專利名稱：用于治療雌激素缺乏癥的2－芳基－3－芳?；讲b]噻吩的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及藥物和有機化學領域，本發(fā)明提供了用于抑制各種雌激素缺乏癥的2—芳基苯并[b]噻吩。
背景技術：
“雌激素缺乏癥”是用于描述由于雌激素水平不足而常常影響婦女的各種疾病的術語。女性雌激素缺乏最常見的原因是由于年齡增長而自然停經，即月經閉止。另外，非自然情況包括外科卵巢切除，化療造成激素停止分泌或藥物作用等均可引起雌激素缺乏。雖然許多病變都可用這一術語進行描述，但雌激素缺乏癥的兩個最重要的結果是醫(yī)療界長期以來最憂慮的骨質疏松癥和心血管病，特別是高脂血癥。
骨質疏松癥描述了一類由多種病因所致的疾病，所有這些病的特征在于每單位體積中骨質的凈損失。骨質損失的結果是骨骼不足以支撐機體，即骨折。骨質疏松癥最常見的類型之一與月經閉止有關。停經后的3—6年內，多數婦女骨骼小梁隔間中的骨質將損失約20％—60％。這一快速損失通常與骨吸收的整體水平增加和以吸收循環(huán)為主的骨形成循環(huán)有關。明顯的結果是骨質的凈損失，骨質疏松癥是閉經后婦女們的常見而又嚴重的疾病。
據估計，僅美國每年就有2500萬婦女遭受該病痛的折磨。骨質疏松癥的結果是對個人的傷害但由于是慢性病和后遺癥需要廣泛和長期的支出(住院治療和家庭護理)也會造成大量經濟損失。特別是那些年長病人。另外，盡管人們認為骨質疏松癥不是威脅生命的疾病，但老年婦女由于髖骨骨折造成的死亡率為20％—30％。這一死亡率中很大一部分與絕經后骨質疏松癥直接相關。
絕經前，多數婦女的心血管發(fā)病率比年齡相當的男性低。但是絕經后，女性心血管發(fā)病率逐漸增加趕上男性發(fā)病率。這一失去保護的現象與雌激素的損失有關，特別是與雌激素失去調節(jié)血脂水平的能力有關。雌激素調節(jié)血脂能力的實質尚不了解，但迄今的證據表明雌激素能提高肝臟低密脂(LDL)受體除去過量膽固醇的能力。另外，雌激素似乎能影響膽固醇的生物合成，對心血管的健康還有其他益處。
雖然雌激素替代治療常用于治療雌激素缺乏癥，但由于許多婦女遭受某些藥物的副作用和用藥形式的不便而受到病人的抱怨。例如，17β—雌二醇由于口服吸收差常通過透皮膏給藥。結果，多數婦女在雌激素替代治療的第一年內便停止服用雌激素。
式Ⅰ化合物或其溶劑化物作為口服藥劑例如鹽酸雷洛昔芬的化學中間體是已知的
其中R和R1獨立地為氫，羥基，C1—C4烷氧基，C3—C6環(huán)烷氧基，OCH2Ar，OCO(C1—C6烷基)，OCOAr；Ar為苯基或取代苯基；和R2為氫，氯，溴，羥基，C1—C6烷氧基，C3—C6環(huán)烷氧基，OCH2Ar，OCO(C1—C6烷基)，OCOAr。
本發(fā)明涉及式Ⅰ化合物新用途的發(fā)現，即，它們是可用于抑制雌激素缺乏癥的藥物。
發(fā)明概要本發(fā)明提供了抑制哺乳動物雌激素缺乏癥的方法，該方法包括給哺乳動物服用有效量的式Ⅰ化合物或其溶劑化物
其中R和R1獨立地為氫，羥基，C1—C6烷氧基，OCH2Ar，OCO(C1—C6烷基)，OCOAr；Ar為苯基或取代苯基；和R2為氫，氯，溴，羥基，C1—C6烷氧基，OCH2Ar，OCO(C1—C6烷基)，OCOAr。
另外，本發(fā)明提供了抑制雌激素缺乏癥的方法，該方法包括給所需哺乳動物服用有效量的式Ⅰ化合物和式Ⅱ化合物或其藥用鹽或溶劑化物，
式Ⅱ中R3和R4獨立地為氫，C1—C6烷基，CO(C1—C6烷基)，或COAr；R5為吡咯烷—1—基，哌啶—1—基，或六亞甲基亞胺—1—基；其中R5中的氮任選地為N—氧化物。
此外，本發(fā)明涉及含有式Ⅰ化合物，或式Ⅰ和式Ⅱ化合物，和藥用賦形劑，稀釋劑或載體的藥物制劑。
發(fā)明詳述本文中用于描述化合物，方法，和制劑中的術語具有通常意義。例如，“C1—C4烷基”是指甲基，乙基，丙基，異丙基，環(huán)丙基，正丁基，仲丁基，叔丁基和環(huán)丁基。除了5—6個碳原子的一價的直鏈、支鏈或環(huán)狀的脂鏈，包括戊基、環(huán)戊基、己基、2—甲基戊基、環(huán)己基等外，術語“C1—C6烷基”還包括C1—C4烷基中所列基團。術語“C1—C4烷氧基”是指甲氧基，乙氧基，正丙氧基，異丙氧基，環(huán)丙氧基，正丁氧基，仲丁氧基，叔丁氧基和環(huán)丁氧基。除了通過一價氧原子相連接的直鏈、支鏈或環(huán)狀的5—6個碳原子的脂肪鏈，包括但不限于戊氧基，環(huán)戊氧基，己氧基，2—甲基戊氧基，環(huán)己氧基等外，術語“C1—C6烷氧基”還包括C1—C4烷氧基中所列基團。
術語“鹵化物”是指氯化物，溴化物或碘化物。
術語“取代苯基”是指帶有1—3個選自下列取代基的苯基C1—C6烷基，C1—C4烷氧基，羥基，硝基，氯，氟，或三(氯或氟)甲基。
雖然式Ⅱ化合物的游離堿也可用于本發(fā)明的方法中，但優(yōu)選制備和使用其藥用鹽。典型的藥用鹽包括式Ⅱ化合物與無機酸或有機酸反應制備的鹽。這些鹽叫做酸加成鹽。因而術語“藥用鹽”是指在所用劑量時無毒而且是藥物文獻中常用的式Ⅱ化合物的酸加成鹽。參見例如Berge，S．M，Bighley，L．D．，和Monkhouse，D．C．，J．Pharm．Sci．，66，1，1977。藥用鹽通常具有比衍生它們的化合物的溶解度更高的特點，因而更適合用于藥物制劑中。
藥用鹽的例子是碘化物，醋酸鹽，苯乙酸鹽，三氟乙酸鹽，丙烯酸鹽，抗壞血酸鹽，苯甲酸鹽，氯代苯甲酸鹽，二硝基苯甲酸鹽，羥基苯甲酸鹽，甲氧基苯甲酸鹽，甲基苯甲酸鹽，o—乙酰氧基苯甲酸鹽，萘—2—苯甲酸鹽，溴化物，異丁酸鹽，苯基丁酸鹽，g—羥基丁酸鹽，b—羥基丁酸鹽，丁炔—1，4—二酸鹽，己炔—1，4—二酸鹽，己炔—1，6—二酸鹽，己酸鹽，辛酸鹽，氯化物，肉桂酸鹽，檸檬酸鹽，癸酸鹽，甲酸鹽，延胡索酸鹽，乙醇酸鹽，庚酸鹽，馬尿酸鹽，乳酸鹽，蘋果酸鹽，馬來酸鹽，羥基馬來酸鹽，丙二酸鹽，扁桃酸鹽，甲磺酸鹽，煙酸鹽，異煙酸鹽，硝酸鹽，草酸鹽，鄰苯二甲酸鹽，對苯二甲酸鹽，磷酸鹽，磷酸氫鹽，磷酸二氫鹽，偏磷酸鹽，焦磷酸鹽，丙炔酸鹽，丙酸鹽，苯丙酸鹽，水楊酸鹽，癸二酸鹽，琥珀酸鹽，辛二酸鹽，硫酸鹽，硫酸氫鹽，焦硫酸鹽，亞硫酸鹽，重亞硫酸鹽，磺酸鹽，苯磺酸鹽，p—溴代苯磺酸鹽，氯代苯磺酸鹽，丙磺酸鹽，乙磺酸鹽，2—羥基乙磺酸鹽，甲磺酸鹽，萘—1—磺酸鹽，萘—2—磺酸鹽，p—甲苯磺酸鹽，二甲苯磺酸鹽，酒石酸鹽等式Ⅱ化合物的鹽。
術語“溶劑化物”代表一組合有一個或多個溶劑分子的化合物，例如帶有一個或多個溶劑分子的式Ⅰ或式Ⅱ化合物。這些溶劑分子是藥物文獻中常用的且對受者無害的，例如水或乙醇。
術語“熱力學堿”是指使酸性底物可逆性的脫質子的堿，或當質子為反應副產物時用作捕捉質子的堿，且其活性足以使所需的反應發(fā)生而不會發(fā)生不需要的反應。熱力學堿的例子包括但不限于下列堿碳酸鹽，碳酸氫鹽和氫氧化物(如鋰，鈉或鉀的碳酸鹽，碳酸氫鹽或氫氧化物)，三—(C1—C4烷基)胺，或含氮芳香雜環(huán)(例如吡啶)。
術語“雌激素缺乏癥”是指由于卵巢功能喪失(天生的，手術或化學造成的)和具體說是卵巢激素，特別是雌激素丟失造成的病變和疾病。由于雌激素的丟失是這類綜合癥的癥狀，每一癥狀都會對通過服用本發(fā)明的化合物來替代丟失的雌激素作出應答。因此，本發(fā)明的化合物和方法可用于和有助于治療或預防雌激素缺乏癥，這些癥狀尤其包括但不限于下列骨質疏松癥，高脂血癥，動脈硬化癥，血管舒縮異常(熱閃)，自身免疫病，皮膚和毛發(fā)異常，心血管疾病和病變，癡呆和阿爾默氏病，抑郁，體重增加或減少，某些類型的糖尿病，不適宜的治療和組織修復，陰道萎縮，尿失禁，雌激素控制基因異常后遺癥。應該承認，并非所有雌激素缺乏癥的病人都會有上述癥狀，因而本發(fā)明具體使用的化合物和方法可以不同，取決于這些癥狀的特點和嚴重程度。
術語“抑制”是指防止，治療，減輕，改善，停止，抑制，減慢或逆轉病程，或使雌激素缺乏癥導致的癥狀或相關癥狀減輕。照此，這些方法適當的話包括醫(yī)學治療(急性)和／或預防(防止)給藥。
此處所用術語“有效量”是指能夠抑制本文所述各種疾病癥狀的本發(fā)明的一種或多種化合物的量。
“藥物制劑”，“藥物載體”，“藥物稀釋劑”，和“藥物賦形劑”意指在含有式Ⅰ化合物的制劑或含有式Ⅰ和式Ⅱ化合物聯(lián)合使用的制劑中，載體、稀釋劑、賦形劑和鹽與制劑中的其它成分配伍且對受者無害。
雖然可以使用本發(fā)明的所有化合物，但某些化合物特別有意義且為優(yōu)選的。例如，優(yōu)選其中R，R1和R2獨立地為羥基或甲氧基的式Ⅰ化合物。更優(yōu)選的是其中R、R1和R2各自為羥基的式Ⅰ化合物。最優(yōu)選的是其中R2在苯甲酰基環(huán)的4位，而R、R1和R2各自為羥基的式Ⅰ化合物，即2—(4—羥基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩。另外，特別優(yōu)選其中R3和R4均為氫，R5為哌啶—1—基的式Ⅱ化合物的鹽酸鹽。該式Ⅱ化合物為[2—(4—羥基苯基)—6—羥基苯并[b]噻吩—3—基][4—[2—(1—哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽，即鹽酸雷洛昔芬。
雖然可使用式Ⅰ和式Ⅱ化合物的聯(lián)合使用的所有制劑和方法，但上述優(yōu)選化合物可能的聯(lián)合使用特別有意義且為優(yōu)選的。最優(yōu)選的是2—(4—羥基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩與鹽酸雷洛昔芬的聯(lián)合使用。
式Ⅰ化合物可從式Ⅲ和Ⅳ化合物按下列反應流程1制備，其中R、R1和R2的定義同前。
式Ⅲ化合物可被式Ⅳ的苯甲酰鹵S—烷基化。該S—烷基化反應在溶劑中，在熱力學堿存在下，在0℃—100℃進行1—24小時。優(yōu)選的溶劑和堿通常分別為乙醇和氫氧化鉀。反應優(yōu)選在環(huán)境溫度進行1—3小時。式Ⅳ化合物的優(yōu)選鹵化物是溴化物。
在適宜的溶劑中，將生成的式Ⅴ化合物于50℃—200℃用酸處理1—24小時使之環(huán)化成式Ⅵ化合物。優(yōu)選溶劑和酸是多磷酸。
然后用式Ⅶ的酰鹵?；舰龌衔?。該酰化反應條件為本領域已知的標準Friedel—Crafts條件，參見例如0lah，Friedel—Craftsand Related Reactions，Interscience Publ．，New York，London，and Sidney，1963。通常，該?；窃诙栊匀軇┲?，在路易斯酸催化劑存在下，在0℃—100℃反應1—24小時。1，2—二氯乙烷一般是優(yōu)選溶劑。優(yōu)選反應溫度和時間通常為0℃—10℃和1—3小時。優(yōu)選的式Ⅶ化合物鹵化物是氯化物，優(yōu)選路易斯酸催化劑一般是氯化鋁。
當任一或所有R、R1和R2為羥基時，優(yōu)選用其中任一或所有R、R1和R2為C1—C6烷氧基、OCH2Ar、OCO(C1—C6烷基)或OCOAr的式Ⅲ、Ⅳ和／或Ⅶ化合物按上述順序進行反應。酰化步驟完成后，通過除去生成的式Ⅰ化合物中的C1—C6烷基、CH2Ar、CO(C1—C6烷基)或COAr部分(保護基)制備出其中任一或所有R、R1或R2為羥基的式Ⅰ化合物。除去保護基的方法可在“Protecting Groups in OrganicSynthesis，2nd Edition”，T．H．Greene，et al．，John Wiley＆Sons，New York，1991第二章或第二章之后的實施例一節(jié)中找到。而且，選擇性除去保護基的方法也可在上述Greene參考書的實施例一節(jié)中找到。
關于對式Ⅰ化合物制備的進一步說明，可參見美國專利4，133，814、5，514，703、5，514，704和5，532，382，這些方法引入本發(fā)明作為參考。
非N—氧化物的式Ⅱ化合物及其藥用鹽也可用上述美國專利以美國專利4，418，068、5，393，763和5，629，425和PCT出版物#US97／04259中的方法制備，這些文獻也在此引入本發(fā)明作為參考。
N—氧化物形式的式Ⅱ化合物可這樣制備將非N—氧化物形式的式Ⅱ化合物溶解或懸浮于過氧化氫稀水溶液與甲醇或乙醇的共溶劑中。該反應的反應條件可以從環(huán)境溫度—100℃反應24—72小時。應注意選擇氧化劑必須小心，許多常用試劑例如鉻酸酐，高錳酸鉀等能氧化氮原子的氧化劑不能用，因為它們也會氧化苯并[b]噻吩中的硫。因此，優(yōu)選溫和試劑如過氧化氫。
此處所述最佳反應時間可通過常規(guī)層析技術監(jiān)測反應進程來確定。而且，本發(fā)明的反應最好是在惰性氣體例如氬或特別是氮氣中進行。溶劑的選擇通常不是關鍵，只要所用溶劑對反應為惰性且足以溶解反應物使所需反應發(fā)生。如果需要的話，中間體和終產物可通過常規(guī)技術例如重結晶或在固體載體例如硅膠或氧化鋁上層析純化。
式Ⅲ，Ⅳ和Ⅶ化合物可以買到或用本領域已知方法制備。
合成方法的討論并不是用來限制本發(fā)明的范圍的，不能進行如此推斷。應用上述化學方法能合成出包括但不限于以下的式Ⅰ化合物
2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—羥基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩；2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩；2—(4—羥基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—羥基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩；2—(4—羥基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩；2—(4—乙酰氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—乙酰氧基苯并[b]噻吩；2—(4—乙酰氧基苯基)—3—(4—乙酰氧基苯甲酰)—6—乙酰氧基苯并[b]噻吩；2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—苯甲酰氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—乙酰氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—環(huán)戊氧基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—環(huán)戊氧基苯并[b]噻吩等。
既用式Ⅰ也用式Ⅱ化合物的制劑和方法包括但不限于下列各兩種化合物的聯(lián)合使用2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩和[2—(4—羥基苯基)—6—羥基苯并[b]噻吩—3—基][4—[2—(1—哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽2—(4—羥基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩和[2—(4—羥基苯基)—6—羥基苯并[b]噻吩—3—基][4—[2—(1—哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩和[2—(4—羥基苯基)—6—羥基苯并[b]噻吩—3—基][4—[2—(1—哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩和[2—(4—羥基苯基)—6—羥基苯并[b]噻吩—3—基][4—[2—(1—哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩和[2—(4—羥基苯基)—6—羥基苯并[b]噻吩—3—基][4—[2—(1—哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽2—(4—羥基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩和[2—(4—羥基苯基)—6—羥基苯并[b]噻吩—3—基][4—[2—(1—哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽2—(4—羥基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩和[2—(4—羥基苯基)—6—羥基苯并[b]噻吩—3—基][4—[2—(1—哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽2—(4—羥基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩和[2—(4—羥基苯基)—6—羥基苯并[b]噻吩—3—基][4—[2—(1—哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽2—(4—羥基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩和[2—(4—羥基苯基)—6—羥基苯并[b]噻吩—3—基][4—[2—(1—哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮N—氧化物2—(4—乙酰氧基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—乙酰氧基苯并[b]噻吩和[2—(4—羥基苯基)—6—羥基苯并[b]噻吩—3—基][4—[2—(1—吡咯烷基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽等。
下列制備和實施例進一步說明本發(fā)明化合物的合成。實施例不是在任何意義上限制本發(fā)明的范圍，也不應該如此推斷。除非另外指明，本制備和實施例中的術語和縮寫具有通常意義。例如“℃”，“N”，“mmol”，“g”，“mL”，“M”，“HPLC”，“mp”，“EA”，“MS”和“1H—NMR”分別指攝氏度，當量或當量濃度，毫摩爾，克，毫升，摩爾或摩爾濃度，高效液相層析，熔點，元素分析，質譜，質子核磁共振。
制備制備12—(3—甲氧基苯硫基)—4’—甲氧基苯乙酮將3—甲氧基苯硫酚(50．0g，0．356mol)溶于700ml乙醇。向此混合物中加入氫氧化鉀顆粒(20g，0．36mol)。少量多次地加入(總量為82．5g，0．36mol)2—溴—4’—甲氧基苯乙酮以使反應溫度維持在25℃左右。反應在環(huán)境溫度下進行3小時。通過蒸發(fā)乙醇使反應終止，得到棕色油。該油在2L水和1．5L乙醚中分層。分離醚層，用水洗滌，用無水硫酸鎂干燥。蒸發(fā)至得到固體。將固體用乙醚∶石油醚(3∶1)的混合物重結晶，得到78．5g標題化合物，為粉色結晶固體。mp53℃—54℃。C16H16O3S的EA計算值C，66．64；H，5．59；O，16．64；S，11．12。實驗值C，66．55；H，5．87；O，16．82；S，10．86。
制備22—(4—甲氧苯基)—6—甲氧基苯并[b]噻吩95℃時將2—(3—甲氧基苯硫基)—4—(甲氧基苯乙酮)(50g，0．173mol)加到250g多磷酸中。攪拌該混合物，溫度升至120℃，小心地加入冰。30分鐘后當溫度升至130℃時再加一些冰，開始生成產品結晶。向反應混合物中加水，過濾收集產物。終產物用乙酸乙酯重結晶，得到30g標題化合物。mp193℃—194℃。C16H14O2S的EA計算值C，71．08；H，5．22；0，11．84；S，11．86。實驗值C，71．03；H，5．30；O，11．81；S，11．60。
實施例實施例12—(4—甲氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩將2—(4—甲氧基苯基)—6—甲氧基苯并[b]噻吩(10g，37 mmol)溶于700 ml 1，2—二氯乙烷，將混合物冷至0℃。向反應液中慢慢地加入4—甲氧基苯甲酰氯(6．31g，37mmol)和氯化鋁(5．07g，38mmol)的混合物。反應在0℃進行2小時，加入冰水終止反應。分離出有機層，水層用氯仿提取。合并有機層，用碳酸氫鈉飽和水溶液和水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾。蒸發(fā)除去揮發(fā)物，得到黃色油，將油溶于500ml甲醇和15ml 5N氫氧化鈉，回流至甲醇被蒸去(30分鐘)。將所得油溶于乙醚，用鹽水洗滌，蒸發(fā)。生成14．6g黃色油，用層析純化。生成13．9g標題化合物，為黃色油。C24H20O4S的EA計算值C，71．25；H，4．98；O，15．82；S，7．93。實驗值C，71．25；H，4．90；O，15．78；S，7．65。MS(EI)m／e=404(M+)。
實施例22—(4—羥基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩將2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩(53g，131mmol)溶于氯仿，冷至10℃。向攪拌著的混合物中加入三溴化硼(75g，296mmol)，反應于環(huán)境溫度進行24小時。將反應物傾入水中終止反應。分離出有機層，過濾，蒸發(fā)至干。將殘余物溶于苯，過濾，蒸發(fā)至干。粗產物在硅膠柱上層析進一步純化，用乙醚—苯(9∶1)洗脫，然后在氧化鋁柱上再層析，用乙醚洗脫，然后用甲醇—乙醚(1∶9)洗脫，蒸除溶劑，生成5．8g標題化合物。mp138℃—140℃。C22H16O4S的EA計算值C，70．20；H，4．28；O，17．00。實驗值C，70．46；H，4．50；O，16．87。
實施例32—(4—甲氧基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩將2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩(19．8g，49mmol)溶于二甲基甲酰胺，加入氫化鈉(10g 50％的油分散液)。將反應物冷卻，慢慢加入乙硫醇(12．4g)。將反應物加熱至65℃—70℃至反應完成。蒸發(fā)除去揮發(fā)物，向反應混合物中加水，所得混合物用乙酸乙酯提取。用水洗滌乙酸乙酯提取液，蒸發(fā)至干。殘余物在硅膠柱上層析，用1500ml苯—乙酸乙酯(99∶1)洗脫，然后用苯—乙酸乙酯(97∶3)洗脫。將含有標題化合物的洗脫液蒸發(fā)至干，殘余物用苯重結晶，得到10．7g標題化合物。mp 114℃—116℃。C23H18O4S的EA計算值C，70．75；H，4．64；O，16．39。實驗值C，70．88；H，4．50；O，16．11。
實施例4
2—(4—羥基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩用實施例2的方法將2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩轉變成標題化合物。
下面給出用于說明本發(fā)明用途的實施例，不應在任何意義上限制本發(fā)明。實施例中的實驗模型是與人類雌激素缺乏相關的兩種主要病變，即高脂血癥和骨質疏松癥。一般步驟從Charles River實驗室(Portage，MI)得到出生75天的雌性Sprague Dawley鼠(體重為200g—225g)。在Charles River實驗室中這些小鼠兩側卵巢已被切除(0VX)或經過Sham外科手術，一周后運來。一到達就將它們每3或4只關在一個金屬籠中，可隨意攝取食物(鈣含量約為0．5％)和水一周。室溫維持在22．2+1．7℃，最低相對濕度為40％。室內光照時間為12小時白天，12小時黑夜。
服藥組織的收集經過一周適應期后(0VX之后兩周)開始每天服用測試化合物或17—α—乙炔雌二醇。除非另外指明，所用劑量為口服，為1％羧甲基纖維素懸浮液或溶于20％環(huán)糊精。每日給小鼠服藥，共服4天。給藥后，將小鼠稱重，用氯胺酮∶甲苯噻嗪(2∶1 v∶v)混合物將其麻醉，通過心內穿刺收集血樣。然后用CO2使小鼠窒息死亡，通過中線切口取出子宮，稱量子宮的凈重。
高脂血癥(膽固醇分析)血樣在環(huán)境溫度下放置2小時使之凝集，在3000rpm離心分離10分鐘得到血清。用Boehringer Mannheim Diagostics高效膽固醇分析儀測定血清膽固醇。簡單地說，膽固醇被氧化成膽甾—4—烯—3—酮和過氧化氫。然后在過氧化物酶存在下過氧化氫與苯酚和4—氨基非那宗反應生成p—醌亞胺染料，分光光度計上于500nm讀取。然后在標準曲線上計算膽固醇濃度。整個分析是用Biomek AutomatedWorkstation自動完成。
與切除卵巢后的對照鼠比較，本發(fā)明的代表性化合物降低膽了固醇濃度。骨質疏松癥一般步驟后，給小鼠服藥35天(每治療組6只)，第36天用二氧化碳使小鼠窒息死亡。35天的周期足以使骨密度最大限度地降低，用此處所述方法測定。小鼠死亡時取出子宮，除去體外組織，測量體重前除去流體內容物，以證實雌激素缺乏與卵巢全部切除有關。由于卵巢切除，子宮重量通常減少約75％。然后將子宮放入10％福爾馬林中性緩沖液中，以便隨后進行組織分析。
切除右股骨，在末梢干端用影像分析程序(NIH影像)將生成的X—射線數字化并分析。用定量計算斷層攝影儀在這些小鼠最接近脛骨的一面進行掃描。
按照上述步驟，給測試動物口服本發(fā)明的代表性化合物和乙炔雌二醇(EE2)的20％羥基丙基β—環(huán)糊精溶液，顯示出陽性結果，即骨無機物密度的損失減少。
當然，式Ⅰ化合物的具體劑量應依具體情況決定。同樣地，給藥途徑是決定具體情況時考慮的一個因素。因而，確切劑量和給藥途徑最好由主治醫(yī)師決定。式Ⅰ化合物的典型日劑量應包括約0．001mg—800mg／天的非毒性劑量。優(yōu)選日劑量通常約為0．001mg—60mg／天。該劑量可根據需要一次給藥或分成兩次或三次分開給藥。
如上所述，式Ⅰ化合物可與式Ⅱ化合物一起使用。再次，兩種藥劑(式Ⅰ和式Ⅱ化合物)的確切量可以變化，取決于病人的癥狀和醫(yī)療狀況。一般地，這種聯(lián)合用藥應包括0．001mg—60mg的式Ⅰ化合物和1．0—120mg的式Ⅱ化合物。優(yōu)選聯(lián)合用藥是含有0．001—1mg的式Ⅰ化合物和59—59．999mg的式Ⅱ化合物。更優(yōu)選的聯(lián)合用藥是含有0．001—0．1mg的式Ⅰ化合物和59．9—59．999mg的式Ⅱ化合物。更加優(yōu)選的聯(lián)合用藥含有0．001—0．1mg優(yōu)選式Ⅰ化合物(其中R、R1和R2獨立地為羥基或甲氧基)和59．9—59．999mg的鹽酸雷洛昔芬。最優(yōu)選的聯(lián)合用藥含有0．001—0．1mg最優(yōu)選的式Ⅰ化合物(其中R、R1和R2各自為羥基)和59．9—59．999mg鹽酸雷洛昔芬。
本發(fā)明的化合物可以多種途徑給藥，包括口服，直腸給藥，透皮，口腔，氣霧劑，局部，眼部，皮下，靜脈，肌肉，鼻內等。這些化合物在服用前優(yōu)選進行配制，劑型選擇由主治醫(yī)師決定。因此，本發(fā)明的另一方面是含有有效量的式Ⅰ化合物或含有有效量的式Ⅰ和式Ⅱ化合物或其藥用鹽和藥用載體，稀釋劑或賦形劑的藥物制劑。該制劑中總的活性成分占制劑重量的0．1％—99．9％。
本發(fā)明的藥物制劑可用本領域熟知的方法和易得到的成分進行制備。例如，式Ⅰ化合物，或式Ⅰ和式Ⅱ化合物，可與常用賦形劑、稀釋劑或載體制成片劑、膠囊、懸浮液、粉末等。適用于該制劑的賦形劑、稀釋劑和載體的例子包括下列填充劑和擴充劑如淀粉，糖，甘露糖醇和硅衍生物；粘合劑如羧甲基纖維素和其它纖維素衍生物，藻酸鹽，明膠和聚乙烯吡咯烷酮；濕潤劑如甘油；崩解劑如碳酸鈣和碳酸氫鈉，延遲溶解劑如石蠟；吸收加速劑如季銨化合物；表面活性劑如鯨蠟醇，甘油單硬脂酸酯；吸附載體如高嶺土和皂土；和潤滑劑如滑石，硬脂酸鈣和硬脂酸鎂，和固體聚乙二醇。
也可將化合物制成適于口服的酏劑或溶液，或適于非腸道例如肌肉、皮下或靜脈給藥的溶液。此外，這些化合物也適于制成緩釋劑型等。制劑可以這樣構成，即可能在一定時間內它們僅僅或優(yōu)選地在特定的生理部位釋放活性成分?？捎美缇酆象w物質或石蠟制成涂層，被膜和保護基質。
制劑實施例下列制劑實施例僅用于說明，不在任何意義上限制本發(fā)明的范圍。制劑1膠囊用下列成分制成硬膠囊<
若是合理的變動，上述制劑可以改變。制劑2片劑用下列成分制成片劑<
>將這些成分混合壓成片。制劑3片劑每片中含有2．5—1000mg活性成分的片劑組成如下
活性成分，淀粉和纖維素通過45目U．S．分子篩并充分混合。聚乙烯吡咯烷酮溶液與所得粉末混合，然后通過14目U．S．分子篩。制成的顆粒在50—60℃干燥，通過18日U．S．分子篩。預先將菝甲基淀粉鈉，硬脂酸鎂和滑石通過60目U．S．分子篩，然后將其加到顆粒中，混合后在壓片機上壓片。制劑4懸浮液每5mL劑量中含有0．1-1000mg藥劑的懸浮液的制備如下
將藥劑通過45目U．S．分子篩，與羧甲基纖維素鈉和糖漿混合形成流暢的糊狀物。用一些水稀釋苯甲酸溶液，香料和色素，然后攪拌下加入。然后加入足夠的水使之達到所需體積，制劑5結合片劑
活性成分，淀粉和纖維素通過45目U．S．分子篩并充分混合．所得粉末與聚乙烯吡咯烷酮溶液混合，然后通過14目U．S．分子篩．制成的顆粒于50—60℃干燥，通過18目U．S．分子篩。預先將羧甲基淀粉鈉，硬脂酸鎂和滑石通過60目U．S．分子篩，然后將其加到顆粒中，混合后在壓片機上壓片。制劑6結合片劑
活性成分，淀粉和纖維素通過45目U．S．分子篩并充分混合。所得粉末與聚乙烯吡咯烷酮溶液混合，然后通過14目U．S．分子篩．制成的顆粒于50—60℃干燥，通過18目U．S．分子篩。預先將羧甲基淀粉鈉，硬脂酸鎂和滑石通過60目U．S．分子篩，然后將其加到顆粒中，混合后在壓片機上壓片。
權利要求
1．一種抑制哺乳動物雌激素缺乏癥的方法，該方法包括給哺乳動物服用有效量的式Ⅰ化合物或其溶劑化物
其中R和R1獨立地為氫，羥基，C1—C6烷氧基，OCH2Ar，OCO(C1—C6烷基)，OCOAr；Ar為苯基或取代苯基；和R2為氫，氯，溴，羥基，C1—C6烷氧基，OCH2Ar，OCO(C1—C6烷基)，OCOAr。
2．根據權利要求1的方法，其中的哺乳動物為婦女。
3．根據權利要求2的方法，所述雌激素缺乏癥為骨質疏松癥。
4．根據權利要求2的方法，所述雌激素缺乏癥為高脂血癥。
5．根據權利要求2的方法，其中的式Ⅰ化合物為R，R1和R2獨立地為羥基或甲氧基的化合物或其溶劑化物。
6．根據權利要求5的方法，其中的式Ⅰ化合物為R2在對位而R、R1和R2均為羥基的化合物或其溶劑化物。
7．根據權利要求2的方法，其中的婦女為將閉經或閉經后婦女。
8．根據權利要求2的方法，其中的式Ⅰ化合物為選自以下的化合物或其溶劑化物2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—羥基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩；2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩；2—(4—羥基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—羥基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩；2—(4—羥基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩；2—(4—乙酰氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—乙酰氧基苯并[b]噻吩；2—(4—乙酰氧基苯基)—3—(4—乙酰氧基苯甲酰)—6—乙酰氧基苯并[b]噻吩；2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—苯甲酰氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—乙酰氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；和2—(4—環(huán)戊氧基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—環(huán)戊氧基苯并[b]噻吩。
9．含有式Ⅰ化合物或其溶劑化物和藥用載體，賦形劑或稀釋劑的藥物制劑
其中R和R1獨立地為氫，羥基，C1—C6烷氧基，OCH2Ar，OCO(C1—C6烷基)，OCOAr；Ar為苯基或取代苯基；和R2為氫，氯，溴，羥基，C1—C6烷氧基，OCH2Ar，OCO(C1—C6烷基)，OCOAr。
10．根據權利要求9的制劑，其中的式Ⅰ化合物選自以下化合物或其溶劑化物2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—羥基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩；2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩；2—(4—羥基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—羥基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩；2—(4—羥基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩；2—(4—乙酰氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—乙酰氧基苯并[b]噻吩；2—(4—乙酰氧基苯基)—3—(4—乙酰氧基苯甲酰)—6—乙酰氧基苯并[b]噻吩；2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—苯甲酰氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—乙酰氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；和2—(4—環(huán)戊氧基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—環(huán)戊氧基苯并[b]噻吩。
11．一種抑制哺乳動物雌激素缺乏癥的方法，該方法包括給所需哺乳動物服用有效量的式Ⅰ化合物或其溶劑化物和式Ⅱ化合物或其藥用鹽或溶劑化物
式Ⅰ中R和R1獨立地為氫，羥基，C1—C6烷氧基，OCH2Ar，OCO(C1—C6烷基)，OCOAr；Ar為苯基或取代苯基；和R2為氫，氯，溴，羥基，C1—C6烷氧基，OCH2Ar，OCO(C1—C6烷基)，OCOAr；
式Ⅱ中R3和R4獨立地為氫，C1—C6烷基，CO(C1—C6烷基)或COAr；R5為吡咯烷—1—基，哌啶—1—基或六亞甲基亞胺—1—基；其中R4中的氮任選地為N—氧化物。
12．根據權利要求11的方法，其中的哺乳動物為婦女。
13．根據權利要求12的方法，所述雌激素缺乏癥為骨質疏松癥。
14．根據權利要求12的方法，所述雌激素缺乏癥為高脂血癥。
15．根據權利要求12的方法，其中的式Ⅰ化合物為其中R、R1和R2獨立地為羥基或甲氧基的化合物或其溶劑化物。
16．根據權利要求15的方法，其中的式Ⅰ化合物為R2在對位，而R、R1和R2均為羥基的化合物或其溶劑化物。
17．根據權利要求16的方法，其中的式Ⅱ化合物為鹽酸鹽，R3和R4均為氫，R5為哌啶—1—基。
18．根據權利要求12的方法，婦女為閉經婦女。
19．根據權利要求12的方法，其中的式Ⅰ化合物選自以下化合物或其溶劑化物2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—羥基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩；2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩；2—(4—羥基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—羥基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩；2—(4—羥基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩；2—(4—乙酰氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—乙酰氧基苯并[b]噻吩；2—(4—乙酰氧基苯基)—3—(4—乙酰氧基苯甲酰)—6—乙酰氧基苯并[b]噻吩；2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—苯甲酰氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—乙酰氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；和2—(4—環(huán)戊氧基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—環(huán)戊氧基苯并[b]噻吩。
20．根據權利要求11的方法，其中所述式Ⅰ化合物為2—(4—羥基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩，所述式Ⅱ化合物為鹽酸雷洛昔芬，而所述雌激素缺乏癥為骨質疏松癥。
21．含有式Ⅰ化合物或其溶劑化物和式Ⅱ化合物或其藥用鹽或其溶劑化物和藥用載體、賦形劑或稀釋劑的藥物制劑
式Ⅰ中R和R1獨立地為氫，羥基，C1—C6烷氧基，OCH2Ar，OCO(C1—C6烷基)，OCOAr；Ar為苯基或取代苯基；和R2為氫，氯，溴，羥基，C1—C6烷氧基，OCH2Ar，OCO(C1—C6烷基)，OCOAr；
式Ⅱ中R3和R4獨立地為氫，C1—C6烷基，CO(C1—C6烷基)，或COAr；R5為吡咯烷—1—基，哌啶—1—基或六亞甲基亞胺—1—基；其中R4中的氮任選地為N—氧化物。
22．根據權利要求21的制劑，含有0．001—60mg其中R，R1和R2獨立地為羥基或甲氧基的式Ⅰ化合物或其溶劑化物，和1—120mg式Ⅱ化合物，式Ⅱ化合物為鹽酸雷洛昔芬。
23．根據權利要求22的制劑，其中所述式Ⅰ化合物為2—(4—羥基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩或其溶劑化物。
24．根據權利要求23的制劑，含有0．001—1mg的式Ⅰ化合物或其溶劑化物，和59—59．999mg的鹽酸雷洛昔芬。
25．根據權利要求24的制劑，含有0．001—0．1mg的式Ⅰ化合物或其溶劑化物，和59． 1—59．999mg的鹽酸雷洛昔芬。
26．根據權利要求21的制劑，其中的式Ⅰ化合物選自以下化合物或其溶劑化物2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—羥基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩；2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩；2—(4—羥基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—羥基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩；2—(4—羥基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩；2—(4—乙酰氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—乙酰氧基苯并[b]噻吩；2—(4—乙酰氧基苯基)—3—(4—乙酰氧基苯甲酰)—6—乙酰氧基苯并[b]噻吩；2—(4—甲氧基苯基)—3—(4—苯甲酰氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；2—(4—乙酰氧基苯基)—3—(4—甲氧基苯甲酰)—6—甲氧基苯并[b]噻吩；和2—(4—環(huán)戊氧基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—環(huán)戊氧基苯并[b]噻吩。
27．一種產品，包括包裝材料和包裝材料中包裹的一種藥物制劑，其中包裝材料中含有標明藥物制劑可被服用以抑制雌激素缺乏癥疾病的標簽，而藥物制劑中含有式Ⅰ(a)化合物或其溶劑化物和下式化合物或其溶劑化物
式Ⅰ(a)中R6、R7和R8獨立地為羥基或甲氧基。
28．根據權利要求27的產品，含有0．001—1mg的式Ⅰ(a)化合物或其溶劑化物，和59—59．999mg的下式化合物或其溶劑化物，
29．根據權利要求28的產品，其中的式Ⅰ(a)化合物為2—(4—羥基苯基)—3—(4—羥基苯甲酰)—6—羥基苯并[b]噻吩或其溶劑化物。
30．根據權利要求29的產品，所述疾病為骨質疏松癥。
全文摘要
本發(fā)明提供了用式(Ⅰ)化合物抑制各種與雌激素缺乏癥有關的疾病、包括骨質疏松癥和高脂血癥的方法。
文檔編號A61K31/445GK1278812SQ98810970
公開日2001年1月3日 申請日期1998年11月9日 優(yōu)先權日1997年11月14日
發(fā)明者G·J·庫利南 申請人:伊萊利利公司