專利名稱：知母總皂苷在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，涉及一種知母總皂苷(ZMZG)提取物的新藥物用途。
背景技術(shù)：
知母系百合科植物知母(Anemarrhena asphodeloides Bge.)的干燥根莖。主產(chǎn)河北、山西。以河北易縣所產(chǎn)品質(zhì)最佳，稱“西陵知母”。具有清熱瀉火、生津潤燥的功效，主治外感熱病，高熱煩渴，肺熱燥咳，內(nèi)熱消渴，腸燥便秘等癥。知母總皂苷是從知母中提取的活性成分，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)血小板聚集有明顯的抑制作用，也有抗炎作用和抗病毒作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提出一種抗真菌的藥物，并提供其實(shí)用的劑型。從藥理實(shí)驗(yàn)看出，知母總皂苷有較好的抗真菌作用，可以用于真菌型皮膚病的治療，且無毒副作用，同時(shí)也拓寬了知母原藥材的開發(fā)利用領(lǐng)域。
由于本發(fā)明首次公開知母總皂苷提取物在抗真菌方面的藥物作用，因此將知母總皂苷單獨(dú)或與其他活性組分或輔料配制成藥劑，用于抗真菌的作用。
本發(fā)明的知母總皂苷是一種藥物活性成分，按常規(guī)的制劑工藝，可以知母總皂苷為主要活性成分，加入常規(guī)的輔型劑、溶劑、增溶劑、基質(zhì)、防腐劑等輔料，制成適合于臨床上使用的劑型。例如乳膏劑、霜?jiǎng)Ⅳ鷦?、糊劑、乳劑、乳膠劑、凝膠劑等。
本發(fā)明知母總皂苷提取物的含量在劑型中1％——10％的范圍內(nèi)，可以每日給藥2次或多次，優(yōu)選的是10％，每次給藥2次，適宜的給藥途徑是外用，皮膚給藥。
知母總皂苷提取方法，采取大孔樹脂法提取，即知母1000g，水煮3次，每次2h，濾過，合并水提液，經(jīng)大孔樹脂吸附，用水洗至無色后，用乙醇洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓蒸出乙醇，得淡黃色粉末，真空干燥，即得知母總皂苷。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例一組成(10g知母總皂苷/100g軟膏)乳膏劑配制方法知母總皂苷10.0g、硬脂酸9.6g、單硬脂酸甘油酯2.8g、液體石蠟4.8g、白凡士林0.8g、羊毛脂4.0g、三乙醇胺0.32g、羥苯乙酯0.1g蒸餾水適量；制法硬脂酸，單硬脂酸甘油酯，液體石蠟，白凡士林和羊毛脂為油相，置蒸發(fā)皿中，于水浴上加熱至80℃左右，取ZMZG溶于蒸餾水中，與三乙醇胺，羥苯乙酯置燒杯中，水浴加熱至80℃左右。在等溫下將水相緩緩倒入油相中，并在水浴上不斷攪拌至半固體狀，再在室溫下攪拌近至冷凝，高壓滅菌后備用。
實(shí)施例二實(shí)驗(yàn)1、體外抗真菌作用材料與方法供試菌種石膏樣毛癬菌，石膏樣小孢子菌，絮狀表皮癬菌(中國醫(yī)科院皮膚病醫(yī)院真菌科提供)。
培養(yǎng)基沙氏肉湯培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)方法采用液體試管法，將制備好的液體培養(yǎng)基在無菌環(huán)境條件分裝入12支試管中，每管1ml，將知母總皂苷用蒸餾水配制成50mg/ml為原液，取1ml加入第一個(gè)試管內(nèi)，采用試管二倍稀釋法制成25mg/ml，12.5mg/ml，6.25mg/ml，3.125mg/ml，1.5625mg/ml，0.7813mg/ml，0.3906mg/ml，0.1925mg/ml，0.0977mg/ml，0.0488mg/ml系列濃度的藥液培養(yǎng)基。每個(gè)含藥試管內(nèi)加入0.1ml的菌懸液(1×104-1×105cfu/ml)。第11管不加菌液，作為陰性對(duì)照，第12管加菌液，作為陽性對(duì)照。置26℃恒溫箱中培養(yǎng)一周，每日觀察其生長情況，并做記錄。真菌不生長的最高藥物稀釋度為該藥的最低抑菌濃度(MIC)。取出真菌不生長的藥液培養(yǎng)基移種到平皿沙氏瓊脂基上，于26℃培養(yǎng)一周再觀察結(jié)果，真菌不生長的最高稀釋度為該藥的最低殺菌濃度(MBC)。見表1表1 知母總皂苷對(duì)三種皮膚癬菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，知母總皂苷對(duì)石膏樣毛癬菌，石膏樣小孢子菌和絮狀表皮癬菌均有抑菌和殺菌作用，尤其對(duì)石膏樣毛癬菌的作用較為顯著。
實(shí)驗(yàn)2 治療效果實(shí)驗(yàn)材料與方法藥物知母總皂苷乳膏；乳膏基質(zhì)；達(dá)克寧乳膏(西安楊森制藥有限公司，產(chǎn)品批號(hào)050406545)動(dòng)物健康白色豚鼠30只(由長春高新醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心提供，合格證號(hào)SCXK-(吉)2003-0004)，雌雄各半，體重250g±50g。
菌種石膏樣毛癬菌。
方法菌懸液制備用接種鉤取在沙氏斜面培養(yǎng)基上生長的石膏樣毛癬菌的成熟菌落，加到無菌生理鹽水中，經(jīng)研磨勻漿后制成約(1～5)×106cfu/ml的孢子混懸液。
豚鼠感染模型的制備用脫毛劑在豚鼠脊柱兩側(cè)背部制備光滑無毛區(qū)，每只豚鼠背側(cè)面感染區(qū)剃毛4×5cm，24小時(shí)后，按常規(guī)方法人工感染石膏樣毛癬菌，3～5天后，局部感染明顯形成，經(jīng)真菌學(xué)檢查陽性后，確定感染成功。
將30只感染的豚鼠隨機(jī)分3組，ZMZG乳膏組，乳膏基質(zhì)組，陽性對(duì)照組(達(dá)克寧乳膏)，每組10只。每感染處用藥量0.2g，2次/天，連續(xù)2周，每2天進(jìn)行一次真菌學(xué)鏡檢和皮損觀察。療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為2級(jí)治愈為皮損消退真菌鏡檢連續(xù)2次陰性；無效為皮損未消退，真菌鏡檢陽性。
結(jié)果知母總皂苷乳膏治療豚鼠局部皮膚感染石膏樣毛癬菌，二周的治愈率為85％(見表2)；達(dá)克寧乳膏治療豚鼠局部皮膚感染石膏樣毛癬菌，二周的治愈率為80％(見表2)。知母總皂苷乳膏二周的治愈率與達(dá)克寧乳膏二周的治愈率比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無顯著性差異(P＞0.05)。表明ZMZG乳膏在皮膚癬病治療效果上與達(dá)克寧相近。
表2 知母總皂苷乳膏對(duì)豚鼠局部皮膚感染石膏樣毛癬菌的治療結(jié)果

注乳膏基質(zhì)組與知母總皂苷乳膏組，乳膏基質(zhì)組與陽性對(duì)照組比較**P＜0.05知母總皂苷乳膏組與陽性對(duì)照組比較#P＞0.05實(shí)驗(yàn)3 皮膚刺激實(shí)驗(yàn)材料與方法藥物知母總皂苷乳膏，乳膏基質(zhì)。
動(dòng)物健康白色豚鼠10只(由長春高新醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心提供，合格證號(hào)SCXK-(吉)2003-0004)，雌雄各半，體重250g±50g。
方法實(shí)驗(yàn)前24小時(shí)將豚鼠背部脊柱兩側(cè)脫毛而不損傷皮膚，脫毛面積為4cm×5cm。一塊脫毛區(qū)做正常皮膚刺激實(shí)驗(yàn)，分為給藥區(qū)和對(duì)照區(qū)。給藥區(qū)涂抹ZMZG乳膏劑0.2g對(duì)照區(qū)涂以等量的乳膏基質(zhì)，用一層塑料薄膜覆蓋，再用膠布固定。另一塊脫毛區(qū)作損傷皮膚刺激實(shí)驗(yàn)，給藥前用針頭在脫毛區(qū)皮膚上劃出“#”形擦傷，刺傷表皮，不傷真皮，有輕度的滲血為度。給藥方法同上；給藥24小時(shí)后，除去藥物，分別記錄1、24、48及72小時(shí)給藥部位出現(xiàn)的紅斑和水腫的情況，按表3評(píng)分并評(píng)價(jià)刺激強(qiáng)度。
表3 皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表4 知母總皂苷ZMZG乳膏劑對(duì)皮膚刺激的平均反應(yīng)值

結(jié)果表4可見ZMZG乳膏與基質(zhì)組對(duì)正常皮膚與損傷皮膚的平均反應(yīng)值無明顯差別。說明給藥組對(duì)正常及損傷皮膚均無刺激性，基質(zhì)組亦無刺激性。
實(shí)驗(yàn)4 皮膚過敏實(shí)驗(yàn)材料與方法藥物知母總皂苷乳膏，2、4-二硝基氯苯，乳膏基質(zhì)。
動(dòng)物健康白色豚鼠40只，雌雄各半，體重250g±50g(由長春高新醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心提)。
方法將動(dòng)物隨機(jī)分4組，ZMZG乳膏，基質(zhì)對(duì)照組，空白對(duì)照組，陽性對(duì)照組(2、4-二硝基氯苯)，每組10只。實(shí)驗(yàn)前24小時(shí)在豚鼠背部左側(cè)脫毛，脫毛面積為4cm×5cm。按皮膚涂抹法給藥。致敏接觸各給藥組分別涂以0.2g(0.2ml)藥液于去毛區(qū)?？瞻讓?duì)照組涂等量的蒸餾水，持續(xù)6小時(shí)后去除覆蓋固定物。第7天和第14天，以同樣方法重復(fù)一次，第28天激發(fā)給藥，同樣方法將幾種受試物分別涂于動(dòng)物背部皮膚右側(cè)去毛區(qū)，6小時(shí)候洗去受試物，即刻觀察，然后于24、48及72小時(shí)再次觀察皮膚過敏反應(yīng)情況，按表5標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分，并評(píng)價(jià)致敏程度。
表5 皮膚過敏反應(yīng)程度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表6 知母總皂苷(ZMZG)乳膏對(duì)豚鼠皮膚過敏的影響

結(jié)果如表6所示，陽性藥物2、4-二硝基氯苯組動(dòng)物皮膚受試區(qū)激發(fā)給藥6小時(shí)后，有明顯輕度紅斑出現(xiàn)，無水腫，致敏率100％?；|(zhì)對(duì)照組動(dòng)物皮膚受試區(qū)在激發(fā)給藥后一只動(dòng)物略見紅斑，48小時(shí)后恢復(fù)正常，認(rèn)為無致敏現(xiàn)象。ZMZG乳膏組動(dòng)物皮膚受試區(qū)自激發(fā)給藥6至72小時(shí)后未出現(xiàn)紅斑及水腫，與空白對(duì)照組沒有差異。由此可見知母總皂苷乳膏無致敏作用。
實(shí)驗(yàn)5 皮膚急性毒性實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康白色豚鼠20只(由長春高新醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心提供，合格證號(hào)SCXK-(吉)2003-0004)，雌雄各半，體重250g±50g。
藥物知母總皂苷乳膏劑方法動(dòng)物隨機(jī)分成2組(即完整皮膚組和破損皮膚組)，受試前24小時(shí)豚鼠背部兩側(cè)去毛4cm×5cm，將其中10只做破損皮膚。每塊脫毛區(qū)涂ZMZG乳膏劑，給藥24小時(shí)除去藥物，連續(xù)觀察7天。結(jié)果未發(fā)現(xiàn)任何異常反應(yīng)，故認(rèn)為該藥在此劑量下對(duì)豚鼠外用無任何急性毒性反應(yīng)出現(xiàn)。
權(quán)利要求
1.知母總皂苷在置備抗真菌藥物中的應(yīng)用。
2.知母總皂苷為主要活性成分，加入常規(guī)的輔型劑、溶劑、增溶劑、基質(zhì)、防腐劑制成適合于臨床上使用的乳膏劑、霜?jiǎng)?、酊劑、糊劑、乳劑、乳膠劑、凝膠劑。
全文摘要
知母總皂苷在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用本發(fā)明涉及知母總皂苷(ZMZG)在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用。屬于中藥領(lǐng)域。本發(fā)明提出ZMZG在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用。從藥理實(shí)驗(yàn)看出，ZMZG有較好的抗皮膚真菌作用，可以用于對(duì)真菌性皮膚病的治療，且無毒副作用，同時(shí)拓寬了知母原藥材的開發(fā)利用領(lǐng)域。本發(fā)明的ZMZG是一種藥物活性成分，按常規(guī)的制劑工藝，可以ZMZG為主要活性成分，加入常規(guī)的賦型劑、基質(zhì)、防腐劑，制成適合于臨床上使用的劑型。
文檔編號(hào)A61P31/10GK1768823SQ200510017190
公開日2006年5月10日 申請(qǐng)日期2005年10月17日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月17日
發(fā)明者李靜, 李娟 , 巨艷紅, 甄清, 李勇 申請(qǐng)人:吉林大學(xué)