1.一種大鯢虹彩病毒CPA檢測(cè)引物：
CPF: 5’-GCCTCAGCGAACAGCGTGGCACCACCTCTACTCCTAT-3’
CPR: 5’-GGCACCACCTCTACTCCTATGCCTCAGCGAACAGCGT-3’
DF: 5’-(Biotin) CCTCAGCCTACAGCACCC-3’
DR: 5’-(FITC) CTGGCGTTGGTCAGTCCG-3’
DPF: 5’-TCCATCCCAGTCAGCA-3’
DPR: 5’-TACCCAGAGTCGTCACCT-3’。
2.權(quán)利要求1所述的大鯢虹彩病毒CPA檢測(cè)引物在制備大鯢虹彩病毒CPA檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，所述的大鯢虹彩病毒CPA檢測(cè)試劑盒，包括：
10×ThermoPol? Reaction Buffer；Bst DNA 聚合酶；dNTPs；MgSO4；Betaine；交叉引物CPF、CPR；檢測(cè)引物DF、DR；剝離引物DPF、DPR；核酸檢測(cè)試紙條；
CPF: 5’-GCCTCAGCGAACAGCGTGGCACCACCTCTACTCCTAT-3’
CPR: 5’-GGCACCACCTCTACTCCTATGCCTCAGCGAACAGCGT-3’
DF: 5’-(Biotin) CCTCAGCCTACAGCACCC-3’
DR: 5’-(FITC) CTGGCGTTGGTCAGTCCG-3’
DPF: 5’-TCCATCCCAGTCAGCA-3’
DPR: 5’-TACCCAGAGTCGTCACCT-3’。
4.利用權(quán)利要求1所述引物非診斷性檢測(cè)大鯢虹彩病毒的方法：
1、病毒DNA的獲?。?/p>
2、CPA擴(kuò)增：
采用25μL反應(yīng)體系，包括：10×ThermoPol? Reaction Buffer 2.5μL，交叉引物CPF、CPR各1.0μM，檢測(cè)引物DF、DR各0.2~1.0μM，剝離引物DPF、DPR各0.2~1.0μM，MgSO44~12mM，dNTPs 0.2~1.0mM，Betaine 0.6M，Bst DNA聚合酶8U，模板DNA 1μL，ddH2O補(bǔ)足至25μL；55~65℃的溫度范圍，反應(yīng)30~90分鐘后，80℃滅活2分鐘；
3、檢測(cè)結(jié)果判定，可以用下述二種方法之一進(jìn)行結(jié)果的判定：
1）取擴(kuò)增產(chǎn)物，用2.0%的瓊脂糖凝膠電泳后，置于凝膠成像系統(tǒng)中成像，電泳圖片顯示CPA特征性梯狀條帶，則結(jié)果為陽(yáng)性；無(wú)任何條帶，則結(jié)果為陰性；
2）取擴(kuò)增產(chǎn)物，用核酸檢測(cè)試紙條檢測(cè)，僅在質(zhì)控區(qū)C出現(xiàn)一條紅線，表示樣品檢測(cè)結(jié)果陰性；出現(xiàn)兩條紅線，一條檢測(cè)線，一條質(zhì)控線，表示樣品檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性；在質(zhì)控區(qū)C無(wú)紅色線條出現(xiàn)，表明核酸檢測(cè)試紙條失效，檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，步驟2的CPA擴(kuò)增反應(yīng)體系和反應(yīng)條件為：
采用25μL反應(yīng)體系，包括：10×ThermoPol? Reaction Buffer 2.5μL，交叉引物CPF、CPR各1.0μM，檢測(cè)引物DF、DR各0.4μM，剝離引物DPF、DPR各0.4μM，MgSO48.0mM，dNTPs 1.0mM，Betaine 0.6M，Bst DNA聚合酶8U，模板DNA 1μL，ddH2O補(bǔ)足至25μL；63℃反應(yīng)60分鐘后，80℃滅活2分鐘。