專利名稱：：螺甾烷基糖苷晶體的制作方法
背景技術(shù)：
：本發(fā)明涉及甾族糖苷和使用它們的方法，尤其用作哺乳動(dòng)物的降血膽甾醇劑和抗動(dòng)脈粥樣硬化劑。許多具有降血膽甾醇活性的產(chǎn)物是交聯(lián)的合成聚合物衍生物，如聚苯乙烯。例如，交聯(lián)的、水不溶性的、結(jié)合膽汁酸的聚苯乙烯基樹(shù)脂，例如Cholestyramine(消膽胺)試劑，具有砂質(zhì)“口感”，和因此具有差的可口性。還有，這些樹(shù)脂珠一般具有低的活體內(nèi)功效。因此，這些物質(zhì)的有效降血膽甾醇劑量過(guò)多，一般18-24克配制的產(chǎn)物/1天。具有降血膽甾醇活性的其它已知聚合物包括天然產(chǎn)物脫乙酰殼多糖和脫乙酰殼多糖衍生物，如歐洲專利申請(qǐng)公開(kāi)No.0212145中所述。然而，這些物質(zhì)的有效降血膽甾醇劑量也高。其它已知的血膽甾醇過(guò)多控制劑包括植物提取物如“苜蓿皂草苷”。然而，這些植物提取物的組成可變并含有大量的無(wú)用的化學(xué)物質(zhì)。由于組成的可變性，很難設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)的劑量或預(yù)計(jì)所存在的雜質(zhì)。因此，這一提取物不適合于由人施用。此外，這些提取物的提純也是昂貴的。作為替代物，某些以合成手段生產(chǎn)的純“皂草配基衍生的”化合物類，例如從螺甾烷、螺甾烯或甾醇衍生化合物合成的物質(zhì)，比苜蓿提取物更高效地降低膽甾醇吸收(按重量計(jì))和因而能夠以合理的劑量施用。由于這些物質(zhì)的化學(xué)組成是已知的和因?yàn)樗鼈兡軌蛞愿呒兌群铣桑鼈冞m合于由包括人在內(nèi)的任何溫血?jiǎng)游镉?。然而，除非大量地施用，純?cè)聿菖浠粫?huì)顯著地抑制膽甾醇吸收。只有當(dāng)與另一部分復(fù)合時(shí)皂草配基才具有所需效果。此類皂草配基復(fù)合物的例子是惕告吉寧和薯蕷皂苷配基的復(fù)合物，尤其它們的糖苷類。P.K.肯地亞，Iu.K.法斯蘭考，G.M.高瑞努，V.A.波貝可，I.V.蘇提納，N.E.馬西肯括，藥物雜志(Kim.Pharm.Zh.)，1981，15(9)，55公開(kāi)了3-O-(β-D-吡喃半乳糖基)核柯配基和其作為降血膽甾醇劑的用途。US專利No.4,602,003和4,602,005公開(kāi)了某些甾族糖苷，尤其3-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)惕告吉寧和3-O-(β-D-纖維素二糖基)惕告吉寧以及它們用于控制血膽甾醇過(guò)多的用途。與例如消膽胺相比，3-O-(β-D-纖維素二糖基)惕告吉寧具有優(yōu)異的降血膽甾醇作用。同時(shí)，具有優(yōu)異降血膽甾醇活性的其它甾族糖苷(例如，(3β，5α，25R)-3-[(β-D-纖維素二糖基)氧基]螺甾烷-12-酮)公開(kāi)于多國(guó)指定的以WO94/00480出版的PCT申請(qǐng)PCT/US93/04092(它的公開(kāi)內(nèi)容被引入本文供參考)和1993年4月28日提交的多國(guó)指定的US專利申請(qǐng)流水號(hào)08/054,449(現(xiàn)為PCT/US/00446)，其中公開(kāi)了(3β，5α，25R)-3-[(β-D-纖維素二糖基)氧基]螺甾烷-11-酮的結(jié)晶一水合物和其用作降血膽甾醇劑和抗動(dòng)脈粥樣硬化劑的用途。還有，多國(guó)指定的US專利申請(qǐng)流水號(hào)08/174,100和08/174,099(它們的公開(kāi)內(nèi)容被引入本文供參考)公開(kāi)了另外一些具有優(yōu)異的降血膽甾醇活性的甾族糖苷(例如(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲?；鵠纖維素二糖基)氧基]螺甾烷-12-酮)。因此，雖然已經(jīng)有幾種血膽甾醇過(guò)多控制劑，在本
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中仍然需要尋求替代試劑。本發(fā)明概述本發(fā)明的一個(gè)方面是涉及兩種高度結(jié)晶形式(下文表示為A形式和B形式)的螺甾烷基糖苷，它們可用作降血膽甾醇劑或抗動(dòng)脈粥樣硬化劑。該化合物是(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲?；鵠纖維素二糖基)氧基[螺甾烷-12-酮并具有下面的X-射線衍射D-間距</tables><tablesid="table6"num="006"><tablewidth="489">形式B12個(gè)最大峰的d-間距19.9617.1115.149.977.576.626.095.365.154.904.573.77</table></tables>結(jié)晶形式A螺甾烷基糖苷是優(yōu)選的并具有以下d-間距</tables>結(jié)晶形式B螺甾烷基糖苷是本發(fā)明的另一方面并具有以下d-間距</tables>本發(fā)明的另一方面是涉及用于治療哺乳動(dòng)物的血膽甾醇過(guò)多或動(dòng)脈粥樣硬化的藥物組合物，它包括上述結(jié)晶化合物和藥物上可接受的載體。本發(fā)明的再一方面是涉及通過(guò)對(duì)患有血膽甾醇過(guò)多或動(dòng)脈粥樣硬化的哺乳動(dòng)物施用治療有效量的上述結(jié)晶化合物來(lái)治療哺乳動(dòng)物血膽甾醇過(guò)多或動(dòng)脈粥樣硬化的方法。本發(fā)明的仍一方面是涉及制備上述結(jié)晶化合物的方法。該方法包括從合適的溶劑，優(yōu)選乙酸乙酯或乙腈中結(jié)晶。在該方法的一個(gè)優(yōu)選的方面，(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲酰基]纖維素二糖基)氧基]螺甾烷-12-酮與足夠量的乙酸乙酯或乙腈混合足夠的時(shí)間，經(jīng)冷卻后，獲得結(jié)晶的(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲酰基]纖維素二糖基)氧基]螺甾烷-12-酮。所以，本發(fā)明通過(guò)提供第一種(形式A)不吸濕的、熱力學(xué)穩(wěn)定的、高度結(jié)晶形式的(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲?；鵠纖維素二糖基)氧基]螺甾烷-12-酮和第二種(B形式)結(jié)晶形式的該化合物，它比第三種現(xiàn)有的結(jié)晶形式的該化合物具有更高的熱力學(xué)穩(wěn)定性，得以在本
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中取得突出的進(jìn)步。這些晶體有利于該化合物的發(fā)展和管理審查。還有，本發(fā)明優(yōu)選的結(jié)晶形式因其不吸濕性而具有優(yōu)異的可處理性和配制特性(例如制片)。相比之下，第三種現(xiàn)有的晶體形式的化合物是沒(méi)有可辨別形態(tài)的微晶體。后一種形式具有較低的熱力學(xué)穩(wěn)定性，因?yàn)樗菬o(wú)序晶胞的晶體，并具有蠟狀稠度(歸因于它的吸溫性)使它很難過(guò)濾、處理和配制。從用來(lái)說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施方案的說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)以及從附圖可以更清楚地看出本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)。附圖簡(jiǎn)述圖1顯示了本發(fā)明的第一種優(yōu)選的晶體形式A的X-射線粉末衍射譜圖。圖2顯示了本發(fā)明的第二種晶體形式B的X-射線粉末衍射譜圖。本發(fā)明詳述(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲酰基]纖維素二糖基)氧基]螺甾烷-12-酮具有下式式I的化合物在這里定義為具有式I所示絕對(duì)立體化學(xué)的單一對(duì)映體。根據(jù)本發(fā)明，有兩種高度結(jié)晶形式的式I化合物。通過(guò)參考表征本發(fā)明的高度結(jié)晶形式的X-射線粉末衍射譜圖的圖1(形式A)和圖2(形式B)，能夠更好地理解本發(fā)明。在兩個(gè)譜圖中，強(qiáng)度(Y)(cps)對(duì)2θ(X)(度)描繪。這些X-射線粉末衍射譜是在室溫條件下用西門(mén)子衍射儀Model5000(Madison，Wisconsin)取下的。兩結(jié)晶形式A和B在形態(tài)上呈雙錐形刀片(doublyterminatedblades)的形式。優(yōu)選形式A已被觀察為棒狀或雙錐形刀片形式的混合物，然而，據(jù)信該棒是中間形態(tài)和刀片是最終形態(tài)。因?yàn)橐詢山Y(jié)晶形態(tài)存在的形式A仍然具有同樣的晶格，因而可以相信任何一種形態(tài)都可以單獨(dú)分離出來(lái)。優(yōu)選形式A為不吸溫的。形式B以水合或溶劑合形式存在。還有，兩結(jié)晶形式已被觀察為薄片形。上述化合物的優(yōu)選的高度結(jié)晶形式A可根據(jù)以下操作程序來(lái)制備?；旧霞儍?低于約10％的雜質(zhì)，排除殘留的溶劑如水)的無(wú)定形或結(jié)晶(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲?；鵠纖維素二糖基)氧基]螺甾烷-12-酮通過(guò)以下方法被轉(zhuǎn)化成第一種高度結(jié)晶形式A通過(guò)將該無(wú)定形的或結(jié)晶的物質(zhì)在合適的溶劑，優(yōu)選乙酸乙酯或乙腈中混合(例如溶解或淤漿化)(但很清楚的是轉(zhuǎn)化成所需結(jié)晶形態(tài)包括將無(wú)定形或結(jié)晶物質(zhì)溶解和沉淀所需結(jié)晶形式)，隨后(重)結(jié)晶。優(yōu)選地，化合物對(duì)溶劑的濃度是約1∶100-約1∶1(按重量/體積，wt/Vol)。尤其優(yōu)選的是該濃度是約5∶100-約20∶100。優(yōu)選地，溶解溫度是從室溫(例如17-30℃)至回流溫度變化，而60℃-回流溫度更有效。通常該高溫保持約0.5小時(shí)至24小時(shí)。如果該高溫用于溶解，則讓所得到的懸浮液冷卻至室溫，和將晶體?；s0.5小時(shí)至60小時(shí)，然后通過(guò)普通方法，優(yōu)選過(guò)濾和真空干燥加以收集。此外，起始物質(zhì)可溶于第一種溶劑，如(C1-C6)烷基酮類，THF/環(huán)己烷，(C1-C4)鏈烷醇或氯代烴類如二氯甲烷，優(yōu)選四氫呋喃/環(huán)己烷3∶1，隨后通過(guò)與乙酸乙酯或乙腈接觸而(重)結(jié)晶(例如在蒸餾過(guò)程中用第二種溶劑置換第一種溶劑)。上述化合物的另一種高度結(jié)晶形式B可根據(jù)上述操作程序(包括在前面段落中的替換操作程序)，按照類似方法制備，不同的是使用(C1-C4)鏈烷醇(可以任意性地有至多70％的水)，如乙醇，異丙醇或正丙醇(30-70％)/水(70-30％)，作為重結(jié)晶溶劑。根據(jù)在1993年12月28日提交的多國(guó)指定的US專利申請(qǐng)流水號(hào)08/174,100(它的公開(kāi)內(nèi)容被引入本文供參考)描述的方法來(lái)制備(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲?；鵠纖維素二糖基)氧基]螺甾烷-12-酮。尤其，所要求的化合物可按如下制備(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲?；鵠-2′，2″，3′，3″，6′-五氯乙?；?纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮通過(guò)在約0℃-約100℃(通常在室溫下)和約0.5磅/英寸2(psi)-約50psi(通常為常壓)下，在極性溶劑如甲醇、四氫呋喃、正丙醇或它們的混合物中與親核堿如甲醇鈉或氰化鉀混合約0.25小時(shí)-約2小時(shí)(通常0.5小時(shí))而被脫乙酰基，得到(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲酰基]纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮。(3β，5α，25R)-3-[(β-D-2′，2″，3′，3″，6′-五氯乙酰基-纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮通過(guò)在極性非質(zhì)子傳遞溶劑如二甲基甲酰胺中在氯化亞銅存在下，在室溫下與合適的異氰酸酯(即，異氰酸2-氟苯基酯)混合2小時(shí)-約10小時(shí)而轉(zhuǎn)化成氨基甲?；糠?，產(chǎn)生(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲?；鵠-2′，2″，3′，3″，6′-五氯乙酰基-纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮。-2′，2″，3′，3″，6′-五氯乙酰基-纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮在二氯甲烷和甲醇的混合物中在室溫下用三氟乙酸處理約2小時(shí)-約8小時(shí)，制備(3β，5α，25R)-3-[(β-D-2′，2″，3′，3″，6′-五氯乙酰基-纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮。在無(wú)水的非質(zhì)子傳遞溶劑如氯仿或二氯乙烷中，在催化量的強(qiáng)酸如樟腦磺酸存在下，在回流條件和常壓下使(3β，5α，25R)-3-[(β-D-纖維素二糖基)氧基1-螺甾烷-12-酮與茴香醛二甲基縮醛反應(yīng)約2-約6小時(shí)。在完成縮酮化之后，在約-20℃-約10℃的溫度下添加堿，優(yōu)選胺類堿，如吡啶和酰化劑如氨乙酸酐，隨后在室溫下攪拌約1小時(shí)-約12小時(shí)(通常約2小時(shí))，制備(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-O-[4-甲氧基亞芐基]-2′，2″，3′，3″，6′-五氯乙?；?纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮。(3β，5α，25R)-3-[(七乙?；?β-D-纖維素二糖基)氧基]螺甾烷-12-酮通過(guò)在約40-100℃的高溫(通常在回流溫度下)和約0.5psi-約50psi(通常為常壓)下，在溶劑如甲醇、四氫呋喃、正丙醇或它們的混合物中與親核堿如甲醇鈉或氰化鉀混合約0.25小時(shí)-約3小時(shí)而被脫乙酰基，得到(3β，5α，25R)-3-[(β-D-纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮。通過(guò)在0.5-約4當(dāng)量的氟化鋅存在下，在約20℃-約100℃的溫度下，讓七乙?；?β-D-纖維素二糖基溴化物和(3β，5α，25R)-3-羥基-螺甾烷-12-酮在非質(zhì)子傳遞的無(wú)水反應(yīng)惰性溶劑(例如乙腈)中進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)約0.5-約12小時(shí)而制得(3β，5α，25R)-3-[(七乙?；?β-D-纖維素二糖基)氧基]螺甾烷-12-酮。上述反應(yīng)的起始原料(例如全乙酰基化的糖鹵化物)是容易獲得的或能夠由本
技術(shù)領(lǐng)域：
中的那些熟練人員使用有機(jī)化學(xué)的普通方法容易地合成。尤其，(3β，5α，25R)-3-羥基-螺甾烷-12-酮(即核柯配基)可從SigmaChemicalCompany(西格瑪化學(xué)公司)，圣.路易斯，MO或SteraloidsInc.，威爾頓(Wilton)，N.H.購(gòu)得。還有，從天然產(chǎn)物分離和提純它的方法描述在Rodd’sChemistryofCarbonCompounds(Rodd的碳化合物化學(xué))，S.考菲(S.Coffey)編，11卷，E部，pp1-53，1971。本發(fā)明的化合物是膽甾醇吸收的有效抑制劑，因此適于在哺乳動(dòng)物，尤其人類中作為血膽甾醇過(guò)多控制劑的治療用途。由于血膽甾醇過(guò)多與泛化的心血管、腦血管或末梢血管疾病的發(fā)展有密切的關(guān)系，其次本化合物阻止粥樣硬化(尤其動(dòng)脈粥樣硬化)的發(fā)展。本化合物的血膽甾醇過(guò)多控制活性可由基于標(biāo)準(zhǔn)操作程序的方法來(lái)說(shuō)明。例如，本化合物在抑制膽甾醇腸內(nèi)吸收方面的活體內(nèi)活性可由Melchoir(麥切爾)和Harwell(哈威)(J.LipidRes.(脂類研究期刊)，1985，26，306-315)的操作程序測(cè)定。該活性可由在雄性敘利亞金倉(cāng)鼠體內(nèi)降低膽甾醇吸收的降血膽甾醇劑的量(相對(duì)于對(duì)照物)來(lái)測(cè)定。在4天的時(shí)間讓雄性敘利亞金倉(cāng)鼠服用無(wú)膽甾醇的食物(對(duì)照動(dòng)物)或補(bǔ)充了1％膽甾醇和0.5％膽酸的食物。隨后的一天該動(dòng)物被絕食18小時(shí)，然后服用1.5mL的含有0.25％甲基纖維素、0.6％吐溫(Tween)80和10％乙醇的口服大丸藥(對(duì)照動(dòng)物)或另外還含有所需濃度的待測(cè)試的化合物的口服大丸藥。在大丸藥服用之后，立即讓該動(dòng)物接受第二批1.5mL的含有1％[3H]膽甾醇(2.0μCi/動(dòng)物；210dpm/nmol)和0.5％膽酸的液體狀倉(cāng)鼠食物的口服大丸藥，和然后讓動(dòng)物絕食24小時(shí)。在這第二次絕食時(shí)間過(guò)后，將動(dòng)物殺死，切下肝臟，皂化，然后等分試樣通過(guò)添加過(guò)氧化氫來(lái)脫色，并分析放射性。根據(jù)所測(cè)定的肝臟重量來(lái)計(jì)算總肝臟放射性。膽甾醇吸收率被表達(dá)為大丸藥服用24小時(shí)過(guò)后在肝臟中存在的以口服大丸藥形式服用的總放射活性的百分?jǐn)?shù)。該化合物的抵抗粥樣硬化的效果(即活性和劑量)可由在雄性新西蘭白兔的主動(dòng)脈內(nèi)降低脂質(zhì)沉積的本發(fā)明藥物的量(相對(duì)于對(duì)照物)來(lái)測(cè)定。在1星期的時(shí)間為雄性新西蘭白兔喂含有0.4％膽甾醇和5％花生油的食物(一天一頓喂食)。1星期后一些白兔(對(duì)照組)繼續(xù)喂這些食物而剩余的白兔食用補(bǔ)充了所需濃度的待測(cè)試化合物的食物。8.5星期之后，中斷藥物治療和這些動(dòng)物保持食用含膽甾醇食物達(dá)另外2個(gè)星期之久，然后轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)膽甾醇食物喂養(yǎng)5個(gè)星期。將動(dòng)物殺死，從胸弓(thoracicarch)至髂骨的分支取出主動(dòng)脈。主動(dòng)脈被清除外膜，縱向切開(kāi)和然后按照霍爾曼(Holman)等人所述用蘇丹IV染色(Lab.Invet.(實(shí)驗(yàn)室研究)1958，7，42-47)。被染色表面積的百分?jǐn)?shù)是通過(guò)使用OptimasImageAnalyzingSystem(圖像處理系統(tǒng))由光密度分析法來(lái)進(jìn)行定量。減少的脂質(zhì)沉積可由在與對(duì)照兔比較的藥物治療組中被染色的表面積百分?jǐn)?shù)的減少來(lái)表示。本發(fā)明的化合物可通過(guò)任何將化合物釋放到腸腔的方法施用。這些方法包括口服，十二指腸內(nèi)途徑，等。施用的甾族糖苷的量當(dāng)然取決于所治療的主體，取決于疾病嚴(yán)重程度，取決于施用方式和取決于藥劑師的判斷。然而，有效劑量范圍是0.005-20mg/kg/天，優(yōu)選0.01-5mg/kg/天，最優(yōu)選0.01-1mg/kg/天。對(duì)于平均70kg的人，這應(yīng)該是0.00035-1.4g/天，優(yōu)選0.0007-0.35g/天，最優(yōu)選0.0007-0.07g/天。對(duì)于口服(它是優(yōu)選的)，該藥物組合物可以是溶液，懸浮液，片劑，丸劑，膠囊劑，粉劑，緩釋配制劑和類似形式。取決于預(yù)定施用方式，該藥物組合物可以是固體，半固體或液體劑量形式，如片劑，丸劑，膠囊劑，粉劑，液體劑，懸浮液，或類似形式，優(yōu)選以適合于按精確劑量一次施用的單位劑量形式。該藥物組合物將包括普通的藥物載體或賦形劑和本發(fā)明的化合物作為活性成分。還有，它還可包括其它藥物或藥劑，載體，助劑等。本發(fā)明的藥物組合物可含有0.1-95％的該化合物，優(yōu)選1％-70％的該化合物。在任何情況下，被施用的組合物或配制劑將含有抗血膽甾醇過(guò)多或抗粥樣硬化有效量的本發(fā)明化合物。對(duì)于固體藥物組合物，常用的無(wú)毒固體載體包括，例如，藥物級(jí)的甘露糖醇，乳糖，淀粉，硬脂酸鎂，糖精鈉，滑石，纖維素，葡萄糖，蔗糖，碳酸鎂和類似載體。能夠由以下方法制備液體藥物組合物通過(guò)溶解或分散，或另外制備本發(fā)明的甾族糖苷并讓它任意性地與藥物助劑在載體如水、鹽水、右旋糖水溶液、甘油、乙醇等中混合，從而形成溶液或懸浮液。用一定量的活性成分制備各種藥物組合物的方法是已知的，或?qū)τ诒?br>技術(shù)領(lǐng)域：
中的熟練人員來(lái)說(shuō)是十分清楚的。例如，參見(jiàn)Remington’sPharmaceuticalSciences.(Remington藥物科學(xué))，Mack出版公司，Easter，Pa.，第15版(1975)。實(shí)施例1結(jié)晶(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲?；鵠纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮如下所述(參見(jiàn)制備A1)，(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲?；鵠纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮(468g)從THF/環(huán)己烷(3∶1)中重結(jié)晶。重結(jié)晶之后，將未干燥的餅溶于30℃的8.4升THF中，過(guò)濾和常壓蒸餾(即在環(huán)境壓力下)，用乙酸乙酯置換餾出物。當(dāng)達(dá)到12升的最終體積且餾出物具有乙酸乙酯的折光指數(shù)時(shí)，混合物被冷卻至20-25℃，?；灰梗^(guò)濾和干燥，獲得363.3g的白色至灰白色固體形式A的標(biāo)題化合物，它屬于薄片形式并是棒狀和雙錐形刀片形態(tài)的混合物。這一優(yōu)選的晶體(主要如上所述制備)的代表性X-射線衍射圖給出在圖1。按照類似的方法，用乙腈替代乙酸乙酯來(lái)制備實(shí)施例1的產(chǎn)物。實(shí)施例2結(jié)晶(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲?；鵠纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮將(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲?；鵠纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮(5g)溶于30℃的50mlTHF和100ml乙醇中，和常壓蒸餾(即在環(huán)境壓力下)。當(dāng)達(dá)到75ml的最終體積時(shí)，將混合物冷卻至0-5℃，?；恍r(shí)，過(guò)濾和干燥，獲得4.82g的白色至灰白色固體形式B的標(biāo)題化合物，它是具有雙錐形刀片形態(tài)的薄片。這一晶體(主要如上所述制備)的代表性X-射線衍射圖給出在圖2。按照類似的方法，用異丙醇替代乙醇來(lái)制備實(shí)施例2的產(chǎn)物。制備A1(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲?；鵠纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮氯乙酸酯的去保護(hù)將甲醇鈉(250mg)加入到(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲?；鵠-2′，2″，3′，3″，6′-五氯乙酰基-纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮(25g，17.7mmol)在THF(75mL)和甲醇(75mL)中的溶液中。在室溫下保持20分鐘之后，通過(guò)添加乙酸(0.5mL)來(lái)停止反應(yīng)。在真空下溶劑體積減少一半和添加另外75mL的甲醇。在劇烈攪拌下，通過(guò)添加水(75mL)沉淀產(chǎn)物。過(guò)濾固體，用1∶1甲醇∶水洗滌并干燥，得到15g粗產(chǎn)物。通過(guò)從THF/環(huán)己烷/乙酸(3∶1∶0.1)中重結(jié)晶來(lái)提純產(chǎn)物。m.p.272-273℃。FABMS1051(M＋Na)+。對(duì)于C53H70F2N2O16＋2H2O的分析計(jì)算值C59.76；H7.03；N2.62。實(shí)測(cè)值C59.91；H7.32；N2.61。制備B1(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲?；鵠-2’，2”，3’，3”，6’-五氯乙?；w維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮使用氯化亞銅的氨基甲?；谑覝叵聦⒙然瘉嗐~(3.48g，36mmol)加入到(3β，5α，25R)-3-[(β-D-2′，2″，3′，3″，6′-五氯乙酰基-纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮(10.0g，8.8mmol)和異氰酸2-氟苯基酯(4mL，36mmol)在干燥二甲基甲酰胺(60mL)中的溶液中。3小時(shí)后，混合物用乙酸乙酯(100mL)稀釋并用1NHCl(2×)和鹽水(1×)洗滌，干燥(硫酸鈉)，過(guò)濾，和真空濃縮。將殘余物溶于二氯甲烷(50mL)中并添加甲醇(75mL)。真空除去二氯甲烷，和固體物從甲醇中沉淀下來(lái)。過(guò)濾固體，用甲醇洗滌和干燥，獲得10.6g無(wú)色固體形式的產(chǎn)物(86％)。m.p.212-214℃。FABMS1433(M＋Na)+。1HNMR(250MHz，CDCl3)δ7.9(m，2H)；7.05(m，8H)；5.35(dd，1H，J＝8.0，7.0Hz)；5.28(dd，1H，J＝9.0，8.0Hz)；5.15(dd，1H，J＝9.0，9.0Hz)；5.05(dd，1H，J＝9.0，8.0Hz)；4.98(dd，1H，J＝8.0，7.0Hz)；4.72(d，1H，J＝9.0Hz)；4.6(m，3H)；4.4-3.4(m，18H)；3.35(dd，1H，J＝10.0，9.0Hz)；2.5(dd，1H，J＝8.0，7.0Hz)；2.35(dd，1H，J＝13.0，12.0Hz)；2.1(m，1H)；2.1-1.1(m，22H)；1.05(d，3H，J＝7.0Hz)；1.02(s，3H)；0.85(s，3H)；0.77(d，3H，J＝7.0Hz).制備Cl(3β，5α，25R)-3-[(β-D-2′，2″，3′，3″，6′-五氯乙?；?纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮對(duì)-甲氧基亞芐基水解將三氟乙酸(19mL)加入到(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-O-[4-甲氧基亞芐基[-2′，2″，3′，3″，6′-五氯乙?；?纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮(23.7g，0.019mol)在二氯甲烷(150mL)和甲醇(50mL)中的溶液中。4小時(shí)后，混合物用水(3×)，NaHCO3(2×)和鹽水(1×)洗滌，干燥(Na2SO4)，濃縮。將殘余物溶于最少量的乙酸乙酯中和用己烷沉淀。過(guò)濾固體，用己烷洗滌和干燥，獲得19.2g無(wú)色固體形式的產(chǎn)物(90％)。m.p.224-226℃。FABMS1159(M＋Na)+。1HNMR(250MHz，CDCl3)δ5.2(dd，1H，J＝9.0，9.0Hz)；5.1(dd，1H，J＝9.0，9.0Hz)；4.95(m，2H)；4.6(m，3H)；4.2-3.4(m，21H)；3.35(dd，1H，J＝9.0，9.0Hz)；3.1(bs，1H)；2.5(dd，1H，J＝8.0，7.0Hz)；2.35(dd，1H，J＝13.0，12.0Hz)；2.1(m，1H)；1.9-1.1(m，22H)；1.05(d，3H，J＝7.0Hz)；1.02(s，3H)；0.85(s，3H)；0.77(d，3H，J＝7.0Hz).制備D1(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-O-[4-甲氧基亞芐基]-2′，2″，3′，3″，6′-五氯乙?；?纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮對(duì)-甲氧基亞芐基的形成和氯乙?；瘜⒄聊X磺酸(3g)加入到(3β，5α，25R)-3-[(β-D-纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮(50g，0.066mol)和茴香醛二甲基縮醛(50mL，0.29mol)在1，2-二氯乙烷(1500ml)中的混合物中。將該懸浮液加熱至回流溫度和蒸發(fā)出20OmL的溶劑。在回流溫度下4小時(shí)后，將凝膠化混合物冷卻至0℃并用吡啶(160mL，1.99mol)和氯乙酸酐(170g，1mmol)處理。讓反應(yīng)升溫至室溫，和2小時(shí)后，混合物用1NHCl(3×)，NaHCO3(1×)和鹽水(1×)洗滌，干燥(硫酸鈉)，過(guò)濾和真空濃縮。將殘余物溶于最少量的乙酸乙酯中和用己烷沉淀。過(guò)濾固體，用己烷洗滌和干燥，獲得78.7g無(wú)色固體形式的產(chǎn)物(95％)。m.p.249-251℃。FABMS1277(M＋Na)+。1HNMR(250MHz，CDCl3)δ7.35(d，2H，J＝9.0Hz)；6.88(d，2H，J＝9.0Hz)；5.45(s，1H)；5.3(m，2H)；5.0(m，2H)；4.7(d，1H，J＝7.0Hz)；4.6(m，2H)；4.3(m，2H)；4.2(dd，1H，J＝11.0，6.0Hz)；4.2-3.5(m，14H)；3.8(s，3H)；3.35(dd，1H，J＝11.0，10.0Hz)；2.5(dd，1H，J＝8.0，7.0Hz)；2.35(dd，1H，J＝13.0，12.0Hz)；2.1(m，1H)；2.1-1.0(m，25H)；1.05(d，3H，J＝7.0Hz)；1.02(s，3H)；0.85(s，3H)；0.77(d，3H，J＝7.0Hz).制備E1(3β，5α，25R)-3-[(β-D-纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮脫酰化將甲醇鈉(50mg)加入到(3β，5α，25R)-3-[(七乙?；?β-D-纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮(5g，4.77mmol)在THF(75mL)和甲醇(25mL)中的溶液中。將該溶液加熱至溫和地回流1小時(shí)。將混合物冷卻，濃縮至25mL。添加甲醇(10mL)和水(10mL)，通過(guò)真空過(guò)濾收集沉淀物并用1∶1甲醇∶水洗滌。產(chǎn)物在真空烘箱中干燥(80℃)，獲得2.9g無(wú)色固體形式的標(biāo)題化合物(80％)。m.p.＞250℃。FABMS755(M＋H)+。對(duì)于C39H62O14＋2H2O的分析計(jì)算值C59.22；H8.41。實(shí)測(cè)值C59.54；H8.64。制備F1(3β，5α，25R)-3-[(七乙?；?β-D-纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮氟化鋅促進(jìn)的糖苷化(3β，5α，25R)-3-羥基-螺甾烷-12-酮(3.0g，6.97mmol)和無(wú)水氟化鋅(2.88g，27.9mmol)在干燥乙腈(175mL)中的懸浮液通過(guò)蒸餾除去75mL的乙腈來(lái)進(jìn)行干燥。讓?xiě)腋∫豪鋮s，添加七酰基-β-D-纖維素二糖基溴化物(9.75g，13.9mmol)，所得到的懸浮液在65℃下加熱3小時(shí)。在冷卻至室溫后，加入二氯甲烷(150mL)。攪拌10分鐘和過(guò)濾。濾液真空濃縮得到10g粗產(chǎn)物。將這一物質(zhì)溶于8∶2氯仿∶甲醇中，預(yù)吸附在硅膠上和通過(guò)快速色譜分離法(洗脫液1∶1乙酸乙酯∶己烷)加以提純，得到6.81g(93％)的標(biāo)題化合物。m.p.220-221℃。FABMS1049(M＋H)+。對(duì)于C53H76O21＋0.5H2O的分析計(jì)算值C60.11；H7.34。實(shí)測(cè)值C59.90；H7.24。應(yīng)該理解，本發(fā)明并不限于以上給出和描述的特定實(shí)施方案，在不脫離由如下權(quán)利要求書(shū)所定義的新型概念的精神和范圍的情況下可作各種變化和改進(jìn)。權(quán)利要求1.一種結(jié)晶螺甾烷基糖苷，包括具有下面的X-射線衍射D-間距的(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲?；鵠纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮</tables>或</tables>2.根據(jù)權(quán)利要求1所要求的結(jié)晶螺甾烷基糖苷，它具有以下的X-射線衍射d-間距3.根據(jù)權(quán)利要求2所要求的結(jié)晶螺甾烷基糖苷，其中形式A具有圖1所示的衍射圖。4.根據(jù)權(quán)利要求1所要求的結(jié)晶螺甾烷基糖苷，它具有以下的X-射線衍射d-間距5.根據(jù)權(quán)利要求4所要求的結(jié)晶螺甾烷基糖苷，其中形式B具有圖2所示的X-射線衍射圖。6.一種用于治療哺乳動(dòng)物的血膽甾醇過(guò)多或粥樣硬化的藥物組合物，它包括藥物有效量的根據(jù)權(quán)利要求1的結(jié)晶螺甾烷基糖苷和藥物上可接受的載體。7.一種治療哺乳動(dòng)物的血膽甾醇過(guò)多或粥樣硬化的方法，該方法包括對(duì)患有血膽甾醇過(guò)多或粥樣硬化的哺乳動(dòng)物施用藥物有效量的權(quán)利要求1的結(jié)晶螺甾烷基糖苷。8.一種制備結(jié)晶的甾族糖苷的方法，包括讓(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲酰基]纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮在乙酸乙酯或乙腈中混合，然后形成結(jié)晶的(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲?；鵠纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮。9.根據(jù)權(quán)利要求8所要求的方法，其中乙酸乙酯或乙腈溶液被加熱和冷卻時(shí)形成晶體。10.一種制備結(jié)晶的甾族糖苷的方法，包括讓(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲?；鵠纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮在任選含有至多70％水的(C1-C4)鏈烷醇中混合，然后形成結(jié)晶的(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲酰基]纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮。11.根據(jù)權(quán)利要求10所要求的方法，其中溶劑是乙醇，異丙醇或正丙醇(30-70％)/水(70-30％)和溶液被加熱和經(jīng)冷卻后形成晶體。全文摘要高度結(jié)晶形式的(3β，5α，25R)-3-[(β-D-4″，6″-雙-[2-氟苯基氨基甲?；鵠纖維素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮，可用作降血膽甾醇劑或抗動(dòng)脈粥樣硬化劑。文檔編號(hào)A61K31/58GK1156458SQ95194842公開(kāi)日1997年8月6日申請(qǐng)日期1995年5月4日優(yōu)先權(quán)日1995年5月4日發(fā)明者D·J·阿蘭,R·A·布佐恩,M·P·德尼諾,H·A·小沃森,J·B·朱格申請(qǐng)人:輝瑞大藥廠