抗菌消炎膠囊中知母的薄層色譜鑒別方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及抗菌消炎膠囊的質(zhì)量檢測方法，尤其是涉及抗菌消炎膠囊中知母的薄層色譜鑒別方法。
【背景技術(shù)】
[0002]抗菌消炎膠囊為收載于部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)第七冊(cè)的抗菌消炎片改變劑型品種，由金銀花、百部、黃芩、大黃、大青葉、知母、金錢草等7味中藥組成，具有清熱、瀉火、解毒的功效。原片劑標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)組方中任何有效成分進(jìn)行定性、定量監(jiān)控。在《中國藥典》(2010年版)中也未收入有關(guān)抗菌消炎膠囊含量測定的方法和標(biāo)準(zhǔn)。知母為抗菌消炎膠囊的主要組分，為有效控制抗菌消炎膠囊的質(zhì)量，檢測其中的知母是必要的。而知母的主要成分為知母皂苷類，其苷元主要為菝葜皂苷元，菝葜皂苷元易溶于乙醇、石油醚和苯等弱極性至中等極性溶劑。現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)于知母或其制劑的鑒別多以菝葜皂苷元為對(duì)照品，以石油醚和苯為溶劑或展開劑。有文獻(xiàn)以苯一丙酮(9: I)為展開劑，但苯有劇毒性，對(duì)試驗(yàn)者和環(huán)境有害，且該展開劑可使陰性樣品產(chǎn)生部分陰性干擾。由此應(yīng)研宄適合知母或其制劑的非毒性展開劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明為克服以上技術(shù)缺陷，提供了一種抗菌消炎膠囊中知母的薄層色譜鑒別方法，該方法使用非毒性溶劑和展開劑，安全有效。
[0004]在抗菌消炎膠囊中知母的薄層色譜法鑒別中，本發(fā)明以菝葜皂苷元為對(duì)照品，使用以下展開劑系統(tǒng):
[0005](I)環(huán)己烷-異丙醇，配比按試液體積比為8.5-9.5: 0.5-1.5 ；
[0006](2)環(huán)己烷-異丙醇-濃氨試液，配比按試液體積比為8.5-9.5: 0.5-1.5: 0.2。
[0007]其中的優(yōu)選展開劑系統(tǒng)為:
[0008]A、環(huán)己烷-異丙醇，配比按試液體積比為9: I;
[0009]B、環(huán)己烷-異丙醇-濃氨試液，配比按試液體積比為9.5: 0.5: 0.2;
[0010]C、環(huán)己烷-異丙醇-濃氨試液，配比按試液體積比為9.5:1: 0.2;
[0011]D、環(huán)己烷:異丙醇，配比按試液體積比為9: 1，氨蒸氣預(yù)飽和20min。
[0012]具體的鑒別方法包括以下步驟:
[0013]1、供試品溶液的制備:取抗菌消炎膠囊內(nèi)容物，用乙醇加熱回流提取，濃縮，濃縮物用環(huán)己烷提取，制成按內(nèi)容物計(jì)3g/ml的環(huán)己烷溶液；
[0014]2、對(duì)照品溶液制備:取菝葜皂苷元對(duì)照品，加環(huán)己烷制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液；
[0015]3、展開:按中國藥典2010年版一部附錄VI B照薄層色譜法試驗(yàn)，供試品溶液和對(duì)照品溶液的點(diǎn)樣量均為5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以上述展開劑中的任一種展開劑展開；
[0016]4、顯色:噴以8%香草醛無水乙醇溶液-硫酸溶液的混合溶液，在100°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)為合格。
[0017]其中，供試品溶液制備可優(yōu)選以下方法:取內(nèi)容物3g,加乙醇20ml，加熱回流40分鐘，濾過，濾液加鹽酸1ml，加熱回流I小時(shí)，濃縮至約10ml，加水10ml，用環(huán)己烷20ml振搖提取，提取液蒸干，殘?jiān)迎h(huán)己烷Iml使溶解，作為供試品溶液。
[0018]本發(fā)明成功解決了抗菌消炎膠囊中知母的薄層色譜鑒別，特別是在生產(chǎn)或藥品檢查中有效控制抗菌消炎膠囊質(zhì)量的問題。該方法相對(duì)于現(xiàn)有的鑒別方法，在保證鑒別效果的前提下，不使用毒性試劑，對(duì)試驗(yàn)人員和環(huán)境友好；且克服了現(xiàn)有展開試劑陰性干擾的問題。
【附圖說明】
[0019]圖1是展開劑系統(tǒng):環(huán)己烷:異丙醇(9: I)的色譜圖。
[0020]圖2是展開劑系統(tǒng):環(huán)己烷:異丙醇:濃氨試液(9.5: 0.5: 0.2)的色譜圖。
[0021]圖3是展開劑系統(tǒng):環(huán)己烷:異丙醇:濃氨試液(9.5:1: 0.2)的色譜圖。
[0022]圖4是展開劑系統(tǒng)環(huán)己烷:異丙醇(9: I)，氨蒸氣預(yù)飽和20min的色譜圖。
[0023]圖5是10批樣品的檢驗(yàn)圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0024]抗菌消炎膠囊中知母的薄層色譜鑒別法的色譜條件研宄。
[0025]I試驗(yàn)用儀器和試藥
[0026]ME203E型電子天平[梅特勒_托利多儀器(上海)有限公司];硅膠G薄層層析預(yù)制板(青島海洋化工有限公司)；硅膠G薄層層析預(yù)制板(浙江臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠)；硅膠G薄層層析預(yù)制板(默克公司)；薄層層析用硅膠G(青島海洋化工有限公司)；抗菌消炎膠囊(中山市恒生藥業(yè)有限公司，批號(hào):20130305、20131004、20131201、20140201、20140301、20140401、20140405、20140506、20140701、20140702);抗菌消炎膠囊知母陰性制劑(中山市恒生藥業(yè)有限公司，批號(hào):DP20131101);菝葜皂苷元對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào):110744-201310);水為純化水；環(huán)己烷、正庚烷、異丙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲酸、石油醚(60?90°C )、三氯甲烷均為分析純。
[0027]2方法與結(jié)果
[0028]2.1分析方法:
[0029]取抗菌消炎膠囊內(nèi)容物3g，加乙醇20ml，加熱回流40分鐘，濾過，濾液加鹽酸Iml，加熱回流I小時(shí)，濃縮至約10ml，加水10ml，用環(huán)己烷20ml振搖提取，提取液蒸干，殘?jiān)迎h(huán)己烷Iml使溶解，作為供試品溶液。另取菝葜皂苷元對(duì)照品，加環(huán)己烷制成每ImL含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄IV B)試驗(yàn)，吸取抗菌消炎膠囊供試品溶液4 μ I及菝葜皂苷元對(duì)照品溶液5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，用展開劑，展開，取出，晾干，噴以8%香草醛無水乙醇溶液與硫酸溶液(7—10)的混合液(0.5: 5)，在100°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
[0030]2.1.1供試品溶液的制備
[0031 ] 取本品內(nèi)容物3g，加乙醇20ml，加熱回流40分鐘，濾過，濾液加鹽酸Iml，加熱回流I小時(shí)，濃縮至約10ml，加水10ml，用環(huán)己燒20ml振搖提取，提取液蒸干，殘澄加環(huán)己燒Iml使溶解，作為供試品溶液。
[0032]2.1.2對(duì)照品溶液的制備
[0033]取菝葜皂苷元對(duì)照品，加環(huán)己烷制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液。
[0034]2.1.3陰性對(duì)照溶液的制備
[0035]取抗菌消炎膠囊知母陰性制劑3g，按供試品溶液制備方法制備。
[0036]2.2色譜條件的研宄
[0037]2.2.1固定相、顯色和檢視方法
[0038]固定相采用硅膠G薄層板；顯色及檢視方法為噴以8%香草醛無水乙醇溶液-[硫酸溶液(7 — 10)] (I: 10)的混合溶液，在100°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0039]2.2.2 展開劑
[0040]分別用以下七種不同展開劑系統(tǒng)，以不同的展開劑比例進(jìn)行考察，并嘗試在展開劑中加入少量甲酸、濃氨試液或置氨蒸氣預(yù)飽和的展開缸內(nèi)展開以改善斑點(diǎn)，比較不同展開劑系統(tǒng)的展開效果。
[0041](I)環(huán)己烷-丙酮系統(tǒng)，分別考察了以下展開劑:
[0042]①環(huán)己烷:丙酮(9:1);
[0043]②環(huán)己烷:丙酮(7:1 ;
[0044]③環(huán)己烷:丙酮(5:1);
[0045]④環(huán)己烷:丙酮:甲酸(7:1: 0.1)。
[0046]結(jié)果:通過所得薄層色譜比較分析，采用環(huán)己烷-丙酮上述比例的展開系統(tǒng)，各供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置均顯相同顏色的斑點(diǎn)，但斑點(diǎn)不夠清晰；且陰性對(duì)照色譜與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置有較淡的其它顏色斑點(diǎn)，容易造成干擾。
[0047](2)環(huán)己烷-乙酸乙酯系統(tǒng)，分別考察了以下展開劑:
[0048]①環(huán)己烷:乙酸乙酯(7:3);
[0049]②環(huán)己烷:乙酸乙酯:甲酸(7: 3: 0.1);
[0050]③環(huán)己烷:乙酸乙酯:甲酸(4:1: 0.1)。
[0051]結(jié)果由所得薄層色譜比較分析可見，采用環(huán)己烷-乙酸乙酯上述比例的展開系統(tǒng)中，供試品色譜中，與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置均顯相同顏色的斑點(diǎn)，但陰性對(duì)照色譜在相應(yīng)位置顯其它顏色斑點(diǎn)，造成明顯干擾。
[0052](3)正庚烷-丙酮系統(tǒng)，分別考察了以下展開劑:
[0053]①正庚烷:丙酮(4:1);
[0054]②正庚烷:丙酮:甲酸(8: 2: 0.1)。
[0055]結(jié)果:采用正庚烷:丙酮上述比例的展開系統(tǒng)，各供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上均顯相同顏色的斑點(diǎn)，但陰性對(duì)照有明顯干擾。
[0056](4)正庚烷-乙酸乙酯系統(tǒng)，分別考察了以下展開劑:
[0057]①正庚烷:乙酸乙酯(2:1);
[0058]②正庚烷:乙酸乙酯(3:1);
[0059]③正庚烷:乙酸乙酯(7:3)。
[0060]結(jié)果:采用正庚烷:乙酸乙酯上述比例的展開系統(tǒng)，各供試品色譜中，與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置均顯相同顏色的斑點(diǎn)，但陰性對(duì)照有明顯干擾。
[0061](5)正庚烷-異丙醇系統(tǒng)，分別考察了以下展開劑:
[0062]①正庚烷:異丙醇(4:1);
[0063]②正庚烷:異丙醇(9:1);
[0064]③正庚烷:異丙醇:濃氨試液(9:1: 0.2)。
[0065]結(jié)果:由色譜可見，采用正庚烷:異丙醇上述比例的展開系統(tǒng)，各供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置均顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性對(duì)照無干擾，加入濃氨試液后斑點(diǎn)形狀有改善。但各色譜斑點(diǎn)分離度不好。
[0066](6)環(huán)己烷-異丙醇系統(tǒng)，分別考察了以下展開劑:
[0067]A.環(huán)己烷-異丙醇，配比按試液體積比為7: 0.3;
[0068]B.環(huán)己烷-異丙醇，配比按試液體積比為8: I;
[0069]C.環(huán)己烷-異丙醇，配比按試液體積比為8.5: 0.5 ；
[0070]D.環(huán)己烷-異丙醇，配比按試液體積比為9: I;