專利名稱：具有抗腫瘤活性的雌甾氨基酸酯化合物及其合成方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是一種具有抗腫瘤活性的雌留氨基酸酯化合物及其合 成方法。
背景技術(shù)：
2-甲氧基雌二醇Q-ME)作為激素類化合物是雌二醇在體內(nèi)的代謝終產(chǎn)物。近幾 年發(fā)現(xiàn)其具有非常廣譜的抗腫瘤活性，可用來治療多發(fā)性骨髓瘤、前列腺癌、乳腺癌、甲狀 腺癌等疾病，具有廣譜抗腫瘤作用，并且一些已經(jīng)產(chǎn)生抗藥性的癌細(xì)胞對2-ME非常敏感。 2-ME作用機(jī)制上與傳統(tǒng)抗腫瘤藥物不同，其抗腫瘤作用機(jī)制主要是抑制細(xì)胞增值；誘導(dǎo) 腫瘤細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)亡；抗血管生成作用；促進(jìn)細(xì)胞周期停滯；增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對輻射的 敏感性等等。但是2-ME存在水溶性差，生物利用度低等缺陷，限制了它的廣泛應(yīng)用。以2-ME類似物為底物的雌留衍生物是針對生物利用低的缺陷制備的，是既保持 或增強(qiáng)抗腫瘤活性又增加其水溶性的新的抗腫瘤化合物。目前關(guān)于2-ME衍生物的抗腫瘤 研究已有很多，據(jù)Abby Ho等人報(bào)道，2-ME 17位羥基與甘氨酸羧基成酯后的化合物保留了 2-ME抗腫瘤活性。基于該研究報(bào)道和雌二醇的構(gòu)效關(guān)系可知若在母核A環(huán)及B環(huán)進(jìn)行結(jié) 構(gòu)修飾，將會使其抗腫瘤活性降低，所以在母核C環(huán)及D環(huán)上的修飾就成為了改善2-ME活 性及水溶性的主要研究方向，其中D環(huán)上的修飾相對而言更具有吸引力。文獻(xiàn)報(bào)道，17位羥 基被F取代后，其化合物抗腫瘤活性消失，而當(dāng)被亞甲基取代后，其化合物保持與2-ME相當(dāng) 的抗腫瘤活性(Abby Ho等，2006)，因此通過2-ME類似物17位上進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，更有希望 得到既保持或增強(qiáng)抗腫瘤活性又增加其水溶性的新的抗腫瘤化合物，從而提高其生物利用 度。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種具有抗腫瘤活 性的雌留氨基酸酯化合物及其合成方法，可有效解決具有抗腫瘤活性的雌留氨基酸酯化合 物的制備問題。本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，該化合物是由氨基酸或小分子肽類和留體母核、化合 物中間體制成，所說的雌留氨基酸酯化合物的分子結(jié)構(gòu)通式為
權(quán)利要求
1. 一種具有抗腫瘤活性的雌留氨基酸酯化合物，其特征在于，該化合物是由氨基酸或 小分子肽類和留體母核、化合物中間體制成，所說的雌留氨基酸酯化合物的分子結(jié)構(gòu)通式 為
2.權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的雌留氨基酸酯化合物的合成方法，其特征在 于，該雌留氨基酸酯化合物的制備方法是(1)、在_5°C -15°C，將氨基酸或小分子肽類溶解于質(zhì)量濃度為8 % -10 %的氫氧化鈉 水溶液或者碳酸氫鈉飽和溶液中，每Iml的質(zhì)量濃度為8% -10%的氫氧化鈉水溶液溶解 2. 5mmol的氨基酸或小分子肽類或者每Iml碳酸氫鈉飽和溶液中溶解0. 2mmol氨基酸或小 分子肽類，得溶解液，邊攪拌邊用氨基酸或小分子肽類摩爾數(shù)的1-1. 5倍量的氯甲酸芐酯 以1滴/3-10秒的速度滴加到溶解液中進(jìn)行反應(yīng)，若將氨基酸或小分子肽類溶解于質(zhì)量濃 度為8% -10%的氫氧化鈉水溶液中時(shí)，在溶解液中需滴加氫氧化鈉水溶液保持PH = 8 9，滴完，置于10°C -30°C下，攪拌反應(yīng)至用茚三酮為顯色劑顯色至無紫色，或做薄層檢測， 薄層檢測的目的在于，測定溶液是否反應(yīng)完全，只有反應(yīng)完全后，才可進(jìn)行下一步的操作， 以下同，測得完全反應(yīng)后，再每次用反應(yīng)溶液體積0. 5-1. 3倍量的乙醚洗滌3次，棄去乙醚， 得水相，水相用質(zhì)量濃度為30% -40%的濃鹽酸調(diào)PH為1-3，出現(xiàn)乳白色固體，對出現(xiàn)乳白 色固體后的液體每次用與乙醚同量的乙酸乙酯萃取3次，合并，合并液依次用每次與乙醚 同量的蒸餾水洗滌2次、飽和食鹽水洗滌1次，再以無水硫酸鎂干燥6-M小時(shí)，抽濾，濾液 減壓濃縮，用體積比為1 2-5的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶劑為流動(dòng)相，過層析柱純 化或過柱色譜純化，得純化的化合物；O)、在10-30°C，將摩爾比為1-1.2 1的純化的化合物和甾體母核的混合物溶解于 反應(yīng)溶劑中，每IOOml反應(yīng)溶劑中溶解2mm0l-5mm0l留體母核，邊攪拌邊先后加入縮合劑1， 3- 二環(huán)己基碳二亞胺和催化劑4- 二甲氨基吡啶，留體母核和1，3_ 二環(huán)己基碳二亞胺的摩 爾比為1 1-1.5 ;4-二甲氨基吡啶和1，3_ 二環(huán)己基碳二亞胺的摩爾比為1 30-100，攪 拌反應(yīng)IOmin后，補(bǔ)加上述縮合劑1，3-二環(huán)己基碳二亞胺量的0. 4-0. 8倍量的另備的縮合 劑1，3_二環(huán)己基碳二亞胺，以使留體母核完全反應(yīng)，攪拌10-20小時(shí)，做薄層檢測，過濾，濾 液減壓濃縮，用體積比為1 2-5的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶液為流動(dòng)相過柱色譜純化，或用乙酸乙酯溶解，過濾，棄去固體，濾液減壓濃縮，用甲醇或乙醇重結(jié)晶純化，純化 后即得化合物中間體，其分子結(jié)構(gòu)通式為
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的雌留氨基酸酯化合物的合成方法，其特征 在于，具體步驟如下(1)、N-芐氧羰基-β -丙氨酸的制備在_5°C，將IOmmol的β -丙氨酸溶解于4. Oml質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉水溶液中， 得溶解液，邊攪拌邊用Hmmol的氯甲酸芐酯以1滴/4秒的速度滴加到溶解液中進(jìn)行反應(yīng)， 并滴加質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉水溶液保持PH為8，滴完，置于10°C下，攪拌反應(yīng)15小 時(shí)，用茚三酮為顯色劑顯色無紫色，再用5ml/次的乙醚洗滌3次，棄去乙醚，得水相，水相用 質(zhì)量濃度為30%的濃鹽酸調(diào)PH至3，出現(xiàn)乳白色固體，對出現(xiàn)乳白色固體后的液體用5ml/ 次的乙酸乙酯萃取3次，合并，合并液依次用5ml/次的蒸餾水洗滌2次、5ml的飽和食鹽水 洗滌1次，再用無水硫酸鎂干燥10小時(shí)，抽濾，濾液減壓濃縮，得淡黃色油狀物，以體積比為 1 3的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶劑為流動(dòng)相，過層析柱純化，得白色固體N-芐氧碳 基-β-丙氨酸；O)、2-甲氧基-3-芐氧基-17 β -羥基-1，3，5 (10)-雌三烯-17-(N-芐氧羰基)-β -丙 氨酸酯的制備在10°C，將3. 2mmol的N-芐氧羰基-β -丙氨酸和3. Ommol的2-甲氧基-3-芐氧基-1，3，5 (10)-雌三烯-17 β -醇溶于75ml 二氯甲烷中，邊攪拌邊先后加入3. Ommol縮合 劑1，3- 二環(huán)己基碳二亞胺和0. 09mmol催化劑4- 二甲氨基吡啶，攪拌反應(yīng)IOmin后，補(bǔ) 加1.5mm0l縮合劑1，3-二環(huán)己基碳二亞胺，以使2-甲氧基-3-芐氧基-1，3，5 (10)-雌三 烯-17 β -醇完全反應(yīng)，攪拌10小時(shí)，做薄層檢測，過濾，濾液減壓濃縮，得淡黃色油狀物，用 體積比為1 3的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶液為流動(dòng)相過柱色譜純化，得化合物中 間體2-甲氧基-3-芐氧基-17 β -羥基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-芐氧羰基)_ β -丙氨 酸酯；(3)、2_甲氧基-3，17 β - 二羥基-1,3,5 (10)-雌三烯-17- β -丙氨酸酯的制備在60°C，將1. 64g2-甲氧基-3-芐氧基-17 β -羥基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-芐氧 羰基)-β -丙氨酸酯溶于無水甲醇中，溶解后，加入0. 82g的10%鈀碳催化劑，加氫至壓力 為50I^i，反應(yīng)4小時(shí)，薄層檢測后，過濾，濾液減壓濃縮，得灰白色固體，用體積比為1 2 的甲醇和乙酸乙酯配制的混合溶液為流動(dòng)相過柱色譜純化，得2-甲氧基-3，17 β - 二羥 基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- β -丙氨酸酯。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的雌留氨基酸酯化合物的合成方法，其特征 在于，具體步驟如下(1)、N-芐氧羰基-L-苯丙氨酸的制備在-3°C，將IOmmol的L-苯丙氨酸溶解于4. Oml質(zhì)量濃度為9%的氫氧化鈉水溶液中， 得溶解液，邊攪拌邊用Hmmol的氯甲酸芐酯以1滴/5秒的速度滴加到溶解液中進(jìn)行反應(yīng)， 并滴加質(zhì)量濃度為9%的氫氧化鈉水溶液保持PH為8，滴完，置于15°C下，攪拌反應(yīng)15小 時(shí)，做薄層檢測，測得溶液完全反應(yīng)后，再用5ml/次的乙醚洗滌3次，棄去乙醚，得水相，水 相用質(zhì)量濃度為35%的濃鹽酸調(diào)PH至2，出現(xiàn)乳白色固體，對出現(xiàn)乳白色固體后的液體用 5ml/次的乙酸乙酯萃取3次，合并，合并液依次用5ml/次的蒸餾水洗滌2次、5ml的飽和食 鹽水洗滌1次，再以無水硫酸鎂干燥15小時(shí)，抽濾，濾液減壓濃縮，得淡黃色油狀物，以體 積比為1 4的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶劑為流動(dòng)相，過柱色譜純化，得N-芐氧碳 基-L-苯丙氨酸；(2)、16α -乙基-2-甲氧基-3-芐氧基-17 β -羥基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-芐氧 羰基)-L-苯再氨酸酯的制備在15°C，將3. 2mmol的N-芐氧羰基-L-苯丙氨酸和3. Ommol的16 α-乙基-2-甲 氧基-3-芐氧基1，3，5 (10)-雌三烯-17 β -醇溶于75ml 二氯甲烷中，邊攪拌邊先后加入 3. Ommol縮合劑1，3_ 二環(huán)己基碳二亞胺和0. 09mmol催化劑4- 二甲氨基吡啶，攪拌反應(yīng) IOmin后，補(bǔ)加1. 8mmol縮合劑1，3- 二環(huán)己基碳二亞胺，以使16 α -乙基-2-甲氧基-3-芐 氧基1，3，5 (10)-雌三烯-17 β -醇完全反應(yīng)，攪拌15小時(shí)，做薄層檢測，過濾，濾液減壓濃 縮，得淡黃色油狀物，用體積比為1 4的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶液為流動(dòng)相過柱 色譜純化，得化合物中間體16 α -乙基-2-甲氧基-3-芐氧基-17 β -羥基-1，3，5 (10)-雌 三烯-17- (N-芐氧羰基)-L-苯丙氨酸酯；(3)、16α -乙基-2-甲氧基-3，17 β - 二羥基-1,3,5 (10)-雌三烯-17-L-苯丙氨酸酯 的制備在60°C，將1.97g 16 α-乙基-2-甲氧基-3-芐氧基-17 β -羥基_1，3，5 (10)-雌三 烯-17-(N-芐氧羰基)-L-苯丙氨酸酯溶于無水乙醇中，溶解后，加入0. 95g的10%鈀碳(Pd/C)催化劑，加氫至壓力為55I^i，反應(yīng)4. 5小時(shí)，薄層檢測后，過濾，濾液減壓濃縮，得灰 白色固體，用體積比為1 5的乙酸乙酯石油醚配制的混合溶液為流動(dòng)相過柱色譜純化， 得16 α-乙基-2-甲氧基-3，17 3-二羥基-1，3，5(10)-雌三烯-17-1^-苯丙氨酸酯。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的雌留氨基酸酯化合物的合成方法，其特征 在于，具體步驟如下(1)、N-芐氧羰基-L-亮氨酸的制備在2°C，將IOmmol的L-亮氨酸溶解于4. Oml質(zhì)量濃度為8%的氫氧化鈉水溶液中，得 溶解液，邊攪拌邊用Hmmol的氯甲酸芐酯以1滴/6秒的速度滴加到溶解液中進(jìn)行反應(yīng)，并 滴加質(zhì)量濃度為8%的氫氧化鈉水溶液保持PH為9，滴完，置于20°C下，攪拌反應(yīng)15小時(shí)， 用茚三酮為顯色劑顯色無紫色，再用5ml/次的乙醚洗滌3次，棄去乙醚，得水相，水相用質(zhì) 量濃度為37%的濃鹽酸調(diào)PH至1，出現(xiàn)乳白色固體，對出現(xiàn)乳白色固體后的液體用5ml/次 的乙酸乙酯萃取3次，合并，合并液依次用5ml/次的蒸餾水洗滌2次、5ml的飽和食鹽水洗 滌1次，再以無水硫酸鎂干燥18小時(shí)，抽濾，濾液減壓濃縮，得淡黃色油狀物，以體積比為 1 4的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶劑為流動(dòng)相，過柱色譜純化，得N-芐氧羰基-L-亮 氨酸；(2)、16α - (N，N- 二甲基)氨甲基_2_甲氧基-3-芐氧基-17 β -羥基-1，3，5 (10)-雌 三烯-17-(N-芐氧羰基)-L-亮氨酸酯的制備在20°C，將3. 2mmol的N-芐氧羰基-L-亮氨酸和3. Ommol的16 α - (N, N- 二甲基)氨 甲基-2-甲氧基-3-芐氧基-1，3，5 (10)-雌三烯-17 β -醇溶于75ml氯仿中，邊攪拌邊先后 加入3. Ommol縮合劑1，3- 二環(huán)己基碳二亞胺和0. 09mmol催化劑4- 二甲氨基吡啶，攪拌反 應(yīng)IOmin后，補(bǔ)加2. Immol縮合劑1，3- 二環(huán)己基碳二亞胺，以使16 α - (N，N- 二甲基)氨甲 基-2-甲氧基-3-芐氧基-1，3，5 (10)-雌三烯-17 β -醇完全反應(yīng)，攪拌10小時(shí)，做薄層檢 測，過濾，濾液減壓濃縮，得淡黃色油狀物，再用乙酸乙酯溶解，過濾，棄去固體，濾液減壓濃 縮，得淡黃色固體，用無水乙醇重結(jié)晶，得化合物中間體16 α _(Ν，Ν-二甲基)氨甲基-2-甲 氧基-3-芐氧基-17 β -羥基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-芐氧羰基)-L-亮氨酸酯；(3)、16α-(N，N-二甲基)氨甲基-2-甲氧基-3，17 β - 二羥基 _1，3，5 (10)-雌三 烯-17-L-亮氨酸酯的制備在20°C，將1.5(^16 0-(隊(duì)^二甲基)氨甲基-2-甲氧基-3-芐氧基-17 β-羥基-1， 3，5 (10)-雌三烯-17- (N-芐氧羰基)-L-亮氨酸酯溶于無水乙醇中，溶解后，加入0. 75g的 10%鈀碳催化劑，加氫至壓力為6(^si，反應(yīng)6小時(shí)，薄層檢測后，過濾，濾液減壓濃縮，得灰 白色固體，用無水甲醇重結(jié)晶，得16α_(Ν，N-二甲基)氨甲基-2-甲氧基_3，17β_ 二羥 基-1，3，5 (10)-雌三烯-17-L-亮氨酸酯。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的雌留氨基酸酯化合物的合成方法，具特征 在于，具體步驟如下(1)、Ν，Ν ‘_ 二芐氧羰基-L-賴氨酸的制備在6°C，將IOmmol的L-賴氨酸溶解于4. Oml質(zhì)量濃度為10 %的氫氧化鈉水溶液中， 得溶解液，邊攪拌邊用Hmmol的氯甲酸芐酯以1滴/7秒的速度滴加到溶解液中進(jìn)行反應(yīng)， 并滴加質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉水溶液保持PH為8，滴完，置于23°C下，攪拌反應(yīng)15小 時(shí)，用茚三酮為顯色劑顯色無紫色，再用5ml/次的乙醚洗滌3次，棄去乙醚，得水相，水相用質(zhì)量濃度為30%的濃鹽酸調(diào)PH至3，出現(xiàn)乳白色固體，對出現(xiàn)乳白色固體后的液體用5ml/ 次的乙酸乙酯萃取3次，合并，合并液依次用5ml/次的蒸餾水洗滌2次、5ml的飽和食鹽水 洗滌1次，再以無水硫酸鎂干燥20小時(shí)，抽濾，濾液減壓濃縮，得淡黃色油狀物，以體積比為 1 4的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶劑為流動(dòng)相，過柱色譜純化，得N，N ‘-二芐氧羰 基-L-賴氨酸；(2),2-甲氧基-3-芐氧基-17β-羥基-1，3，5(10)_雌三烯-17-(N，N‘-二芐氧羰 基)-L-賴氨酸酯的制備在23°C，將1.6mmol的N，N ‘_ 二芐氧羰基-L-賴氨酸和1. 5mmol的2-甲氧基-3-芐 氧基-1，3，5 (10)-雌三烯-17 β -醇溶于35ml氯仿中，邊攪拌邊先后加入1. 5mmol縮合劑 1,3- 二環(huán)己基碳二亞胺和0. 045mmol催化劑4- 二甲氨基吡啶，攪拌反應(yīng)IOmin后，補(bǔ)加 1. 05mmol縮合劑1，3- 二環(huán)己基碳二亞胺，以使2-甲氧基-3-芐氧基-1，3，5 (10)-雌三烯 17 β -醇完全反應(yīng)，攪拌15小時(shí)，做薄層檢測，基本反應(yīng)完全，過濾，濾液減壓濃縮，得淡黃 色油狀物，用體積比為1 4的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶液為流動(dòng)相過柱色譜純化， 得化合物中間體2-甲氧基-3-芐氧基-17 β -羥基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N，N ‘- 二苯 氧羰基)-L-賴氨酸酯；(3)、2_甲氧基-3，17β - 二羥基-1,3,5 (10)-雌三烯-17-L-賴氨酸酯的制備在 25°C，將 1.03g 2-甲氧基 3-芐氧基-17 β 羥基 _1，3，5 (10)-雌三烯-17-(N，Ν‘-二 芐氧碳基)-L-賴氨酸酯溶于無水乙酸乙酯中，溶解后，加入0. 5g的10%鈀碳催化劑，加氫 至壓力為40I^i，反應(yīng)4小時(shí)，薄層檢測后，過濾，濾液減壓濃縮，得灰色固體物，用乙醇為流 動(dòng)相過柱色譜純化，得2-甲氧基-3，17 β - 二羥基-1，3，5 (10)-雌三烯-17-L-賴氨酸酯。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的雌留氨基酸酯化合物的合成方法，其特征 在于，具體步驟如下(1)、N-芐氧碳基D-纈氨酸的制備0°C下，將IOmmolD-纈氨酸溶于50ml此溫度下的碳酸氫鈉飽和溶液中，得溶解液，邊 攪拌邊用Ilmmol的氯甲酸芐酯以1滴/10秒的速度滴加到溶解液中進(jìn)行反應(yīng)，滴完，置于 30°C下，攪拌反應(yīng)15小時(shí)，做薄層檢測，測得溶液完全反應(yīng)后，再用50ml/次的乙醚洗滌3 次，棄去乙醚，得水相，水相用質(zhì)量濃度為30%的濃鹽酸調(diào)PH至3，出現(xiàn)乳白色固體，對出現(xiàn) 乳白色固體后的液體用50ml/次的乙酸乙酯萃取3次，合并，合并液依次用50ml/次的蒸餾 水洗滌2次、50ml的飽和食鹽水洗滌1次，再以無水硫酸鎂干燥7小時(shí)，抽濾，濾液減壓濃 縮，得淡黃色油狀物，以體積比為1 3的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶劑為流動(dòng)相，過 層析柱純化，得N-芐氧羰基-D-纈氨酸；(2)、2_甲氧基-3-芐氧基-17β -羥基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-芐氧羰基)-D-纈 氨酸酯的制備在30°C，將3. 2mmol的N-芐氧羰基-D-纈氨酸和3. Ommol的2-甲氧基-3-芐氧 基-1，3，5 (10)-雌三烯-17 β -醇溶于75ml 二氯甲烷中，邊攪拌邊先后加入3. Ommol縮合 劑1，3-二環(huán)己基碳二亞胺和0. 09mmol催化劑4-二甲氨基吡啶，攪拌反應(yīng)IOmin后，補(bǔ)加 1. 5mmol的縮合劑1，3-二環(huán)己基碳二亞胺，以使2-甲氧基-3-芐氧基-1，3，5 (10)-雌三 烯-17 β -醇完全反應(yīng)，攪拌10小時(shí)，做薄層檢測，過濾，濾液減壓濃縮，得淡黃色油狀物，用 體積比為1 4的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶液為流動(dòng)相過柱色譜純化，得化合物中間體2-甲氧基-3-芐氧基-17 β -羥基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-芐氧羰基)-D-纈氨 酸酯；(3)、2_甲氧基-3，17 β - 二羥基-1,3,5 (10)-雌三烯-17-D-纈氨酸酯的制備在30°C，將1. 53g 2-甲氧基-3-芐氧基-17 β-羥基-1，3，5 (10)-雌三烯-17-(N-芐 氧碳基)-D_纈氨酸酯溶于無水乙醇中，溶解后，加入0. 78g的10%鈀碳催化劑，加氫至壓 力為45I^i，反應(yīng)4小時(shí)，薄層檢測后，過濾，濾液減壓濃縮，得灰白色固體，用無水甲醇重結(jié) 晶，得2-甲氧基-3，17 β - 二羥基-1,3,5 (10)-雌三烯-17-D-纈氨酸酯。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的雌留氨基酸酯化合物的合成方法，其特征 在于，具體步驟如下(1)、N-芐氧碳基-D-丙氨酸的制備在10°C，將IOmmol的D-丙氨酸溶解于4. Oml質(zhì)量濃度為8%的氫氧化鈉水溶液中，得 溶解液，邊攪拌邊用Hmmol的氯甲酸芐酯以1滴/9秒的速度滴加到溶解液中進(jìn)行反應(yīng)，并 滴加質(zhì)量濃度為8%的氫氧化鈉水溶液保持PH為8，滴完，置于下，攪拌反應(yīng)15小時(shí)， 做薄層檢測，測得溶液完全反應(yīng)后，再用5ml/次的乙醚洗滌3次，棄去乙醚，得水相，水相用 質(zhì)量濃度為30%的濃鹽酸調(diào)PH至3，出現(xiàn)乳白色固體，對出現(xiàn)乳白色固體后的液體用5ml/ 次的乙酸乙酯萃取3次，合并，合并液依次用5ml/次的蒸餾水洗滌2次、5ml的飽和食鹽水 洗滌1次，再以無水硫酸鎂干燥12小時(shí)，抽濾，濾液減壓濃縮，得淡黃色油狀物，以體積比為 1 3的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶劑為流動(dòng)相，過層析柱純化，得N-芐氧羰基-D-丙 氨酸；(2)、2_乙氧基-3-芐氧基-17β -羥基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-芐氧羰基)-D-丙 氨酸酯的制備在27°C，將3. 2mmol的N-芐氧羰基-D-丙氨酸和3. Ommol的2-乙氧基-3-芐氧基-1， 3，5 (10)-雌三烯-17 β醇溶于75ml 二氯甲烷中，邊攪拌邊先后加入3. Ommol縮合劑1，3-二 環(huán)己基碳二亞胺和0. 09mmol催化劑4- 二甲氨基吡啶，攪拌反應(yīng)IOmin后，補(bǔ)加1. 8mmol 的縮合劑1，3- 二環(huán)己基碳二亞胺，以使2-乙氧基-3-芐氧基-1，3，5 (10)-雌三烯-17 β 醇完全反應(yīng)，攪拌18小時(shí)，做薄層檢測，過濾，濾液減壓濃縮，得淡黃色油狀物，用體積比為 1 3的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶液為流動(dòng)相過柱色譜純化，得化合物中間體2-乙 氧基-3-芐氧基-17 β -羥基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-芐氧羰基)-D-丙氨酸酯；(3)、2_乙氧基-3，17β - 二羥基-1,3,5 (10)-雌三烯-17-D-丙氨酸酯的制備在60°C，將1. 466g 2-乙氧基-3-芐氧基-17 β -羥基-1,3,5 (10)-雌三烯-17- (N-芐 氧羰基)-D-丙氨酸酯溶于無水甲醇中，溶解后，加入0. 72g的10 %鈀碳催化劑，加氫至壓 力為50I^i，反應(yīng)4小時(shí)，薄層檢測后，過濾，濾液減壓濃縮，得灰白色固體，用無水甲醇重結(jié) 晶，得2-乙氧基-3，17 β - 二羥基-1,3,5 (10)-雌三烯-17-D-丙氨酸酯。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的雌留氨基酸酯化合物的合成方法，其特征 在于，具體步驟如下(1)、N-芐氧碳基-D-亮氨酸的制備在-5°C，將25mmol的D-亮氨酸溶解于IOml質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉水溶液中，得 溶解液，邊攪拌邊用35mmol氯甲酸芐酯以1滴/4秒的速度滴加到溶解液中進(jìn)行反應(yīng)，并滴 加質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉水溶液保持PH為8，滴完，置于10°C下，攪拌反應(yīng)15小時(shí)，用茚三酮為顯色劑顯色無紫色，再用16ml/次的乙醚洗滌3次，棄去乙醚，得水相，水相用質(zhì) 量濃度為30%的濃鹽酸調(diào)PH至3，出現(xiàn)乳白色固體，對出現(xiàn)乳白色固體后的液體用16ml/ 次的乙酸乙酯萃取3次，合并，合并液依次用16ml/次的蒸餾水洗滌2次、16ml/次的飽和 食鹽水洗滌1次，再用無水硫酸鎂干燥10小時(shí)，抽濾，濾液減壓濃縮，得淡黃色油狀物，以體 積比為1 3的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶劑為流動(dòng)相，過層析柱純化，得N-芐氧碳 基-D-亮氨酸；(2)、2_甲氧基-3-芐氧基-17β -羥基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-芐氧羰基)-D-亮 氨酸酯的制備在20°C，將3. 2mmolN-芐氧碳基-D-亮氨酸和3. Ommol的2-甲氧基3-芐氧基_1，3， 5 (10)-雌三烯-17 β -醇溶于75ml 二氯甲烷中，邊攪拌邊先后加入3. Ommol縮合劑1，3- 二 環(huán)己基碳二亞胺和0. 09mmol催化劑4- 二甲氨基吡啶，攪拌反應(yīng)IOmin后，補(bǔ)加2. Immol縮 合劑1，3_ 二環(huán)己基碳二亞胺，以使2-甲氧基-3-芐氧基-1，3，5(10)-雌三烯-17β-醇 完全反應(yīng)，攪拌10小時(shí)，做薄層檢測，過濾，濾液減壓濃縮，得淡黃色油狀物，再用乙酸乙酯 溶解，過濾，棄去固體，濾液減壓濃縮，得淡黃色固體，用無水乙醇重結(jié)晶，得化合物中間體 1. 2g 2-甲氧基-3-芐氧基-17 β -羥基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-芐氧羰基)-D-亮氨 酸酯；(3)、2_甲氧基-3，17β - 二羥基-1,3,5 (10)-雌三烯-17-D-亮氨酸酯的制備在20°C，將1. 2g 2-甲氧基-3-芐氧基-17 β -羥基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-芐氧 羰基)-D-亮氨酸酯溶于無水乙醇中，溶解后，加入0. 6g的10 %鈀碳催化劑，加氫氣至壓力 為60I^i，反應(yīng)4小時(shí)，薄層檢測后，過濾，濾液減壓濃縮，得到灰白色固體，以無水甲醇重結(jié) 晶，得2-甲氧基-3，17 β - 二羥基-1,3,5 (10)-雌三烯-17-D-亮氨酸酯。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的雌留氨基酸酯化合物的合成方法，其特 征在于，具體步驟如下(1)、N-芐氧羰基-β-丙氨酰-L-組氨酸的制備在8°C，將IOmmol的N-β -丙氨酰-L-組氨酸(L-肌肽)溶解于4. Oml質(zhì)量濃度為 10%的氫氧化鈉水溶液中，得溶解液，邊攪拌邊用Hmmol的氯甲酸芐酯以1滴/8秒的速度 滴加到溶解液中進(jìn)行反應(yīng)，并滴加質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉(NaOH)水溶液保持PH為8， 滴完，置于25°C下，攪拌反應(yīng)12小時(shí)，用茚三酮為顯色劑顯色無紫色，再用7ml/次乙醚洗滌 3次，棄去乙醚，得水相，水相用質(zhì)量濃度為30%的濃鹽酸調(diào)PH至3，出現(xiàn)乳白色固體，對出 現(xiàn)乳白色固體后的液體用7ml/次的乙酸乙酯萃取3次，合并，合并液依次用7ml/次的蒸餾 水洗滌2次、7ml的飽和食鹽水洗滌1次，再以無水硫酸鎂干燥22小時(shí)，抽濾，濾液減壓濃 縮，得淡黃色油狀物，以體積比為1 4的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶劑為流動(dòng)相，過 層析柱純化，得無水透明油狀物N-芐氧羰基-β -丙氨酰-L-組氨酸；(2)、2_甲氧基-3-芐氧基-17β -羥基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-芐氧羰基-β -丙 氨酰)-L-組氨酸酯的制備在25°C，將3. 2mmol的N-芐氧羰基-β -丙氨酰-L-組氨酸和3. Ommol的2-甲氧 基-3-芐氧基-1，3，5 (10)-雌三烯-17 β -醇溶解于75ml無水乙腈中，邊攪拌邊先后加入 3. Ommol縮合劑1，3_ 二環(huán)己基碳二亞胺和0. 09mmol催化劑4- 二甲氨基吡啶，攪拌反應(yīng) IOmin后，補(bǔ)加1.5mm0l縮合劑1，3-二環(huán)己基碳二亞胺，以使2-甲氧基_3_芐氧基_1，3，·5 (10)-雌三烯-17 β -醇完全反應(yīng)，攪拌17小時(shí)，做薄層檢測，過濾，濾液減壓濃縮，得到淡 黃色油狀物，再用乙酸乙酯溶解，過濾，棄去固體，濾液減壓濃縮，得到淡黃色固體，用甲醇 重結(jié)晶，得化合物中間體2-甲氧基-3-芐氧基-17 β -羥基-1，3，5 (10)-雌三烯-17-(N-芐 氧羰基-β -丙氨酰)-L-組氨酸酯；(3)、2_甲氧基-3，17 β - 二羥基-1,3,5 (10)-雌三烯-17-Ν- β -丙氨酰-L-組氨酸酯 的制備在60°C，將1. 50g 2-甲氧基-3-芐氧基-17 β-羥基-1，3，5 (10)-雌三烯-17-(N-芐 氧羰基)-β -丙氨酰-L-組氨酸酯溶于無水甲醇中，溶解后，加入0. 75g的10 %鈀碳催化 劑，加氫至壓力為60I^i，反應(yīng)4小時(shí)，薄層檢測后，過濾，濾液減壓濃縮，得灰白色固體， 以乙酸乙酯重結(jié)晶，得2-甲氧基-3，17 β - 二羥基-1，3，5(10)-雌三烯-17_Ν_β -丙氨 酰-L-組氨酸酯。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有抗腫瘤活性的雌甾氨基酸酯化合物及其合成方法，有效解決具有抗腫瘤活性的雌甾氨基酸酯化合物的制備問題，將氨基酸或小分子肽類溶于氫氧化鈉水溶液或碳酸氫鈉飽和溶液中，用氯甲酸芐酯滴加，反應(yīng)至用茚三酮顯色至無紫色或做薄層檢測，用乙醚洗滌，棄乙醚，水相用鹽酸調(diào)PH，出現(xiàn)乳白色固體，用乙酸乙酯萃取，合并液用蒸餾水、飽和食鹽水洗滌，以無水硫酸鎂干燥，抽濾，濃縮，純化，再和甾體母核混合溶解于反應(yīng)溶劑中，加縮合劑和催化劑，補(bǔ)加另備的縮合劑，做薄層檢測，過濾，濃縮，純化，溶于溶解溶劑中，加鈀碳催化，加氫反應(yīng)，薄層檢測后，過濾，濃縮，純化，本發(fā)明的抗腫瘤活性具有較好的水溶性，對腫瘤細(xì)胞的抑制作用優(yōu)于2-甲氧基雌二醇。
文檔編號C07K5/12GK102079771SQ20101058237
公開日2011年6月1日 申請日期2010年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月10日
發(fā)明者張崇威, 張振中, 張紅嶺, 施秀芳, 馬巖 申請人:鄭州大學(xué)