一種靈芝孢子粉的精制工藝與綜合利用方法及其用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種靈芝孢子粉的精制工藝，在破壁后對(duì)破壁的靈芝孢子粉進(jìn)行去壁精制，用體積分?jǐn)?shù)為20%～95%的乙醇溶液和水浸泡后，分離壁殼，得到去壁靈芝孢子粉濾液和靈芝孢子粉壁殼，去壁靈芝孢子粉濾液經(jīng)濃縮、干燥制得精制靈芝孢子粉，靈芝孢子粉壁殼經(jīng)過(guò)綜合回收利用工藝，制得壁殼醇提物固體粉末、二氯甲烷提取固體粉末、乙酸乙酯提取固體粉末、壁殼水提物固體粉末、正丁醇提取固體粉末、水相粉末或殼聚糖。本發(fā)明通過(guò)去壁精制實(shí)現(xiàn)了孢子粉無(wú)效成分（壁殼）的分離和有效成分（多糖及三萜等）的富集，產(chǎn)出的精制靈芝孢子粉有效成分含量顯著提高，藥效明顯增強(qiáng)，并且對(duì)壁殼綜合利用，提高了經(jīng)濟(jì)效益。
【專利說(shuō)明】一種靈芝孢子粉的精制工藝與綜合利用方法及其用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種靈芝孢子粉的制備工藝，特別是靈芝孢子粉的精制技術(shù)與孢子粉壁殼綜合利用的方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002]靈芝，別名仙草、神芝或芝草，為擔(dān)子菌綱多孔菌科真菌赤芝Ganodermalucidum(Leyss.ex Fr.) Karst 或紫芝Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang 的干燥子實(shí)體，其性味甘平，具有扶正固本、滋補(bǔ)強(qiáng)壯等功效，藥用價(jià)值高，在我國(guó)、朝鮮半島、日本及東南亞等國(guó)家均有著廣泛的應(yīng)用。靈芝在生長(zhǎng)成熟期，會(huì)從菌褶中彈射出極其微小的卵形生殖細(xì)胞，稱為靈芝孢子或靈芝孢子粉。近年來(lái)，研究者對(duì)其進(jìn)行了大量研究，發(fā)現(xiàn)靈芝孢子粉包含多種活性成分，如多糖、三萜、氨基酸、生物堿、留醇和無(wú)機(jī)元素等，并從基因、蛋白或代謝通路等不同層次確證了抗腫瘤、抗癲癇、增強(qiáng)免疫、調(diào)節(jié)血糖血脂等一系列藥理作用。目前，已有相應(yīng)藥品進(jìn)入市場(chǎng)，并取得了較好的臨床療效。
[0003]從細(xì)胞結(jié)構(gòu)上看，靈芝孢子具有雙層壁結(jié)構(gòu)，由幾丁質(zhì)和葡萄糖構(gòu)成，質(zhì)地較為堅(jiān)韌，占比達(dá)50%~70%。幾丁質(zhì)為廣泛存在于自然界的一種含氮多糖類生物性高分子，研究表明具有抗腫瘤、抗炎和抗菌等作用，但天然幾丁質(zhì)以蛋白多糖形式存在，常與多肽、鈣質(zhì)、色素等相結(jié)合，脫乙酰程度低，活性并不顯著。實(shí)驗(yàn)表明，靈芝孢子壁阻礙有效成分的溶出，影響體內(nèi)吸收，因此目前絕大部分產(chǎn)品都采用不同的破壁工藝粉碎孢子壁，以期提高活性成分體內(nèi)生物利用度，增強(qiáng)治療效果。但破壁后幾丁質(zhì)仍與壁內(nèi)有效成分混合在一起，難以去除。孢子中活性成分含量低的問題仍沒有得到根本解決。
[0004]幾丁質(zhì)在熱堿中N端脫乙酰基的產(chǎn)物為殼聚糖，是一種具有調(diào)節(jié)糖脂代謝、降低自由基所致的過(guò)氧化反應(yīng)、增強(qiáng)機(jī)體免疫等多種活性的多糖類成分，其獨(dú)特的生物學(xué)特性已得到廣泛研究和認(rèn)可，是一種極具開發(fā)前景的醫(yī)藥原料及生理學(xué)材料。靈芝孢子壁中幾丁質(zhì)含量很高，且仍然殘余部分靈芝孢子的有效成分，如有適宜的方法對(duì)其進(jìn)行開發(fā)，不僅能為壁殼的處理提供一條可行的途徑，還能使這些“廢物”得到充分的利用，為相關(guān)疾病的早期干預(yù)和輔助治療提供豐富的資源。但目前尚未有研究對(duì)靈芝孢子壁的作用進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)，其物質(zhì)基礎(chǔ)、生物活性及作用機(jī)制均未知。
[0005]綜上所述，如能實(shí)現(xiàn)靈芝孢子粉的去壁精制，同時(shí)對(duì)生產(chǎn)過(guò)程廢棄的壁殼進(jìn)行降解加工和活性評(píng)價(jià)的研究，不僅可以提高產(chǎn)品療效，提升其藥用價(jià)值，也為資源的循環(huán)利用提供了方法和依據(jù)，有利于產(chǎn)業(yè)的轉(zhuǎn)型升級(jí)，實(shí)現(xiàn)可持續(xù)發(fā)展并提高經(jīng)濟(jì)效益。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有靈芝孢子粉制備工藝及其綜合應(yīng)用方法的不足，提供一種高效、快速、安全、可控的去壁精制工藝和壁殼的綜合利用技術(shù)及其用途，以提高靈芝孢子粉產(chǎn)品的品質(zhì)和附加值，為產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供可行的思路和方法。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:[0008]一種靈芝孢子粉的精制工藝，所述工藝包括以下步驟:
[0009](I)原料初篩:稱取靈芝孢子原料，過(guò)篩除去雜質(zhì)，得到過(guò)篩的靈芝孢子；優(yōu)選的，所用篩子為80~120目；
[0010](2)水洗離心:將過(guò)篩的靈芝孢子加入蒸餾水?dāng)嚢?0~30分鐘后靜置10~30分鐘；癟殼孢子較輕會(huì)浮于水面，泥沙和其他較重的雜質(zhì)則沉在水底，而飽滿的孢子則處在水層的中央，根據(jù)分層情況除去上層癟殼、下層泥沙與雜質(zhì)，取中層孢子懸浮液至過(guò)濾離心機(jī)中，離心甩除水分，得到濕靈芝孢子；所述蒸餾水的質(zhì)量為過(guò)篩的靈芝孢子的質(zhì)量的4~10倍，優(yōu)選8倍；
[0011](3)干燥:水洗離心后的濕靈芝孢子干燥至水分含量在7%以下，得到干燥的靈芝孢子；所述干燥的方式包括但不限于常壓干燥、真空干燥、冷凍干燥、紅外線干燥或微波干燥等，其中微波干燥具有干燥速度快、加熱均勻、產(chǎn)品質(zhì)量好、控制靈敏、操作方便等優(yōu)點(diǎn)，因此優(yōu)選微波干燥。微波干燥過(guò)程中，濕靈芝孢子需厚薄均勻地?cái)傆诤姹P上，控制物料厚度(4cm，溫度< 60°C，既可獲得較快的干燥速度，同時(shí)對(duì)孢子中活性成分的影響也較小；
[0012](4)破壁:對(duì)干燥的靈芝孢子進(jìn)行破壁處理，使破壁率達(dá)到80%~100%，得到破壁的靈芝孢子粉；破壁的方法包括但不限于物理、化學(xué)和生物法等，如振動(dòng)磨破壁、超音速氣流破壁、流化床式氣流粉碎機(jī)破壁或酶解法破壁；振動(dòng)磨法破壁率高，但容易產(chǎn)生高溫破壞有效成分，也容易帶入重金屬污染；超音速氣流法低溫、無(wú)介質(zhì)污染但破壁率相對(duì)較低；酶解法也會(huì)引入外源性成分。優(yōu)選破壁率較高且粒度均勻、易于清洗的流化床式氣流粉碎機(jī)進(jìn)行破壁，破壁后孢子粉破壁率可達(dá)到98%以上，且重金屬(如鉛、砷、汞、鎘、銅、鎳、鉻、錳、鐵等)與破壁前無(wú)明顯增加，符合相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)或規(guī)范的要求； [0013](5)去壁精制:將破壁的靈芝孢子粉置于提取罐中，分別依次用體積分?jǐn)?shù)為20%~95%的乙醇溶液和水在50°C~100°C浸泡2~4次，每次I~3小時(shí)，合并所有浸泡液并分離壁殼，得到去壁靈芝孢子粉濾液和靈芝孢子粉壁殼；每次浸泡所用乙醇溶液或水的質(zhì)量用量為破壁的靈芝孢子粉的質(zhì)量的6-14倍；浸泡時(shí)可采用浸拌、攪拌、回流、超聲或乳化分散等手段促使壁殼分離；分離壁殼可采用靜置、過(guò)濾或離心等方法；
[0014]進(jìn)一步，所述浸泡方式優(yōu)選按以下步驟進(jìn)行:破壁的靈芝孢子粉每次加入10-12質(zhì)量倍的體積分?jǐn)?shù)60%乙醇溶液(即指體積分?jǐn)?shù)60%乙醇溶液的質(zhì)量為破壁的靈芝孢子粉質(zhì)量的10-12倍)，在80°C浸泡2次，每次2小時(shí)，再每次加入7-10質(zhì)量倍的水(即水的質(zhì)量為靈芝孢子粉質(zhì)量的7-10倍)，在60°C超聲浸泡2次，每次I小時(shí)，合并所有浸泡液，過(guò)濾分離壁殼，得到去壁靈芝孢子粉濾液和靈芝孢子粉壁殼。
[0015]所述過(guò)濾分離壁殼方式優(yōu)選板框過(guò)濾機(jī)或過(guò)濾離心機(jī)；所述板框過(guò)濾機(jī)參數(shù)設(shè)置為8m3/h、壓力≤0.3Mpa,濾膜孔徑≤4 μ m ;所訴過(guò)濾離心機(jī)濾袋孔徑≥800目，頻率40~60赫茲，轉(zhuǎn)速600~1500轉(zhuǎn)/分鐘；
[0016](6)濃縮:在60°C以下將去壁靈芝孢子粉濾液濃縮至縮至無(wú)醇味，得到濃縮液；同時(shí)回收乙醇。優(yōu)選的,濾液濃縮至比重1.05~1.3 ;
[0017](7)干燥:濃縮液干燥成固體粉末即得精制靈芝孢子粉；或濃縮液采用一步制粒法直接制備得到精制靈芝孢子粉制劑或制劑中間體；所述干燥可使用但不僅限于噴霧干燥、冷凍干燥或微波干燥法，優(yōu)選微波干燥；一步制粒操作簡(jiǎn)單，生產(chǎn)效率高，又可避免細(xì)粉飛揚(yáng)，防止交叉污染，保證了生產(chǎn)環(huán)境符合GMP要求；采用一步制粒法時(shí)，可以根據(jù)制劑的要求加入淀粉、糊精、乳糖、蔗糖、甘露醇、聚維酮、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、甲基纖維素、聚乙二醇、阿拉伯膠、明膠或濃縮液進(jìn)一步濃縮得到的的孢子粉流浸膏(比重1.2~1.4)作為粘合劑一步完成混合、干燥、制粒工藝，提高生產(chǎn)效率。
[0018]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供靈芝孢子粉壁殼的綜合利用方法，所述方法包括以下步驟:
[0019](A)壁殼醇提物的制備:取靈芝孢子粉的精制工藝的步驟(5)得到的靈芝孢子粉壁殼，加體積分?jǐn)?shù)60%~90% (優(yōu)選70%)乙醇溶液，于60V~80°C (優(yōu)選80°C )下提取I~4小時(shí)(優(yōu)選4小時(shí))，提取I~3次；合并所有提取液，過(guò)濾得濾液A和濾渣A，取濾液A減壓濃縮回收乙醇，剩余物冷凍干燥得到壁殼醇提物固體粉末；所述體積分?jǐn)?shù)60%~90%乙醇溶液的質(zhì)量用量為靈芝孢子粉壁殼的質(zhì)量的6~12倍，優(yōu)選8倍；
[0020](B) (i)取步驟(A)制得的壁殼醇提物固體粉末加3~4質(zhì)量倍的50°C~80°C(優(yōu)選70°C)熱水浸泡(通常浸泡30~60分鐘)并充分?jǐn)嚢?，加入與熱水等體積的石油醚萃取2~4次，合并所有石油醚層，濃縮、干燥(優(yōu)選冷凍干燥)制得石油醚提取浸膏狀固體；
[0021](ii)萃取后剩余的水層合并，按照上述(i)的方法，分別依次以與水層等體積的二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取，并濃縮、干燥，分別制得二氯甲烷提取固體粉末、乙酸乙酯提取固體粉末和正丁醇提取固體粉末；最后剩余的水相合并后濃縮、干燥制得水相粉末；
[0022](C)壁殼水提物的制備:取步驟(A)中醇提后過(guò)濾所得的濾渣A，烘干后加蒸餾水于100°C回流提取0.5~I小時(shí)，提取I~3次，合并所有的提取液，過(guò)濾，得濾液B和濾渣B，濾液B經(jīng)濃縮干燥后即得米黃色的壁殼水提物固體粉末；所述蒸餾水的質(zhì)量用量為濾渣A的質(zhì)量的8~10 倍；
[0023](D)殼聚糖的制備:取步驟(C)中水提后的濾渣B，烘干后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%~60%(優(yōu)選50%)Na0H水溶液，于100°C水浴下提取2~4小時(shí)，離心得沉淀物A ;將沉淀物A用蒸餾水洗滌至中性，之后加入3~7倍沉淀物A質(zhì)量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%~20% (優(yōu)選10%)醋酸水溶液，于95°C水浴提取2~4小時(shí)，離心、過(guò)濾取濾液C，加入NaOH調(diào)pH值=10，有沉淀物析出，離心取沉淀物B，用蒸餾水洗滌至中性，干燥，即制得殼聚糖；所述質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%~60%Na0H水溶液的質(zhì)量用量為濾渣B的質(zhì)量的3~7倍。
[0024]本發(fā)明還提供通過(guò)上述工藝制備獲得的精制靈芝孢子粉及壁殼不同部位組分在開發(fā)抗腫瘤、抗氧化或促消化類等藥品或保健品中的用途。通過(guò)含量測(cè)定、活性評(píng)價(jià)和藥理實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)精制靈芝孢子粉、壁殼醇提物固體粉末、乙酸乙酯提取固體粉末、正丁醇提取固體粉末及殼聚糖中的有效成分含量高，且具有較好的提高免疫力、抑制腫瘤生長(zhǎng)、抗氧化、清除自由基或促消化作用，具有較好的成藥潛力，可繼續(xù)進(jìn)行藥物的研究開發(fā)。
[0025]本發(fā)明提供的精制靈芝孢子粉可用于制備抗腫瘤藥物，特別可用于制備抗肝癌藥物。
[0026]本發(fā)明提供的壁殼醇提物固體粉末、二氯甲烷提取固體粉末、乙酸乙酯提取固體粉末、正丁醇提取固體粉末或水相粉末可用于制備抗腫瘤藥物，特別可用于制備抗乳腺癌和抗肺癌藥物。特別是壁殼醇提物固體粉末、二氯甲烷提取固體粉末、乙酸乙酯提取固體粉末用于制備抗乳腺癌和抗肺癌藥物。
[0027]本發(fā)明提供的殼聚糖可用于制備治療胃腸道疾病藥物。
[0028]本發(fā)明提供的精制靈芝孢子粉、壁殼醇提物固體粉末、二氯甲烷提取固體粉末、乙酸乙酯提取固體粉末、壁殼水提物固體粉末和殼聚糖可作為有效部位，加入人體可接受的藥用輔料，按照相應(yīng)的制備方法制成制劑。
[0029]所述的制劑包括注射液、滴注液、粉針劑、顆粒劑、片劑、沖劑、散劑、口服液、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口含劑、顆粒劑、丸劑、膏劑、丹劑、噴霧劑、滴丸劑、崩解劑、口崩片、微丸、微乳、固體分散劑等。
[0030]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明提供的靈芝孢子粉精制技術(shù)及其綜合應(yīng)用方法和現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn):
[0031](I)本發(fā)明提供的靈芝孢子粉精制技術(shù) 工藝科學(xué)、環(huán)保，可操作性強(qiáng)，精制效率高，實(shí)現(xiàn)了孢子粉無(wú)效成分(壁殼)的分離和有效成分(多糖及三萜等)的富集，產(chǎn)出的精制靈芝孢子粉有效成分含量顯著提高，藥效明顯增強(qiáng)，且不積聚重金屬，提高了靈芝孢子粉產(chǎn)品的品質(zhì)及附加值；
[0032](2)本發(fā)明提供的壁殼的綜合應(yīng)用方法對(duì)工藝過(guò)程中原本廢棄的壁殼進(jìn)行了系統(tǒng)評(píng)價(jià)和分析，提供了壁殼回收利用的工藝和方法，為其循環(huán)利用及后續(xù)產(chǎn)品的開發(fā)提供了可行的途徑和思路，實(shí)現(xiàn)了可持續(xù)發(fā)展并提高了經(jīng)濟(jì)效益。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0033]圖1為精制靈芝孢子粉生產(chǎn)工藝流程圖。
[0034]圖2為壁殼醇提物和水提物的制備工藝流程圖。
[0035]圖3為壁殼醇提物不同極性提取物的制備工藝流程圖。
[0036]圖4為殼聚糖的制備工藝流程圖。
[0037]圖5為壁殼醇提物固體粉末對(duì)MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞與A549肺癌細(xì)胞增殖的抑制作用圖。
[0038]圖6為壁殼醇提物和不同極性部位固體粉末對(duì)MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞增殖的抑制作用圖。
[0039]圖7為壁殼醇提物總抗氧化能力曲線圖。
[0040]圖8為壁殼醇提物對(duì)DPPH自由基的清除率曲線圖。
[0041]圖9為壁殼醇提物不同極性部位對(duì)DPPH自由基清除率比較圖。
[0042]圖10為壁殼醇提物和壁殼水提物對(duì)MDA的清除率曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0043]根據(jù)下述實(shí)施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí)施例所描述的具體的料液配比、工藝條件及其結(jié)果僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會(huì)限制權(quán)利要求書中所詳細(xì)描述的本發(fā)明。
[0044]實(shí)施例1
[0045]靈芝孢子粉的精制技術(shù)如附圖1所示，具體按以下步驟進(jìn)行:
[0046](I)稱取靈芝孢子原料，過(guò)80目篩，去除較大的碎石和泥沙；
[0047](2)將過(guò)篩孢子2000g放入攪拌罐中，加入16000g蒸餾水，攪拌20分鐘后靜置15分鐘。從投料口撈出癟殼孢子和其它上浮雜質(zhì)，從攪拌罐底的排水口排出沉在水底的污泥和碎石。將中層孢子懸浮液溢流至鐵罐中，并抽至過(guò)濾離心機(jī)中，甩除水分；[0048](3)離心后的濕孢子放入真空微波干燥機(jī)中的托盤中，厚薄均勻攤平，進(jìn)行低溫干燥。物料厚度≤4cm，溫度≤60°C，干燥至含水量6%，得干燥孢子1400g ；
[0049](4)采用流化床式氣流粉碎機(jī)對(duì)干燥孢子破壁，得到破壁的靈芝孢子粉1400g。按NYT1677-2008標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)，其破壁率為98%。破壁的靈芝孢子粉中鉻、鎳、鉛含量分別為
0.65mg/kg、0.14mg/kg、0.079mg/kg,較未破壁前 0.5mg/kg、0.17mg/kg、0.085mg/kg 無(wú)明顯增加，符合GB2762-2012食品中安全限量的要求；
[0050](5)破壁孢子粉1400g投入提取罐中，加入14000g體積分?jǐn)?shù)60%乙醇溶液，在80°C浸泡2小時(shí)，浸泡2次，再以1000Og蒸餾水在60°C超聲浸泡2次，每次I小時(shí)。合并所有浸泡液用過(guò)濾離心機(jī)過(guò)濾，通過(guò)濾網(wǎng)的即為去壁靈芝孢子粉濾液，而濾網(wǎng)上的則為孢子粉壁殼；過(guò)濾離心機(jī)濾袋孔徑800目，頻率40赫茲，轉(zhuǎn)速1000轉(zhuǎn)/分鐘；
[0051](6)在60°C將濾液濃縮至無(wú)醇味，濃縮液比重1.05 ；
[0052](7)采用微波干燥將濃縮液干燥成固體粉末即得精制靈芝孢子粉400g。
[0053]實(shí)施例2
[0054]靈芝孢子粉壁殼的綜合利用方法如附圖2所示，具體包括以下步驟:
[0055](I)取實(shí)施例1中步驟(5)所得孢子粉壁殼lOOOg，用8000g的體積分?jǐn)?shù)70%乙醇溶液于80°C提取4小時(shí)，提取3次。合并提取液，過(guò)濾得濾液A和濾渣A，濾液A減壓濃縮回收乙醇，采用冷凍干燥的方法得到壁殼醇提物固體粉末60g ；
[0056](2)取上述壁殼醇提物固體粉末50g，加150g70°C熱水浸泡30分鐘并充分?jǐn)嚢瑁蠹尤?50g石油醚萃取3次，萃取后將所有石油醚層合并，減壓濃縮，冷凍干燥得石油醚浸膏狀固體20g;萃取后剩余的水層按相同的方法，分別依次以二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分別得到二氯甲烷提取固體粉末3g、乙酸乙酯提取固體粉末2g和正丁醇提取固體粉末4g。最后剩余的水相合并、濃縮干燥后得水相固體粉末7g ；
[0057](3)取實(shí)施例2步驟(1)中醇提后的濾渣A900g，烘干后加8000g蒸餾水于100°C回流提取2次，每次I小時(shí)，合并所有的提取液，過(guò)濾，得濾液B和濾渣B，濾液B濃縮干燥后得米黃色的壁殼水提物固體粉末5g ；
[0058](4)取實(shí)施例2步驟(3)中水提后的濾渣B800g，加入4000g質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%Na0H溶液，100°C水浴提取4小時(shí)，離心后去濾液取沉淀物A。將沉淀物A用蒸餾水洗滌至中性，之后加入2800gl0%醋酸溶液，于95°C水浴提取3小時(shí)，離心過(guò)濾取濾液，加入NaOH調(diào)pH值=10，有沉淀物析出，離心取沉淀物B，用蒸餾水洗滌至中性并干燥，即得殼聚糖500g。
[0059]實(shí)施例3
[0060]精制靈芝孢子粉與普通靈芝孢子粉有效成分含量檢測(cè)
[0061]取實(shí)施例1生產(chǎn)的精制靈芝孢子粉，另取以常規(guī)工藝生產(chǎn)的普通靈芝孢子粉，分別采用苯酚-硫酸法，香草醛-冰醋酸-高氯酸法測(cè)多糖含量和總?cè)坪?，以葡萄糖和齊墩果酸為對(duì)照，在490nm和550nm下以分光光度法測(cè)定樣品的吸光度并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算相應(yīng)的濃度。結(jié)果表明，精制靈芝孢子粉的粗多糖及總?cè)坪匡@著大于普通靈芝孢子粉(P < 0.01)，含量提高了近20倍。結(jié)果見表1。
[0062]普通靈芝孢子粉按照實(shí)施例1步驟(1)~(4)操作，得到的破壁的靈芝孢子粉，不經(jīng)去壁精制，即為常規(guī)工藝得到的靈芝孢子粉。
[0063] 表1精制靈芝孢子粉與普通靈芝孢子粉有效成分含量檢測(cè)結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.一種靈芝孢子粉的精制工藝，其特征在于所述工藝包括以下步驟: (1)原料初篩:稱取靈芝孢子原料，過(guò)篩除去雜質(zhì)，得到過(guò)篩的靈芝孢子； (2)水洗離心:將過(guò)篩的靈芝孢子加入蒸餾水?dāng)嚢?0~30分鐘后靜置10~30分鐘；除去上層癟殼、下層泥沙與雜質(zhì)，取中層孢子懸浮液，離心甩除水分，得到濕靈芝孢子； (3)干燥:濕靈芝孢子干燥至水分含量在7%以下，得到干燥的靈芝孢子； (4)破壁:對(duì)干燥的靈芝孢子進(jìn)行破壁處理，使破壁率達(dá)到80%~100%，得到破壁的靈芝孢子粉； (5)去壁精制:將破壁的靈芝孢子粉置于提取罐中，分別依次用體積分?jǐn)?shù)為20%~95%的乙醇溶液和水在50°C~100°C浸泡2~4次，每次I~3小時(shí)，合并所有浸泡液并分離壁殼，得到去壁靈芝孢子粉濾液和靈芝孢子粉壁殼； (6)濃縮:在60°C以下將去壁靈芝孢子粉濾液濃縮至縮至無(wú)醇味，得到濃縮液； (7)干燥:濃縮液干燥成固體粉末即得精制靈芝孢子粉；或濃縮液采用一步制粒法直接制得精制靈芝孢子粉制劑或制劑中間體。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(4)中，破壁處理采用流化床式氣流粉碎機(jī)進(jìn)行破壁。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(5)中，所述去壁精制按以下步驟操作:破壁的靈芝孢子粉每次加入10-12質(zhì)量倍的體積分?jǐn)?shù)60%乙醇溶液，在80°C浸泡2次，每次2小時(shí)，再每次加入破壁的靈芝孢子粉的7-10質(zhì)量倍的水在60°C超聲浸泡2次，每次I小時(shí)，合并所有浸泡液，過(guò)濾分離壁殼，得到去壁靈芝孢子粉濾液和靈芝孢子粉壁殼。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述一步制粒法是將濃縮液與粘合劑混合、干燥、制粒得到精制靈芝孢子粉制劑；所述粘合劑為部分濃縮液進(jìn)一步濃縮得到的孢子粉流浸膏。
5.如權(quán)利要求1~4之一所述的方法制得的精制靈芝孢子粉或精制靈芝孢子粉制劑。
6.如權(quán)利要求5所述的精制靈芝孢子粉或精制靈芝孢子粉制劑在制備抗肝癌藥物中的應(yīng)用。
7.一種靈芝孢子粉壁殼的綜合利用方法，其特征在于所述方法包括以下步驟: (A)壁殼醇提物的制備:取靈芝孢子粉壁殼，加體積分?jǐn)?shù)60%~90%乙醇溶液，于60V~80°C下提取I~4小時(shí)，提取I~3次；合并所有提取液，過(guò)濾得濾液A和濾渣A，取濾液A減壓濃縮回收乙醇，剩余物冷凍干燥得到壁殼醇提物固體粉末；所述體積分?jǐn)?shù)60%~90%乙醇溶液的質(zhì)量用量為靈芝孢子粉壁殼的質(zhì)量的6~12倍； (B)(i)取步驟(A)制得的壁殼醇提物固體粉末加3~4質(zhì)量倍的50°C~80°C熱水浸泡并充分?jǐn)嚢?，加入與熱水等體積的石油醚萃取2~4次，合并所有石油醚層，濃縮、干燥制得石油醚提取浸膏狀固體； (ii)萃取后剩余的水層合并，按照上述(i)的方法，分別依次以與水層等體積的二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取，并濃縮、干燥，分別制得二氯甲烷提取固體粉末、乙酸乙酯提取固體粉末和正丁 醇提取固體粉末； (C)壁殼水提物的制備:取步驟(A)中醇提后過(guò)濾所得的濾渣A，烘干后加蒸餾水于1OO0C回流提取0.5~1小時(shí)，提取1~3次，合并所有的提取液，過(guò)濾，得濾液B和濾渣B，濾液B經(jīng)濃縮干燥后即得壁殼水提物固體粉末；所述蒸餾水的質(zhì)量用量為濾渣A的質(zhì)量的8~10倍； (D)殼聚糖的制備:取步驟(C)中水提后的濾渣B，烘干后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%~60%Na0H水溶液，于100°C水浴下提取2~4小時(shí)，離心得沉淀物A ;將沉淀物A用蒸餾水洗滌至中性，之后加入3~7倍沉淀物A質(zhì)量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%~20%醋酸水溶液，于95°C水浴提取2~4小時(shí)，離心、過(guò)濾取濾液C，加入NaOH調(diào)pH值=10，有沉淀物析出，離心取沉淀物B，用蒸餾水洗滌至中性、干燥，即制得殼聚糖；所述質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%~60%Na0H水溶液的質(zhì)量用量為濾渣B的質(zhì)量的3~7倍； 所述靈芝孢子粉壁殼按以下方法制得: (O原料初篩:稱取靈芝孢子原料，過(guò)篩除去雜質(zhì)，得到過(guò)篩的靈芝孢子； (2)水洗離心:將過(guò)篩的靈芝孢子加入蒸餾水?dāng)嚢?0~30分鐘后靜置10~30分鐘；除去上層癟殼、下層泥沙與雜質(zhì)，抽取中層孢子懸浮液，離心甩除水分，得到濕靈芝孢子； (3)干燥:濕靈芝孢子干燥至水分含量在7%以下，得到干燥的靈芝孢子； (4)破壁:對(duì)干燥的靈芝孢子進(jìn)行破壁處理，使破壁率達(dá)到80%~100%，得到破壁的靈芝孢子粉； (5)去壁精制:將破壁的靈芝孢子粉置于提取罐中，分別依次用體積分?jǐn)?shù)為20%~95%的乙醇溶液和水在50°C~100°C浸泡2~4次，每次I~3小時(shí)，合并所有浸泡液并分離壁殼，得到去壁靈芝孢子粉濾液和靈芝孢子粉壁殼。
8.如權(quán)利要求7所述的方法制得的壁殼醇提物固體粉末、二氯甲烷提取固體粉末、乙酸乙酯提取固體粉末、壁殼水提物固體粉末、正丁醇提取固體粉末、水相粉末或殼聚糖。
9.如權(quán)利要求8所述的壁殼醇提物固體粉末、二氯甲烷提取固體粉末、乙酸乙酯提取固體粉末、正丁醇提取固體粉末或水相粉末在制備抗乳腺癌或抗肺癌、藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C08B37/08GK104013652SQ201310743712
【公開日】2014年9月3日 申請(qǐng)日期:2013年12月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月29日
【發(fā)明者】徐靖, 李振皓, 李明焱, 李建淼 申請(qǐng)人:金華壽仙谷藥業(yè)有限公司