本發(fā)明的技術(shù)背景：
TNFα是由免疫系統(tǒng)的細(xì)胞分泌并與其相互作用的促炎細(xì)胞因子。TNFα已顯示參與許多人類疾病，特別是慢性炎性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，克羅恩病，潰瘍性結(jié)腸炎和多發(fā)性硬化。幾種抗TNFα抗體目前正在開發(fā)中。已經(jīng)銷售兩種抗體：用于皮下或靜脈內(nèi)注射的形式的英夫利昔單抗(infliximab)和阿達(dá)木單抗
然而，一些研究報(bào)道了抗TNFα抗體治療，特別是通過全身途徑，可能具有不期望的副作用，特別是細(xì)菌感染如結(jié)核病的發(fā)生(Jarequi-Amezaga等人，Journal of Crohn's and colitis，2013,7(3)：208-212)或利斯特氏菌感染(Abreu等人，Journal of Crohn's and colitis，2013,7(2)：175-182)或假絲酵母感染(Huang等人，Journal of pediatric gastroenterology and nutrition,2013,56(4):e23–6)。
用于口服給藥的抗TNFα多克隆抗體的制劑正在開發(fā)中。但是仍然存在改善口服施用的抗TNFα抗體的功效和/或安全性的需要。
發(fā)明概述
本發(fā)明人現(xiàn)在提出了用于口服給藥的藥物組合物，其包含抗腫瘤壞死因子α(TNFα)抗體，優(yōu)選在轉(zhuǎn)基因非人動物的乳中產(chǎn)生的單克隆抗體，并且其可以有利地與辛酸組合。
優(yōu)選地，所述組合物為適于在腸中靶向釋放抗體的形式。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗TNFα抗體是阿達(dá)木單抗或具有阿達(dá)木單抗的蛋白質(zhì)序列。
該組合物特別用于治療炎性疾病，優(yōu)選炎性腸病，更優(yōu)選克羅恩病。
發(fā)明詳述
定義：
術(shù)語“治療”是指改善或預(yù)防或逆轉(zhuǎn)疾病或病癥，或至少一種可與其區(qū)別的癥狀，或改善或預(yù)防或逆轉(zhuǎn)至少一種與所治療的疾病或病癥相關(guān)的至少一個可測量的身體參數(shù)，其不一定在治療的受試者中或由受治療的受試者區(qū)分。術(shù)語“治療”還包括身體上抑制或減緩疾病或病癥的進(jìn)展，例如穩(wěn)定可區(qū)分的癥狀，生理上抑制或減緩疾病或病癥的進(jìn)展，例如身體參數(shù)的穩(wěn)定，或兩者。
在本發(fā)明的含義內(nèi)，“患者”是指任何哺乳動物，更特別是人類，男性或女性，不論年齡。
術(shù)語“炎性疾病”包括具有炎性成分的任何疾病，優(yōu)選炎性腸病，特別是慢性炎性腸病，例如克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎。還包括特發(fā)性青少年關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，牛皮癬，銀屑病風(fēng)濕病和強(qiáng)直性脊柱炎。
術(shù)語“組合”和“共同施用”是指以單一制劑形式或作為兩種單獨(dú)制劑施用抗TNFα抗體和辛酸。給藥可以同時或順序，以任何順序進(jìn)行。這兩種藥劑可以同時或相繼給藥。
抗TNFα抗體：
“抗TNFα抗體”是指特異性結(jié)合人TNFα的任何抗體。優(yōu)選地，抗體根據(jù)以下常數(shù)與人TNFα解離：低于1×10–8M(優(yōu)選低于1×10–9M，優(yōu)選低于1×10–10M，優(yōu)選低于1×10–11M)的Kd和1×10–3s–1或以下的Koff，兩者都通過表面等離振子共振試驗(yàn)測定。優(yōu)選地，抗體是中和性的，特別是其通過阻斷其與位于細(xì)胞表面上的TNF p55和p75受體的相互作用來中和TNFα的生物學(xué)功能。抗體的中和能力可通過標(biāo)準(zhǔn)測試來測試，例如抗體在標(biāo)準(zhǔn)L929體外測試中中和人TNFα的細(xì)胞毒性，IC50為1×10–7M或更低，優(yōu)選低于1×10–8M,1×10–9M或1×10–10M。
優(yōu)選地，它是單克隆抗體。
抗體可以是來自哺乳動物例如小鼠的抗體，或者可以優(yōu)選是人源化的，或完全是人的。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗TNFα抗體是人單克隆抗體。
優(yōu)選使用的抗TNFα抗體是阿達(dá)木單抗或具有阿達(dá)木單抗的蛋白質(zhì)序列，即包含輕鏈序列SEQ ID NO：1和重鏈序列SEQ ID NO：2。
SEQ ID NO:1
1 DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQGIR NYLAWYQQKP GKAPKLLIYA ASTLQSGVPS
61 RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDVATYYCQR YNRAPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP
121 SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT
181 LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
SEQ ID NO:2
1 EVQLVESGGG LVQPGRSLRL SCAASGFTFD DYAMHWVRQA PGKGLEWVSA ITWNSGHIDY
61 ADSVEGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAKVS YLSTASSLDY WGQGTLVTVS
121 SASTKGPSVF PLAPSSKSTS GGTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS
181 SGLYSLSSVV TVPSSSLGTQ TYICNVNHKP SNTKVDKKVE PKSC
阿達(dá)木單抗是由兩條κ輕鏈和兩條IgG1重鏈組成的免疫球蛋白G(IgG)。
抗體也可以是例如英夫利昔單抗或戈利木單抗。
用于本發(fā)明的抗體可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何技術(shù)產(chǎn)生；優(yōu)選其是重組抗體。
在一個具體的實(shí)施方案中，抗體因此可以通過在宿主細(xì)胞中重組產(chǎn)生，用一種或多種載體轉(zhuǎn)化，所述載體允許編碼抗體重鏈和/或輕鏈的核苷酸序列的表達(dá)和/或分泌。載體通常包含啟動子，翻譯起始和終止信號，以及合適的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)。其以穩(wěn)定的方式保持在宿主細(xì)胞中，并且可任選地具有指定翻譯的蛋白質(zhì)的分泌的特異性信號。這些各種元件由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)所使用的宿主細(xì)胞選擇和優(yōu)化。這樣的載體通過本領(lǐng)域技術(shù)人員通常使用的方法制備，并且可以通過標(biāo)準(zhǔn)方法例如脂質(zhì)轉(zhuǎn)染，電穿孔，使用聚陽離子試劑，熱休克或化學(xué)方法將所得克隆導(dǎo)入合適的宿主中。宿主細(xì)胞可以選自原核或真核系統(tǒng)，例如細(xì)菌細(xì)胞，但也可選自酵母細(xì)胞或動物細(xì)胞，特別是哺乳動物細(xì)胞。用于產(chǎn)生單克隆抗體的優(yōu)選哺乳動物細(xì)胞是大鼠品系YB2/0，倉鼠品系CHO，特別是CHO dhfr-和CHO Lec13，PER.C6TM(Crucell)，293，K562，NS0，SP2/0，BHK或COS。也可以使用昆蟲細(xì)胞。
另一種生產(chǎn)模式是在轉(zhuǎn)基因生物體中，例如在植物中表達(dá)重組抗體((Ayala M,Gavilondo J,Rodríguez M,Fuentes A,Enríquez G,Pérez L,Cremata J,Pujol M.Production of plantibodies in Nicotiana plants.Methods Mol Biol.2009；483:103–34)或特別是在轉(zhuǎn)基因動物例如兔，山羊或豬的乳中(Pollock,D.P.,J.P.Kutzko,E.Birck–Wilson,J.L.Williams,Y.Echelard and H.M.Meade.(1999).Transgenic milk as a method for the production of recombinant antibodies.Journal of Immunological Methods.231:147–157)。
根據(jù)優(yōu)選的實(shí)施方案，抗體在非人類轉(zhuǎn)基因哺乳動物的乳中產(chǎn)生，其經(jīng)遺傳修飾以產(chǎn)生該糖蛋白。哺乳動物可以是例如山羊，母羊，雌性野牛，水牛，駱駝，美洲駝，小鼠或大鼠，或奶牛，母豬，兔子或母馬。
優(yōu)選地，其是轉(zhuǎn)基因山羊乳。
抗體通過乳腺分泌，允許其存在于轉(zhuǎn)基因哺乳動物的乳中，涉及組織依賴性地控制抗體的表達(dá)。這種控制方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。通過允許在動物的特定組織中表達(dá)糖蛋白的序列來控制表達(dá)。它們特別是“WAP”，“β-酪蛋白”，“β-乳球蛋白”類型的啟動子序列和可能的肽信號類型的序列。優(yōu)選地，使用包含在5'β-酪蛋白啟動子控制下的兩條鏈的序列的表達(dá)載體，在轉(zhuǎn)基因山羊的乳腺中產(chǎn)生抗體。在專利EP 0 264 166中描述了從轉(zhuǎn)基因動物的乳中提取目標(biāo)蛋白的方法。
有利地，每升乳產(chǎn)生超過4克抗體，有利地超過5,10,15,20,25,30,35克/升，有利地高達(dá)70克/升。
有利地，由動物轉(zhuǎn)基因產(chǎn)生的抗體，特別是在轉(zhuǎn)基因山羊的乳腺中產(chǎn)生的抗體是糖基化的抗-TNFα抗體群的形式，其具有高水平的半乳糖基化，例如大于60％，優(yōu)選大于70％，更優(yōu)選至少80％。
根據(jù)另一個具體方面，群體中所有抗體的巖藻糖基化水平為至少50％，特別是至少60％。
根據(jù)另一個特定方面，群體包含含有單-半乳糖基化N-聚糖的抗體。
根據(jù)另一個特定方面，群體包含含有雙半乳糖基化N-聚糖的抗體。
根據(jù)另一個具體方面，群體的抗體的半乳糖基化水平與群體的抗體的巖藻糖基化水平的比率為1.0至1.4。
根據(jù)另一個具體方面，群體中至少35％的抗體包含雙半乳糖基化的N-聚糖，并且所述群體中的至少25％的抗體包含單半乳糖基化的N-聚糖。
根據(jù)另一個具體方面，抗體的唾液酸化水平為至少50％，優(yōu)選至少70％，或至少90％。
根據(jù)另一個具體方面，所述抗體是完全唾液酸化的。
N-聚糖生物合成不受編碼調(diào)節(jié)，如蛋白質(zhì)就是如此，而主要依賴于細(xì)胞中特異性糖基轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)和活性。因此，糖蛋白(例如抗體Fc片段)通常作為在同一蛋白質(zhì)骨架上帶有不同聚糖的糖型的異質(zhì)群體存在。
高半乳糖基化抗體群是這樣的抗體群，其中群中所有抗體的半乳糖基化水平為至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％，高達(dá)100％的半乳糖基化。
根據(jù)高度半乳糖基化抗體群體的具體實(shí)施方案，群體中所有抗體的半乳糖基化水平為至少60％。
半乳糖基化的水平可以用下式確定：
其中:
-“n”是在色譜圖，例如正相高效液相色譜(NP HPLC)光譜上分析的N-聚糖峰的數(shù)目，
-“Gal的數(shù)目”是對應(yīng)于峰的聚糖的觸角上的半乳糖的數(shù)目，
-“A的數(shù)目”是對應(yīng)于峰的聚糖形式的觸角上的N-乙?；?葡糖胺單元的數(shù)量(除了聚糖共有的框架結(jié)構(gòu)的兩個N-乙?；?葡糖胺單元)，和
-“相對表面積的％”是相應(yīng)峰下面積的百分比。
抗體群的抗體的半乳糖基化水平可以例如通過從抗體釋放N-聚糖，通過在色譜圖上分辨N-聚糖，通過鑒定相應(yīng)于特定峰的N-聚糖的寡糖單元，通過確定峰的強(qiáng)度并通過將數(shù)據(jù)應(yīng)用于上述公式來確定。
半乳糖基化的抗體包括具有單半乳糖基化的N-聚糖和雙半乳糖基化的N-聚糖的抗體。
根據(jù)高半乳糖基化抗體群體的特定方面，群體包含含有單-半乳糖基化N-聚糖的抗體，其可以是或不是唾液酸化的。根據(jù)高度半乳糖基化抗體群體的特定方面，抗體的至少1％，至少5％，至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％，至多100％的N-聚糖包含單半乳糖基化的N-聚糖。根據(jù)本發(fā)明的另一個具體實(shí)施方案，在高半乳糖基化抗體群中，至少25％的抗體包含單半乳糖基化的N-聚糖。
根據(jù)高半乳糖基化抗體群體的特定方面，群體包含含有雙半乳糖基化N-聚糖的抗體，其可以是或不是唾液酸化的。根據(jù)高度半乳糖基化抗體群體的特定方面，抗體的至少1％，至少5％，至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％，至多100％的N-聚糖包含雙半乳糖基化的N-聚糖。根據(jù)本發(fā)明的另一個具體實(shí)施方案，在高半乳糖基化抗體群中，至少35％的抗體包含雙半乳糖基化的N-聚糖。
根據(jù)高度半乳糖基化抗體群體的另一方面，群體包含含有可被唾液酸化或不被唾液酸化的單半乳糖基化的N-聚糖的抗體和包含可被唾液酸化或不被唾液酸化的雙半乳糖基化的N-聚糖的抗體。
根據(jù)高度半乳糖基化抗體群體的特定方面，抗體的至少1％，至少5％，至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％，至多99％的N-聚糖包含單半乳糖基化的N-聚糖，和抗體的至少1％，至少5％，至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％至少70％，至少80％，至少90％，至多99％的N-聚糖包含雙半乳糖基化的N-聚糖。
根據(jù)高度半乳糖基化抗體群體的另一個具體方面，至少25％的抗體包含單半乳糖基化的N-聚糖，并且至少35％的抗體包含雙半乳糖基化的N-聚糖。
在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗TNFα抗體由轉(zhuǎn)基因哺乳動物的乳腺上皮細(xì)胞產(chǎn)生，用于在乳腺中產(chǎn)生外源性，并且潛在地也是轉(zhuǎn)基因的抗TNFα抗體用于產(chǎn)生唾液酸轉(zhuǎn)移酶。因此，產(chǎn)生的治療性抗體具有高水平的半乳糖基化，和潛在地增加水平的連接到Fc片段的聚糖殘基上的末端α-2,6唾液酸鍵。
在某些實(shí)施方案中，抗體具有高甘露糖含量的糖基化譜。如本文所用，“具有高甘露糖含量的糖基化譜”是指含有至少一種寡甘露糖的抗體或抗體組合物，其中至少30％的抗體含有至少一種寡甘露糖。在某些實(shí)施方案中，至少30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或更多的抗體糖是非巖藻糖基化寡甘露糖。在其他實(shí)施方案中，小于50％，40％，30％，20％，10％，5％或更少的抗體糖包含巖藻糖。在另一個實(shí)施方案中，抗體具有低巖藻糖含量和高寡甘露糖含量。因此，在其它實(shí)施方案中，至少30％，40％，50％，60％，70％，80％或90％或更多的抗體糖是寡甘露糖和小于50％，40％，30％，20％，10％或5％的抗體糖包含巖藻糖。因此，在另一個實(shí)施方案中，至少30％，40％，50％，60％，70％，80％或90％或更多的抗體糖是非巖藻糖基化寡甘露糖和小于50％，40％，30％，20％，10％或5％的抗體糖包含巖藻糖。
根據(jù)一個具體方面，含甘露糖的寡糖范圍從Man5到Man9，其中數(shù)字表示甘露糖殘基的數(shù)目。例如，含甘露糖的寡糖可以包括Man5，Man6，Man7，Man8和Man9。在某些實(shí)施方案中，抗體，如轉(zhuǎn)基因產(chǎn)生的阿達(dá)木單抗，具有高M(jìn)an6含量。在某些實(shí)施方案中，主要糖是Man5。在某些實(shí)施方案中，至少10％，15％或更多的糖是Man 5。有利地，至少20％的糖是Man5。在其它實(shí)施方案中，主要糖是Man6。在某些實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)基因產(chǎn)生的抗體的至少10％，15％或更多的糖是Man6。有利地，至少20％的糖是Man6。在其他實(shí)施方案中，主要糖是Man7。在某些實(shí)施方案中，至少10％，15％或更多的糖是Man 7。有利地，至少20％的糖是Man7。
特別優(yōu)選的是具有如上所述具有高水平的半乳糖或甘露糖的譜的抗體，因?yàn)樗鼈儗cγRIIIa(CD16)受體具有高親和力。高親和力是指通過Scatchard分析或BIAcore技術(shù)(無標(biāo)記表面等離子體共振技術(shù))測定的至少等于2×106M–1，優(yōu)選至少等于2×107M–1,2×108M–1或2×109M–1的親和力。這種受體存在于許多免疫細(xì)胞上，包括自然殺傷細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，嗜中性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞。與非高度半乳糖基化或非高度甘露糖基化的抗體相比，對CD16的這種親和力允許補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)或抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)活性或靶細(xì)胞吞噬現(xiàn)象的改善。在某些實(shí)施方案中，在結(jié)合可溶性TNFα方面，在乳腺上皮細(xì)胞中產(chǎn)生的抗TNFα抗體群體優(yōu)于在不是乳腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體。在某些實(shí)施方案中，在結(jié)合跨膜TNFα方面，在乳腺細(xì)胞中產(chǎn)生的抗TNFα抗體群體優(yōu)于在不是乳腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體。用于測定與可溶性TNFα或跨膜TNFα的結(jié)合水平的測試已被很好地建立(參見例如Horiuchi等，Rheumatology等，49：1215)。
與辛酸的組合：
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，與辛酸組合施用抗TNFα抗體，所述抗TNFα抗體優(yōu)選是在轉(zhuǎn)基因非人動物的乳中產(chǎn)生的單克隆抗體。
辛酸，也稱為辛酸，是包含八個碳原子的飽和直鏈脂肪酸。
辛酸可以以酸形式或以辛酸鹽形式使用?？梢栽O(shè)想任何藥學(xué)上可接受的鹽，例如辛酸鈉或辛酸鉀。
根據(jù)本發(fā)明，但不希望受特定作用機(jī)制的限制，辛酸具有原位提供抗菌(特別是抗細(xì)菌，抗真菌和抗病毒)活性的作用，并且可有利地防止在腸腔中TNFα的中和后的感染或超感染的風(fēng)險(xiǎn)?？筎NF抗體和辛酸的組合也具有改善的抗炎效果。辛酸還使得可以通過保護(hù)抗體免受胃腸道中的過快降解而改善抗體的功效，這最終使得可以進(jìn)一步增強(qiáng)組合物的抗炎效果。
因此，本發(fā)明還具有作為目的的用于口服給藥的藥物組合物，其包含抗TNFα抗體和辛酸或辛酸鹽。
本發(fā)明的另一個目的涉及通過口服給藥，與口服給予辛酸(或辛酸鹽)組合用于治療炎性疾病的抗TNFα抗體。
抗體和辛酸(或辛酸鹽)旨在分開，同時或順序給藥。
本發(fā)明的另一個目的是一種藥盒，其在同一包裝內(nèi)包含：
-含有用于口服給藥的藥物組合物的第一容器，所述藥物組合物包含抗TNFα抗體；
-含有用于口服給藥的藥物組合物的第二容器，所述藥物組合物包含辛酸(或辛酸鹽)。
抗TNFα抗體和辛酸(或辛酸鹽)可以在相同的藥物組合物中組合，或者可以以單獨(dú)的組合物的形式使用，同時或順序施用。特別地，它們可以分開施用，即同時或獨(dú)立施用，例如在時間上分開施用。辛酸(或辛酸鹽)可以以藥物組合物或膳食補(bǔ)充劑型組合物的形式用于本發(fā)明中。
治療制劑和應(yīng)用：
本發(fā)明的組合物可以以通常用于口服給藥的任何蓋侖制劑形式存在，特別是以片劑，膠囊劑，粉劑或任何固體口服制劑形式或任何液體口服制劑形式存在。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，組合物以適合于在腸中靶向釋放的蓋侖制劑形式存在?！澳c”在本文中是指腸的所有部分，特別是結(jié)腸。這樣的組合物特別可用于治療炎性腸病，因?yàn)樗鼈冊试S在感染部位(特別是小腸或結(jié)腸)的局部作用。此外，它們限制抗體進(jìn)入血流，限制了與抗TNFα抗體相關(guān)的副作用。
存在幾種策略用于制備口服藥物，其活性成分僅在腸中釋放，優(yōu)選僅在結(jié)腸中釋放。
某些策略包括藥物與底物或包衣與pH敏感聚合物的共價結(jié)合。還可以使用被結(jié)腸細(xì)菌降解的賦形劑和載體。
在一個具體實(shí)施方案中，抗TNFα抗體可以配制成用pH敏感聚合物包衣的固體劑型，如片劑或膠囊。在胃中pH為1至3，但在小腸和結(jié)腸中pH增加至接近7的值。最常用的在酸性pH下不溶但在中性或堿性pH下可溶的聚合物是甲基丙烯酸衍生物，特別是L和S。
在另一個實(shí)施方案中，也可以使用用可被結(jié)腸微生物(更特別是細(xì)菌酶如偶氮還原酶和糖苷酶)降解的聚合物包衣的制劑，例如具有高度親水性的偶氮聚合物。
也可以使用凝膠和水凝膠，特別是基于多糖的水凝膠。
當(dāng)抗TNFα抗體與辛酸(或辛酸鹽)組合時，包含抗TNFα抗體的劑型可以不同于包含任選組合的辛酸的劑型。
優(yōu)選地，抗TNFα抗體以片劑或膠囊形式施用。優(yōu)選地，辛酸以膠囊形式施用。
本發(fā)明的組合物可以包含或與其它治療劑組合，但是以非優(yōu)選的方式。
根據(jù)本發(fā)明的組合物有利地包含一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體?？梢蕴峒袄缗c藥物用途相容并且為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的鹽水，生理溶液，等滲溶液和緩沖溶液等。組合物可以含有一種或多種選自分散劑，增溶劑，穩(wěn)定劑，防腐劑等的試劑或載體?？捎糜谥苿?液體和/或可注射和/或固體)中的試劑或載體特別是甲基纖維素，羥甲基纖維素，羧甲基纖維素，聚山梨酯80，甘露醇，明膠，乳糖，植物油，阿拉伯膠等。組合物可任選地通過提供延長和/或延遲釋放的蓋侖制劑形式或裝置來配制。對于這種類型的制劑，有利地使用試劑，例如纖維素，碳酸鹽或淀粉。
所施用的劑量可以根據(jù)患者的體重和年齡以及疾病的嚴(yán)重程度，由本領(lǐng)域技術(shù)人員評估來改變。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，對于體重為55至80kg的人，抗體的劑量在約0.02mg/kg至約100mg/kg體重的范圍內(nèi)，或約1mg至約8g/天。
在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗體的劑量在約0.16mg/kg至約32mg/kg體重，或約8.75mg至約2.5g/天的范圍內(nèi)。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗體的劑量在約0.16mg/kg至約13mg/kg體重，或約8.75mg至約1g/天的范圍內(nèi)。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗體的劑量在約0.16mg/kg至約6.5mg/kg體重，或約8.75mg至約520mg的范圍內(nèi)。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗體的劑量在約0.16mg/kg至約3.2mg/kg體重，或約8.75mg至約256mg的范圍內(nèi)。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗體的劑量在約0.16mg/kg至約1.3mg/kg體重，或約8.75mg至約104mg的范圍內(nèi)。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗體的劑量在約0.16mg/kg至約0.64mg/kg體重，或約8.75mg至約51mg的范圍內(nèi)。
通常，有利的劑量是每天8至200mg，優(yōu)選每天8至35或15至70mg的劑量。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，辛酸(或辛酸鹽)的劑量在0.01mg/kg至約500mg/kg的范圍內(nèi)，例如0.1mg/kg至300mg/kg或每天約0.1mg至20g。
患者可以接受例如抗TNFα抗體(優(yōu)選阿達(dá)木單抗)每日劑量例如10mg至500mg，優(yōu)選8至200mg/天，優(yōu)選8至35或15至70mg/天。
辛酸(或辛酸鹽)的給藥劑量可以優(yōu)選在100mg和4g之間，優(yōu)選在200mg和2g之間，優(yōu)選在300mg和1.5g之間，優(yōu)選在750mg和1250mg之間，更優(yōu)選在900mg mg和1100mg之間。它可以是每日劑量或每周一次或多次服用的劑量。
在一個具體的實(shí)施方案中，抗體和辛酸(或辛酸鹽)可以以至少等于1:1，優(yōu)選5:1，優(yōu)選10:1，優(yōu)選15:1，優(yōu)選20:1的辛酸與抗體的重量比使用。
當(dāng)依次給予兩種藥劑時，所述劑量在同一天給藥，至少兩次分開給藥，或者例如在第一天給予第一種藥劑并且在第二天或后一天給予第二種藥劑。
以下實(shí)施例和附圖說明本發(fā)明，而不限制其范圍。
圖例：
附圖是顯示經(jīng)受各種條件的Caco-2細(xì)胞的白細(xì)胞介素-8分泌水平的直方圖。在辛酸+抗TNF抗體的組合存在下，分泌被最強(qiáng)烈地抑制。
實(shí)施例：對Caco-2系的抗炎作用
材料和方法：
Caco-2細(xì)胞是結(jié)腸癌細(xì)胞系，是人腸上皮的建立的細(xì)胞模型(Pinto等，1983，Biol.Cell，47,323-330)。這些細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素-8(IL-8)，其是白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)活化后炎癥性腸病發(fā)病機(jī)制中的主要白細(xì)胞介素之一。
本發(fā)明人使用Caco-2細(xì)胞系作為上皮細(xì)胞模型，并評估了本發(fā)明的組合物對白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)活化后這些細(xì)胞的白介素-8(IL-8)分泌的影響。
為此，將沉積在24孔板中的Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)14天，直到細(xì)胞匯合并處于穩(wěn)定的分化狀態(tài)。在第14天，在辛酸，轉(zhuǎn)基因產(chǎn)生的抗TNF抗體(阿達(dá)木單抗)和兩者的組合的存在下預(yù)培養(yǎng)細(xì)胞。24小時后，用1ng/ml IL-1β刺激細(xì)胞12小時。通過ELISA測量培養(yǎng)物上清液中存在的IL-8水平。
結(jié)果：
加入抗TNF抗體誘導(dǎo)IL-8水平降低，從而降低抗炎潛能。辛酸+抗TNF抗體的組合似乎是更強(qiáng)的IL-8分泌抑制劑(參見附圖)，顯示出更強(qiáng)的抗炎效果。
使用在培養(yǎng)14天后分化的Caco-2細(xì)胞，并添加IL-1β，使得有可能在體外再現(xiàn)類似于體內(nèi)腸炎癥的條件。觀察到的結(jié)果顯示，根據(jù)本發(fā)明的組合物在體內(nèi)具有潛在的治療益處。