專利名稱：從柑桔加工副產(chǎn)物中提取黃酮的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從柑桔加工副產(chǎn)物中提取黃酮類物質(zhì)的方法。
背景技術(shù)：
柑桔是我國果樹產(chǎn)業(yè)中的主要水果之一，廣泛分布在浙江、福建、廣東等地。其栽培面積居世界第一，產(chǎn)量居世界第三。柑桔中含有豐富的類黃酮物質(zhì)，目前已鑒定出的類黃酮單體有60多種，可分為黃烷酮、黃酮、黃酮醇、黃烷酮醇等。柑桔中具有豐富的類黃酮物質(zhì)，柑桔類的黃酮類物質(zhì)具有抗氧化、抗腫瘤以及保護心腦血管等多種保健、醫(yī)療功能，具有廣泛應(yīng)用前景。
隨著罐頭和果汁加工產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，產(chǎn)生大量的柑桔加工副產(chǎn)物，為柑桔總黃酮物質(zhì)的提取提供了豐富的原料；柑桔加工副產(chǎn)物由柑桔皮、經(jīng)絡(luò)和加工后的桔渣等組成。
近年來，相關(guān)領(lǐng)域的研究者對于桔皮生物類黃酮的提取已進行了一些研究。但大多集中在橙皮苷和柚皮苷上，對其他一些柑桔類黃酮物質(zhì)的提取利用還不多；國家專利“柑桔類黃酮提取技術(shù)(03135524.2)”對黃酮的提取未進行分類，產(chǎn)物中主要為黃酮苷，而且方法采用復(fù)合溶劑，生產(chǎn)時間長，僅結(jié)晶一次就需72h。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種快速且提取純度高的從柑桔加工副產(chǎn)物中提取黃酮的方法。
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種從柑桔加工副產(chǎn)物中提取黃酮的方法，包括以下步驟1)、原料制備將柑桔加工副產(chǎn)物經(jīng)50～60℃烘干后進行粉碎，得粉碎物；2)、提取將粉碎物在6～15Mpa的壓力和60～80℃的溫度下，用濃度為75～85％的乙醇溶液提取，粉碎物與乙醇溶液的用量比為1千克5～10升，提取時間為10～15min；然后依次經(jīng)過濾、減壓濃縮后得粗提物；
3)、初次分離按照5～15mg粗提物/mL水的比例，將上述粗提物放入水中形成懸浮液；將上述懸浮液上聚酰胺柱，用水清洗至無糖后，再分別用濃度為60～75％的乙醇溶液和乙醇進行梯度洗脫，并分段收集洗脫液；4)、純化將上述不同收集段的洗脫液減壓濃縮后分別上葡聚糖凝膠柱；再分別用洗脫液II進行再次的洗脫；5)、將上述再次洗脫后所得的洗脫液分別進行減壓濃縮即得不同種類的黃酮。
作為本發(fā)明的從柑桔加工副產(chǎn)物中提取黃酮的方法的改進步驟3)的聚酰胺柱選用目數(shù)為60～80的聚酰胺樹脂。
作為本發(fā)明的從柑桔加工副產(chǎn)物中提取黃酮的方法的進一步改進步驟3)過柱流速為1～6BV/h，洗脫液流速為2～8BV/h；步驟4)過柱流速為1～6BV/h；洗脫液流速為2～8BV/h，洗脫液II為甲醇、乙醇、丙酮、或濃度大于30％的甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙酮水溶液。
本發(fā)明從柑桔加工副產(chǎn)物中提取黃酮的方法，采用現(xiàn)代功能食品學(xué)、化學(xué)的先進提取分離技術(shù)手段，因此具有以下優(yōu)點1)、通過增加溫度和增大壓力來提高萃取的效率，提取時間比以往方法明顯縮短；且提高了提取效率，只需提取一次即可，減少了溶劑的用量，從而降低了生產(chǎn)成本。
2)、采用聚酰胺柱進行初步分離，并利用葡聚糖凝膠柱進一步純化，大大提高了產(chǎn)品的純度。采用本發(fā)明的方法可獲得兩種黃酮產(chǎn)物，其中黃酮苷含量達96％以上。多甲氧基黃酮為95％以上。
具體實施例方式
實施例1、一種從柑桔加工副產(chǎn)物中提取黃酮的方法，依次進行以下步驟1)、原料制備將柑桔加工副產(chǎn)物(柑桔皮)經(jīng)55℃烘干后進行粉碎，過40-60目篩，得粉碎物。
2)、提取將0.5kg粉碎物和3L濃度為80％的乙醇溶液裝入萃取釜中，在10Mpa的壓力和70℃的溫度下提取15min。提取完畢后過濾，得上清液；將上清液真空濃縮后得粗提物。
3)、初次分離將上述粗提物6g用400mL水懸浮溶解后形成懸浮液備用。
取處理好的聚酰胺樹脂(60-80目)，以95％乙醇濕法裝柱(內(nèi)徑1cm)，柱體積為30mL。先用乙醇在柱上流動清洗，直至洗出液加適量水無白色渾濁現(xiàn)象為止；再用蒸餾水洗滌，除去乙醇后即得所需的聚酰胺柱。
將上述備用的懸浮液上聚酰胺柱，過柱流速為4BV/h。然后用150～200mL水清洗以除去糖及部分雜質(zhì)，用糖顯色試驗檢測確定無糖即可。
先用濃度為65％的乙醇溶液以5BV/h的流速洗脫，收集0.5-2BV間的洗脫液A；再用100％乙醇以5BV/h的流速洗脫，收集0.5-2BV的洗脫液B。
4)、純化將上述洗脫液A真空濃縮后，用少量濃度為70％乙醇溶液溶解(以溶解即可)，上葡聚糖凝膠柱G15(可加溴酚蘭做指示劑)，過柱流速為2BV/h；再用濃度為70％乙醇溶液進行洗脫，流速3BV/h，待溴酚蘭流出后，收集約0.5BV洗脫液，真空濃縮后即得黃酮苷。測得總量為97.2％，其中橙皮苷含量68.2％。
將上述洗脫液B真空濃縮后，用少量乙醇溶解(以溶解即可)，上葡聚糖凝膠柱LH-20(可加溴酚蘭做指示劑)，過柱流速為2BV/h，再用乙醇進行洗脫，流速3BV/h，待溴酚蘭流出后，棄去前面0.5BV收集大于0.5～1.5BV的洗脫液，真空濃縮后即得多甲氧基黃酮。測得總量為95.2％，其中川皮素為46.5％，桔皮素為35.2％。
實施例2、一種從柑桔加工副產(chǎn)物中提取黃酮的方法，依次進行以下步驟1)、原料制備將柑桔加工副產(chǎn)物(胡柚皮)經(jīng)60℃烘干后進行粉碎，過40-60目篩，得粉碎物。
2)、提取將0.5kg粉碎物和5L濃度為85％的乙醇溶液裝入萃取釜中，在15Mpa的壓力和60℃的溫度下提取10min。提取完畢后過濾，得上清液；將上清液真空濃縮后得粗提物。
3)、初次分離將上述粗提物7.5g，用1000mL水懸浮溶解后形成懸浮液備用。
取處理好的聚酰胺樹脂(60-80目)，以95％乙醇濕法裝柱(內(nèi)徑2.5cm)，柱體積為100mL。先用乙醇在柱上流動清洗，直至洗出液加適量水無白色渾濁現(xiàn)象為止；再用蒸餾水洗滌，除去乙醇后即得所需的聚酰胺柱。
將上述備用的懸浮液上聚酰胺柱，過柱流速為6BV/h。然后用150-200mL水清洗以除去糖及部分雜質(zhì)，可用糖顯色試驗檢測確定無糖即可。用濃度為70％的乙醇以8BV/h的流速洗脫，收集0.5-2BV間的洗脫液A，再用100％乙醇以8BV/h的流速洗脫，收集0.5-2BV的洗脫液B。
4)、純化將上述洗脫液A濃縮后，用少量70％乙醇溶解(以溶解即可)，上葡聚糖凝膠柱G15(可加溴酚蘭做指示劑)，過柱流速為2BV/h，再用60％乙醇進行洗脫，流速3BV/h，待溴酚蘭流出后，收集約0.5BV洗脫液，真空濃縮后即得黃酮苷。測得總量為97.8％，其中柚皮苷為61.2％，新橙皮苷含量20.5％。
將上述洗脫液B濃縮后，用少量乙醇溶解，上葡聚糖凝膠柱LH-20(可加溴酚蘭做指示劑)，過柱流速為2BV/h，再用乙醇進行洗脫，流速3BV/h，待溴酚蘭流出后，棄去前面0.5BV收集大于0.5-1.5BV的洗脫液，真空濃縮后即得多甲氧基黃酮。測得總量為96.1％，其中川皮素為46.2％，桔皮素為36.5％。
實施例3、一種從柑桔加工副產(chǎn)物中提取黃酮的方法，依次進行以下步驟1)、原料制備將柑桔加工副產(chǎn)物(柑桔皮、經(jīng)絡(luò)和加工后的桔渣等的混合物)經(jīng)50℃烘干后進行粉碎，過40-60目篩，得粉碎物。
2)、提取將0.5kg粉碎物和2.5L濃度為75％的乙醇溶液裝入萃取釜中，在6Mpa的壓力和80℃的溫度下提取12min。提取完畢后過濾，得上清液；將上清液真空濃縮后得粗提物。
3)、初次分離將上述粗提物2g用400mL水懸浮溶解后形成懸浮液備用。
取處理好的聚酰胺樹脂(60-80目)，以95％乙醇濕法裝柱(內(nèi)徑1cm)，柱體積為30mL。先用乙醇在柱上流動清洗，直至洗出液加適量水無白色渾濁現(xiàn)象為止；再用蒸餾水洗滌，除去乙醇后即得所需的聚酰胺柱。
將上述備用的懸浮液上聚酰胺柱，過柱流速為4BV/h。然后用150～200mL水清洗以除去糖及部分雜質(zhì)，用糖顯色試驗檢測確定無糖即可。
先用濃度為65％的乙醇溶液以5BV/h的流速洗脫，收集0.5-2BV間的洗脫液A；再用100％乙醇以5BV/h的流速洗脫，收集0.5-2BV的洗脫液B。
4)、純化將上述洗脫液A真空濃縮后，用少量濃度為70％乙醇溶液溶解(以溶解即可)，上葡聚糖凝膠柱G15(可加溴酚蘭做指示劑)，過柱流速為2BV/h；再用濃度為40％乙醇溶液進行洗脫，流速3BV/h，待溴酚蘭流出后，收集約0.5BV洗脫液，減壓濃縮后即得黃酮苷。測得總量為96.8％，其中橙皮苷含量67.2％。
將上述洗脫液B濃縮后，用少量乙醇溶解(以溶解即可)，上葡聚糖凝膠柱LH-20(可加溴酚蘭做指示劑)，過柱流速為2BV/h，再用乙醇進行洗脫，流速3BV/h，待溴酚蘭流出后，棄去前面0.5BV收集大于0.5～1.5BV的洗脫液，減壓濃縮后即得多甲氧基黃酮。測得總量為95.8％，其中川皮素為46.9％，桔皮素為34.5％。
最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的一個具體實施例。顯然，本發(fā)明不限于以上實施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認為是本發(fā)明的保護范圍。
權(quán)利要求
1.一種從柑桔加工副產(chǎn)物中提取黃酮的方法，包括以下步驟1)、原料制備將柑桔加工副產(chǎn)物經(jīng)50～60℃烘干后進行粉碎，得粉碎物；2)、提取將粉碎物在6～15Mpa的壓力和60～80℃的溫度下，用濃度為75～85％的乙醇溶液提取，粉碎物與乙醇溶液的用量比為1千克∶5～10升，提取時間為10～15min；然后依次經(jīng)過濾、減壓濃縮后得粗提物；3)、初次分離按照5～15mg粗提物/mL水的比例，將上述粗提物放入水中形成懸浮液；將上述懸浮液上聚酰胺柱，用水清洗至無糖后，再分別用濃度為60～75％的乙醇溶液和乙醇進行梯度洗脫，并分段收集洗脫液；4)、純化將上述不同收集段的洗脫液減壓濃縮后分別上葡聚糖凝膠柱；再分別用洗脫液II進行再次的洗脫；5)、將上述再次洗脫后所得的洗脫液分別進行減壓濃縮即得不同種類的黃酮。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從柑桔加工副產(chǎn)物中提取黃酮的方法，其特征是所述步驟3)的聚酰胺柱選用目數(shù)為60～80的聚酰胺樹脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從柑桔加工副產(chǎn)物中提取黃酮的方法，其特征是所述步驟3)過柱流速為1～6BV/h；洗脫液流速為2～8BV/h。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的從柑桔加工副產(chǎn)物中提取黃酮的方法，其特征是所述步驟4)過柱流速為1～6BV/h；洗脫液流速為2～8BV/h。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的從柑桔加工副產(chǎn)物中提取黃酮的方法，其特征是所述驟4)的洗脫液II為甲醇、乙醇、丙酮、或濃度大于30％的甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙酮水溶液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從柑桔加工副產(chǎn)物中提取黃酮的方法，包括以下步驟1)原料制備將柑桔加工副產(chǎn)物制成粉碎物；2)提取將粉碎物用乙醇溶液提取，然后依次經(jīng)過濾、減壓濃縮后得粗提物；3)初次分離將粗提物與水形成的懸浮液上聚酰胺柱，進行梯度洗脫，并分段收集洗脫液；4)純化；5)將上述步驟所得的洗脫液分別進行減壓濃縮即得不同種類的黃酮。利用本發(fā)明的方法從柑桔加工副產(chǎn)物中提取黃酮，速度快且提取純度高。
文檔編號C07D311/04GK101066986SQ20071006919
公開日2007年11月7日 申請日期2007年6月5日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月5日
發(fā)明者張玉, 吳慧明 申請人:浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院