本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及金橙II降解菌AO7-2及其生產(chǎn)的菌劑,是利用微生物的方法降解偶氮染料金橙II,適用于環(huán)境污染的治理。
背景技術(shù):
偶氮染料(偶氮基兩端連接芳基的一類化合物)是紡織品服裝在印染工藝中應(yīng)用最廣泛的一類合成染料,用于多種天然和合成纖維的染色和印花,也用于油漆、塑料、橡膠等的著色。在特殊條件下,它能分解產(chǎn)生20多種致癌芳香胺,經(jīng)過活化作用改變?nèi)梭w的DNA結(jié)構(gòu)引起病變和誘發(fā)癌癥。
偶氮化合物共同的特征為分子中含有偶氮鍵“-N=N-”。一般來說,偶氮化合物的分子中含有1-3個(gè)“-N=N-”,鍵上連有笨或苯基,苯或苯基又連有-Cl、-NH2、-CH3、-SO3、-NO2及-OH等基團(tuán)。
偶氮染料污染的主要特點(diǎn)是污染量大,雖然偶氮染料廢水中殘留的染料成分濃度很低,但是排入水體會(huì)造成水體的透光率降低,破壞水體生態(tài)系統(tǒng)。這些染料結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,具有抗堿、抗酸、抗微生物、抗光等特性,可以較長(zhǎng)時(shí)間地滯留在環(huán)境中,因此存在潛在的健康危害。在生產(chǎn)和使用染料的地方,地下水和地表水的重要污染物就是偶氮染料。在很多染料工業(yè)密集的地區(qū),河流和地下水都面臨著嚴(yán)重污染的危險(xiǎn)。
偶氮染料對(duì)人體的健康也有嚴(yán)重危害。日本人Yoshida等在20世紀(jì)30年代發(fā)現(xiàn),溶劑黃可以引起老鼠肝細(xì)胞癌變。此后,人們才開始意識(shí)到,在生產(chǎn)和使用過程中,偶氮染料及其中間體具有危險(xiǎn)性。芳香胺作為偶氮染料中間體,已被一些國(guó)家列為可疑致癌物,其中β-萘胺和聯(lián)苯胺已經(jīng)被確認(rèn)為是對(duì)人類最具烈性的致癌物。其中,偶氮基經(jīng)常會(huì)與一個(gè)或多個(gè)芳香環(huán)系統(tǒng)相連,而形成共軛體系,從而作為染料的發(fā)色體。他幾乎分布于所有顏色。偶氮染料不僅僅可以用于紡織品的印染,還可以用來染紙張、皮革、食品等。應(yīng)該指出的是,在一般情況下,偶氮染料自身不會(huì)危害人體健康,但是部分偶氮染料使用芳香胺類中間體合成的,而芳香胺類中間體具有致癌性,當(dāng)人體皮膚長(zhǎng)時(shí)間與其接觸后,通過人體正常的新陳代謝過程而釋放出的物質(zhì)就會(huì)與其結(jié)合,結(jié)合后會(huì)發(fā)生還原反應(yīng),該反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致偶氮基斷裂,從而再次生成具有致癌性的芳香胺類化合物,假如這些生成的化合物被人體重新吸收,在經(jīng)過活化作用以后,人體的細(xì)胞就會(huì)在結(jié)構(gòu)和功能方面發(fā)生改變,轉(zhuǎn)變成為人體病變的誘因。這樣的結(jié)果是,導(dǎo)致癌癥的可能性。
偶氮染料金橙II產(chǎn)品可溶于水,偶氮染料金橙II對(duì)環(huán)境的污染已嚴(yán)重危害著人類的健康,其污染環(huán)境的綜合治理,未見有比較成熟和穩(wěn)定高效的技術(shù)。金橙II高效降解菌株資源極其匱乏。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:
本發(fā)明的目的是:提供一種金橙II降解菌AO7-2及其生產(chǎn)的菌劑,降解菌株AO7-2能夠高效地降解金橙II,使其脫色率超過90%,用于相關(guān)染料廢水生物強(qiáng)化處理及水體或土壤的污染治理,豐富金橙II降解菌株資源庫(kù)。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是:金橙II降解菌AO7-2的菌株是Arthrobacter protophormiae,屬于微球菌科、節(jié)桿菌屬,于2016年9月19日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,地址:中國(guó)武漢市武漢大學(xué),保藏編號(hào):CCTCC M2016502,主要生物學(xué)特性:細(xì)菌菌體呈球狀,分散排列,菌落呈淡黃色,圓形,濕潤(rùn),有光澤,不透明,表面隆起,邊緣整齊,細(xì)菌無莢膜,無芽孢,革蘭氏染色為陽(yáng)性,細(xì)菌通過裂殖進(jìn)行繁殖,該細(xì)菌為異養(yǎng)型細(xì)菌,在生長(zhǎng)過程中需要氧氣,不需要陽(yáng)光,接觸酶反應(yīng)陽(yáng)性,氧化酶反應(yīng)陰性,該細(xì)菌的最適生長(zhǎng)溫度為30-38oC,最適環(huán)境pH為8.0。
利用金橙II降解菌AO7-2生產(chǎn)菌劑,該菌劑通過以下方法制備而成,其特征在于該方法包括以下步驟:
步驟(1):用接種環(huán)刮取一環(huán)金橙II降解菌AO7-2的試管種接種于中,30℃,180rpm振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期;其中,1L發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分的重量含量為:蛋白胨1%,酵母膏0.5%,氯化鈉0.5%,其余去離子水,pH為9.0;
步驟(2):將步驟(1)培養(yǎng)好的菌種按培養(yǎng)基體積的1%接種入500L種子罐,培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期;1L種子罐培養(yǎng)基中各組分的重量含量為:蛋白胨1%,酵母膏0.5%,氯化鈉0.5%,其余去離子水,pH為9.0;培養(yǎng)條件是:培養(yǎng)過程中通無菌空氣,每分鐘通入的無菌空氣與培養(yǎng)基體積之比為1:0.6~1.2,攪拌速度為180~240r/min,培養(yǎng)溫度為30℃,培養(yǎng)時(shí)間為48~60h;
步驟(3):將步驟(2)的種子液按培養(yǎng)基體積的10%接入生產(chǎn)罐發(fā)酵培養(yǎng);生產(chǎn)罐所用培養(yǎng)基與種子罐培養(yǎng)基相同;培養(yǎng)條件是:培養(yǎng)過程中通無菌空氣,每分鐘通入的無菌空氣與培養(yǎng)基體積之比為1:0.6~1.2,攪拌速度為180~240r/min,培養(yǎng)溫度為30℃,培養(yǎng)時(shí)間為48~60h;
步驟(4):生產(chǎn)罐中,當(dāng)菌體數(shù)量達(dá)到10億個(gè)/mL以上時(shí)發(fā)酵結(jié)束,發(fā)酵完成后培養(yǎng)液出罐,直接用塑料包裝桶或包裝瓶分裝成液體劑,該液體劑即為菌劑。
本發(fā)明的有益效果是:1、降解菌AO7-2能使金橙II的殘留量降低90%以上,在短時(shí)間內(nèi)使偶氮染料金橙II得到降解;2、利用金橙II降解菌AO7-2生產(chǎn)菌劑,生產(chǎn)使用成本低,使用方便,去除效果好,適合相關(guān)染料廢水生物強(qiáng)化處理及水體和土壤的污染治理,對(duì)于保護(hù)生態(tài)環(huán)境、保護(hù)人類身體健康、提高農(nóng)產(chǎn)品的附加值具有重要的意義。
附圖說明
圖1是菌株AO7-2對(duì)金橙II的降解進(jìn)程;
圖2是溫度對(duì)AO7-2降解效率的影響;
圖3-1是pH對(duì)菌株AO7-2生長(zhǎng)的影響;
圖3-2是pH對(duì)AO7-2降解效率的影響;
圖3-3是系列pH條件下菌株AO7-2對(duì)染料金橙II的吸附;
圖4是鹽濃度對(duì)AO7-2降解效率的影響;
圖5是金屬離子對(duì)AO7-2降解效率的影響。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例及其附圖對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案做進(jìn)一步的分析,但不能理解為是對(duì)技術(shù)方案的限制。
金橙II降解菌AO7-2,其菌株是Arthrobacter protophormiae,屬于微球菌科、節(jié)桿菌屬,于2016年9月19日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,地址:中國(guó)武漢市武漢大學(xué),保藏編號(hào):CCTCC M2016502。
1. 菌株的分離和鑒定:取污染土壤10g,置于100mL的無菌水中,振蕩5min,得土壤菌懸液;取5mL的土壤菌懸液,加入到100mL的無機(jī)鹽培養(yǎng)基[NH4NO3 1g/L, KH2PO4 1.5g/L, K2HPO4 0.5 g/L, NaCl 0.5g/L, MgSO4·7H2O, 0.2g/L]中,添加金橙II作為碳源,置于30℃,150r/min搖床振蕩培養(yǎng)獲得富集液;梯度稀釋富集液涂布于添加金橙II的培養(yǎng)基平板上,直到獲得金橙II的降解菌株;該降解菌命名為AO7-2,進(jìn)一步純化并鑒定為Arthrobacter protophormiae;AO7-2菌株主要生物學(xué)特性:細(xì)菌菌體呈球狀,分散排列,菌落呈淡黃色,圓形,濕潤(rùn),有光澤,不透明,表面隆起,邊緣整齊,細(xì)菌無莢膜,無芽孢,革蘭氏染色為陽(yáng)性,細(xì)菌通過裂殖進(jìn)行繁殖,該細(xì)菌為異養(yǎng)型細(xì)菌,在生長(zhǎng)過程中需要氧氣,不需要陽(yáng)光,接觸酶反應(yīng)陽(yáng)性,氧化酶反應(yīng)陰性,該細(xì)菌的最適生長(zhǎng)溫度為30-38oC,最適環(huán)境pH為8.0;在實(shí)驗(yàn)室條件下該菌降解金橙II的降解率達(dá)90%以上,該菌可以用發(fā)酵工業(yè)通用發(fā)酵設(shè)備進(jìn)行生產(chǎn)。
2. 實(shí)驗(yàn)室生物降解實(shí)驗(yàn)
2.1菌株AO7-2對(duì)金橙II的降解進(jìn)程:菌株AO7-2在LB培養(yǎng)基(LB培養(yǎng)基配方:蛋白胨1%、酵母膏0.5%、氯化鈉0.5%,)中振蕩(30℃,180rpm)培養(yǎng)過夜,次日取菌株種子液加液體LB稀釋3倍后加入金橙II母液,使其終濃度為20mg/L;將該降解體系放置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中靜置,并按時(shí)間間隔取樣(時(shí)間間隔為2小時(shí)),所取樣品置于冰水混合物中保存,待所有樣品取完后統(tǒng)一處理;所有樣品取完后,經(jīng)12000rpm,3min離心去除菌體,得到含有尚未被降解脫色的金橙II的上清液;上清液采用紫外可見分光光度計(jì)于484nm處測(cè)量其光密度值,實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個(gè)重復(fù),分別檢測(cè)吸光度后計(jì)算平均值并以此來衡量體系中金橙II的殘留量;結(jié)果如圖1所示:隨著時(shí)間的延長(zhǎng),菌株AO7-2能夠快速使金橙II溶液脫色,24小時(shí)內(nèi)脫色率超過90%,據(jù)此判斷菌株AO7-2對(duì)金橙II具有很好的降解脫色性能。
2.2溫度對(duì)AO7-2降解效率的影響:溫度對(duì)微生物生長(zhǎng)和代謝具有非常顯著的影響,為闡明溫度對(duì)菌株AO7-2降解金橙II的影響,將菌株過夜培養(yǎng)后建立降解體系(同2.1),將該降解體系平均分成6份,每份設(shè)置三個(gè)重復(fù);將均分后的混合液分別放置于10℃、20℃、30℃、37℃、50℃、60℃恒溫培養(yǎng)箱中,溫浴10小時(shí)后取出樣品,離心,分別測(cè)定并計(jì)算不同溫度下菌株AO7-2對(duì)偶氮染料金橙II的降解率(樣品處理和檢測(cè)方法同2.1);結(jié)果如圖2所示:低溫和高溫對(duì)菌株降解金橙II均具有顯著的抑制作用,30~37℃是菌株降解金橙II的適宜溫度范圍;溫度達(dá)到或超過50℃時(shí),菌株對(duì)金橙II的降解率極低,幾乎不能使其脫色。
2.3 pH對(duì)AO7-2降解效率的影響:pH對(duì)微生物生長(zhǎng)和代謝同樣具有非常顯著的影響,微生物都具有一個(gè)適宜生長(zhǎng)和代謝的pH范圍,超出這個(gè)范圍,微生物就不能很好地生長(zhǎng)和代謝;為考察pH對(duì)菌株AO7-2生長(zhǎng)的影響,分別用鹽酸或氫氧化鈉溶液將液體LB培養(yǎng)基調(diào)至pH3~pH10;按1%接種量,接種在LB中過夜培養(yǎng)的AO7-2種子液至20mL系列pH值的LB培養(yǎng)基中,置于30℃,180rpm恒溫?fù)u床中振蕩培養(yǎng)約6小時(shí)后,用紫外可見分光光度計(jì)在600nm處測(cè)定菌液吸光值,并以O(shè)D600值來衡量對(duì)應(yīng)樣品的菌體濃度;結(jié)果如圖3-1所示:圖3-1的結(jié)果顯示菌株在中性偏堿環(huán)境下生長(zhǎng)良好,菌株生長(zhǎng)的適宜pH范圍是6~9;偏酸性環(huán)境及強(qiáng)堿性環(huán)境對(duì)菌株的生長(zhǎng)具有極強(qiáng)的抑制作用,當(dāng)pH小于等于5或大于等于10時(shí)菌株無法正常生長(zhǎng)。
將菌株AO7-2在LB中的過夜培養(yǎng)物等分成8份,12000rpm,3min離心收集菌體,并分別用等體積系列pH值的LB培養(yǎng)液重懸體,加入終濃度為20mg/L的金橙II母液,構(gòu)建好的降解體系置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中,溫浴10小時(shí)后取出樣品,計(jì)算和分析不同pH條件下菌株對(duì)金橙II的降解率(樣品處理和檢測(cè)方法同2.1),以研究pH對(duì)菌株AO7-2降解金橙II的影響;結(jié)果如圖3-2和3-3所示;圖3-2顯示pH3-5范圍內(nèi)混合液中金橙II的去除率逐步降低;pH6-9時(shí)去除率逐步升高,pH10時(shí)去除率略有降低;但在偏酸性環(huán)境中,菌株AO7-2對(duì)金橙II有明顯的吸附作用,從圖3-3可以看出pH越低,菌株吸附染料的濃度就越大,顏色也就越深;綜合混合液中染料殘留和菌體吸附情況,判斷菌株在偏堿性環(huán)境中對(duì)金橙II有較好的降解效果,最適pH為9。
2.4鹽度對(duì)AO7-2降解效率的影響:鹽濃度是環(huán)境質(zhì)量評(píng)估和污水處理過程中經(jīng)??疾榈闹匾獏?shù)之一,對(duì)微生物的生長(zhǎng)和代謝有較大影響;為研究鹽濃度對(duì)菌株AO7-2的生長(zhǎng)的影響,按1%接種量,分別接種在LB中過夜培養(yǎng)的AO7-2種子液至20mL含系列鹽濃度(0%,0.5%,1%,1.5%,2%,2.5%,3%,3.5%,4%,4.5%)的LB培養(yǎng)基中,置于30℃,180rpm恒溫?fù)u床中振蕩培養(yǎng)約6小時(shí)后,用紫外可見分光光度計(jì)在600nm處測(cè)定菌液吸光值,并以O(shè)D600值來衡量對(duì)應(yīng)樣品的菌體濃度;將菌株AO7-2在LB中的過夜培養(yǎng)物等分成10份,12000rpm,3min離心收集菌體,并分別用等體積含系列鹽濃度的LB培養(yǎng)液重懸體,加入終濃度為20mg/L的金橙II母液,置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中,溫浴10小時(shí)后取出樣品,計(jì)算和分析不同鹽濃度條件下菌株對(duì)金橙II的降解率(樣品處理和檢測(cè)方法同2.1),以研究鹽濃度對(duì)菌株AO7-2降解金橙II的影響;結(jié)果如圖4所示:隨著鹽濃度的提高,菌株AO7-2的生長(zhǎng)受到顯著地抑制,對(duì)金橙II的降解率也略有下降,但影響不顯著。
2.5金屬離子對(duì)AO7-2降解效率的影響:金屬離子對(duì)微生物的生長(zhǎng)和代謝有重要影響,對(duì)微生物體內(nèi)的各種金屬酶的催化活力也有較大影響;為研究不同金屬離子對(duì)菌株AO7-2降解染料金橙II的影響,在含有20mg/L金橙II的菌株培養(yǎng)液中加入一系列不同的金屬離子(Mg2+、Fe2+、Fe3+、Cu2+、Ca2+、Zn2+、Hg2+、Co2+、Ag1+、Al3+、K1+、Mn2+),并分別設(shè)置0.1mM、1mM和10mM三個(gè)濃度梯度;體系置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中,溫浴10小時(shí)后取出樣品,計(jì)算和分析各濃度下不同金屬離子對(duì)菌株降解金橙II的相對(duì)降解率(樣品處理和檢測(cè)方法同2.1);結(jié)果如圖5所示,Mg2+、Ca2+、Al3+、K1+、Mn2+等離子對(duì)菌株的降解率沒有顯著影響,而Fe2+、Fe3+、Co2+等在較高濃度時(shí)對(duì)菌株降解率有一定的抑制作用,隨著其濃度的加大抑制作用越來越強(qiáng);Cu2+、Hg2+、Ag1+對(duì)菌株的降解率有很強(qiáng)的抑制作用;尤其是Hg2+,其在低濃度下就對(duì)菌株降解金橙II有強(qiáng)烈的抑制作用。
生產(chǎn)實(shí)施例1:依以下步驟生產(chǎn)金橙II降解菌AO7-2的菌劑,該菌劑通過以下方法制備而成,其特征在于該方法包括以下步驟:
步驟(1):用接種環(huán)刮取一環(huán)金橙II降解菌AO7-2的試管種接種于中,30℃,180rpm振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期;其中,1L發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分的重量含量為:蛋白胨1%,酵母膏0.5%,氯化鈉0.5%,其余去離子水,pH為9.0;
步驟(2):將步驟(1)培養(yǎng)好的菌種按培養(yǎng)基體積的1%接種入500L種子罐,培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期;1L種子罐培養(yǎng)基中各組分的重量含量為:蛋白胨1%,酵母膏0.5%,氯化鈉0.5%,其余去離子水,pH為9.0;培養(yǎng)條件是:培養(yǎng)過程中通無菌空氣,每分鐘通入的無菌空氣與培養(yǎng)基體積之比為1:0.6,攪拌速度為180r/min,培養(yǎng)溫度為30℃,培養(yǎng)時(shí)間為48h;
步驟(3):將步驟(2)的種子液按培養(yǎng)基體積的10%接入生產(chǎn)罐發(fā)酵培養(yǎng);生產(chǎn)罐所用培養(yǎng)基與種子罐培養(yǎng)基相同;培養(yǎng)條件是:培養(yǎng)過程中通無菌空氣,每分鐘通入的無菌空氣與培養(yǎng)基體積之比為1:0.6,攪拌速度為180r/min,培養(yǎng)溫度為30℃,培養(yǎng)時(shí)間為48h;
步驟(4):生產(chǎn)罐中,當(dāng)菌體數(shù)量達(dá)到10億個(gè)/mL以上時(shí)發(fā)酵結(jié)束,發(fā)酵完成后培養(yǎng)液出罐,直接用塑料包裝桶或包裝瓶分裝成液體劑,該液體劑即為菌劑。
生產(chǎn)實(shí)施例2:依以下步驟生產(chǎn)金橙II降解菌AO7-2的菌劑,該菌劑通過以下方法制備而成,其特征在于該方法包括以下步驟:
步驟(1):用接種環(huán)刮取一環(huán)金橙II降解菌AO7-2的試管種接種于中,30℃,180rpm振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期;其中,1L發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分的重量含量為:蛋白胨1%,酵母膏0.5%,氯化鈉0.5%,其余去離子水,pH為9.0;
步驟(2):將步驟(1)培養(yǎng)好的菌種按培養(yǎng)基體積的1%接種入500L種子罐,培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期;1L種子罐培養(yǎng)基中各組分的重量含量為:蛋白胨1%,酵母膏0.5%,氯化鈉0.5%,其余去離子水,pH為9.0;培養(yǎng)條件是:培養(yǎng)過程中通無菌空氣,每分鐘通入的無菌空氣與培養(yǎng)基體積之比為1:0.9,攪拌速度為210r/min,培養(yǎng)溫度為30℃,培養(yǎng)時(shí)間為54h;
步驟(3):將步驟(2)的種子液按培養(yǎng)基體積的10%接入生產(chǎn)罐發(fā)酵培養(yǎng);生產(chǎn)罐所用培養(yǎng)基與種子罐培養(yǎng)基相同;培養(yǎng)條件是:培養(yǎng)過程中通無菌空氣,每分鐘通入的無菌空氣與培養(yǎng)基體積之比為1:0.9,攪拌速度為210r/min,培養(yǎng)溫度為30℃,培養(yǎng)時(shí)間為54h;
步驟(4):生產(chǎn)罐中,當(dāng)菌體數(shù)量達(dá)到10億個(gè)/mL以上時(shí)發(fā)酵結(jié)束,發(fā)酵完成后培養(yǎng)液出罐,直接用塑料包裝桶或包裝瓶分裝成液體劑,該液體劑即為菌劑。
生產(chǎn)實(shí)施例3:依以下步驟生產(chǎn)金橙II降解菌AO7-2的菌劑,該菌劑通過以下方法制備而成,其特征在于該方法包括以下步驟:
步驟(1):用接種環(huán)刮取一環(huán)金橙II降解菌AO7-2的試管種接種于中,30℃,180rpm振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期;其中,1L發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分的重量含量為:蛋白胨1%,酵母膏0.5%,氯化鈉0.5%,其余去離子水,pH為9.0;
步驟(2):將步驟(1)培養(yǎng)好的菌種按培養(yǎng)基體積的1%接種入500L種子罐,培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期;1L種子罐培養(yǎng)基中各組分的重量含量為:蛋白胨1%,酵母膏0.5%,氯化鈉0.5%,其余去離子水,pH為9.0;培養(yǎng)條件是:培養(yǎng)過程中通無菌空氣,每分鐘通入的無菌空氣與培養(yǎng)基體積之比為1:1.2,攪拌速度為240r/min,培養(yǎng)溫度為30℃,培養(yǎng)時(shí)間為60h;
步驟(3):將步驟(2)的種子液按培養(yǎng)基體積的10%接入生產(chǎn)罐發(fā)酵培養(yǎng);生產(chǎn)罐所用培養(yǎng)基與種子罐培養(yǎng)基相同;培養(yǎng)條件是:培養(yǎng)過程中通無菌空氣,每分鐘通入的無菌空氣與培養(yǎng)基體積之比為1:1.2,攪拌速度為240r/min,培養(yǎng)溫度為30℃,培養(yǎng)時(shí)間為60h;
步驟(4):生產(chǎn)罐中,當(dāng)菌體數(shù)量達(dá)到10億個(gè)/mL以上時(shí)發(fā)酵結(jié)束,發(fā)酵完成后培養(yǎng)液出罐,直接用塑料包裝桶或包裝瓶分裝成液體劑,該液體劑即為菌劑。
上述實(shí)施例1-3所得菌劑降解金橙II效果如下表:
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