專利名稱：一種高純度絲素肽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種高純度絲素肽的制備方法。
背景技術(shù)：
目前，絲素肽是先進(jìn)的天然營(yíng)養(yǎng)護(hù)膚、護(hù)發(fā)品的高級(jí)原料，在護(hù)膚用品中加入絲素肽，可以增加皮膚細(xì)胞活力，有防曬美白保濕的效果；在護(hù)發(fā)用品中加入絲素肽，可在頭發(fā)表面形成保護(hù)膜，使頭發(fā)增加彈性，滋養(yǎng)潤(rùn)澤，可修復(fù)燙發(fā)、染發(fā)等引起的損傷。此外，絲素肽在生物制藥、外用醫(yī)療材料及功能性保健食品方面也有重要的利用價(jià)值，可制成保肝護(hù)肝類的藥品、糖尿病類的藥品、老年癡呆癥類的藥品等；可應(yīng)用于制造隱形眼鏡、人造皮膚及創(chuàng)傷膜、人工角膜、人造血管等醫(yī)療用品。同時(shí)，絲素肽與肌膚有天然的親合效果，極易被皮膚吸收。因此，絲素肽可以防止皮膚干燥、為人體肌膚正常的新陳代謝提供必要的養(yǎng)分，并可阻斷紫外線對(duì)人體的侵害、抑制皮膚黑色素的形成等等。其中，在應(yīng)用于藥品、化妝品、醫(yī)用材料等領(lǐng)域中，要求絲素肽具有極高的純度，一般需要達(dá)到90%以上才可。而現(xiàn)有的絲素肽的制備方法中，能滿足上述高純度要求的極少。例如，中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)CN1392265A公開(kāi)了一種生物活性肽_絲素肽的制備方法，其最終制得的絲素肽產(chǎn)品中肽含量為85.15%。而提高絲素肽產(chǎn)品中肽含量，一般有如下兩種途徑:一是對(duì)絲素肽產(chǎn)品進(jìn)行二次提純，二是改進(jìn)制備工藝，得到高純度的絲素肽。顯然，對(duì)于第一種方法，需要額外增加處理工藝，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，成本較高。而第二種方法，表面上看是較好的選擇，但如何實(shí)現(xiàn)，成了本領(lǐng)域的難題之一。總所周知，為了提高產(chǎn)品的純度，就需要在制備過(guò)程中加強(qiáng)雜質(zhì)的去除，然而，就中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)CN1392265A而言，其采用了納濾膜進(jìn)行納濾脫鹽，其脫鹽率達(dá)到了
98.39%(參見(jiàn)說(shuō)明書(shū)表3)，但其純度仍然較低。因此，如何進(jìn)一步提高脫鹽率，以獲得高純度的絲素肽，以滿足藥品、化妝品、醫(yī)用材料等的使用要求，成了本領(lǐng)域亟待解決的難題之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種高純度絲素肽的制備方法。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種高純度絲素肽的制備方法，包括如下步驟:
(1)以下腳繭或廢蠶絲為原料，用Na2CO3溶液進(jìn)行脫膠精煉；再經(jīng)過(guò)水洗、干燥后，得到絲素；
(2)將上述絲素用CaCl2-H2O-C2H5OH三元體系溶解；
(3)稀釋后，用中性蛋白酶進(jìn)行酶解，酶用量為2(Γ200活力單位/g絲素，酶解溫度為25 50°C，時(shí)間 30 300 min ；
(4)采用電滲析進(jìn)行過(guò)濾，電流密度為2(Γ25毫安/cm2，直至脫鹽率達(dá)到90%；
(5)采用透析進(jìn)行過(guò)濾:先以自來(lái)水為流動(dòng)水進(jìn)行透析，當(dāng)透析膜的出水的電導(dǎo)率與自來(lái)水的電導(dǎo)率相同時(shí)；再以純水為流動(dòng)水進(jìn)行透析，當(dāng)透析膜的出水的電導(dǎo)率與純水的電導(dǎo)率相同時(shí)，透析結(jié)束；
(6)濃縮、噴霧干燥、滅菌，即可得到所述高純度絲素肽。上述技術(shù)方案中，所述步驟(I)中，Na2CO3溶液的體積濃度為0.3^0.5%。上述技術(shù)方案中，所述步驟(2)中，以摩爾計(jì)，CaCl2 =H2O =C2H5OH=I:8:2。上述技術(shù)方案中，所述步驟(3)中，所稀釋是采用蒸餾水稀釋體積10倍以上。本發(fā)明同時(shí)請(qǐng)求保護(hù)由上述制備方法得到的高純度絲素肽。由于上述技術(shù)方案運(yùn)用，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有下列優(yōu)點(diǎn):
1.本發(fā)明開(kāi)發(fā)了一種高純度絲素肽的制備方法，試驗(yàn)證明，本方法的脫鹽率可達(dá)
99.5%，最終得到的絲素肽產(chǎn)品中肽含量可達(dá)94%以上，滿足了藥品、化妝品、醫(yī)用材料等的使用要求，從而解決了本領(lǐng)域的難題，具有創(chuàng)造性。2.本發(fā)明采用CaCl2-H2O-C2H5OH三元體系溶解絲素，在配合電滲析過(guò)濾和透析過(guò)濾，大大提高了脫鹽率，取得了顯著的效果。3.本發(fā)明的制備方法簡(jiǎn)單、易于操作，工藝時(shí)間較短，具有良好的應(yīng)用前景。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述:
實(shí)施例一
一種高純度絲素肽的制備方法，包括如下步驟:
(1)以下腳繭或廢蠶絲為原料，用體積濃度為0.3%的Na2CO3溶液進(jìn)行脫膠精煉；再經(jīng)過(guò)水洗、干燥后，得到絲素；
(2)將上述絲素用CaCl2-H2O-C2H5OH三元體系溶解；以摩爾計(jì)，CaCl2=H2O =C2H5OH=I:8:
2 ；
(3)采用蒸餾水稀釋體積10倍之后，用中性蛋白酶進(jìn)行酶解，酶用量為150活力單位/g絲素，酶解溫度為45°C，時(shí)間120min ；
(4)采用電滲析進(jìn)行過(guò)濾，電流密度為2(Γ25毫安/cm2，直至脫鹽率達(dá)到90%；
(5)采用透析進(jìn)行過(guò)濾:先以自來(lái)水為流動(dòng)水進(jìn)行透析，當(dāng)透析膜的出水的電導(dǎo)率與自來(lái)水的電導(dǎo)率相同時(shí)；再以純水為流動(dòng)水進(jìn)行透析，當(dāng)透析膜的出水的電導(dǎo)率與純水的電導(dǎo)率相同時(shí)，透析結(jié)束；
(6)濃縮、噴霧干燥、滅菌，即可得到所述高純度絲素肽。 測(cè)定上述實(shí)施例的脫鹽率、肽含量、灰分含量和含水量，并與中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)CN1392265A做比較，結(jié)果如下:
Γ^pFf￥^f￥￥￥l^Fir*!.....^ —................................................................................94 OSeO 小于小子 5 O
CN13<>22c>5A Κ 85 15ββ5.10 ο
由上表可見(jiàn)，本發(fā)明的脫鹽率可達(dá)99.5%，最終得到的絲素肽產(chǎn)品中肽含量可達(dá)94.08%，滿足了藥品、化妝品、醫(yī)用材料等的使用要求，從而解決了本領(lǐng)域的難題，具有創(chuàng)造性。接著，測(cè)定實(shí)施例一的絲素肽的理化指標(biāo)和微生物指標(biāo)，結(jié)果如下:
權(quán)利要求
1.一種高純度絲素肽的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)以下腳繭或廢蠶絲為原料，用Na2CO3溶液進(jìn)行脫膠精煉；再經(jīng)過(guò)水洗、干燥后，得到絲素； (2)將上述絲素用CaCl2-H2O-C2H5OH三元體系溶解； (3)稀釋后，用中性蛋白酶進(jìn)行酶解，酶用量為2(Γ200活力單位/g絲素，酶解溫度為25 50°C，時(shí)間 30 300 min ； (4)采用電滲析進(jìn)行過(guò)濾，電流密度為2(Γ25毫安/cm2，直至脫鹽率達(dá)到90%； (5)采用透析進(jìn)行過(guò)濾:先以自來(lái)水為流動(dòng)水進(jìn)行透析，當(dāng)透析膜的出水的電導(dǎo)率與自來(lái)水的電導(dǎo)率相同時(shí)；再以純水為流動(dòng)水進(jìn)行透析，當(dāng)透析膜的出水的電導(dǎo)率與純水的電導(dǎo)率相同時(shí)，透析結(jié)束； (6)濃縮、噴霧干燥、滅菌，即可得到所述高純度絲素肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述步驟(I)中，Na2CO3溶液的體積濃度為0.3 0.5%ο
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述步驟(2)中，以摩爾計(jì)，CaCl2:H2O:C2H5OH= 1:8:2。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述步驟(3)中，所稀釋是采用蒸餾水稀釋體積10倍以上。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法得到的高純度絲素肽。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種高純度絲素肽的制備方法，包括如下步驟(1)以下腳繭或廢蠶絲為原料，用Na2CO3溶液進(jìn)行脫膠精煉；再經(jīng)過(guò)水洗、干燥后，得到絲素；(2)將上述絲素用CaCl2-H2O-C2H5OH三元體系溶解；(3)稀釋后，用中性蛋白酶進(jìn)行酶解；(4)采用電滲析進(jìn)行過(guò)濾；(5)采用透析進(jìn)行過(guò)濾；(6)濃縮、噴霧干燥、滅菌，即可得到所述高純度絲素肽。試驗(yàn)證明，本發(fā)明的脫鹽率可達(dá)99.5%，最終得到的絲素肽產(chǎn)品中肽含量可達(dá)94%以上，滿足了藥品、化妝品、醫(yī)用材料等的使用要求，從而解決了本領(lǐng)域的難題，具有創(chuàng)造性。
文檔編號(hào)C07K1/34GK103243145SQ20131020890
公開(kāi)日2013年8月14日 申請(qǐng)日期2013年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月30日
發(fā)明者盛家鏞, 邢鐵玲, 陳國(guó)強(qiáng) 申請(qǐng)人:蘇州大學(xué)