專利名稱：一種分離純化紫杉醇和紫杉烷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種分離純化紫杉醇和紫杉烷的方法，適用于制藥廠進行紫杉醇和紫杉完的工業(yè)化生產(chǎn)。
自一九九二年美國EDA批準(zhǔn)抗癌新藥一紫杉醇用于轉(zhuǎn)移性卵巢癌、乳腺癌的治療至今，紫杉醇生產(chǎn)的主要技術(shù)問題是紫杉醇的分離純化。因化學(xué)結(jié)構(gòu)相近和層析特性相近的Cephalomannine的存在，使得紫杉醇的純度難以達到98％以上，若要達到此標(biāo)準(zhǔn)，需要經(jīng)過復(fù)雜的分離過程，而使成本難以降低。目前生產(chǎn)采用于柱層析、常壓層析和低壓層析等正相載體，以昂貴的有機溶劑如已烷、氯仿等進行洗脫。國內(nèi)大多數(shù)廠家采用了如下過程分離紫杉醇，植物提取物經(jīng)脫脂、萃取，然后經(jīng)過3-4步的系列層析，還很難將紫杉醇和Cephalomannine分離，生產(chǎn)量難以提高。有的采用高效液相層析或高速逆流色譜分離純化紫杉醇但分離量小，成本較高。國外有人采用了萃取——硅膠層析——高速逆流層析等步驟純化紫杉醇也存在同樣問題，即分離下完全。Murray CK等在美國專利5364747、1994-11-15中報道以各種方法(OsO4、O3、Br2等)選擇性地氧化Cephalomannine及其它類似物，控制反應(yīng)條件，使紫杉醇下被氧化，然后經(jīng)過沉淀或萃取或通過硅膠層析，所得到的紫杉醇純度可達97.5％，美國Hauser公司采用了動態(tài)液固萃取及液液聚流等技術(shù)使紫杉醇的年生產(chǎn)量達數(shù)百公斤以上，但成本仍然較高，Nair在美國專利5279949，1994-01-18中報道，曾用了活性炭進行脫色、去雜，然后再進行常規(guī)層析，該項工作沒有將活性炭進一步作為分離載體對紫杉烷類物質(zhì)進行分離，因而沒有解決紫杉醇生產(chǎn)中的關(guān)鍵。在以上這些方法中，存在如下問題1、采用正相載體分離紫杉醇，柱效不高，而且溶劑系統(tǒng)復(fù)雜昂貴；2、采用反相載體分離，可選擇的載體種類很多，但成本較貴。作梯度洗脫時耐溶劑穩(wěn)定性較差，分離量??；3、通過化學(xué)反應(yīng)后再分離純化紫杉醇，小試效果好，但增加了生產(chǎn)工序，在大規(guī)模生產(chǎn)時，反應(yīng)條件并不容易控制，而且其它紫杉烷的回收又需要加一道工序。
本發(fā)明的目的是提供了一種分離純化紫杉醇和紫杉烷的方法，采用活性炭對紫杉醇和紫杉烷進行分離，工藝簡單，成本低，分離效率高。
為解決上述問題，本發(fā)明采用反相載體性質(zhì)的活性炭進行紫杉醇和Cephalomannine的分離，在完成了載體特性、粒度、溶劑配比、梯度方式、溶劑流速、柱效、柱壓及負載量等條件的試驗研究的基礎(chǔ)上，采用如下技術(shù)方案含紫杉烷類化合物的浸膏，以1∶3的比例拌入硅藻土或氧化鋁，通風(fēng)干燥成粉末狀，裝柱，以3倍體積的石油醚或氯仿(9∶1)洗脫， 再以石油醚(30-60℃)氯仿(1∶1.2)洗脫至流出液無色為止，其特征是將濃縮物拌入活性炭，通風(fēng)干燥，然后將80-160目的活性炭以丙酮浸潤后裝柱，再用蒸餾水洗出丙酮，將已載樣的活性炭置于柱的上層。以丙酮和水作梯度洗脫，可有效地將Cephalomannine和紫杉醇及其它紫、杉烷類化合物分離，用此方法可使紫杉醇純度達98％以上，最大分離量為1g/cm2(柱截面積)。
實施例采用紅豆杉植物浸膏50-100kg，加入50-100L丙酮溶解成可流動浸膏，再用150kg硅藻土或氧化鋁吸附，然后通風(fēng)或減壓干燥成粉末狀，裝入不銹鋼柱，用石油醚和氯仿(9∶1)350-450L洗脫，再用石油醚和氯仿(1∶1.2)洗脫至流出液無色為止(500-750L)，濃縮、回收溶劑。再將濃縮物以80-160目活性炭20kg吸附，通風(fēng)干燥，然后用50kg80-160目之活性炭以丙酮為溶劑裝柱，再用蒸餾水洗出丙酮。將已載樣的活性炭置于枉的上層。以丙酮和水20-100％梯度洗脫(100ml/min/2kg)，然后監(jiān)測，收集紫杉醇部分。并濃縮結(jié)晶，再以氯仿，丙酮交替洗柱子，再次備用。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點和效果1、采用活性炭作為紫杉醇和紫杉烷的分離載體，不僅分離量大，而且純度高；2、建立的分離柱可反復(fù)使用，具有良好的重復(fù)性；3、成本低，成本低于40％以上；4、工藝簡便，操作方便，整個純化過程僅需2-3步，使生產(chǎn)工序減少2-4步；5、提高了紫杉醇和Cephalomannine的分離效果；6、用同樣規(guī)模的設(shè)施采用本法可使紫杉醇分離量比用其它方法高80-100倍之多。并具有廣泛的社會和經(jīng)濟效益。
權(quán)利要求
1.一種分離純化紫杉醇和紫杉烷的方法，采用紅豆杉植物浸膏加入丙酮溶解成可流動浸膏，硅藻土或氧化鋁吸附，通風(fēng)干燥成粉末狀，裝入不銹鋼柱，以石油醚和氯仿洗脫，濃縮、回收溶劑，其特征是將濃縮物拌入活性炭，通風(fēng)干燥，然后將80-160目之活性炭以丙酮為溶劑裝柱，再用蒸餾水洗出丙酮，將已載樣的活性炭量于柱的上層，用丙酮和水洗脫。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分離純化紫杉醇和紫杉烷的方法，其特征是丙酮和水為20-100％作梯度洗脫。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種分離純化紫杉醇和紫杉烷的方法,采用紅豆杉植物浸膏加入丙酮溶解成可流動浸膏,硅藻土或氧化鋁吸附,通風(fēng)干燥成粉末狀,裝入不銹鋼柱,以石油醚和氯仿洗脫,濃縮回收溶劑,其特征是將濃縮物拌入活性炭,通風(fēng)干燥,將80—160目之活性炭以丙酮為溶劑裝柱,再用蒸餾水洗出丙酮,將已載樣的活性炭置于柱的上層,用丙酮和水洗脫。本發(fā)明工藝簡便,操作方便,分離量大,純度高,具有廣泛的社會和經(jīng)濟效果。
文檔編號C07D305/14GK1207389SQ9710919
公開日1999年2月10日 申請日期1997年8月1日 優(yōu)先權(quán)日1997年8月1日
發(fā)明者盧大炎, 葉晚成, 王愛芬, 侯云甫 申請人:中國科學(xué)院武漢植物研究所