專利名稱：：一種復方紫杉醇—鴉膽子油注射乳劑及其制備方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種復方紫杉醇一鴉膽子油注射乳劑及其制備方法，屬于制藥領域。
背景技術：
：紫杉醇是從紅豆杉科紅豆杉屬植物的樹皮中提取得到的二萜類化合物。它是一種新型的微管穩(wěn)定劑，具有獨特抗癌活性，被美國國立癌癥研究所認為是近1520年來腫瘤化療的最重要的進展。作為晚期卵巢癌的二線治療藥，至今已在40多個國家獲準上市，并在乳腺癌、肺癌、白血病、胃腸道癌及介入治療后的血管再狹窄等治療上顯示了令人鼓舞的療效。雖然紫杉醇具有良好的抗腫瘤活性，但紫杉醇在甲醇、乙醇和DMSO等有機溶劑中可溶，而在水中的溶解度小于0.03mg/mL。口服給藥生物利用度差，只能通過靜脈注射給藥。紫杉醇的水不溶性給其靜脈給藥帶來很大困難，限制了它的臨床應用?，F(xiàn)行臨床常用的紫杉醇制劑是用聚氧乙烯蓖麻油與無水乙醇l:l混合制成的油劑(CremophorEL)即紫杉醇Cremophor制劑，注射給藥前用生理鹽水或5%葡萄糖溶液稀釋到給藥濃度。為解決這一難題，人們在注射劑中加入表面活性劑聚氧乙烯蓖麻油(CremophorEL)，臨床應用效果較好。但會引起多種不良反應，如過敏反應、中毒性腎損害、神經毒性、心臟血管毒性等。為避免嚴重的過敏反應，在臨床上，紫杉醇注射給藥前常預先注射皮質醇類(如地塞米松)，苯海拉明和H2受體拮抗劑(如西咪替丁、雷尼替丁)。但這些針劑的使用仍不能有效徹底防止所有患者的不良反應，仍會導致部分患者注射紫杉醇后發(fā)生過敏反應[KimSC.KimDW.ShimYH.etal.Invivoevaluationofpolymericmicellarpaclitaxelformulation:toxicityandefficacy.JControlledRelease.2001.72(123):191.]。近年來，為了解決臨床應用中出現(xiàn)的水溶性低和不良反應等各種問題，研究人員對紫杉醇結構進行修飾或將其制備成特定的制劑，其中制劑是研究的熱點和重點。目前，對紫杉醇的新型制劑研究包括微乳、膠束、前體藥物、包合物、脂質體、微球、納米粒、磁性泡囊、糊劑、凝膠、植入劑和藥物釋放支架等。這些紫杉醇制劑在水溶性、穩(wěn)定性和生物利用度方面有了不同程度的改善，但仍沒有一種制劑可以完全取代CremophorEL。因此，有必要進一步開發(fā)紫杉醇的新型制劑。中國專利申請CN1634021A公開了用一種注射用油來溶解紫杉醇并用適當乳化劑等藥用輔料制備成符合靜脈注射要求的乳劑。其中注射用油是選自于大豆油、魚油、亞麻子油、葵花子油、月見草油、沙棘油、辛癸酸甘油醋或惹仁油中的一種或一種以上的混合物。該專利直接將紫杉醇溶于植物油中，由于紫衫醇在油中較低的溶解度，紫杉醇應該大多懸浮在油中，處于游離狀態(tài)，制備成乳劑后，臨床應用時稀釋后很容易形成沉淀。中國專利申請CN101006997A公開了一種復方紫杉醇及衍生物多西他賽脂肪乳劑，該制劑是將主藥紫杉醇或多西他賽包裹在水包油微球的復合油相中，這種復合油相采用對紫杉醇和多西他賽溶解度較大的增溶脂溶性成分植物揮發(fā)油或三丁酸甘油酷或三辛酸甘油脂同植物油混合。鴉膽子油是從苦木科植物鴉膽子的干燥成熟果實中提取得到的脂肪油，以體外腹水癌細胞伊紅染色法為藥理篩選指標，發(fā)現(xiàn)鴉膽子油中的油酸具有很強的抗癌活性。目前為止，未見紫杉醇、鴉膽子油和乙醇組成的復合油相與注射用輔料一起制備注射乳劑的報道。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于尋找一種載藥量大、副作用小、給藥方便的新的靜脈注射用紫杉醇乳劑及其制備方法，以滿足市場上對該種新藥的需求。本發(fā)明的技術方案本發(fā)明復方紫杉醇一鴉膽子油注射乳劑是由紫杉醇溶解于乙醇后加入鴉膽子油組成復合油相，再與卵磷脂、注射用水等注射用輔料制備成的復方乳劑。其中，紫杉醇乙醇鴉膽子油卵磷脂注射用水的重量配比=0.oiio:120:550:i30:600iooo。優(yōu)選的是紫杉醇乙醇鴉膽子油卵磷脂注射用水的重量配比=0.055:210:io30:520:600soo。更進一步優(yōu)選的是紫杉醇乙醇鴉膽子油卵磷脂注射用水的重量配比=0.12:412:io20:515:600700。其中所述卵磷脂為大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂。本發(fā)明復方紫杉醇一鴉膽子油注射乳劑的制備方法為將紫杉醇溶解于乙醇中，將鴉膽子油加入紫杉醇的乙醇溶液中，混合均勻形成油相，將卵磷脂分散于注射用水中得到水相，將水相和油相混合，用高速勻漿機攪拌5—IO分鐘得初乳；將制得的乳劑置于高壓乳勻機中，在80100MPa的壓力下，乳化35次，得到均一的乳劑。所得乳劑用0.45ym的微孔濾膜過濾，分裝后于115'C高壓滅菌30分鐘。本發(fā)明所得復方制劑的特征是含有抗癌藥物紫杉醇和鴉膽子油的水包油型乳劑，該乳劑粒徑小于1000nm，紫杉醇含量為O.510mg/g。本發(fā)明復方紫杉醇一鴉膽子油注射乳劑中紫杉醇的含量用高效液相色譜測定；粒徑用激光動態(tài)光散射儀進行測定。本發(fā)明的優(yōu)點經過大量篩選實驗得到紫杉醇，乙醇和鴉膽子油組成的復合油相中紫杉醇的溶解度很大，制備成水包油型乳劑，外水相中不含紫杉醇成分，有效降低由于藥物引起的靜脈炎，過敏反應大大降低，增強患者的順應性。且本發(fā)明制劑處方簡單，稀釋后不產生沉淀，靜脈注射不會發(fā)生栓塞。為臨床提供一種載藥量大、副作用小、給藥方便的新的靜脈注射用紫杉醇乳劑。具體實施例方式實施例l油相篩選試驗篩選的依據(jù)是將紫杉醇溶解于乙醇后加入植物油或表面活性劑，考察紫杉醇的溶解性，選擇對紫杉醇溶解性較好的油相為成功制備注射用紫杉醇創(chuàng)造條件。具體篩選過程如下稱取20mg紫杉醇5份，分別加入0.5g乙醇，超聲處理溶解；向紫杉醇溶液中分別加入大豆油、鴉膽子油、玉米油、棉籽油和橄欖油各lg，混合，于超聲波上超聲處理30分鐘后，10000rpm離心10分鐘，棄去沉淀，上清液中紫杉醇含量用高效液相色譜測定，結果列于表l表1<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>試驗表明，將各種油分別加入紫杉醇乙醇溶液中后，除了鴉膽子油以外，其它油都不同程度產生沉淀。因此，本發(fā)明選擇將紫杉醇溶解于乙醇后加鴉膽子油經過處理得到油相，進一步制備乳劑。實施例2制備含紫杉醇O.7mg/g的復方紫杉醇一鴉膽子油注射乳劑稱取480mg紫杉醇，加入8g乙醇，超聲處理溶解后，加入13g鴉膽子油，充分攪拌均勻得油相；將10g精制大豆卵磷脂分散于300g注射用水中得水相。將以上兩液混合，轉移到高速勻漿機中，加入350g注射用水，以20000rpm混合均質10分鐘，形成初乳。將初乳轉移到高壓乳勻機中，氮氣保護下在80100MPa循環(huán)4次，將乳劑用O.45ym的微孔濾膜過濾，分裝，115°C高壓滅菌30分鐘。該乳劑粒徑在1001000nm之間的乳粒占94%，高效液相色譜測定紫杉醇含量為0.68mg/g。實施例3制備含紫杉醇lmg/g的復方紫杉醇一鴉膽子油注射乳劑稱取800mg紫杉醇，加入10g乙醇，超聲處理溶解后，加入10g鴉膽子油，充分攪拌均勻得油相；將10g精制大豆卵磷脂分散于300g注射用水中得水相。將以上兩液混合，轉移到高速勻漿機中，加入470g注射用水，以20000rpm混合均質10分鐘，形成初乳。將初乳轉移到高壓乳勻機中，氮氣保護下在80100MPa循環(huán)4次，將乳劑用O.45ym的微孔濾膜過濾，分裝，115°C高壓滅菌30分鐘。該乳劑粒徑在1001000nm之間的乳粒占97%，高效液相色譜測定紫杉醇含量為0.96mg/g。實施例4制備含紫杉醇2mg/g的復方紫杉醇一鴉膽子油注射乳劑稱取800mg紫杉醇，加入12g乙醇，超聲處理溶解后，加入15g鴉膽子油，充分攪拌均勻得油相；將13g精制大豆卵磷脂分散于250g注射用水中得水相。將以上兩液混合，轉移到高速勻漿機中，加入110g注射用水，以20000rpm混合均質10分鐘，形成初乳。將初乳轉移到高壓乳勻機中，氮氣保護下在80100MPa循環(huán)4次，將乳劑用O.45ym的微孔濾膜過濾，分裝，115°C高壓滅菌30分鐘。該乳劑粒徑在1001000nm之間的乳粒占92%，高效液相色譜測定紫杉醇含量為1.91mg/g實施例5制備含紫杉醇5mg/g的復方紫杉醇一鴉膽子油注射乳劑稱取500mg紫杉醇，加入10g乙醇，超聲處理溶解后，加入15g鴉膽子油，充分攪拌均勻得油相；將10g精制大豆卵磷脂分散于65g注射用水中得水相。將以上兩液混合，轉移到高速勻漿機中，以20000rpm混合均質10分鐘，形成初乳。將初乳轉移到高壓乳勻機中，氮氣保護下在80100MPa循環(huán)4次，將乳劑用O.45ym的微孔濾膜過濾，分裝，115'C高壓滅菌30分鐘。該乳劑粒徑在1001000nm之間的乳粒占92X，高效液相色譜測定紫杉醇含量為4.85mg/g)。實施例6制備含紫杉醇8mg/g的復方紫杉醇一鴉膽子油注射乳劑稱取800mg紫杉醇，加入10g乙醇，超聲處理溶解后，加入20g鴉膽子油，充分攪拌均勻得油相；將10g精制大豆卵磷脂分散于40g注射用水中得水相。將以上兩液混合，轉移到高速勻漿機中，以20000rpm混合均質10分鐘，形成初乳。將初乳轉移到高壓乳勻機中，氮氣保護下在80100MPa循環(huán)4次，將乳劑用O.45ym的微孔濾膜過濾，分裝，115'C高壓滅菌30分鐘。該乳劑粒徑在1001000nm之間的乳粒占90X，高效液相色譜測定紫杉醇含量為7.46mg/g)。以下試驗例采用的對照品為市售紫杉醇注射液，重慶萊美藥業(yè)股份有限公司提供，批號為080402。試驗例一刺激性試驗1、健康家兔30只，雌雄各半，體重2.5士0.2kg，隨機分三組，第一組給生理鹽水，第二組為市售紫杉醇注射液，第三組為實施例3制備的復方紫杉醇一鴉膽子油注射乳劑。經耳緣靜脈給藥，20ml/只，1ml/min恒速推入，藥后兩小時處死動物，取注射部位行病理切片H.E.染色，普通顯微鏡下觀察注射部位血管，毛細血管對藥物的反應。2、健康家兔30只，雌雄各半，體重2.5士0.2kg，隨機分三組，第一組給生理鹽水，第二組為市售紫杉醇注射液，第三組為實施例3制備的復方紫杉醇脂肪乳注射液。每日耳緣靜脈給藥一次，20ml/只，1ml/min恒速推入，連續(xù)給藥一周，第七天藥后2小時處死動物，取注射部位10%福爾多林液固定，石臘包埋，H.E.染色，普通顯微鏡下觀察注射部位血管，毛細血管對藥物的反應。結果顯示，本發(fā)明復方紫杉醇脂肪乳注射液10例中有3例嗜中性白細胞向血管壁附著及浸潤，而市售紫杉醇注射液10例中有4例嗜中性白細胞向血管壁附著及浸潤，兩者均有不同程度的間質浮腫。市售紫杉醇注射液10例中有7例都存在混合血栓。本發(fā)明復方紫杉醇乳注射液IO例中未出現(xiàn)血栓。二者均有不同程度的靜脈內皮腫脹、毛細管周圍炎性反應，但本發(fā)明復方紫杉醇乳注射液顯著輕于市售紫杉醇注射液。試驗例二急性過敏試驗取豚鼠20只，隨機分成2組，雌雄各半。受試藥物為市售紫杉醇注射液和按實施例5制備的復方紫杉醇一鴉膽子油注射乳劑，分別按照4mg/kg劑量實施肌內注射，注射量為0.5ml，隔日注射，連續(xù)3次，觀察豚鼠行為及出現(xiàn)的毒副作用。結果，市售紫杉醇注射液組出現(xiàn)3級過敏反應，如多次抓鼻，顫抖，噴嚏，豎毛，抽搐，呼吸困難，2例出現(xiàn)大小便失禁，3只死亡；本發(fā)明復方紫杉醇一鴉膽子油注射乳劑出現(xiàn)1級過敏反應癥狀，出現(xiàn)豎毛，噴嚏現(xiàn)象，沒有死亡現(xiàn)象。因此，本發(fā)明復方紫杉醇一鴉膽子油注射乳劑較市售紫杉醇乳液過敏反應輕。試驗例三體內抗腫瘤試驗將處于生長旺盛期的小鼠Lewis肺癌組織制成稀薄懸液，接種于小鼠右側腋部皮下，約22.5X106細胞/支，接種24小時隨機分籠，尾靜脈給藥。給藥方案為市售紫杉醇注射液組，按實施例6制備的復方紫杉醇一鴉膽子油注射乳劑，空白對照組，每兩天給藥一次，共4次；停藥后48小時處死動物，稱瘤重，計算各組平均瘤重，按下公式求出腫瘤生長抑制率并進行T檢驗。腫瘤生長抑制率二空白對照組平均瘤重-治療組平均瘤重/空白平均瘤重X100%，結果見表2。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>結果顯示本發(fā)明復方紫杉醇一鴉膽子油注射乳劑抑瘤率顯著優(yōu)于紫杉醇注射液組，動物狀態(tài)好。權利要求1.一種復方紫杉醇—鴉膽子油注射乳劑，其特征在于它是由紫杉醇溶解于乙醇后加入鴉膽子油組成復合油相，再與卵磷脂、注射用水等注射用輔料制備成的水包油型乳劑。2.根據(jù)權利要求l所述復方紫杉醇一鴉膽子油注射乳劑，其特征在于:該乳劑中紫杉醇含量為O.510mg/g。3.根據(jù)權利要求l所述復方紫杉醇一鴉膽子油注射乳劑，其特征在于:紫杉醇乙醇鴉膽子油卵磷脂注射用水的重量配比=o.oiio:120:550:130:6001000。4.根據(jù)權利要求3所述復方紫杉醇一鴉膽子油注射乳劑，其特征在于:紫杉醇乙醇鴉膽子油卵磷脂注射用水的重量配比=0.055:215:io30:520:600800。5.根據(jù)權利要求4所述復方紫杉醇一鴉膽子油注射乳劑，其特征在于:紫杉醇乙醇鴉膽子油卵磷脂注射用水的重量配比=0.12:412:io20:515:600700。6.制備權利要求35任一項所述復方紫杉醇一鴉膽子油注射乳劑的方法，它包括如下步驟a、按上述重量比準備原料；b、將紫杉醇溶解于乙醇中，加入鴉膽子油混合均勻，形成油相；c、將卵磷脂分散于注射用水中得到水相；d、將水相和油相混合，用高速勻漿機攪拌5—10分鐘得初乳；將制得的乳劑置于高壓乳勻機中，在80100MPa的壓力下，乳化35次，用O.45ym的微孔濾膜過濾，分裝后于115。C高壓滅菌30分鐘即得。全文摘要本發(fā)明涉及一種復方紫杉醇—鴉膽子油注射乳劑及其制備方法，屬于制藥領域。所解決的技術問題是尋找一種載藥量大、副作用小、給藥方便的新的靜脈注射用紫杉醇乳劑及其制備方法，以滿足市場上對該種新藥的需求。具體地，它是由紫杉醇溶解于乙醇后加入鴉膽子油組成復合油相，再與卵磷脂、注射用水等注射用輔料制備成的水包油型乳劑。本發(fā)明經過大量篩選實驗得到紫杉醇，乙醇和鴉膽子油組成的復合油相中紫杉醇的溶解度很大，制備成水包油型乳劑，外水相中不含紫杉醇成分，有效降低因其引起的靜脈炎，過敏反應大大降低，增強患者的順應性。且本發(fā)明制劑處方簡單，稀釋后不產生沉淀，靜脈注射不會發(fā)生栓塞。為臨床提供一種新的靜脈注射用紫杉醇乳劑。文檔編號A61K31/337GK101361771SQ20081030485公開日2009年2月11日申請日期2008年10月10日優(yōu)先權日2008年10月10日發(fā)明者唐小海,鑫宋,謝永美,宇邱申請人:重慶萊美藥業(yè)股份有限公司