從獨角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤類生物堿化合物的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取技術(shù)領(lǐng)域，主要涉及一種從獨角仙提取降崁酮衍生物和 嘌呤類生物堿化合物的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 藥用昆蟲由于資源豐富，且活性較強，在新藥開發(fā)方面有巨大的潛力。獨角仙 Allomyrina dichotoma (Linnaeus),又稱雙叉犀金龜，為昆蟲綱-鞘翅目-犀金龜科甲 蟲。全世界具有大型犄角的獨角仙目前約有60種，其他犄角較小或不明顯的種類約有 一千三百多種。中藥上又叫獨角螂蟲，主要有鎮(zhèn)驚、破瘀止痛、攻毒及通便等藥用功效。獨角 仙有很高的藥用價值。中醫(yī)藥選用其雄蟲入藥，夏季捕捉，用開水燙死后晾干或烘干備用。 現(xiàn)代醫(yī)藥研究發(fā)現(xiàn)，該節(jié)肢動物昆蟲還具有治療白血病和抗癌功效。如1976年有報道從獨 角仙提取到獨角仙素"dicotastin"，體外研究發(fā)現(xiàn)，該物質(zhì)對實體瘤W-256瘍瘤有很高活 性，對P-388淋巴白血病有邊緣活性。綜上所述，獨角仙作為我國傳統(tǒng)中藥應(yīng)用，歷史悠久， 資源豐富；另一方面，其活性和藥用物質(zhì)基礎(chǔ)研究仍然十分匱乏。因此，挖掘和利用這一天 然藥用資源，研究其成藥規(guī)律是十分重要的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種從獨角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤類生物堿化合物的 方法，該方法首次從獨角仙中提取出3個新化合物，分別被鑒定為1個新降崁酮衍生物和2 個新嘌呤類生物堿化合物，提取的化合物具有一定的抗菌活性。
[0004] 本發(fā)明實現(xiàn)上述技術(shù)目的采用的技術(shù)方案是：從獨角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤 類生物堿化合物的方法，包括以下步驟： 步驟一、取獨角仙成蟲，用清水洗凈后晾干，然后置于30-65°C的烘箱中干燥至恒重，取 出并粉碎，得到獨角仙粉，備用；將獨角仙粉在22-26°C條件下，用獨角仙粉重量5-15倍的 二氯甲烷浸泡，浸泡過程中用超聲波輔助提取，過濾，向得到的濾渣中再次加入獨角仙粉重 量5-15倍的二氯甲烷，在22-26°C條件下浸泡，浸泡過程中用超聲波輔助提取，提取結(jié)束后 過濾，將得到的濾渣置于通風(fēng)處常溫風(fēng)干，得到蟲渣，備用； 步驟二、向步驟一得到的蟲渣中加入其重量5-15倍的甲醇溶液，在22-26°C條件下浸 泡，浸泡過程中用超聲波輔助提取，甲醇溶液的質(zhì)量百分數(shù)為70%，提取后過濾，分別收集 濾液和濾渣，然后向濾渣中再次加入蟲渣重量5-15倍質(zhì)量百分數(shù)為70%的甲醇溶液，在 22-26°C條件下浸泡，浸泡過程中用超聲波輔助提取，提取結(jié)束后過濾，收集濾液，并將兩次 濾液合并，濃縮，得到獨角仙提取濃縮液，備用；將獨角仙提取濃縮液在_20°C條件下冷凍 成冰狀，取出，置于冷凍干燥器中干燥至恒重，得到獨角仙提取浸膏，備用； 步驟三、向步驟二得到的獨角仙提取浸膏中加入質(zhì)量百分數(shù)為70%的甲醇溶液，溶解 完全后加入硅膠拌樣，研磨均勻后室溫干燥，得到拌料樣品，備用；然后將拌料樣品重量 20-30倍的硅膠用氯仿拌樣后濕法上柱，并在硅膠柱中加入拌料樣品，再用不同體積比的氯 仿甲醇混合溶液進行梯度洗脫，其中所用的氯仿甲醇混合溶液中兩者的體積比依次為9:1、 7:3、1:1、3:7和1:9,采用TLC檢測分析，合并相似餾分，使之形成16個餾分段，備用； 步驟四、將步驟三得到的第6個餾分段采用凝膠柱色譜法進行分離，洗脫劑為體積比 為7:3的氯仿甲醇溶液，洗脫過程中收集餾分，合并相似餾分，使之形成10個餾分，并將其 中的第5個餾分用半制備型HPLC分離純化，洗脫液為質(zhì)量百分數(shù)為65%的甲醇溶液，得到 淺黃色固體粉末，即化合物I ; 步驟五、將步驟三得到的第11和12餾分段合并，用聚酰胺柱色譜進行分離，洗脫劑為 甲醇水溶液，其中甲醇體積百分比為80-100%，水的體積百分比為0-20%，洗脫得到7個餾 分，備用； 將第3個餾分在室溫下靜置，有固體析出，過濾，得到固體化合物，然后將固體化合物 用氯仿甲醇溶液重結(jié)晶，得到白色固體粉末，得到化合物II ; 將第4個餾分在室溫下靜置，有固體析出，過濾，得到固體化合物，然后將固體化合物 用氯仿甲醇溶液重結(jié)晶，得到白色固體粉末，得到化合物III ; 所述的化合物I、II和III的結(jié)構(gòu)式分別為：
【主權(quán)項】
1.從獨角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤類生物堿化合物的方法，其特征在于：包括以下 步驟： 步驟一、取獨角仙成蟲，用清水洗凈后晾干，然后置于30-65°C的烘箱中干燥至恒重，取 出并粉碎，得到獨角仙粉，備用；將獨角仙粉在22-26°C條件下，用獨角仙粉重量5-15倍的 二氯甲烷浸泡，浸泡過程中用超聲波輔助提取，過濾；向得到的濾渣中再次加入獨角仙粉重 量5-15倍的二氯甲烷，在22-26°C條件下浸泡，浸泡過程中用超聲波輔助提取，提取結(jié)束后 過濾，將得到的濾渣置于通風(fēng)處常溫風(fēng)干，得到蟲渣，備用； 步驟二、向步驟一得到的蟲渣中加入其重量5-15倍的甲醇溶液，在22-26°C條件下浸 泡，浸泡過程中用超聲波輔助提取，甲醇溶液的質(zhì)量百分數(shù)為70%，提取后過濾，分別收集 濾液和濾渣，然后向濾渣中再次加入蟲渣重量5-15倍質(zhì)量百分數(shù)為70%的甲醇溶液，在 22-26°C條件下浸泡，浸泡過程中用超聲波輔助提取，提取結(jié)束后過濾，收集濾液，并將兩次 濾液合并，濃縮，得到獨角仙提取濃縮液，備用；將獨角仙提取濃縮液在-20°C條件下冷凍 成冰狀，取出，置于冷凍干燥器中干燥至恒重，得到獨角仙提取浸膏，備用； 步驟三、向步驟二得到的獨角仙提取浸膏中加入質(zhì)量百分數(shù)為70%的甲醇溶液，溶解 完全后加入硅膠拌樣，研磨均勻后室溫干燥，得到拌料樣品，備用；然后將拌料樣品重量 20-30倍的硅膠用氯仿拌樣后濕法上柱，并在硅膠柱中加入拌料樣品，再用不同體積比的氯 仿甲醇混合溶液進行梯度洗脫，其中所用的氯仿甲醇混合溶液中兩者的體積比依次為9:1、 7:3、1:1、3:7和1:9,采用TLC檢測分析，合并相似餾分，使之形成16個餾分段，備用； 步驟四、將步驟三得到的第6個餾分段采用凝膠柱色譜法進行分離，洗脫劑為體積比 為7:3的氯仿甲醇溶液，洗脫過程中收集餾分，合并相似餾分，使之形成10個餾分，并將其 中的第5個餾分用半制備型HPLC分離純化，洗脫液為質(zhì)量百分數(shù)為65%的甲醇溶液，得到 淺黃色固體粉末，即化合物I; 步驟五、將步驟三得到的第11和12餾分段合并，用聚酰胺柱色譜進行分離，洗脫劑為 甲醇水溶液，其中甲醇體積百分比為80-100%，水的體積百分比為0-20%，洗脫得到7個餾 分，備用； 將其中的第3個餾分在室溫下靜置，有固體析出，過濾，得到固體化合物，然后將固體 化合物用氯仿甲醇溶液重結(jié)晶，得到白色固體粉末，得到化合物II; 將其中的第4個餾分在室溫下靜置，有固體析出，過濾，得到固體化合物，然后將固體 化合物用氯仿甲醇溶液重結(jié)晶，得到白色固體粉末，得到化合物III; 所述的化合物I、II和III的結(jié)構(gòu)式分別為：
化合物I
化合物III。
2. 如權(quán)利要求1所述的從獨角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤類生物堿化合物的方法，其 特征在于：步驟一所述的采用二氯甲烷浸泡和步驟二所述的甲醇浸泡的時間均為40-48h。
3. 如權(quán)利要求1所述的從獨角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤類生物堿化合物的方法，其 特征在于：步驟三所述的洗脫過程中每個梯度的洗脫量為2倍柱體積。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種從獨角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤類生物堿化合物的方法，包括以下步驟：步驟一、將獨角仙粉用二氯甲烷浸泡，過濾，得蟲渣；步驟二、向蟲渣中加入質(zhì)量百分數(shù)為70%甲醇溶液提取，濃縮，將濃縮液冷凍成冰狀，干燥得到獨角仙提取浸膏；步驟三、獨角仙提取浸膏用70%甲醇溶液溶解，硅膠柱洗脫，合并相似餾分；步驟四、將第6個餾分段采用凝膠柱色譜法進行分離，得到化合物Ⅰ；步驟五、將餾分段11、12合并，用聚酰胺柱色譜分離；將第3個餾分重結(jié)晶，得到化合物Ⅱ；將第4個餾分重結(jié)晶，得到化合物Ⅲ。本發(fā)明首次從獨角仙中提取分離到3個化合物，分別被鑒定為1個新降崁酮衍生物和2個新嘌呤類生物堿化合物。
【IPC分類】C07C67-48, C07C67-56, C07C69-74, C07D473-34
【公開號】CN104557548
【申請?zhí)枴緾N201510029454
【發(fā)明人】尹衛(wèi)平, 牛蘭嵐, 劉軍娜, 高嘉嶼, 李海迪, 劉華清, 李文亮
【申請人】河南科技大學(xué)
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2015年1月21日