專利名稱：補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚抗哮喘病的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及補(bǔ)骨脂ニ氫黃酮甲醚在抗哮喘病藥物上的應(yīng)用，特別是與免疫性疾病相關(guān)的化學(xué)藥物的開發(fā)和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
與自身免疫性疾病相關(guān)的新藥研發(fā)具有廣闊的前景。其中，系統(tǒng)性紅斑狼瘡、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、腸炎、動脈粥樣硬化等炎癥疾病、癌癥以及神經(jīng)退行性疾病帕金森氏綜合征等免疫性疾病嚴(yán)重威脅著我國居民的健康。疾病的發(fā)生是人體免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)失衡。免疫系統(tǒng)主要通過分泌一些細(xì)胞因子(如IL-4，IL-6，IL-10, IL-12，TGF- β , NF- κ B, TNF- α等)來調(diào)節(jié)和激發(fā)各種免疫過程。初始CD4+T細(xì)胞在不同的細(xì)胞因子誘導(dǎo)下，分化成功能及表型不同的效應(yīng)性輔助性T細(xì)胞(Th)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)，其分化過程受細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)。在ConA、IL-2、IL-4的刺激下Th2細(xì)胞都可產(chǎn)生IL_4，IL-4與其受體IL-4R結(jié)合后，可誘導(dǎo)不同的生物學(xué)效應(yīng)，募集下游的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、激活效應(yīng)因子，激活B細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞的増殖和分化。過量IL-4的產(chǎn)生可介導(dǎo)并加速多種疾病，因此降低IL-4含量或抑制NF-κ B活性理論上是ー些炎癥、感染、免疫或惡性疾病的有效治療手段，例如哮喘、牛皮癬、炎癥性腸病等等。因此，我們基于IL-4的調(diào)節(jié)機(jī)制，人為的干預(yù)各種免疫細(xì)胞因子的激活與分泌，上調(diào)或下調(diào)達(dá)到適當(dāng)?shù)谋壤瑥亩{(diào)控ー些免疫失衡，達(dá)到治愈疾病的目的。我們建立了 IL-4-GFP轉(zhuǎn)基因報告小鼠高通量篩選模型，篩選能抑制IL-4分泌的高活性小分子藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開了能夠抑制IL-4分泌、具有抗哮喘作用的小分子藥物29#，涉及哮喘、牛皮癬等自身免疫性疾病相關(guān)的化學(xué)藥物和抗炎藥物的應(yīng)用。29#其化學(xué)結(jié)構(gòu)式和物理常數(shù)見表I :表I
權(quán)利要求
1.本發(fā)明公開了補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚(29#)能夠抑制IL-4分泌、具有抗哮喘作用，涉及哮喘、牛皮癬等自身免疫性疾病相關(guān)的化學(xué)藥物和抗炎藥物的應(yīng)用。29#其化學(xué)結(jié)構(gòu)式和物理常數(shù)見表I :
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的培養(yǎng)體系，其特征在于它是采用96孔培養(yǎng)板，200Ul體系，在條件為37°C、C02濃度為5%、濕潤的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的共培養(yǎng)，其特征在于它是采用每孔中加入IOOiU梯度稀釋后不同濃度的29#和100 u I的濃度為4*106個/ml細(xì)胞懸液共培養(yǎng)。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的刺激因子ConA、IL-2、IL-4，其特征在于它的終濃度分別為2.5 u g/ml、2ng/ml、20ng/ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的anti-CD4-APC抗體染色，其特征在于它是在冰浴避光染色15至30分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的抗哮喘模型，其特征在于它是對小鼠腹腔注射用氫氧化鋁乳化雞清白蛋白(OVA)而誘導(dǎo)的哮喘模型。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抗哮喘的藥物，屬于新藥研發(fā)領(lǐng)域。免疫系統(tǒng)通過不同的細(xì)胞因子如TNF-a、IL-4、INF-γ等，調(diào)節(jié)著機(jī)體的免疫平衡。我們通過建立IL-4-GFP轉(zhuǎn)基因報告小鼠高通量篩選模型和哮喘模型，篩選能抑制IL-4分泌的小分子藥物。通過篩選發(fā)現(xiàn)了一個能抑制IL-4分泌，具有抗哮喘作用的小分子化合物，將其命名為29#，其結(jié)構(gòu)式如(I)所示。IL-4與其受體IL-4R結(jié)合后，募集下游的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、激活效應(yīng)因子，激活B細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞的增殖和分化。過量IL-4的產(chǎn)生可介導(dǎo)并加速多種疾病，因此降低IL-4含量從理論上是一些炎癥、感染、免疫或惡性疾病的有效治療手段，例如哮喘、牛皮癬病等。該小分子藥物可以抑制IL-4的表達(dá)，為此有望開發(fā)成為抗哮喘的藥物。
文檔編號A61P11/06GK102670585SQ20111006570
公開日2012年9月19日 申請日期2011年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月18日
發(fā)明者劉蘭珍, 尹芝南, 張寶童, 梁正, 洪章勇, 趙立青, 陳曦 申請人:天津雙知生物技術(shù)有限公司