸A檢測(cè)分析方法。
[0043] -儀器與試劑
[0044] 儀器：Agilent 1260高效液相色譜儀，Empower 2色譜工作站，全波長(zhǎng)二極管陣列 檢測(cè)器；Sartorius cp 225 D十萬分之一電子天平。
[0045] 色譜柱：YMC C18 色譜柱（250 X 4. 6mm，5 y m);
[0046] 試劑：甲醇為色譜純，水為Millipore制備的超純水，其他試劑均為分析純。
[0047] 丹酚酸A、B對(duì)照品購自中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用。
[0048] 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速： 1. OmL ? min S柱溫：30°C ;檢測(cè)波長(zhǎng)：286nm。理論板數(shù)按丹酸酸A計(jì)不低于5000 ;以甲 醇-0. 5 %甲酸水溶液為流動(dòng)相，經(jīng)甲醇比例為45 %的溶劑條件等度洗脫20分鐘。
[0049] _對(duì)照品溶液及供試樣品溶液的制備
[0050] 對(duì)照品溶液的配制：精密稱取丹酚酸A和丹酚酸B對(duì)照品到容量瓶中，于25°C環(huán) 境溫度下，加水溶解搖勻并稀釋至刻度；
[0051] 供試樣品溶液的配制：取樣品，于25°C環(huán)境溫度下，加入水溶解搖勻并稀釋至刻 度；
[0052] 測(cè)定法：精密吸取對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；精密吸取供試樣品 溶液，注入液相色譜儀，計(jì)算峰面積比。
[0053] 對(duì)照品保留時(shí)間見下表；丹酚酸A和丹酚酸B對(duì)照品HPLC圖譜見圖1、圖2。
[0054] 對(duì)照品色譜保留時(shí)間
[0056] 實(shí)施例1
[0057] 將粉碎后的1kg丹參藥材（生產(chǎn)批號(hào)：131001)用7L濃度為70%乙醇在回流條件 下提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至無醇味；將得到的濃縮液過濾，濾液（1L) 經(jīng)大孔樹脂D101 (天津南開大學(xué)樹脂有限公司）層析，依次用0和50%乙醇水洗脫劑分別 洗脫2和3個(gè)柱體積，收集含有丹酚酸B的40 %洗脫液，減壓濃縮至干，得到60. 65g純度為 64. 3%的丹酚酸鹽固體。將上述丹酚酸鹽在pH = 3. 5的HC1-甘氨酸-NaBr的緩沖溶液中 配制成丹酚酸8濃度為1511^/1^的2.61溶液，然后加入15%摩爾量（以丹酚酸8計(jì)）的 ZnBr 2，于回流條件下反應(yīng)14小時(shí)；反應(yīng)完成后，HPLC檢測(cè)，測(cè)得丹酚酸A的含量為19. 3g， 即丹酚酸A的提取反應(yīng)收率為1. 93% (基于丹參藥材，下同）。
[0058] 實(shí)施例2
[0059] 將粉碎后的1kg丹參藥材（生產(chǎn)批號(hào)：131001)用6L濃度為60%乙醇在回流條件 下提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，過濾，在pH = 3. 0的HC1-甘氨 酸-NaCl的緩沖溶液中配制成丹酚酸B濃度為20mg/mL的1. 95L溶液，然后加入5%摩爾量 (以丹酚酸B計(jì)）的CuBr2，于140°C條件下反應(yīng)4小時(shí)；反應(yīng)完成后，HPLC檢測(cè)，測(cè)得溶液 中含有丹酚酸A 16. 8g，即丹酚酸A的提取反應(yīng)收率為1. 68%。
[0060] 實(shí)施例3
[0061] 將粉碎后的1kg丹參藥材（生產(chǎn)批號(hào)：131001)用7L濃度為50%乙醇在回流條件 下提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至無醇味；將得到的提取液過濾后，在pH = 3. 0的甘氨酸_HBr緩沖溶液中配制成丹酚酸B濃度為15mg/mL2. 60L溶液，然后加入15% 摩爾量（以丹酚酸B計(jì)）的ZnBr2，于100°C條件下反應(yīng)16小時(shí)；反應(yīng)完成后，HPLC檢測(cè)， 測(cè)得溶液中含丹酚酸A 17. 6g，即丹酚酸A的提取反應(yīng)收率為1. 76%。
[0062] 實(shí)施例4
[0063] 將粉碎后的1kg丹參藥材（生產(chǎn)批號(hào)：131001)用6L濃度為50%乙醇在回流條 件下提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，并減壓濃縮至無醇味；將得到的提取液過濾后，在 pH = 3. 0的HC1-甘氨酸緩沖溶液配制成丹酚酸B濃度為30mg/mL的1. 30L溶液，然后加入 5%摩爾量（以丹酚酸B計(jì)）的Cu (OAc) 2，于140°C條件下反應(yīng)4小時(shí)；反應(yīng)完成后，HPLC檢 測(cè)，測(cè)得溶液中含丹酚酸A 17. 9g，即丹酚酸A的提取反應(yīng)收率為1.79%。
[0064] 實(shí)施例5
[0065] 將粉碎后的1kg丹參藥材（生產(chǎn)批號(hào)：131001)用5L濃度為60%乙醇在回流條 件下提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，并減壓濃縮至無醇味；將得到的提取液過濾后，在 pH = 3. 0的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液中配制成丹酚酸B濃度為15mg/mL的2. 71L溶液，加入 15%摩爾量（以丹酚酸B計(jì)）的催化劑ZnBr2，于100°C條件下反應(yīng)15小時(shí)；反應(yīng)完成后， HPLC檢測(cè)，測(cè)得溶液中含丹酚酸A 18. 2g，即丹酚酸A的提取反應(yīng)收率為1.82%。將上述 所得丹酚酸A濃縮液，經(jīng)3L HP20大孔樹脂柱層析分離，依次用0、30 %的乙醇溶液各洗脫3 個(gè)柱體積，然后用40%乙醇分別洗脫4個(gè)柱體積，HPLC檢測(cè)，收集丹酚酸A純度大于95% (286nm)的40%乙醇洗脫部分，減壓濃縮至干得到丹酚酸A固體9. 26g。
[0066] 實(shí)施例6
[0067] 將粉碎后的1kg丹參藥材（生產(chǎn)批號(hào)：131001)用7L濃度為50%乙醇在回流條件 下提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至無醇味；將得到的濃縮液過濾，濾液經(jīng)大 孔樹脂HP20 (寶恩化工）層析，依次用0 - 80%乙醇/水洗脫劑洗脫，收集含有丹酚酸B的 洗脫液，減壓濃縮至干，得到62. 2lg純度為63. 6 %的固體丹酚酸鹽。將62. 2lg丹酚酸鹽在 pH = 4. 0的Na2HP04-檸檬酸緩沖溶液中配制成丹酚酸B濃度為15mg/mL的2. 64L溶液，然 后加入15%摩爾量（以丹酚酸8計(jì)）的211((^(3)2，于100°(：條件下反應(yīng)14小時(shí)；反應(yīng)完成 后，HPLC檢測(cè)，測(cè)得溶液中含丹酚酸A 14. 5g，丹酚酸A的提取反應(yīng)收率為1. 45 %。
[0068] 實(shí)施例7
[0069] 將粉碎后的1kg丹參藥材（生產(chǎn)批號(hào)：131001)用7L濃度為20%乙醇在回流條件 下提取3次，每次2小，合并提取液，減壓濃縮至無醇味；然后將濃縮液在pH = 4. 0的鄰苯 二甲酸-HC1緩沖溶液中配制成丹酚酸B濃度為15mg/mL的2. 58L溶液，然后加入15%摩爾 量（以丹酚酸B計(jì)）的MnCl2，于回流條件下反應(yīng)16小時(shí)；反應(yīng)完成后，HPLC檢測(cè)，測(cè)得溶 液中含丹酚酸A 15. 2g，丹酚酸A的提取反應(yīng)收率為1. 52%。
[0070] 實(shí)施例8
[0071] 將粉碎后的1kg丹參藥材（生產(chǎn)批號(hào)：131001)加入到pH = 4.0的HC1-甘氨酸 緩沖溶液5. 0L中，然后加入45 %摩爾量（以丹酚酸B計(jì)）的ZnBr2，于回流條件下提取反 應(yīng)18小時(shí)；反應(yīng)完成后，過濾；濾渣經(jīng)7L濃度為70 %的乙醇水溶液提取回流2次，每次2 小時(shí)，合并提取液并濃縮得到含丹酚酸A的濃縮液。HPLC檢測(cè)，測(cè)得濃縮溶液中含丹酚酸 A19.6g，丹酚酸A的提取反應(yīng)收率為1.96%。
[0072] 實(shí)施例9
[0073] 將粉碎后的1kg丹參藥材（生產(chǎn)批號(hào)：131001)加入到pH = 4. 0的HBr-甘氨酸 緩沖溶液5. 0L中，然后加入80 %摩爾量（以丹酚酸B計(jì)）的CuBr2，于回流條件下提取反 應(yīng)16小時(shí)；反應(yīng)完成后，過濾；濾渣經(jīng)7L濃度為60 %的乙醇水溶液回流提取2次，每次2 小時(shí)，合并提取液并濃縮得到含丹酚酸A的濃縮液2L。HPLC檢測(cè)，測(cè)得濃縮溶液中含丹酚 酸A 20. 8g，丹酚酸A的提取反應(yīng)收率為2. 08 %。
[0074] 實(shí)施例10
[0075] 將粉碎后的1kg丹參藥材（生產(chǎn)批號(hào)：131001)加入到pH = 4. 0的HBr-甘氨酸 緩沖溶液5L中，然后加入40 %摩爾量（以丹酚酸B計(jì)）的CuBr2，于140°C條件下反應(yīng)5小 時(shí)；反應(yīng)完成后，過濾；濾渣經(jīng)6L濃度為50%的乙醇水溶液提取回流2次，每次2小時(shí)，合 并提取液并濃縮得到含丹酚酸A的濃縮液，HPLC檢測(cè)，測(cè)得濃縮溶液中含丹酚酸A 18. 3g， 丹酚酸A的提取反應(yīng)收率為1.83%。將上述所得丹酚酸A濃縮液，經(jīng)3L D101大孔樹脂柱 層析分離，依次用〇、25%的乙醇溶液各洗脫3個(gè)柱體積，然后用40 %乙醇分別洗脫4個(gè)柱 體積，HPLC檢測(cè)，收集丹酚酸A純度大于95% (286nm)的40%乙醇洗脫部分，減壓濃縮至 干得到丹酚酸A固體7. 87g。
[0076] 實(shí)驗(yàn)例1 :丹酚酸B轉(zhuǎn)化丹酚酸A工藝比較
[0077] 實(shí)驗(yàn)組1 :取丹酚酸B純度為64. 3%的丹酚酸鹽固體2. 0g，配制成90mL pH值為4 的鹽酸水溶液，加1. 0%的ZnCl2。
[0078] 實(shí)驗(yàn)組2 :取丹酚酸B純度為64. 3%的丹酚酸鹽固體2. 0g，配制成90mL pH值為4 的甘氨酸-溴化鈉-鹽酸緩沖溶液，加1. 〇%的ZnCl2。
[0079] 實(shí)驗(yàn)組3 :取丹酚酸B純度為64. 3%的丹酚酸鹽固體2. 0g，配制成90mL pH值為4 的甘氨酸-溴化鈉-鹽酸緩沖溶液，加10 %的ZnCl2。
[0080] 其中實(shí)驗(yàn)組1 一 2統(tǒng)一置于同一高壓反應(yīng)釜中于130°C下反應(yīng)4小時(shí)，實(shí)驗(yàn)組3 在回流條件下反應(yīng)10小時(shí)。反應(yīng)完成后，反應(yīng)統(tǒng)一冷卻至室溫，并加水稀釋至相同體積 (200mL)，HPLC檢測(cè)（進(jìn)樣10 y L)，計(jì)算丹酚酸A的產(chǎn)率。
[0081] 表1、不同工藝條件下丹酚酸B轉(zhuǎn)化丹酚酸A實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較
[0082]
[0083] 表1實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：（1)在130°C高溫高壓反應(yīng)條件下，以氨基酸緩沖溶液作為反 應(yīng)溶劑的實(shí)驗(yàn)組2 (見附圖4)中的丹酚酸B轉(zhuǎn)化率及丹酚酸A產(chǎn)率比常規(guī)反應(yīng)條件實(shí)驗(yàn)組 1(見附圖3)有明顯的提高。（2)對(duì)比實(shí)驗(yàn)組2和3結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在丹酚酸B轉(zhuǎn)化率相近的情 況下，雖然回流條件下反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)，但該條件下的丹酚酸A的產(chǎn)率要高于130°C高溫高壓 條件。
[0084] 實(shí)驗(yàn)例2 :丹酚酸B轉(zhuǎn)化為丹酚酸A工藝優(yōu)化
[0085] 實(shí)驗(yàn)2. 1 :最佳化丹酚酸B轉(zhuǎn)化丹酚酸A反應(yīng)條件
[0086] 首先我們以丹參藥材（生產(chǎn)批號(hào)：131001)醇水提取物大孔樹脂分離所得丹酚酸 鹽為原料，在回流反應(yīng)條件下，最佳化了影響反應(yīng)的因素：甘氨酸-鹽酸緩沖溶液的pH值 及反應(yīng)時(shí)間。實(shí)驗(yàn)基本條件為：以丹酚酸鹽為原料（丹酚酸B含量64. 3% )，配成不同pH 的反應(yīng)緩沖溶液（甘氨酸-溴化鈉-鹽酸），并在10% ZnClJ^催化下，于回流條件下反應(yīng) (實(shí)驗(yàn)組1 一 7)。HPLC檢測(cè)，并計(jì)算丹酚酸B轉(zhuǎn)化率及丹酚酸A產(chǎn)率，并與對(duì)照組1和2比 較。結(jié)果如表2所不：
[0087] 表2、丹酚酸B反應(yīng)濃度、pH值及時(shí)間
[0088]
[0089] 3對(duì)照組的丹酚酸B轉(zhuǎn)化反應(yīng)在不同pH的常規(guī)水溶液中。
[0090] 表2實(shí)驗(yàn)結(jié)果：（1)實(shí)驗(yàn)組1 一 3結(jié)果表明，丹酚酸B在反應(yīng)14小時(shí)后基本轉(zhuǎn)化完 全。（2)比較實(shí)驗(yàn)組3 - 7實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，緩沖溶液pH在1 一 6之間可以取得較滿意的丹 酚酸B轉(zhuǎn)化率和丹酚酸A的產(chǎn)率，在2 - 5之間變化時(shí)丹酚酸A產(chǎn)率更優(yōu)，pH值3 - 4時(shí) 效果最佳。（3)與對(duì)照組1和2結(jié)果相比，在較優(yōu)的反應(yīng)pH條件下，緩沖溶液作為轉(zhuǎn)化反應(yīng) 液時(shí)（實(shí)驗(yàn)組3和5)，無論丹酚酸B轉(zhuǎn)化率還是丹酚酸A產(chǎn)率都要顯著優(yōu)于常規(guī)水溶液條 件。
[0091 ] 綜上所述，丹酚酸B轉(zhuǎn)化丹酚酸A最佳反應(yīng)條件為：反應(yīng)緩沖液pH = 3 - 4,反應(yīng) 10 - 14小時(shí)。
[0092] 實(shí)驗(yàn)2. 2 :催化劑
[0093] 為了尋求更加經(jīng)濟(jì)、高效的催化劑，降低工業(yè)成本，我們?cè)谧罴褜?shí)驗(yàn)條件基礎(chǔ)上， 進(jìn)一步篩選了系列催化劑。實(shí)驗(yàn)組1 一 14反應(yīng)條件為：以丹酚酸鹽為原料，丹酚酸B濃度 15mg/mL，pH = 4的甘氨酸-溴化鈉-鹽酸緩沖液，于100°C條件下反應(yīng)14小時(shí)。結(jié)果如表 3所示：
[0094] 表3、最佳化反應(yīng)的Lewis酸催化劑及用量
[0095]
[0096] 表3實(shí)驗(yàn)結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組1 一 12反應(yīng)結(jié)果顯示這類金屬路易斯酸化合物的催化活性 相當(dāng)，其中ZnBrjP CuBr 2顯示出更優(yōu)的催化效果?？紤]到ZnBr 2具有易得、價(jià)格更加優(yōu)惠 和環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)，因此我們優(yōu)先選擇ZnBr2S催化劑，并最佳化其反應(yīng)用量，發(fā)現(xiàn)在該最 佳反應(yīng)條件下，10 - 20%當(dāng)量的ZnBr2可在14小時(shí)內(nèi)有效催化丹酚酸B轉(zhuǎn)化為丹酚酸A。
[0097] 實(shí)驗(yàn)例3 :提取轉(zhuǎn)化緩沖液
[0098] 為了進(jìn)一步考察不同提取轉(zhuǎn)化緩沖液對(duì)丹參藥材（生產(chǎn)批號(hào)：131001)提取轉(zhuǎn)化 反應(yīng)的影響，我們?cè)谙嗤磻?yīng)條件下，考察了不同類型的緩沖溶液。其中反應(yīng)條件為：以丹 酚酸鹽為原料，丹酚酸B濃度10mg/mL，pH值4. 0,催化劑ZnBr2用量為40%，于100°C條件 下反應(yīng)16小時(shí)。結(jié)果如表4所示：
[0099] 表4、最佳條件下不同體系的提取轉(zhuǎn)化液對(duì)丹酚酸B轉(zhuǎn)化丹酚酸A的影響
[0100]
[0101] 表4實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：甘氨酸-鹽酸和醋酸-醋酸鈉緩沖溶液作為提取轉(zhuǎn)化液時(shí)的 丹酚酸A的產(chǎn)率顯著高于其他溶液體系。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于包括將含丹酚酸B和/或紫草酸成 分的原料在金屬Lewis酸催化劑存在下、在pH值1-6的緩沖液中經(jīng)加熱化學(xué)轉(zhuǎn)化成丹酸酸 A的步驟。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于含丹酚酸B和/ 或紫草酸成分的原料為丹參藥材、丹參藥材提取物、或者丹參總酚酸富集物。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于所述丹參總酚酸 富集物按照下述方法制備：將丹參藥材提取物濃縮過濾后，經(jīng)大孔樹脂分離，〇 - 60%醇水 溶液洗脫，收集并濃縮得到丹參總酚酸富集物。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于制備丹參總 酚酸富集物所用大孔樹脂填料選自下列樹脂中的一種或幾種：HP20、HPD-80、HPD-100、 HPD-100B、HPD-200A、HPD-300、HPD-450、HPD-722、HPD-826、ADS-5、ADS-8、ADS-21、D101、 AB-8、1300-I 及 RA 型樹脂。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于所述緩沖液的pH 值為 2.0 - 5.0。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于所述緩沖液的pH 值為 3.0 - 4.0。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于所述緩沖液的pH 值為約4. 0。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于所述緩沖液選 自：甘氨酸緩沖液、醋酸-醋酸鈉緩沖液、磷酸二氫鈉緩沖液、鄰苯二甲酸鹽酸緩沖液、檸檬 酸-檸檬酸鈉緩沖液、檸檬酸-氫氧化鈉-鹽酸緩沖液。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于所述緩沖液選自： 甘氨酸緩沖液、醋酸-醋酸鈉緩沖液。10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于所述加熱轉(zhuǎn)化于 100 - 140 °C的溫度下進(jìn)行。11. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于所述加熱轉(zhuǎn)化反 應(yīng)進(jìn)行1 一 24小時(shí)。12. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于所述加熱轉(zhuǎn)化反 應(yīng)進(jìn)行4 一 16小時(shí)。13. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于所述加熱轉(zhuǎn)化反 應(yīng)進(jìn)行10 - 16小時(shí)。14. 根據(jù)權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于所 述金屬 Lewis 酸催化劑選自 ZnBr2、ZnC104、Zn(0Ac)2、ZnS04、CuBr 2、CuBr、Cu(0Ac)2、CeCl3、 MnCl2、NiCl2、Fe2(S04) 3和 FeCl 2中的一種或幾種。15. 根據(jù)權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于所述 催化劑與丹酚酸B的摩爾百分比為1 一 100%。16. 根據(jù)權(quán)利要求1-15任一項(xiàng)所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于所述 催化劑與丹酚酸B的摩爾百分比為30 - 60%。17. 根據(jù)權(quán)利要求1-16任一項(xiàng)所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于所述 催化劑與丹酚酸B的摩爾百分比為40 - 50%。18. 根據(jù)權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于還包 括進(jìn)一步提取和/或純化丹酚酸A的步驟。19. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于所述含丹酚酸 B和/或紫草酸成分的原料為丹參藥材，所述提取丹酚酸A的步驟包括將反應(yīng)液的固體部分 用醇水提取，提取液濃縮過濾后，經(jīng)大孔樹脂分離，〇 - 60%醇水溶液洗脫，收集并濃縮得 到富含丹酚酸A的丹參總酚酸富集物。20. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于制備所述富 含丹酚酸A的丹參總酚酸所用大孔樹脂填料選自下列樹脂中的一種或幾種：HP20、HPD-80、 HPD-100、HPD-100B、HPD-200A、HPD-300、HPD-450、HPD-722、HPD-826、ADS-5、ADS-8、ADS-21、 D101、AB-8、1300-I 及 RA 型樹脂。21. 根據(jù)權(quán)利要求18-20任一項(xiàng)所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于所述 丹酚酸A的純化步驟包括丹酚酸A轉(zhuǎn)化液過濾，濾液經(jīng)大孔樹脂分離，依次用水洗脫3個(gè)柱 體積、20 - 30 %醇水洗脫3個(gè)柱體積，40 - 60 %醇水洗脫6個(gè)柱體積，收集40-60 %醇水洗 脫部分并減壓濃縮至干，得到丹酚酸A固體。22. 根據(jù)權(quán)利要求3、19-21任一項(xiàng)所述的丹酚酸A化學(xué)轉(zhuǎn)化的制備方法，其特征在于所 述醇水溶液為(^一 C 4的醇水溶液。
【文檔編號(hào)】C07C67/32GK105985245SQ201510086508
【公開日】2016年10月5日
【申請(qǐng)日】2015年2月16日
【發(fā)明人】宣利江, 王逸平, 宋維彬, 顧云龍
【申請(qǐng)人】中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所, 上海綠谷制藥有限公司