本發(fā)明涉及阿法替尼順式異構(gòu)體的制備方法與應(yīng)用，阿法替尼順式異構(gòu)體是阿法替尼及其鹽的原料和制劑工藝中的重要雜質(zhì)。
背景技術(shù)：
馬來酸阿法替尼是一種口服藥物，是表皮生長因子受體(EGFR)和人表皮受體2(HER2)酪氨酸激酶的不可逆抑制劑。Ⅱb/Ⅲ期隨機(jī)研究表明，與安慰劑+最佳支持治療相比，阿法替尼+最佳支持治療，治療既往一二線化療及EGFR-TKI治療失敗的非小細(xì)胞肺癌患者，未改善患者總生存，但顯著改善了無進(jìn)展生存期，提高了ORR和8周疾病控制率。另一項(xiàng)研究(LUX-LUNG2)結(jié)果顯示，伴有常見EGFR突變類型的大多數(shù)(61％)患者接受阿法替尼治療后，腫瘤顯著縮小、腫瘤進(jìn)展時(shí)間較晚、生存期較長。這些結(jié)果初步證實(shí)阿法替尼是比較有前途的靶向藥物。
馬來酸阿法替尼是第二代高效雙重非可逆性的酪氨酸激酶抑制劑。厄洛替尼及吉非替尼作為酪氨酸激酶抑制劑，單抑制EGFR，BIBW2992同時(shí)抑制EGFR和HER-2兩種受體。英國倫敦蓋伊醫(yī)院皇家醫(yī)學(xué)院James Sr等對各種實(shí)體瘤病人中進(jìn)行了研究，Ⅰ期臨床研究顯示具有EGFR突變的NSCLC患者可獲得令人鼓舞的結(jié)果，20％的患者得到持續(xù)性的PR(女性2例和男性1例)，其中2例顯示EGFR第19外顯子的缺失，該突變類型多見于女性、非吸煙者和腺癌患者。BIBW2992每日口服50mg有良好的耐受性。BIBW2992Ⅱ期臨床研究顯示，具有EGFR突變的NSCLC患者，對第一代酪氨酸激酶抑制劑耐藥時(shí)，BIBW2992仍對其有抗瘤活性的潛力。因其是唯一對EGFR和HER2具有非可逆性雙重抑制作用，原研公司為勃林格殷格翰藥業(yè)有限公司，F(xiàn)DA批準(zhǔn)日期為2013-07-12，馬來酸阿法替尼的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式Ⅳ所示：
對于式III所示的馬來酸阿法替尼光學(xué)異構(gòu)體能夠通過采用光學(xué)異構(gòu)體的初始原料進(jìn)行 制備，但是關(guān)于阿法替尼順式異構(gòu)體的制備方法目前還沒有文獻(xiàn)介紹，同時(shí)，在制備阿法替尼的反應(yīng)過程中不可避免的產(chǎn)生式II所示的阿法替尼順式異構(gòu)體，該雜質(zhì)的轉(zhuǎn)化率在此反應(yīng)中較低，很難進(jìn)行分離及純化。因此有必要開發(fā)一種穩(wěn)定、便捷、質(zhì)量高的方法制備阿法替尼順式異構(gòu)體。
式II所示的阿法替尼順式異構(gòu)體雜質(zhì)中文化學(xué)名為(Z)-4-二甲基氨基-丁-2-烯酸-[4-(3-氯-4-氟-苯基氨基)-7-((S)-四氫呋喃-3-基氧)-喹唑啉-6-基]-酰胺。
在藥品研究中，對馬來酸阿法替尼原料和制劑的質(zhì)量控制，必須有質(zhì)量合格的雜質(zhì)對照品。本發(fā)明的II所示的阿法替尼順式異構(gòu)體可以作為雜質(zhì)對照品控制阿法替尼及其鹽的原料或制劑的質(zhì)量，所述的鹽包括馬來酸鹽。
專利文獻(xiàn)CN1867564B記載了馬來酸阿法替尼的合成路線，以N4-(3-氯-4-氟苯基)-7-[[(3S)-四氫-3-呋喃基]氧基]-4,6-喹唑啉二胺為起始原料，經(jīng)酰化、取代，成鹽得到馬來酸阿法替尼，反應(yīng)路線如下式所示：
其中式Ⅰ轉(zhuǎn)化為API堿的過程中會產(chǎn)生少量式Ⅱ的順式異構(gòu)體雜質(zhì)，但不能達(dá)到可以分離純化的目的，考慮是否可以通過改變其反應(yīng)條件使得式Ⅱ的順式異構(gòu)體雜質(zhì)轉(zhuǎn)化率增加，并且通過特定的柱層析分離條件得到高純度的式Ⅱ的順式異構(gòu)體雜質(zhì)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供了式II化合物及其制備方法，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式II所示，化學(xué)名為(Z)-4-二甲基氨基-丁-2-烯酸-[4-(3-氯-4-氟-苯基氨基)-7-((S)-四氫呋喃-3-基氧)-喹唑啉-6-基]-酰胺。
本發(fā)明是在參考上述文獻(xiàn)CN1867564B制備得到馬來酸阿法替尼的基礎(chǔ)上，開發(fā)出的阿法替尼雜質(zhì)—阿法替尼順式異構(gòu)體的合成新方法。本發(fā)明的制備條件溫和可控，且相對于參考文獻(xiàn)CN1867564B的合成方法操作更簡單，設(shè)備要求更低，可快捷方便地制備得到高純度的阿法替尼順式異構(gòu)體。本發(fā)明對阿法替尼順式異構(gòu)體純化方法進(jìn)行了詳細(xì)研究，篩選出了穩(wěn)定的柱層析分離條件，收率高，且使阿法替尼順式異構(gòu)體HPLC純度可達(dá)98％以上。
本發(fā)明的中間體化合物式Ⅰ是根據(jù)專利文獻(xiàn)CN1867564B中的制備方法制備而成，二甲胺基乙醛亞硫酸氫鈉鹽是商業(yè)上可獲得的。
阿法替尼順式異構(gòu)體的制備步驟如下：
將式I的中間體為起始物料，在有機(jī)溶劑、一定溫度和堿性試劑的作用下，與二甲胺基乙醛亞硫酸氫鈉鹽反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后加入水，析出阿法替尼順式異構(gòu)粗品，所述粗品可經(jīng)柱層析方法純化得到阿法替尼順式異構(gòu)體。
進(jìn)一步地，所述的堿性試劑選自氯化鋰、溴化鋰、氫氧化鋰、叔丁醇鋰、氫氧化鈉，氫氧化鉀、碳酸鈉或碳酸鉀的一種或多種；
更進(jìn)一步地，所述的堿性試劑優(yōu)選氫氧化鋰。
進(jìn)一步地，所述有機(jī)溶劑優(yōu)選為N,N-二甲基甲酰胺或乙醇。
進(jìn)一步地，所述的溫度選自0～40℃；
更進(jìn)一步地，所述的溫度優(yōu)選為20～30℃。
進(jìn)一步地，柱層析方法使用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑、以0.01mol/L磷酸氫二鉀的水溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至6.50)為流動相A，以乙腈為流動相B，柱溫為35℃，檢測波長254nm&220nm，流速為每分鐘25.0ml，進(jìn)行梯度洗脫。
更優(yōu)選的方案：
(1)將式I的中間體為起始物料，以N,N-二甲基甲酰胺或乙醇作為溶劑，在堿的作用下，于溫度20-30℃反應(yīng)1-3h；
(2)后處理控制內(nèi)溫在30℃以下加入水，析出式II粗品；
(3)再通過柱層析方法分離，濃縮、干燥得到阿法替尼順式異構(gòu)體。
進(jìn)一步地，所述的堿性試劑選自氯化鋰、溴化鋰、氫氧化鋰、叔丁醇鋰、氫氧化鈉，氫氧化鉀、碳酸鈉或碳酸鉀的一種或兩種；
更進(jìn)一步地，所述的堿性試劑優(yōu)選氫氧化鋰。
進(jìn)一步地，步驟(3)中所述柱層析方法(Gilson GX-281Liquid Handler,Gilson 322Pump,Gilson 156UV Detector)使用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Phenomenex Gemini C18110A,150×30mm,5μm)進(jìn)行分離純化；以0.01mol/L磷酸氫二鉀的水溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至6.50)為流動相A，以乙腈為流動相B，柱溫為35℃，檢測波長254nm&220nm，流速為每分鐘25.0ml。照表1進(jìn)行線性梯度洗脫，收集21.5-21.7min的組分，濃縮至油狀，凍干得蓬松白色固體。
表1梯度洗脫
本發(fā)明制備的化合物(Z)-4-二甲基氨基-丁-2-烯酸-[4-(3-氯-4-氟-苯基氨基)-7-((S)-四氫呋喃-3-基氧)-喹唑啉-6-基]-酰胺可作為阿法替尼及其鹽的有關(guān)物質(zhì)檢測用對照品，用于阿法替尼及其鹽的原料和相關(guān)制劑的質(zhì)量控制。
本發(fā)明采用的技術(shù)方案的有益效果是操作便捷，反應(yīng)條件溫和可控，大大提高反應(yīng)的穩(wěn)定性，反應(yīng)產(chǎn)物收率高、純度高。
附圖說明
圖1：(Z)-4-二甲基氨基-丁-2-烯酸-[4-(3-氯-4-氟-苯基氨基)-7-((S)-四氫呋喃-3-基氧)-喹唑啉-6-基]-酰胺的氫譜譜圖
具體實(shí)施方式
本發(fā)明將于下文通過實(shí)施例更加詳細(xì)的描述，這些實(shí)施例示例性地用于進(jìn)一步說明，可以更好理解本發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)當(dāng)視為對本發(fā)明的限制。
阿法替尼順式異構(gòu)體的制備：
實(shí)施例1：
將6ml DMF(N,N-二甲基甲酰胺)加入反應(yīng)瓶中，加入式I化合物(1g)，控溫至20～30℃，加入氯化鋰(0.08g)，將氫氧化鉀(0.41g)加入反應(yīng)瓶中，將二甲氨基乙醛亞硫酸氫鈉鹽(0.55g)加入反應(yīng)瓶中；控制內(nèi)溫20～30℃反應(yīng)1～2小時(shí)，向反應(yīng)體系中緩慢滴加14ml水，利用冰水浴控制溫度在30℃以下，滴加完畢，攪拌2小時(shí)；過濾，固體使用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Phenomenex Gemini C18110A,150×30mm,5μm)進(jìn)行分離純化；以0.01mol/L磷酸氫二鉀的水溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至6.50)為流動相A，以乙腈為流動相B，柱溫為35℃，檢測波長254nm&220nm，流速為每分鐘25.0ml。照表1進(jìn)行線性梯度洗脫，收集21.5-21.7min的組分，濃縮至油狀，凍干得蓬松白色固體80mg，即式II化合物，收率9.1％，HPLC純度98.1％。
表1梯度洗脫
(Z)-4-二甲基氨基-丁-2-烯酸-[4-(3-氯-4-氟-苯基氨基)-7-((S)-四氫呋喃-3-基氧)-喹唑啉-6-基]-酰胺的結(jié)構(gòu)確證手段包括質(zhì)譜(Agilent 6120LCMS)、1H-NMR及13C-NMR(Bruker 400M)。
結(jié)構(gòu)確證：質(zhì)譜(MS)：m/z＝486[M+H]+
1H NMR(DMSO-d6)δ2.13(m,1H),2.19(s,6H),2.40(m,1H),3.50(d,2H),3.78(m,1H),3.94(dd,1H),3.99(t,2H),5.28(d,1H),6.23～6.36(m,2H),7.22(s,1H),7.41(t,1H),7.78(m,1H),8.11(dd,1H),8.50(s,1H),8.89(s,1H),9.69(s,1H),9.81(s,1H)。
實(shí)施例2：
將6ml乙醇加入反應(yīng)瓶中，加入式I化合物(1g)，控溫至20～24℃，加入氯化鋰(0.08g)，將氫氧化鉀(0.41g)加入反應(yīng)瓶中，將二甲氨基乙醛亞硫酸氫鈉鹽(0.70g)加入反應(yīng)瓶中；控制內(nèi)溫20～24℃反應(yīng)1～2小時(shí)，向反應(yīng)體系中緩慢滴加14ml水，利用冰水浴控制溫度在30℃以下，滴加完畢，攪拌2小時(shí)；過濾，固體利用實(shí)施例1的柱層析方法，得到65mg式II化合物，收率9.5％，HPLC純度98.0％。
實(shí)施例3：
將6ml DMF加入反應(yīng)瓶中，加入式I化合物(1g)，控溫至23～26℃，加入叔丁醇鋰(0.12g)，將氫氧化鈉(0.29g)加入反應(yīng)瓶中，將二甲氨基乙醛亞硫酸氫鈉鹽(0.65g)加入反應(yīng)瓶中；控制內(nèi)溫23～26℃反應(yīng)3小時(shí)，向反應(yīng)體系中緩慢滴加14ml水，利用冰水浴控制溫度在30℃以下，滴加完畢，攪拌2小時(shí)；過濾，固體利用實(shí)施例1的柱層析方法，得到89mg式II化合物，收率10.1％，HPLC純度98.5％。
實(shí)施例4：
將6ml乙醇加入反應(yīng)瓶中，加入式I化合物(1g)，控溫至22～25℃，加入氫氧化鋰(0.17g)，將二甲氨基乙醛亞硫酸氫鈉鹽(0.55g)加入反應(yīng)瓶中；利用冰水浴控制內(nèi)溫22～25℃反應(yīng)2小時(shí)，向反應(yīng)體系中緩慢滴加14ml水，控制溫度在30℃以下，滴加完畢，攪拌2小時(shí)；過濾，固體利用實(shí)施例1的柱層析方法，得到101mg式II化合物，收率11.6％，HPLC純度98.2％。
實(shí)施例5：
將6ml DMF加入反應(yīng)瓶中，加入式I化合物(1g)，控溫至15～19℃，加入溴化鋰(0.16g)，將碳酸鉀(1g)加入反應(yīng)瓶中，將二甲氨基乙醛亞硫酸氫鈉鹽(0.45g)加入反應(yīng)瓶中；控制內(nèi)溫15～19℃反應(yīng)3小時(shí)，向反應(yīng)體系中緩慢滴加14ml水，利用冰水浴控制溫度在30℃以下， 滴加完畢，攪拌2小時(shí)；過濾，固體利用實(shí)施例1的柱層析方法，得到54mg式II化合物，收率6.1％，HPLC純度98.1％。
實(shí)施例6：
將6ml乙醇加入反應(yīng)瓶中，加入式I化合物(1g)，控溫至32～36℃，加入溴化鋰(0.16g)，將碳酸鈉(0.77g)加入反應(yīng)瓶中，將二甲氨基乙醛亞硫酸氫鈉鹽(0.49g)加入反應(yīng)瓶中；控制內(nèi)溫32～36℃反應(yīng)3小時(shí)，向反應(yīng)體系中緩慢滴加14ml水，利用冰水浴控制溫度在30℃以下，滴加完畢，攪拌2小時(shí)；過濾，固體利用實(shí)施例1的柱層析方法，得到54mg式II化合物，收率5.1％，HPLC純度98.3％。
在本申請全文中，參考了各種出版物。將這些出版物的公開內(nèi)容全文在此并入本申請作為參考，以便更充分地描述本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)狀態(tài)。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，在不背離本發(fā)明的范圍或精神之內(nèi)，可以對本發(fā)明進(jìn)行各種修改和變化?？紤]到本文公開的本發(fā)明的說明書和實(shí)踐，本發(fā)明的其他實(shí)施方式對于本領(lǐng)域技術(shù)人員將是顯而易見的。預(yù)期認(rèn)為說明書和實(shí)施例僅僅是示例性的，本發(fā)明的實(shí)際范圍和精神由所附權(quán)利要求書限定。