專利名稱：：注射用紫杉醇凍干微乳劑及其制備方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術領域：
，具體地說涉及含有紫杉醇的注射用凍干微乳劑及其制備方法。
背景技術：
：紫杉醇是一種新的、獨特的抗微管藥物，被美國新化合物實體(NCE)稱為近20年來極偉大的發(fā)現(xiàn)之一，它具有獨特的微管穩(wěn)定作用，是目前一類臨床上用于治療晚期卵巢癌、乳腺癌的最好藥物之一，另外還發(fā)現(xiàn)它們對非小細胞肺癌、前列腺癌、頭頸部腫瘤、類風濕性關節(jié)炎等也具有良好的療效。由于紫杉醇類物質的水溶性極差，目前臨床使用的紫杉醇制劑是用聚氧乙烯蓖麻油(Cremophoi^EL)與無水乙醇1:1混合制成的油劑，注射給藥前用生理鹽水或5%葡萄糖溶液稀釋到給藥濃度。由于聚氧乙烯蓖麻油在體內(nèi)能夠引起嚴重的過敏反應，給藥前需用抗過敏藥物對病人進行預處理，整個過程非常不便，需謹慎監(jiān)測用藥過程，給患者帶來了極大的痛苦。為避免因CremophoWEL及紫杉醇自身帶來的不良反應，提高紫杉醇的抗腫瘤作用，近年來，國內(nèi)外藥學工作者致力于紫杉醇新的給藥系統(tǒng)研究，其中最成功的是將其制備成脂質體，但是在一周的貯存期內(nèi)即能出現(xiàn)藥物沉淀，該脂質體的粒徑范圍在4.5-5um之間，同時存在大于30"m的粒子，在注射后通過毛細血管時可能引起栓塞，臨床應用具有一定的危險性；專利200410068134.3和03134714.2公開了紫杉醇乳劑，是將紫杉醇與注射用油，注射用乳化劑和注射用水混合制成脂肪乳劑，這種乳劑，可以克服現(xiàn)有注射液的一些缺陷，并可補充營養(yǎng)，但仍然存在載藥量低，貯存時間短，穩(wěn)定性差等缺點，并且平均粒徑均在500nm左右，不具備良好的器官靶向性；專利99800022.1公開了紫杉醇與非水溶性衍生物——聚乙二醇1000維生素E琥珀酸酯的組合物，雖然在一定程度上提高了紫杉醇的穩(wěn)定性，使其在該載體溶液中不易降解，但是機體對該制劑的耐受性還有待進一步研究；專利98811010.5公開了紫杉醇與環(huán)糊精的組合物，但環(huán)糊精有較大的過敏反應和溶血現(xiàn)象，限制了紫杉醇包合物的廣泛使用。其他紫杉醇制劑的研究還包括聚合物納米粒，固體脂質納米粒及供局部給藥的紫杉醇微球制劑和凝膠劑，但這些制劑不同程度的存在著藥物滲漏、體內(nèi)藥物的突釋行為以及聚合物的毒性問題。因此，開發(fā)方便安全的給藥系統(tǒng)成為了紫杉醇大規(guī)模應用的關鍵。為提高紫杉醇用藥的安全性和用藥的順應性，我們選擇微乳作為紫杉醇的載藥系統(tǒng)并進行了全面的研究。微乳自20世紀90年代有藥用產(chǎn)品上市以來，已有了較大的進展。作為藥物的膠體性載體，其主要優(yōu)點是毒性小、安全性高、高壓乳勻法易于大生產(chǎn)，還可增大難溶性藥物的溶解性，提高藥物的穩(wěn)定性，也可作為緩釋給藥系統(tǒng)，具有一定的靶向作用。微乳可認為是一種膨脹膠束體系，在其形成時，油相增溶到膠束的烴鏈核內(nèi)部，增大了內(nèi)核體積，且由于油相對藥物的溶解性較好，從而極大地提高藥物在微乳中的溶解度。此外，本發(fā)明還進一歩采用冷凍干燥法將紫杉醇微乳制劑制成塊狀固體或固體粉末，該方法提高了微乳的穩(wěn)定性，避免藥物的滲漏，有利于制劑的貯存，運輸和銷售。冷凍干燥過程中由于二糖的存在，有利于降低脂質的相轉變溫度。這樣，干膜脂質在室溫下為液晶相，避免了相分離的發(fā)生，且在復溶過程中不會發(fā)生相轉變和雙分子層的泄漏。因此，將微乳制成凍干制品，既保持了微乳的形態(tài)特征，保證藥物穩(wěn)定的包裹于微乳油相內(nèi)核中，又增加了產(chǎn)品的安全性和穩(wěn)定性，為臨床應用提供了可靠的保障。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于研制和向臨床提供一種供注射用的安全性高，療效顯著，性質穩(wěn)定，毒副作用小，制備工藝簡單并且適合工業(yè)化生產(chǎn)的注射用紫杉醇凍干微乳劑。采用有效劑量的紫杉醇作為藥物，并含有油相，乳化劑，助乳化劑，pH調節(jié)劑，等滲調節(jié)劑，凍干保護劑等藥用輔料，稱取處方量的乳化劑，助乳化劑和注射用油攪拌均勻后，將紫杉醇加入上述混合液中后攪拌至完全溶解，然后加入注射用水，充分攪勻，調節(jié)pH值后即得紫杉醇微乳劑，進一歩向其中加入凍干保護劑，經(jīng)真空冷凍干燥后，制成凍干微乳劑。使用前用生理鹽水,葡萄糖溶液或林格溶液進行稀釋，即可迅速回復成微乳。本發(fā)明能提高或改善藥物的包封率，具有控制藥物釋放、靶向定位釋放且穩(wěn)定性好等優(yōu)點。既能克服現(xiàn)有制劑的缺陷和不足，提供一種不含聚氧乙烯蓖麻油(Cremopho^EL)，吐溫以及有機溶劑的紫杉醇類物質制劑，又能提高紫杉醇類物質的生物利用度、臨床上持續(xù)給藥劑量以及治療指數(shù)。本發(fā)明的另一目的是提供了紫杉醇凍干微乳劑的制備方法，該方法均采用常規(guī)的工藝設備，可工業(yè)大規(guī)模高效率生產(chǎn)。并且本制劑通過冷凍干燥以塊狀固體或固體粉末形式保存，方便了制劑的貯存，運輸和銷售。在冷凍干燥過程中，保護劑形成一種具有極高粘度的"玻璃化"狀態(tài)，它包圍在乳滴的周圍，抑制了乳滴的運動和聚集。此外，微乳凍干失水過程中，保護劑二糖分子中的羥基能在失水部位與之連接，形成一種新的保護膜，使微乳在物理狀態(tài)上與有水存在時相似，從而保持了微乳的完整結構，避免了藥物的滲漏。本發(fā)明的注射用紫杉醇凍干微乳劑，各組分按重量百分比組成為-紫杉醇0.1%2%注射用油0.5%10%乳化劑0.1%20%助乳化劑0.1%15%抗氧劑適量pH調節(jié)劑調節(jié)pH3.08.0等滲調節(jié)劑適量凍干保護劑1.0%30%注射用水適量本發(fā)明所述的注射用油包括大豆油，紅花油，橄欖油，玉米油，沙棘油，亞麻子油，花生油，茶油，葵花籽油，C6C18中等脂肪鏈長度的甘油三酯類，魚油，薏仁油，月見草油，維生素E琥珀酸酯，維生素E醋酸酯，辛酸/癸酸甘油酯，米格列醇(Miglyol812)，油酸乙酯，油酸，亞油酸乙酯，月桂酸異丙酯，肉豆蔻酸異丙酯，丁酸乙酯，乳酸乙酯等中的一種或一種以上組合物。本發(fā)明所述的乳化劑包括天然大豆卵磷脂，天然蛋黃卵磷脂，天然磷脂酰膽堿或半合成磷脂酰膽堿及其衍生物，泊洛沙姆188，182,407，908,聚氧乙烯脂肪酸酯類，聚氧乙烯脂肪醇醚類，膽酸或去氧膽酸及其鈉鹽，甘膽酸鈉，牛磺膽酸鈉，去氧?；悄懰徕c等中的一種或一種以上組合物。本發(fā)明所述的輔助乳化劑包括聚乙二醇1000維生素E琥珀酸酯(TPGS)，聚乙二醇660-12-羥基硬脂酸酯(HS-15)，聚氧乙烯-8-辛酸/癸酸甘油酯(Labrasol)，聚乙二醇-二硬脂ft乙醇胺(PEG-DSPE)，乙二醇單乙基醚(Transcutol)，二已基琥珀?；撬徕c(Aeroso〗OT)，JH丁醇，乙二醇，丙二醇和聚甘油酯等中的一種或一種以上組合物。本發(fā)明所述的抗氧劑為亞硫酸鹽類，抗壞血酸，沒食子酸丙酯，抗壞血酸棕櫚酸酯，叔丁基對羥基茴香醚(BHA)，二叔丁基對甲酚(BHT)，維生素E等中的一種或一種以上組合物。本發(fā)明所述的pH調節(jié)劑為氫氧化鈉，擰檬酸鈉，擰檬酸，磷酸，醋酸或鹽酸中的一種或一種以上組合物。本發(fā)明所述的等滲調節(jié)劑為甘油，山梨醇，甘露醇或葡萄糖中的一種或一種以上組合物。本發(fā)明所述的凍干保護劑為蔗糖，乳糖，麥芽糖，葡萄糖，海藻糖，棉籽糖，果糖，己糖，山梨醇，木糖醇，甘露醇，氨基酸等中的一種或一種以上組合物。本發(fā)明所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，可通過如下方法制備(1)按處方量稱取紫杉醇，乳化劑，輔助乳化劑和注射用油，在4080'C加熱熔融得油相；(2)稱取處方量的注射用水，加入等滲調節(jié)劑和抗氧劑，在4080。C加熱溶解得水相；(3)以上兩相在408(TC下攪拌即得到紫杉醇微乳劑或經(jīng)高壓勻質形成納米乳，調節(jié)pH值3.08.0;(4)在制備好的紫杉醇微乳劑中加入適量保護劑，通過真空冷凍干燥方法得到固體制劑。本發(fā)明所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，粒徑在100nm以下，且分布均勻。本發(fā)明所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，破乳后測定相分布，該微乳劑共分三層，包括油層,乳化劑層和水層，其中油層中的藥物含量為90%99%,乳化劑層的藥物含量為1%10%，水層中的藥物含量低于0.01%。本發(fā)明所述的注射用紫杉醇凍千微乳劑，其紫杉醇的包封率在85%以上，滿足臨床使用的藥物包封率要求。本發(fā)明所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑可用生理鹽水，5%葡萄糖溶液或林格溶液進行稀釋，在〗00秒鐘內(nèi)即可溶解，并且粒徑和包封率沒有明顯變化。本發(fā)明所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，可被生理相容性溶液在相圖微乳區(qū)大體積稀釋，微乳的形態(tài)和類型保持不變，粒徑在100nm以下。本發(fā)明提供一種新的注射用紫杉醇凍干微乳劑，由于選用了合適的注射用油及乳化劑等組分以及合適的制備方法，該產(chǎn)品載藥量大，包封率高；該微乳劑進一步采用冷凍干燥法制成粉針劑，提高了制劑的穩(wěn)定性，保持了微乳的完整結構，避免了現(xiàn)有乳劑儲存期短，藥物易滲漏的缺點；該凍干微乳劑在臨用前用生理性溶液配伍后即可迅速溶解，并且在相圖微乳區(qū)可被大體積稀釋，微乳的形態(tài)和類型保持不變，粒徑和包封率沒有明顯變化，在48小時內(nèi)穩(wěn)定，未見藥物晶體析出；該凍干微乳劑無毒副作用，也無剌激性，極大地減少了患者輸液時的疼痛，易為患者接受；該制劑還具有一定的靶向性，提高了藥物的生物利用度和治療指數(shù)；該制劑制備工藝簡單易行，適于大量制備和工業(yè)化生產(chǎn)注射用紫杉醇凍干微乳劑。圖1是凍干前后微乳形態(tài)示意圖，其中I為凍干前II為凍干后；A為親水區(qū)；B為疏水區(qū)；C為真空冷凍干燥；l為紫杉醇；2為表面活性劑；3為助表面活性劑；4為油5為水；6為凍干保護劑。圖2是實施例1凍干前后微乳的粒徑圖A凍干前B凍干后圖3是實施例2透射電鏡下觀察的凍干前及凍干后復溶的微乳形態(tài)A凍干前B凍千后圖4是實施例3配伍穩(wěn)定性粒徑圖A凍干前B凍干后圖5是反相透析法測定實施例13凍干微乳劑的體外釋放曲線圖6是自制組與參比組多劑量組織分布圖具體實施方式實施例h(1〉稱取注射用大豆油50g,大豆磷脂12g，維生素￡2.0§，紫杉醇10g置于水浴中加熱攪拌瑢融，保持溫度70。C，作為油相；(2)稱取聚乙二醇1000維生素E琥珀酸酯(TPGS')15g，Poloxamer1884.0g，山梨醇9.5g加入到適量注射用水中，加熱攪拌使其溶解，保持溫度7(TC，作為水相。在攪拌下將水相滴入油相中，繼續(xù)攪拌，形成微乳或經(jīng)高壓750bar高壓乳勻6次形成納米乳，用0.2。/。檸檬酸調pH為5.5;(3)在上述紫杉醇微乳劑中加入15%蔗糖，在-80。C預凍8h后，真空冷凍干燥72h,即得注射用紫杉醇凍干微乳劑。將凍干制劑加水復溶后測得粒徑37.2nm，包封率為87.3%,以5%葡萄糖溶液或0.9%氯化鈉溶液稀釋后48h內(nèi)無沉淀析出，凍干前后粒徑結果如圖2所示。將冷凍干燥的微乳劑在室溫下儲存3個月后，加水復溶后測得粒徑25.6nm，包封率為85.8%。實施例2:(1)稱取中鏈油35g，蛋黃磷脂20g，紫杉醇18g置于水浴中加熱攪拌熔融，保持溫度65'C，作為油相；(2)稱取乙二醇單乙基醚(Transcutol)25g，去氧膽酸鈉3.0g，甘露醇8.5g，抗壞血酸1.0g加入到適量注射用水中，加熱攪拌使其溶解，保持溫度65'C，作為水相。在攪拌下將水相滴入油相中，繼續(xù)攪拌，形成微乳，用0.1mol/LNaOH調pH7.0;(3)在上述紫杉醇微乳劑中加入20%海藻糖，在-85。C預凍7h后，真空冷凍干燥64h，即得注射用紫杉醇凍干微乳劑。將凍干制劑加水復溶后測得包封率為90.1%，粒徑35.5nm，以5%葡萄糖溶液或0.9%氯化鈉溶液稀釋后48h內(nèi)無沉淀析出。將冷凍干燥的微乳劑在室溫下儲存3個月后，加水復溶后測得包封率為87.3%,粒徑37.4nm。實施例3:(1)稱取油酸乙酯45g，大豆油25g，大豆磷脂15g，紫杉醇6.0g置于水浴中加熱攪拌熔融，保持溫度75°C，作為油相；(2)稱取聚乙二醇-二硬脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)2.5g，Poloxamerl885.0g，亞硫酸鈉1.2g，甘油10.0g加入到適量注射用水中，加熱攪拌使其溶解，保持溫度75。C，作為水相。在攪拌下將水相滴入油相中，繼續(xù)攪拌，形成微乳，用0.5mol/L磷酸調pH為5.5;(3)在上述紫杉醇微乳劑中加入12%甘露醇，在-55t:預凍12h，真空冷凍干燥80h，即得注射用紫杉醇凍干微乳劑。將凍干制劑加水復溶后測得包封率為89.3%,粒徑30.1nm，以5%葡萄糖溶液或0.9%氯化鈉溶液稀釋后4811內(nèi)無沉淀析出。將冷凍干燥的微乳劑在室溫下儲存3個月后，加水復溶后測得包封率為87.6%，粒徑32.8nm。實施例4:(1)稱取紅花油25g，亞油酸乙酯25g，蛋黃磷脂22.5g，聚氧乙烯-8-辛酸/癸酸甘油酉旨(Labrasol)8.0g，紫杉醇30g置于水浴中加熱攪拌熔融，保持溫度7(TC，作為油相；(2)稱取?；悄懰徕c7.5g，抗壞血酸1.Og加入到適量注射用水中，加熱攪拌使其溶解，保持溫度70°C，用0.lmo/L鹽酸溶液調節(jié)pH為3.0;(3)在上述紫杉醇微乳劑中加入15%蔗糖，在-65。C預凍10h后，真空冷凍干燥72h，即得注射用紫杉醇凍干微乳劑。將凍干制劑加水復溶后測得包封率為87.3%，粒徑38.6nm，以5%葡萄糖溶液或0.9%氯化鈉溶液稀釋后48h內(nèi)無沉淀析出。將冷凍干燥的微乳劑在室溫下儲存3個月后，加水復溶后測得包封率為85.1%，粒徑34.0腦。實施例5:(1)稱取月桂醇異丙酯100g，大豆磷脂42.5§，正丁醇47.58，紫杉醇65g置于水浴中加熱攪拌熔融，保持溫度65。C，作為油相；(2)稱取Poloxamerl886.0g，甘油150g，維生素E2.5g加入到適量注射用水中，加熱攪拌使其溶解，保持溫度65t:，用2.0y。檸檬酸溶液調節(jié)pH為5.0;(3)在上述紫杉醇微乳劑中加入10%乳糖和10%海藻糖，在-70。C預凍8h后，真空冷凍干燥72h，即得注射用紫杉醇凍干微乳劑。將凍干制劑加水復溶后測得包封率為86.1%,粒徑54.3nm，以5%葡萄糖溶液或0.9%氯化鈉溶液稀釋后48h內(nèi)無沉淀析出。將冷凍干燥的微乳劑在室溫下儲存3個月后，加水復溶后測得包封率為85.7%，粒徑53.2nm。實施例6:(1)稱取米格列醇(Miglyo1812)120g，蛋黃磷脂86.5g，乙二醇43.0g，紫杉醇75g置于水浴中加熱攪拌熔融，保持溫度80°C，作為油相；(2)稱取聚乙二醇660-12-羥基硬脂酸酯(HS-15)200g，Polox咖er40712.0g，山梨醇4.5g，亞硫酸鈉1.0g加入到適量注射用水中，加熱攪拌使其溶解，保持溫度80'C，用0.5mol/L磷酸調pH為5.5;(3)在上述紫杉醇微乳劑中加入20%葡萄糖，在-55。C預凍12h后，真空冷凍千燥74h，即得注射用紫杉醇凍干微乳劑。將凍干制劑加水復溶后測得包封率為92.7%，粒徑26.3nm，以5%葡萄糖溶液或0.9%氯化鈉溶液稀釋后48h內(nèi)無沉淀析出。將冷凍干燥的微乳劑在室溫下儲存3個月后，加水復溶后測得包封率為90.1%,粒徑28.3nm。實施例7:紫杉醇在微乳劑中的相分布試驗取3mL自制微乳劑加入氯化鈉使溶液飽和后，在酒精燈上直火加熱，使其破乳分層，從上到下依次為油層，乳化劑層和水層。分別取出油層和水層，按照含量測定方法進高效液相色譜儀分析，以紫杉醇微乳的含量為參比，計算油層和水層中紫杉醇的標示百分含量分別為95.37%和9.68X10-3%，結果表明藥物主要分布于油相中。實施例8:包封率的測定微柱離心法測定包封率將用蒸餾水平衡好的SephadexG-50裝入3mL固相萃取柱的針筒中(5.2cmX0.9cm)，底部放一略小于其內(nèi)徑的圓形篩板，離心(IOOOr*min-l)lmin，除去多余的水分，制成SephadexG-50的微型柱。取實施例16中的紫杉醇凍干微乳劑及室溫儲存3個月樣品，加水復溶后分別精密吸取0.2mL，緩緩加于柱頂部，1000r*min-l離心lmin。由柱頂部加入1.0mL40^乙醇溶液，1000rmin-1離心lmin，收集濾過液，再于柱頂部加入相同體積的40%乙醇溶液，重復以上操作，合并19管濾過液，加40%乙醇溶液稀釋并定容至25mL，搖勻，精密吸取20uL溶液，進樣，測定峰面積，用外標一點法計算紫杉醇的含量，記為Ml;另吸取0.2mL微乳，置于25mL容量瓶中，加無水乙醇定容至刻度，搖勻，精密吸取20nL上清液進樣，計為MO;按下式計算包封率包封率(％)=(M17M0)X100%，Ml為微乳中所包封的紫杉醇的量；MO為微乳中紫杉醇的總量。實施例9:取實施例2中凍干前和凍干后復溶的產(chǎn)品進行透射電鏡觀察，比較兩者在凍干前后的微觀形態(tài)變化，結果如圖3所示?？梢钥闯?，凍干后，微乳的粒徑與凍干前相比更加均勻，凍干過程中，保護劑分布于微粒內(nèi)外，從而阻止了微粒間相互聚集、融合，起到類似空間穩(wěn)定作用。因此，冷凍干燥后復溶的微乳形態(tài)依然圓整，未見藥物晶體析出，凍干前后微乳形態(tài)示意圖如圖1所示。實施例10:配伍穩(wěn)定性試驗取實施例3中紫杉醇凍干微乳劑，用生理鹽水，5%葡萄糖溶液或林格溶液等生理相容性溶液稀釋至臨床給藥濃度，分別于Oh和放置6h后測得粒徑大小為30.1nm和31.0nm，包封率為89.3%和88.7%，粒徑如圖4所示。實施例11:取實施例13中紫杉醇凍干微乳制劑，測定其體外釋放曲線。采用反相動態(tài)透析法，以pH7.4PBS+20。/。乙醇溶液200mL為釋放介質，轉速50r*min-l，溫度(37±0.5)。C。將12個大小一致，裝有2mL釋放介質的透析袋(截留分子量1200014000)，浸入釋放介質中，平衡12h。分別于0.25,0.5，1.0，2.0，4.0，8.0，12.0，24.0，48.0，60.0h各取出一個透析袋，吸取袋內(nèi)適量溶液，同時補入等量同溫釋放介質，樣品過濾后進樣。結果表明，在釋放條件下，前8小時釋放速度較快，隨后釋放速度減慢。結果如圖5所示。實施例12:含量測定取實施例46中的紫杉醇凍干微乳劑加水復溶后，精密量取紫杉醇微乳混懸液0.5mL，置于10mL容量瓶中，加無水乙醇定容至刻度，搖勻，超聲后，3500r*min-l離心3min，取上清液，進高效液相色譜儀分析，以對照溶液為外標，按外標法，以峰面積計算，得樣品中紫杉醇的標示百分含量分別為98.5%，99.1%，98.0%。實施例13:刺激性試驗注射用紫杉醇凍干微乳劑用生理鹽水或5%葡萄糖溶液配伍稀釋后對兔耳緣靜脈注射10.0mg/kg的劑量，未見明顯剌激性。過敏試驗:注射用紫杉醇凍干微乳劑用生理鹽水或5%葡萄糖溶液配伍稀釋后給豚鼠0.2m1/只(0.6mg/kg)皮下注射致敏，攻擊劑量為0.8ml/只(7.2mg/kg)，結果為陰性。溶血試驗在裝有注射用紫杉醇凍干微乳劑用生理鹽水或5%葡萄糖溶液配伍稀釋后2.5mL的試管中加入濃度為2%家兔紅血球混懸液2.5mL，結果無溶血作用。實施例14:急性毒性試驗18只SD大鼠六只一組分成三組，第一組對照組注射生理鹽水，第二組注射市售紫杉醇(Taxol)注射液，第三組注射自制的紫杉醇凍干微乳劑，給藥前，用生理鹽水將紫杉醇(Taxol)注射液和紫杉醇凍干微乳劑稀釋為濃度1.0mg/mL，尾靜脈注射給藥15mg/kg，注射15天后檢查動物的存活率和器官重量(單位克)，結果如表1所示。市售紫杉醇注射液尾靜脈注射后立即表現(xiàn)出運動失調并對外界剌激不反應，24小時內(nèi)全部死亡。而自制紫杉醇凍千微乳劑給藥后動物行為正常，實驗后的幾天，體重并未明顯下降，死亡的一只動物在給藥后的第9天。因此，從結果中可以得出，自制組制劑靜脈注射后毒副作用明顯小于市售制劑。表1市售紫杉醇注射液與自制紫杉醇凍干微乳劑的毒性比較<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實施例15:組織分布試驗雌性荷瘤小鼠12只，隨機分成2組，分別按4mg/kg劑量尾靜脈緩慢推注自制紫杉醇凍干微乳劑和市售紫杉醇(Taxol)注射液，連續(xù)給藥6天，第6天給藥后4h乙醚麻醉，摘眼球采血，立即解剖采集心、肝、脾、肺、腎、腦、胰腺、生殖腺、股骨、胸骨、胃、小腸、大腸、平滑肌、骨骼肌、脂肪、膀胱、瘤體，勻漿后測定各組織中的藥物濃度，結果除肺部外，自制組在各個組織中的濃度普遍高于參比組，其中在腫瘤部位的藥物濃度約為市售組的2倍。自制組臟器中藥物的分布順序為肝>膀胱>胸骨>胰腺>小腸>脾>腎>卵巢>心>大腸>子宮>肺>胃>骨骼肌>平滑肌>股骨>腫瘤>腦>血漿>脂肪；市售組臟器中藥物的分布順序為肺>肝>小腸>胰腺>胸骨>脾>大腸>卵巢>腎>膀胱>子宮>心>骨骼肌>胃>平滑肌>脂肪>血槳>股骨>腦>腫瘤。結果見圖6所示。權利要求1.本發(fā)明的注射用紫杉醇凍干微乳劑，各組分按重量百分比組成為紫杉醇0.1％～2％注射用油0.5％～10％乳化劑0.1％～20％輔助乳化劑0.1％～15％抗氧劑適量pH調節(jié)劑調節(jié)pH3.0～8.0等滲調節(jié)劑適量凍干保護劑1.0％～30％注射用水適量2.根據(jù)權利耍求1所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，其特征在了-所述的注射用油包括大豆油，紅花油，橄欖油，玉米油，沙棘油，亞麻子油，花生油，茶油，葵花籽油，C6~C18中等脂肪鏈長度的甘油三酷類，魚油，薏仁油，月見草油，維生素E琥珀酸酯，維生素E醋酸酯，辛酸/癸酸甘油酯，米格列醇(Miglyol812)，油酸乙酯，油酸，亞油酸乙酯，月桂酸異丙酯，肉豆蔻酸異丙酯，丁酸乙酯，乳酸乙酯等中的一種成一種以上組合物；乳化劑包括天然火豆卵磷脂，天然蛋黃卵磷脂，天然磷脂酰膽堿或半合成磷脂酰膽堿及其衍生物，泊洛沙姆188,182,407,908，聚氧乙烯脂肪酸酯類，聚氧乙烯脂肪醇醚類，膽酸成去氧膽酸及其鈉鹽，甘膽酸鈉，?；悄懰徕c，去氧?；悄懰徕c等中的一種或一種以上組合物；輔助乳化劑包括聚乙二醇IOOO維生素E琥珀酸酯(TPGS)，聚乙二醇660-12-羥基硬脂酸酯(HS-15),聚氧乙烯-8-辛酸/癸酸甘油酯(Labrasol),聚乙二醇-二硬脂酰乙醇胺(PEG-DSPE),乙二醇單乙基醚(Transcutol)，一己基琥珀?；撬徕c(AerosolOT)，正丁醇，乙二醇，丙二醇和聚甘油酯等中的一種或一種以上組合物；抗氧劑為亞硫酸鹽類，抗壞血酸，沒食子酸丙酯，抗壞血酸棕櫚酸酯，叔丁基對羥基茴香醚(BHA)，—叔丁基對甲酚(BHT)，維生素E等中的一種或一種以上組合物；pH調節(jié)劑為氫氧化鈉，檸檬酸鈉，檸檬酸，'磷酸，醋酸或鹽酸中的一種成一種以上組合物；等滲調節(jié)劑為甘油，山梨醇，甘露醇或葡萄糖中的一種成一種以上組合物；凍干保護劑包括蔗糖，乳糖，麥芽糖，葡萄糖，海藻糖，棉籽糖，果糖，己糖，山梨醇，TlC瞎醇，甘露醇，氨基酸等中的一種或一種以上組合物。3.根據(jù)權利耍求1所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑的制備方法，其特征包括如下步驟(l)按處方呈稱取紫杉醇，乳化劑，輔助乳化劑和注射用油，在4080。C加熱熔融得油相；(2)稱取處方量的注射用水，加入等滲調節(jié)劑和抗氧劑，在4080。C加熱溶解得水相；(3)以上兩相在408(TC下攪拌即得到紫杉醇微乳劑或經(jīng)高壓勻質形成納米乳，調節(jié)pH值3.08.0;(4)在制備好的紫杉醇微乳劑中加入適量保護劑，通過真空冷凍干燥方法得到固體制劑。4.根據(jù)權利要求1所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，其特征在于所述的粒徑在lOOmn以下，且分布均勻。5.根據(jù)權利耍求1所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，其特征在于破乳后測定相分布，該微乳劑共分三層，包括油層，乳化劑層和水層，其中油層中的藥物含量為85%99%，乳化劑層的藥物含試為1%15%，水層中的藥物含量低于0.01%。6.根據(jù)權利要求1所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，其特征在于所述的紫杉醇的包封率在85%以上，滿足臨床使用的藥物包封率要求。7.根據(jù)權利耍求1所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，其特征在于使用前可用生理鹽水，5%葡萄糖溶液或林格溶液等生理相容性溶液進行稀釋，在100秒鐘內(nèi)即可溶解，并且粒徑和包封率沒有明顯變化。8.根據(jù)權利耍求1所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，其特征在于可被生理相容性溶液在相圖微乳區(qū)大體積稀釋，微乳的形態(tài)和類型保持不變，粒徑在100nm以下。9.根據(jù)權利耍求1所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，其特征在于與溶液配伍后，在48小時內(nèi)穩(wěn)定，未見藥物晶體析山。10.根據(jù)權利耍求1所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，其特征在于具有緩慢釋藥特性，可增大單次給藥劑量，減少臨床給藥次數(shù)。臨床應用無致敏及變態(tài)反應，無需進行預防過敏治療，縮短治療準備時間。全文摘要本發(fā)明提供了一種注射用紫杉醇的凍干微乳劑及其制備方法。采用有效劑量的紫杉醇作為藥物，并含有油相，乳化劑，助乳化劑，pH調節(jié)劑，等滲調節(jié)劑，凍干保護劑等藥用輔料，稱取處方量的乳化劑，助乳化劑和注射用油攪拌均勻后，將紫杉醇加入上述混合液中后攪拌至完全溶解，然后加入注射用水，充分攪勻，調節(jié)pH值后即得紫杉醇微乳劑，進一步向其加入凍干保護劑，經(jīng)真空冷凍干燥后，制成凍干微乳劑。使用前用生理鹽水，葡萄糖溶液或林格溶液等生理相容性溶液進行稀釋，即可迅速回復成微乳。本發(fā)明的特點是通過將紫杉醇微乳進一步冷凍干燥的工藝，顯著提高了紫杉醇的穩(wěn)定性和療效，大大降低了毒副作用，特別值得關注的是，冷凍干燥法對微乳起到了很好的保護作用，避免了藥物的滲漏，對于建立紫杉醇微乳載藥系統(tǒng)的穩(wěn)定劑型及其長期保存開辟了新的前景。本發(fā)明提供的凍干微乳劑的制備方法，制備工藝簡單，不含有機溶劑，成本低廉，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。文檔編號A61P35/00GK101428002SQ20081022890公開日2009年5月13日申請日期2008年11月20日優(yōu)先權日2008年11月20日發(fā)明者丹劉,健宋,李淑斌,潔鮑申請人:沈陽萬愛普利德醫(yī)藥科技有限公司