專利名稱：脂質(zhì)體苯并喹唑啉胸苷酸合成酶抑制劑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及脂質(zhì)體制劑，其包含苯并喹唑啉胸苷酸合成酶抑制劑。另外，本發(fā)明涉及制造和使用這類制劑的方法。
圖2描述HCT-8處理的腫瘤的腫瘤生長曲線。
圖3描述NX1843和GW1843對(duì)裸鼠體重的影響。
圖4描述NX1843對(duì)腫瘤生長和體重的劑量反應(yīng)作用。
圖5描述NX1843在molt4白血病模型中的功效。
發(fā)明詳述提供了封裝于脂質(zhì)體內(nèi)的包含苯并喹唑啉胸苷酸合成酶抑制劑(BTSI)的制劑以及制備它們的方法。這些制劑具有藥物用途，包括作為抗腫瘤或抗病毒制劑。另外，與游離藥物(free drug)相比，作為抗腫瘤制劑，脂質(zhì)體具有改良的藥物動(dòng)力學(xué)和增強(qiáng)的功效。這些制劑包括脂質(zhì)體，其包含至少一種磷脂酰膽堿，膽甾醇和BTSI。
美國專利號(hào)5,663,337(1997年9月2日)中描述了本發(fā)明的苯并喹唑啉胸苷酸合成酶抑制劑(此處稱為“本發(fā)明的化合物”)，其整體引入本文作為參考，尤其是第1欄第37行至第6欄第45行(包括首尾行)，引入本文作為參考。
因此，本發(fā)明提供了化學(xué)式(I)的化合物 或它們的鹽，其中虛線表示單鍵或雙鍵，R1是C1-4烷基或任選被C1-4烷基、C1-5烷?；蚱S基取代的氨基；R2，R3，R4和R5相同或不同，并且每個(gè)選自氫，苯基，鹵素，硝基，S(O)nR8基團(tuán)，其中n是整數(shù)0，1或2，R8是鹵素或C1-4烷基或NR9R10基團(tuán)，其中R9和R10均是氫，NR11R12基團(tuán)，其中R11和R12相同或不同，并且每個(gè)是氫或C1-4烷基，OR13基團(tuán)，其中R13是氫或任選被鹵素取代的C1-4烷基；任選被OR14或NR14R15基團(tuán)取代的C1-4脂族基團(tuán)，其中R14和R15相同或不同，并且每個(gè)是氫或C1-4烷基；或R2-R5中的兩個(gè)連接在一起形成苯并基團(tuán)，或R2-R5中的一個(gè)是-X-Y-R16，其中X是CH2，NR17，CO或S(O)m，m是0，1或2，R17是氫或C1-4脂族基團(tuán)，Y是CH2，NR17′，O，或S(O)m’，其中m’是0，1，或2，R17′是氫或C1-4脂族基團(tuán)，條件是，當(dāng)X和Y每個(gè)是CH2時(shí)，X和Y相同，或-X-Y-是-O-，-NR17-，-CH＝CH-或-N＝N-，其中R17如上述定義，R16是C1-4脂族基團(tuán)或5-或6-元芳香環(huán)，所述芳香環(huán)任選被R18在至少一個(gè)碳原子被從連接Y的位置去除的位置上取代，所述5-或6-元環(huán)任選被鹵素原子進(jìn)一步取代；R18是鹵素，C1-4烷氧基，硝基，腈，任選被鹵素取代的C1-4烷基，鹵素或COR19基團(tuán)，其中R19是羥基，C1-4烷氧基或任選被一個(gè)或兩個(gè)羧基或它的C1-12酯取代的C1-6烷基，或R19是NR20R21，其中R20和R21相同或不同并且每個(gè)是氫或任選被羥基取代的C1-4烷基，或R19是氨基酸基團(tuán)或它的酯，其中氨基酸基團(tuán)的第一氮原子可連接5-或6-元芳香環(huán)以形成一個(gè)另外的5-或6-元雜環(huán)，或R19是C2-3亞烷基，其連接到5-或6-元芳香環(huán)上以形成一個(gè)另外的5-或6-元環(huán)；R6和R7相同或不同，并且每個(gè)是任選被羥基取代的C1-4烷基、或C1-4烷氧基或兩者一起形成苯并基團(tuán)；條件是至少R2-R7之一不是氫，并且當(dāng)R1是羥基或甲基時(shí)，R4不是甲氧基。術(shù)語鹵素表示氟，溴，氯和碘。術(shù)語C1-4脂族基團(tuán)表示C1-4烷基，烯基或炔基。術(shù)語氨基酸基團(tuán)表示天然存在的氨基酸。優(yōu)選的氨基酸基團(tuán)包括甘氨酸，谷氨酸和聚谷氨酸(polyglutamic and)基團(tuán)。當(dāng)氨基酸基團(tuán)連接5-或6-元芳香環(huán)時(shí)，這是通過靠近連接COR19的碳原子的芳香環(huán)的碳原子實(shí)現(xiàn)的。優(yōu)選虛線是雙鍵。
合適的芳香環(huán)R16的取代基包括鹵素，C1-4烷基和C1-4烷氧基，每個(gè)任選被1-5個(gè)鹵素原子取代。最合適存在一個(gè)或兩個(gè)選自氟，氯，甲基，三氟甲基和甲氧基的取代基，優(yōu)選氟，或在芳香環(huán)上不存在取代基。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，-X-Y-R16是基團(tuán) 其中R18如前所定義，并且優(yōu)選如前定義的COR19，R22是氫或氟。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，X-Y-R16是基團(tuán) 其中H2NR19a是谷氨酸或聚谷氨酸基團(tuán)，Z是CH2，S或O。合適地，R1是任選被一個(gè)或兩個(gè)甲基或乙基取代的氨基，或R1是甲基或乙基。優(yōu)選R1是氨基或甲基。
合適地，R2-R5的至多僅三個(gè)，優(yōu)選至多僅兩個(gè)不是氫，并且每個(gè)獨(dú)立選自氫，鹵素，羥基，硝基，任選被羥基或C1-2烷氧基取代的C1-3烷基，C1-3烷氧基，任選被一個(gè)或兩個(gè)甲基或乙基取代的氨基，或S(O)nR23基團(tuán)，其中n是0，1，或2，R23是C1-4烷基或任選被一個(gè)或兩個(gè)甲基或乙基取代的氨基，或R2-R5之一是基團(tuán)-X-Y-R24，其中R24是基團(tuán) 或 其中R18，R19a，R22和Z如前所定義。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，R18是硝基或基團(tuán) 其中R25，R26和R27相同或不同，并且每個(gè)是氫或C1-4烷基，并且t是0-6的整數(shù)。優(yōu)選R25，R26和R27是氫并且t是0。優(yōu)選Z是CH2或S。優(yōu)選R2-R5之一是如前定義的-X-Y-R24。優(yōu)選R3是-X-Y-R24。合適地，R6和R7相同或不同，并且每個(gè)是氫，甲基，乙基或被溴、羥基或甲氧基取代的甲基。優(yōu)選R7是氫，R6是甲基。優(yōu)選-X-Y-是-SO2NR17-或CH2NR17，其中R17如前所定義。合適地，R17是氫或C1-4烷基或烯基，優(yōu)選R17是氫或甲基。本發(fā)明的一類化合物是化學(xué)式(Ia)的化合物 或它們的鹽，其中虛線表示單鍵或雙鍵，R1a是C1-4烷基或任選被C1-4烷基取代的氨基，C1-5烷酰基或芐基；R2a，R3a，R4a和R5a相同或不同，并且每個(gè)選自氫，鹵素，硝基，基團(tuán)S(O)nR8a，其中n是整數(shù)0，1或2，R8a是鹵素或是C1- 4烷基或氨基；基團(tuán)NR11aR12a，其中R11a和R12a相同或不同，并且每個(gè)是氫或C1-4烷基，基團(tuán)OR13a，其中R13a是氫或任選被鹵素取代的C1-4烷基，任選被基團(tuán)OR14a或NR14aR15a取代的C1-4脂族基團(tuán)，其中R14a和R15a相同或不同，并且每個(gè)是氫或C1-4烷基，或R2a-R5a之一是基團(tuán)-X-Y-R16a，其中X是CH2，NR17a，CO或S(O)m，m是0，1，或2，R17a是氫或C1-4脂族基團(tuán)，Y是CH2，NR17′aO，或S(O)m′，其中m′是0，1或2，R17′a是氫或C1-4脂族基團(tuán)，條件是，當(dāng)X和Y每個(gè)是CH2時(shí)，X和Y僅相同，或-X-Y-是-NR17a，-CH＝CN-或-N＝N-，其中R17a如前定義，R16a是C1-4脂族基團(tuán)或任選取代的5-或6-元芳香環(huán)，所述5-或6-元芳香環(huán)被基團(tuán)R18a在至少一個(gè)碳原子被從連接Y的位置去除的位置上取代，R18a是硝基，腈，任選被鹵素取代的C1-4烷基，鹵素，或基團(tuán)COR19a，其中R19a是任選被一個(gè)或兩個(gè)羧基或C1-4烷氧基取代的C1-6烷基，基團(tuán)CONR20aR21a，其中R20a和R21a相同或不同并且每個(gè)是氫或C1-4烷基或R19a是谷氨酸或聚谷氨酸基團(tuán)或其酯，其中谷氨酸或聚谷氨酸基團(tuán)的第一個(gè)氮原子可連接5-或6-元芳香環(huán)以形成另一個(gè)5-或6-元雜環(huán)；R6a和R7a相同或不同并且每個(gè)是任選被羥基取代的C1-4烷基或C1-4烷氧基或兩個(gè)一起形成苯并基團(tuán)，條件是，R2a-R7a中的至少一個(gè)不是氫，并且當(dāng)R1a是羥基或甲基時(shí)，R4a不是甲氧基。本發(fā)明的另一類化合物是化學(xué)式(II)的化合物 或它們的鹽，其中R1，R6，R7和虛線如前定義，R28-R31相同或不同并且每個(gè)選自氫，鹵素，硝基，基團(tuán)S(O)nR8，基團(tuán)NR11R12，基團(tuán)OR13，或任選被基團(tuán)OR14或NR14R15取代的C1-4脂族基團(tuán)，其中R8，R11，R12，R13，R14和R15如前定義，條件是，R28-R31不全是氫，并且當(dāng)R1是羥基或甲基時(shí)，R30不是甲氧基。本發(fā)明優(yōu)選的一類化合物是化學(xué)式(III)的化合物 或它們的鹽，其中R1，R6和R7如前定義，R32-R35相同或不同并且一個(gè)是基團(tuán)X-Y-R16，其它相同或不同并且每個(gè)選自氫，鹵素，硝基，S(O)nR8，NR11R12，OR13或任選被OR14或NR14R15取代的C1-4脂族基團(tuán)，其中X，Y，R8，R11，R12，R13，R14，R15和R16如前定義。本發(fā)明另一類優(yōu)選的化合物是化學(xué)式(IV)的化合物 其中R1，R6，R7和R32-R35如前定義。優(yōu)選R33是如前定義的X-Y-R16。優(yōu)選的化學(xué)式(I)的化合物包括3-氨基-9-溴苯并[f]喹唑啉-1(2H)-酮3-氨基-9-乙炔基苯并[f]喹唑啉-1(2H)-酮N-(4-((3-氨基-1，2，5，6-四氫-1-氧苯并[f]喹唑啉-9-基)亞磺酰氨基)苯甲?；?-L-谷氨酸N-(4-((1，2，5，6-四氫-3-甲基-1-氧苯并[f]喹唑啉-9-基)亞磺酰氨基)苯甲?；?-L-谷氨酸N-(4-((1，2-二氫-3-甲基-1-氧苯并[f]喹唑啉-9-基)亞磺酰氨基)苯甲?；?-L-谷氨酸N-(4-(((1，2-二氫-3-甲基-1-氧苯并[f]喹唑啉-9-基)甲基)氨基)-2-氟代苯甲?；?-L-谷氨酸N-(4-(((1，2-二氫-3-甲基-1-氧苯并[f]喹唑啉-9-基)甲基)氨基)苯甲?；?-L-谷氨酸(S)-2-(5-(((1，2-二氫-3-甲基-1-氧苯并[f]喹唑啉-9-基)甲基)氨基-1-氧代-2-異二氫吲哚基)谷氨酸9-((4-乙?；桨坊?甲基-3-甲基苯并[f]喹唑啉-1(2H)-酮3-甲基090((4-硝基苯胺基)甲基)苯并[f]喹唑啉-1(2H)-酮N-(4-(((3-氨基-1，2-二氫-1-氧苯并[f]喹唑啉-9-基)甲基)氨基)苯甲?；?-L-谷氨酸3-氨基-9-((4-硝基苯胺基)甲基)苯并[f]喹唑啉-1(2H)-酮9-((4-乙酰基苯胺基)甲基-3-氨基苯并[f]喹唑啉-1(2H)-酮(RS)-2-(2-(4-(((1，2-二氫-3-甲基-1-氧苯并[f]喹唑啉-9-基)甲基)氨基)苯基-2-氧乙基)谷氨酸4-(4-(((1，2-二氫-3-甲基-1-氧苯并[f]喹唑啉-9-基)甲基)氨基)苯基-4-氧代丁酸乙酯4-(4-(((1，2-二氫-3-甲基-1-氧苯并[f]喹唑啉-9-基)甲基)氨基)苯基-4-氧代丁酸N-(4-(((1，2-二氫-3-甲基-1-氧苯并[f]喹唑啉-9-基)甲基)氨基)-2-氟代苯甲酰基)甘氨酸N-(4-(((1，2-二氫-3-甲基-1-氧苯并[f]喹唑啉-9-基)甲基)氨基)-2-氟代苯甲?；?甘氨酸乙酯化學(xué)式(I)的某些化合物包含不對(duì)稱碳原子，因此能作為光學(xué)異構(gòu)體存在。單個(gè)的光學(xué)異構(gòu)體和它們的混合物也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明化合物的鹽可包含衍生自化學(xué)式(I)的化合物的氨基或由化學(xué)式(I)的化合物得到的陰離子(例如當(dāng)被羧基取代時(shí))和陽離子的酸式加成鹽。在這兩種類型的鹽中，治療活性存在于衍生自本發(fā)明的這里定義的化合物的部分，盡管為了治療和預(yù)防的目的，其它組分的同一性是不重要的，但是優(yōu)選對(duì)患者是藥學(xué)可接受的。藥用酸式加成鹽的實(shí)例包括那些衍生自無機(jī)酸如鹽酸，氫溴酸，磷酸，偏磷酸，硝酸和硫酸，和有機(jī)酸如酒石酸，乙酸，三氟乙酸，檸檬酸，蘋果酸，乳酸，富馬酸，苯甲酸，乙醇酸，葡糖酸，琥珀酸和甲磺酸和芳基磺酸，例如對(duì)-甲苯磺酸的鹽。包含衍生自化學(xué)式(I)的化合物的陰離子和陽離子的鹽的實(shí)例包括銨鹽，堿金屬鹽，如鈉和鉀鹽，堿土金屬鹽如鎂和鈣鹽，和與有機(jī)堿形成的鹽例如衍生自一元-，二元-或三元-(低級(jí)烷基)或(低級(jí)鏈烷醇)胺，例如三乙醇胺和二乙氨基乙胺的鹽，和與雜環(huán)胺如哌啶，吡啶，哌嗪和嗎啉形成的鹽。藥用鹽以及因而不能藥用的鹽用于分離和/或純化本發(fā)明的化合物，非藥用鹽還能用本領(lǐng)域中眾所周知的技術(shù)轉(zhuǎn)變成藥用鹽。
從包含羧基的化學(xué)式(I)的化合物形成的化學(xué)式(I)的化合物的酯通常是制備母酸的有用的中間體。
本發(fā)明一個(gè)特別優(yōu)選的化合物是一種化合物，GW1843(此處也稱為GW1843U89或1843U89)，化學(xué)式如下 此處使用的GW1843的脂質(zhì)體制劑稱為NX1843。
此處使用的術(shù)語“脂質(zhì)體”指的是單層泡囊或多層泡囊，例如在美國專利號(hào)4,753,788中所描述的(其內(nèi)容引入本文供參考)。
“單層脂質(zhì)體”也稱為“單層泡囊”，是由一種類脂雙層膜組成的球形泡囊，所述類脂雙層膜確定一個(gè)封閉的含水區(qū)室。所述雙層膜由兩層類脂組成；內(nèi)層和外層(小葉)。類脂分子的外層進(jìn)行取向，使得它們的親水頭部朝向外部的含水環(huán)境，它們的疏水尾部向下指向脂質(zhì)體的內(nèi)部。類脂層的內(nèi)層直接在外層的下面，類脂的取向使得頭部朝向脂質(zhì)體的含水內(nèi)部并且尾部朝向類脂外層的尾部。
“多層脂質(zhì)體”也稱為“多層泡囊(multilamellar或multiple lamellar)”，由多于一個(gè)類脂雙層膜組成，這些膜確定了多于一個(gè)封閉的含水區(qū)室。這些膜被集中排列，使得不同的膜被含水區(qū)室所分隔，非常象洋蔥。
此處使用的術(shù)語“封裝”和“包埋”指的是將BTSI結(jié)合或締合到脂質(zhì)體中或與脂質(zhì)體相結(jié)合或締合。BTSI可存在于脂質(zhì)體的內(nèi)部含水空間，膜雙層的內(nèi)或外小葉中，部分包埋于雙層的外小葉并且部分在脂質(zhì)體的外部，或與脂質(zhì)體的表面相連(如通過靜電相互作用)，或這些的組合。
此處使用的“賦形劑”指的是有助于藥物產(chǎn)品的穩(wěn)定性的物質(zhì)，包括但不局限于pH的穩(wěn)定性，脂質(zhì)體的膠體性質(zhì)的穩(wěn)定性，和藥物及磷脂的化學(xué)穩(wěn)定性。賦形劑的實(shí)例包括但不局限于酸，一價(jià)陰離子的鈉或銨形式如氯化物，乙酸鹽，乳糖酸鹽和甲酸鹽；二價(jià)陰離子如天冬氨酸鹽，琥珀酸鹽和硫酸鹽；和三價(jià)離子如檸檬酸鹽和磷酸鹽。
“磷脂”指的是能形成脂質(zhì)體的任何一種磷脂或磷脂的組合。磷脂酰膽堿(PC)，包括那些獲自卵，大豆或其它植物源的磷脂酰膽堿，或那些部分或全部合成的磷脂酰膽堿，或具有可變的類脂鏈長和不飽和度的磷脂酰膽堿，是適于在本發(fā)明中使用的。合成的、半合成的和天然產(chǎn)品的磷脂酰膽堿是適于在本發(fā)明中使用的，包括但不局限于二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)，氫化大豆磷脂酰膽堿(HSPC)，大豆磷脂酰膽堿(大豆PC)，卵磷脂酰膽堿(卵PC)，二油酰磷脂酰膽堿(DOPC)，氫化卵磷脂酰膽堿(HEPC)，二反油酰磷脂酰膽堿(dielaidoylphosphatidylcholine)(DEPC)，二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)，和二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)。所有這些磷脂是市場上可購買的。優(yōu)選的PC是HSPC和DSPC；最優(yōu)選HSPC。
另外，磷脂酰甘油(PG)和磷脂酸(PA)也是適于在本發(fā)明中使用的磷脂，包括但不局限于二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)，二月桂基磷脂酰甘油(DLPG)，二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)，二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)，二肉豆蔻酰磷脂酸(DMPA)，二硬脂酰磷脂酸(DSPA)，二月桂基磷脂酸(DLPA)，和二棕櫚酰磷脂酸(DPPA)。當(dāng)在制劑中使用時(shí)，二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)是優(yōu)選的帶負(fù)電的類脂。當(dāng)帶負(fù)電的類脂如DSPG包含于制劑中時(shí)，優(yōu)選以少于總類脂的20％，更優(yōu)選少于5％的摩爾量存在。其它合適的磷脂包括磷脂酰乙醇胺，磷脂酰肌醇和包含月桂酸，肉豆蔻酸，硬脂酸和棕櫚酸鏈的磷脂酸。另外，本發(fā)明也考慮包括含磷脂的聚乙二醇(PEG)。
此處使用的術(shù)語“腸道外”指的是靜脈內(nèi)(IV)，肌肉內(nèi)(IM)，皮下(SubQ)或腹膜內(nèi)(IP)給藥。
本發(fā)明考慮了任何有效的磷脂∶BTSI比率。優(yōu)選的磷脂∶BTSI摩爾比是5∶1-75∶1，更優(yōu)選是8∶1-20∶1。優(yōu)選的脂質(zhì)體制劑包括磷脂∶膽甾醇摩爾比超過5∶1-2∶1.5的范圍。最優(yōu)選的脂質(zhì)體制劑是PC∶膽甾醇為2∶1。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，脂質(zhì)體是具有小于100nm中值粒徑的單層泡囊，其中磷脂是氫化大豆磷脂酰膽堿(HSPC)，并且以2∶1的摩爾比包含膽甾醇，并且BTSI是GW1843。
通常，制備本發(fā)明的制劑的方法是最初制備形成脂質(zhì)體的溶液。例如通過稱出一定量磷脂酰膽堿和膽甾醇，并將它們?nèi)芙庠谟袡C(jī)溶劑優(yōu)選氯仿或溶劑的混合物優(yōu)選氯仿和甲醇的混合物中來實(shí)施。例如用旋轉(zhuǎn)式汽化器、噴霧干燥器或其它工具蒸發(fā)該溶液以形成固態(tài)類脂相如薄膜或粉末。優(yōu)選的干燥方法是使用噴霧干燥器。然后用含活性藥物、含有或不含賦形劑的水溶液水合薄膜或粉末，以形成脂質(zhì)體分散體。優(yōu)選除了酸或堿以外，不使用賦形劑來調(diào)整藥物溶液的pH。根據(jù)所使用的磷脂，將分散于藥物溶液中的類脂薄膜或粉末加熱至約25℃-70℃的溫度。
通過攪拌、優(yōu)選通過搖動(dòng)或混合分散體，形成多層脂質(zhì)體。例如通過超聲處理或使用微流化裝置、或擠出裝置、或均化器或French press對(duì)類脂固相的含水分散體施以能量如剪切力或空穴以形成多層泡囊。也可使用注射，冷凍并融化，從類脂中滲析掉洗滌劑溶液，或用于制備脂質(zhì)體的其它已知方法制備脂質(zhì)體。使用各種已知技術(shù)(包括持續(xù)施用能量)可控制脂質(zhì)體的尺寸。優(yōu)選地，在3,000-20,000磅/平方英寸，優(yōu)選10,000-14,000磅/平方英寸的壓力下，在類脂的約聚集轉(zhuǎn)變溫度，優(yōu)選HSPC∶膽甾醇制劑的55℃以上的溫度下，使用均化裝置以形成直徑小于100納米的單層泡囊。
使用滲析、尺寸排阻色譜法(Sephadex G-50樹脂)或超濾(也稱為交叉過濾) (切斷(cut off)50,000-300,000分子量)，通過緩沖液與水溶液的交換，從脂質(zhì)體分散體中去除未包埋的賦形劑和/或藥物。
脂質(zhì)體的治療用途可包括傳遞游離形態(tài)通常有毒的藥物。在脂質(zhì)體中，可使有毒藥物遠(yuǎn)離可導(dǎo)致毒性的敏感組織，并導(dǎo)向可發(fā)揮它們的治療作用的選定區(qū)域。脂質(zhì)體也可以治療方式使用以經(jīng)過一段延長期緩慢釋放藥物，從而通過增強(qiáng)的藥物動(dòng)力學(xué)分布降低給藥頻率。另外，脂質(zhì)體可提供一種形成適于靜脈內(nèi)輸送的疏水藥物含水分散體的方法。
脂質(zhì)體的輸送路線也可影響它們?cè)隗w內(nèi)的分布。脂質(zhì)體的被動(dòng)輸送涉及給藥的各種路徑如腸道外的應(yīng)用，盡管其它有效給藥形式如內(nèi)關(guān)節(jié)注射，吸入霧劑(inhalant mist)，口服活性制劑，透皮iotophoresis或栓劑也是被考慮的。每種路徑在脂質(zhì)體定位上都有差異。
本發(fā)明還提供了一種抑制腫瘤(耐藥和對(duì)藥物敏感的)生長的方法，所述抑制是通過傳遞給腫瘤(優(yōu)選在哺乳動(dòng)物中)治療或有效量的脂質(zhì)體BTSI實(shí)現(xiàn)的。此處制劑的單一劑量給藥的理想數(shù)量和間隔時(shí)間可通過被治療的疾病的性質(zhì)和程度，給藥的形式、路徑和部位，和被治療的具體患者來確定，并且這些最佳參數(shù)可通過常規(guī)技術(shù)來確定。本領(lǐng)域的技術(shù)人員將會(huì)理解，治療的最佳路線，即對(duì)于確定的天數(shù)每天給藥的劑量數(shù)可由本領(lǐng)域的技術(shù)人員使用治療確定測(cè)試的常規(guī)方法確定。
本發(fā)明考慮了與所有癌癥包括多重耐藥癌癥相關(guān)的腫瘤生長的抑制。所述的脂質(zhì)體制劑可具體用于抑制的癌癥包括結(jié)腸直腸癌，卵巢癌，肺癌，乳腺癌，頭和頸癌，前列腺癌，子宮癌(uteran)，成膠質(zhì)細(xì)胞瘤，和肉瘤。另外，考慮此處描述的并在權(quán)利要求中要求的制劑可與其它抗癌療法結(jié)合使用，所述其它抗癌療法包括但不局限于1)治療卵巢癌的紫杉醇和鉑復(fù)合體；2)治療結(jié)腸直腸癌的5FU和甲酰四氫葉酸或左旋咪唑；3)治療肺癌的順氯氨鉑和足葉乙甙，4)topoI抑制劑如托泊替堪(topotecan)，藥薯(irinotecan)，和NX211，和5)蒽環(huán)霉素如阿霉素或鹽酸強(qiáng)力霉素(doxil)。
通過參考下述實(shí)施例將更完全地理解本發(fā)明，所述實(shí)施例意圖說明本發(fā)明而不是限制本發(fā)明。實(shí)施例1描述GW1843的脂質(zhì)體制劑。實(shí)施例2描述四種脂質(zhì)體制劑的單一劑量藥物動(dòng)力學(xué)。實(shí)施例3描述游離的GW1843和GW1843的脂質(zhì)體制劑之間的血漿藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)比較。實(shí)施例4描述單一NX1843制劑的兩個(gè)獨(dú)立的批次的比較。實(shí)施例5描述不同脂質(zhì)體制劑的比較和動(dòng)物重量對(duì)血漿藥物動(dòng)力學(xué)的影響的確定。實(shí)施例6描述單一靜脈內(nèi)藥丸給藥后的血漿藥物動(dòng)力學(xué)。實(shí)施例7描述對(duì)TS抑制劑GW1843和脂質(zhì)體制劑NX1843的臨床前研究。
GW1843的脂質(zhì)體的制備包括將藥物封裝于脂質(zhì)體的內(nèi)部空間。首先，制備包含氫化大豆磷脂酰膽堿和膽甾醇的類脂薄膜或噴霧干燥的粉末。使用噴霧干燥法制備HSPC∶膽甾醇為2∶1摩爾比的混合物。將類脂溶解在氯仿中直至20％重量/重量。然后使用72-78℃的氮?dú)鈱⒂袡C(jī)溶劑溶液中的類脂組分干燥至粉末。使用薄膜方法制備HSPC∶膽甾醇為4∶1摩爾比的混合物。為制備類脂薄膜，使用氯仿和甲醇(1∶1體積比)的溶劑混合物(273mg/ml)溶解類脂組分。然后通過將氮?dú)獯┻^溶液，同時(shí)將溶液在65℃的溫浴中加熱，去除溶劑。在成品中類脂濃度最多為100-200mg/ml下，在水溶液中水合每種類脂粉末或薄膜，所述水溶液包含20-225mg/ml濃度的活性藥物，含有或不含磷酸鹽緩沖液(用于緩沖溶液pH)，pH在7-9的范圍內(nèi)。使用150mM磷酸鹽緩沖液制備樣品NA-1022-63A，NA-1022-59A，GC-1007-27和GC-1020-36。不用磷酸鹽緩沖液制備其它樣品。在上述磷脂的相變溫度以上的溫度下，用乙酸培養(yǎng)(AT-1084-95B)，這可能造成所觀察到的成品的低pH(表1A)。HSPC∶膽甾醇的摩爾比為4∶1-2∶1。然后在所述類脂相變溫度以上的溫度(～55℃)下，使用探針超聲處理(probe sonication)，從這些混合物形成小單層脂質(zhì)體(＜100nm，中值粒徑，使用微量超細(xì)顆粒分析儀(Micro TracUltrafine Particle Analyzer))。通常使用尺寸排阻色譜法(Sephadex G-50樹脂)通過緩沖液與水或9％蔗糖的交換，從脂質(zhì)體分散體中去除未包埋于脂質(zhì)體含水核中的藥物和/或賦形劑。對(duì)于使用水作為洗脫液的制劑，在從脂質(zhì)體分離未包埋的藥物和/或賦形劑后，加入蔗糖。
通過0.22微米濾器在環(huán)境溫度下過濾樣品，所述濾器由乙酸纖維素或聚醚砜組成。表征結(jié)果示于下表1A中。
使用HSPC以外的磷脂制備其它制劑(表1B)。帶負(fù)電的磷脂酰膽堿，DSPG，也在一種制劑中使用(表1B)。用100mg/ml氯仿和甲醇如上描述制備AL-1230-058，AL-1230-052，AL-1230-048和AL-1230-055類脂薄膜。如上描述制備AL-1230-041噴霧干燥粉末。在100mg/ml，pH7.5的藥物溶液中水化每種類脂薄膜或粉末?；旌虾?，在～65℃和～13,000磅/平方英寸壓力下，使用均化器(Niro制造的Panda)均化水化的類脂，以形成小單層泡囊。均化后，為了注射，用水交叉過濾脂質(zhì)體以去除未包埋的藥物。在交叉過濾末尾，向主體中加入蔗糖至接近9％的濃度。通過0.2μm聚醚砜(PES)濾器過濾脂質(zhì)體溶液。這些制劑的檢測(cè)結(jié)果示于表1B中。
對(duì)于HSPC∶膽甾醇(摩爾比2∶1)制劑，使用不同的賦形劑如蔗糖，磷酸鹽，檸檬酸鹽和琥珀酸鹽制備另外的制劑。在100mg/ml，pH7.5的藥物溶液中水化HSPC∶膽甾醇(2∶1)(摩爾比)的噴霧干燥粉末。混合后，65℃和13,000磅/平方英寸壓力下，使用均化器(Niro制造的Panda)均化水化的類脂，以形成小單層泡囊。均化后，為了注射，用水交叉過濾脂質(zhì)體以去除未包埋的藥物。在交叉過濾末尾，向主體中加入蔗糖至接近9％的濃度。加入另外的緩沖液賦形劑(表1C)至理想的濃度，并調(diào)整溶液的pH。通過0.2μm聚醚砜(PES)濾器過濾脂質(zhì)體溶液。這些制劑的一些檢測(cè)結(jié)果示于表1C中。制劑的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)示于表1D中。在2-8℃，制劑經(jīng)至少1個(gè)月是穩(wěn)定的。
制備血漿樣品，并通過使用non-validated HPLC分析來分析GW1843。甲醇沉淀血漿蛋白后，C-18反相柱色譜分離可溶性GW1843。用等度法(isocratic method)實(shí)現(xiàn)分離。流動(dòng)緩沖液由80％的乙腈和20％的100mM的乙酸銨組成(pH＝5.3)。使用峰下的面積與GW1843的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
通過非-間隔分析確定藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)(WinNonlin版1.5)。使用對(duì)于每組而言相對(duì)時(shí)間值的平均濃度確定每個(gè)實(shí)驗(yàn)組的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。計(jì)算下述參數(shù)最大血漿濃度(Cmax)；相對(duì)于外延至無限時(shí)間(AUCinf)或至最后的時(shí)間點(diǎn)(AUClast)的時(shí)間曲線的血漿濃度下面的面積；消去半衰期(Elim.T1/2)；平均停留時(shí)間(MRT)血漿清除率(Cl)和在穩(wěn)態(tài)下的分布體積(Vss)。結(jié)果每個(gè)給藥組的血漿濃度歸納于表2中。計(jì)算的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)示于表3中。非間隔分析非間隔分析對(duì)基礎(chǔ)的藥物動(dòng)力學(xué)模型未做任何設(shè)想。評(píng)估在血漿中的最大獲得濃度(Cmax)，對(duì)于脂質(zhì)體制劑范圍為15.5-24.8μg/mL，對(duì)于游離藥物是1.3μg/mL。所有四種脂質(zhì)體制劑的評(píng)估的消去半衰期(Elim.t1/2)明顯大于游離藥物。脂質(zhì)體制劑的消去半衰期均接近18.5小時(shí)，而游離藥物顯示接近0.5小時(shí)的消去半衰期。脂質(zhì)體制劑的血漿濃度對(duì)時(shí)間曲線(AUCinf)下的面積為266,740-462,920(h×ng/mL)，而游離藥物則僅僅為263(h×ng/mL)。后一結(jié)果反映于血漿清除率中，所述血漿清除率對(duì)脂質(zhì)體制劑為2.16-3.75mL/h，對(duì)游離藥物為3,805mL/h。
最后，穩(wěn)定狀態(tài)下脂質(zhì)體制劑的分布體積(Vss)為預(yù)期的大鼠的血漿體積(31.2mL/kg)(3)的2-3倍，而游離藥物具有比脂質(zhì)體制劑大18-30倍的分布體積。
重343.91-420.19克的雄性Sprague-Dawley大鼠用于此研究。按照動(dòng)物福利和養(yǎng)護(hù)準(zhǔn)則(NRC出版物，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)護(hù)和使用指南，1996)在BoulderColorado進(jìn)行生存階段的研究。IACUC草約號(hào)N98010。在處理前和處理期間允許動(dòng)物自由進(jìn)食和飲水。
稱重用NX1843處理的單個(gè)動(dòng)物，異氟醚麻醉下，以1mg/kg體重的劑量通過靜脈內(nèi)藥丸給藥到尾靜脈。
異氟醚麻醉動(dòng)物的同時(shí)，對(duì)GW1843組給藥后的5，15，30和45分鐘，以及1，1.5和2小時(shí)獲得系列EDTA-血樣(0.5mL)。對(duì)于NX1843組，給藥后的10，30和90分鐘，以及4，8，24，32，48，72和96小時(shí)獲得系列EDTA-血樣(0.5mL)。立即將EDTA-血樣加工成血漿，并將血漿樣品保存在-20℃直至分析用。
使用等度(isocratic)反相高效液相色譜(HPLC)程序快速確定大鼠EDTA-血漿中GW1843總濃度。甲醇沉淀血漿蛋白(2份甲醇對(duì)1份血漿)后，通過14,000×g離心10分鐘去除蛋白。用安裝以防護(hù)柱的ZORBAX EclipseTMXBD-C18柱(3mm×15cm)分離可溶性GW1843(注射體積20μL)。HPLC緩沖液由80％100mM pH＝5.3的乙酸銨和20％乙腈組成，并且流速為0.4mL/min?？傔\(yùn)行時(shí)間為7分鐘，并通過在264nm紫外吸收檢測(cè)和定量GW1843。標(biāo)準(zhǔn)曲線由游離GW1843穿刺的大鼠EDTA-血漿組成，而質(zhì)量控制樣品由NX1843穿刺的大鼠EDTA-血漿組成。標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍為0.1-30.0μg/mL。
使用WinNonlin(1.5版)，用非-間隔法分析靜脈內(nèi)給藥GW1843或脂質(zhì)體封裝的GW1843后的總GW1843的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。使用log/線性trapazoidal規(guī)則。對(duì)于非-間隔分析，利用所有的3時(shí)間點(diǎn)(time points)評(píng)估游離GW1843的消去相，而利用最后的5時(shí)間點(diǎn)評(píng)估NX1843的消去半衰期。通過外推至0時(shí)間評(píng)估Cmax值。確定此研究中每只動(dòng)物的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。從在每組中獲得的值確定每個(gè)參數(shù)的平均值和SD。評(píng)估的參數(shù)包括Cmax 最大血漿濃度AUC(0-last)血漿濃度對(duì)直至測(cè)量的最后時(shí)間血漿時(shí)間點(diǎn)的時(shí)間曲線下的面積ke 用線性回歸評(píng)估的末端消去相的斜度t1/2 末端消去相的半衰期(0.693/ke)
MRT(0-inf)外延至無窮大的平均停留時(shí)間AUC(0-inf)濃度對(duì)外延至無窮大的時(shí)間曲線下的面積如下計(jì)算給藥后GW1843的觀察到的清除率(CL)CL＝劑量靜脈內(nèi)/AUC通過在相同實(shí)驗(yàn)中獲得的數(shù)據(jù)不成對(duì)t-檢驗(yàn)(unpaired t-test)進(jìn)行處理組的比較。認(rèn)為小于0.05的p值是顯著的。使用GraphPad Instat 1.0版本(GraphPad軟件)進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果GW1843和脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843)的非-間隔分析GW1843給藥組的總血漿濃度歸納于表4中，而相應(yīng)的脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843；SMC-991-96)給藥組的總血漿濃度歸納于表5中。GW1843和NX1843的幾個(gè)計(jì)算的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的評(píng)估值分別示于表6和表7中。GW1843給藥組的藥物動(dòng)力學(xué)值是基于用所有3個(gè)測(cè)量的GW1843血漿濃度評(píng)估的最后半衰期(terminal half-life)。這可能導(dǎo)致低估半衰期并且因此略微低估AUC。然而，在這個(gè)劑量水平的有限的數(shù)據(jù)需要這種方法。


圖1表示兩個(gè)給藥組log濃度對(duì)時(shí)間曲線。
評(píng)估接受22.1-28.7μg/mL的總GW1843范圍的NX1843的動(dòng)物血漿中最大獲得濃度(Cmax)。這些值明顯大于觀察到的游離GW1843(范圍為1.62-1.99μg/mL)。評(píng)估的(平均值±SD)脂質(zhì)體制劑的最后半衰期(Elim.t1/2)為16.6±0.86小時(shí)，而游離的藥物顯示0.142±0.007小時(shí)的消去半衰期。與游離藥物的僅僅0.27±0.028hr.μg/mL相比，脂質(zhì)體制劑的GW1843血漿濃度對(duì)時(shí)間曲線下的面積[AUC(0-inf)]為524±55.9hr.μg/mL。后一結(jié)果反應(yīng)在血漿清除率中，所述血漿清除率對(duì)脂質(zhì)體制劑為1.93±0.206mL/hr，對(duì)游離的藥物為3,740±456mL/hr。最后，脂質(zhì)體制劑在穩(wěn)態(tài)下的分布體積(Vss)少于大鼠的預(yù)期的血漿體積(31.2mL/kg)(3)的2倍，而游離藥物具有大于脂質(zhì)體制劑的約14.6倍的分布體積。
與游離藥物相比，GW1843的脂質(zhì)體封裝在總血漿曝露(exposure)方面增加了約1,940倍。這個(gè)數(shù)值與在實(shí)施例2中獲得的數(shù)值相似，在實(shí)施例2中觀察到1,000-1,760倍的增加。
通常，在這個(gè)實(shí)施例中獲得的NX1843的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)與那些在實(shí)施例2中觀察到的相似。
在這個(gè)實(shí)施例中，對(duì)于NX1843制劑確定的18.0小時(shí)的平均最后半衰期與在實(shí)施例2中測(cè)試的四種NX1843制劑的所有最后半衰期(范圍17.7-20.2小時(shí))沒有明顯差異。
重207.16-219.27克的雄性Sprague-Dawley大鼠用于此研究。根據(jù)動(dòng)物福利和養(yǎng)護(hù)準(zhǔn)則(NRC出版物，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的養(yǎng)護(hù)和使用指南，1996)，在BoulderColorado進(jìn)行存活階段的研究。IACUC草約號(hào)N98010。在處理前及期間允許動(dòng)物自由進(jìn)食及飲水。
稱重單個(gè)動(dòng)物，并在異氟醚(isoflurane)麻醉下，以1mg/kg體重的劑量通過靜脈內(nèi)藥丸給藥到尾靜脈。
在isoflurane麻醉下，系列EDTA-血樣(0.5mL)在給藥后10，30和90分鐘和4，8，24，32，48，72和96小時(shí)(標(biāo)稱時(shí)間)獲得。將EDTA-血樣立即加工成血漿，并保存于-20℃直至分析用。
如實(shí)施例3確定GW1843在血漿中的總濃度。
如實(shí)施例3評(píng)估靜脈內(nèi)給藥脂質(zhì)體封裝的GW1843后的總GW1843的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
通過數(shù)據(jù)的不成對(duì)t-檢驗(yàn)進(jìn)行處理組的比較。除了進(jìn)行多重比較的情況下利用Bonferroni修正外，認(rèn)為小于0.05的p-值是顯著的。使用GraphPad Instat1.0版本(GraphPad軟件)進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843)批次SMC-1092-09給藥組的血漿濃度歸納于表8中，而相應(yīng)的NX1843批次SMC-991-96給藥組的血漿濃度歸納于表9中。對(duì)于NX1843批次SMC-1092-09和NX1843批次SMC-991-96的幾個(gè)計(jì)算的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的評(píng)估值分別示于表10和表11中。
評(píng)估接受16.9-23.1μg/mL的總GW1843(平均值＝19.1μg/mL)范圍的NX1843批次SMC-1092-09的動(dòng)物血漿中最大獲得濃度(Cmax)。評(píng)估接受15.0-18.4μg/mL的總GW1843(平均值＝16.8μg/mL)范圍的NX1843批次SMC-991-96的動(dòng)物血漿中的Cmax。對(duì)于每組觀察到的平均Cmax值的差異不明顯(p＝0.2161)。對(duì)于批次SMC-1092-09和批次SMC-991-96獲得的評(píng)估(平均值±SD)最后半衰期(Elim.t1/2)分別為1 2.2±0.06小時(shí)和11.7±0.96小時(shí)。觀察到的兩個(gè)批次的半衰期差異不明顯(p＝0.3386)。另外，觀察到的批次SMC-1092-09(70.8mL/kg)和批次SMC-1092-991-96(65.8mL/kg)的Vss的平均值的差異不明顯(p＝0.2784)。最后，觀察到的兩個(gè)批次[SMC-1092-09 276±21.9μg.hr/mL和SMC-991-96 293±53.8μg.hr/mL]的AUC(0-inf)之間的差異或兩個(gè)批次[SMC-1092-09 3.65±0.28mL/hr.kg和SMC-991-96 3.50±0.59mL/hr.kg(p＝0.6623)]的清除率之間的差異不明顯。
在本實(shí)施例中獲得的批次SMC-991-96的幾個(gè)藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)明顯不同于那些在實(shí)施例3中獲得的相同批次的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。兩個(gè)實(shí)施例使用相同的劑量，給藥路線和大鼠品種(參看實(shí)施例3)。使用二-tailed不成對(duì)t檢驗(yàn)檢測(cè)5個(gè)不同藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由于進(jìn)行5個(gè)比較，進(jìn)行Bonferroni校正使得p＜0.01的值對(duì)于顯著性是必須的。
對(duì)于所有5個(gè)被檢測(cè)的參數(shù)，觀察的平均值的差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上是顯著的。對(duì)于血漿清除率(p＝0.0024)，在穩(wěn)態(tài)下的分布體積(p＝0.0027)，血漿最后半衰期(p＝0.0003)，Cmax(p＝0.0022)和AUC(0-inf)(p＝0.0010)觀察到統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的差異。
本實(shí)施例的AUC(0-inf)為在實(shí)施例3中獲得的AUC(0-inf)的55％。經(jīng)過最初24小時(shí)的AUC檢驗(yàn)[AUC(0-24)]表明在本實(shí)施例中批次SMC-991-96(206±29.4μg.hr/mL)僅為在實(shí)施例3中相同批次(320±27.5μg.hr/mL)獲得的AUC(0-24)的64％。這一數(shù)據(jù)揭示在最初24小時(shí)觀察到血漿曝露的主要差異。然而，AUC(0-24)為實(shí)施例3中AUC(0-inf)的61％，而在本研究中為70％，推測(cè)在本研究中發(fā)現(xiàn)的更快末端階段(terminal phase)在減少全部血漿曝露中也起一定作用。
在批次SMC-1092-09和SMC-991-96之間未觀察到統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的藥物動(dòng)力學(xué)差異。
對(duì)于批次SMC-991-96，在本實(shí)施例和實(shí)施例3的結(jié)果之間觀察到統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的藥物動(dòng)力學(xué)差異。
本實(shí)施例和實(shí)施例3的動(dòng)物重量的差異可能導(dǎo)致研究批次SMC-991-96觀察到的藥物動(dòng)力學(xué)差異。
使用重207.78-228.76克的雄性Sprague-Dawley大鼠評(píng)估所有的1批次。另外，使用重403.12-418.28克的大雄性Sprague-Dawley大鼠評(píng)估巨大大鼠的批次AT-1084-91B。根據(jù)動(dòng)物福利和養(yǎng)護(hù)準(zhǔn)則(NRC出版物，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的養(yǎng)護(hù)和使用指南，1996)，在Boulder Colorado進(jìn)行存活階段的研究。IACUC草約號(hào)N98010。在處理前及期間允許動(dòng)物自由進(jìn)食及飲水。
稱重單個(gè)動(dòng)物，并以1mg/kg體重的劑量通過靜脈內(nèi)藥丸給藥到尾靜脈。
在給藥后10，30和90分鐘和4，8，24，32，48，72和96小時(shí)獲得系列EDTA-血樣(0.5mL)。將EDTA-血樣立即加工成血漿，并保存于-20℃直至分析用。血漿樣品是在異氟醚(isofluorane)麻醉?xiàng)l件下獲得的。
如實(shí)施例3確定GW1843在血漿中的總濃度。
如實(shí)施例3所述評(píng)估靜脈內(nèi)給藥GW1843或脂質(zhì)體封裝的GW1843后的總GW1843的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
對(duì)于不成對(duì)數(shù)據(jù)，通過單向ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)。認(rèn)為小于0.05的p值是顯著的。使用GraphPad Instat1.0版本(GraphPad軟件)進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果將動(dòng)物分派給5組之一(每組n＝4)。組A-D由平均重223克的動(dòng)物組成，而組E由平均重409克的動(dòng)物組成。每組中的動(dòng)物接受1mg/kg靜脈內(nèi)藥丸劑量的脂質(zhì)體封裝的GW1843制劑。組A給藥批次AT-1084-97B，一種包含堿性固有的pH的制劑。組B，C和E每個(gè)給藥標(biāo)準(zhǔn)的NX1843制劑。組B給藥來自批次SMC-1092-09的檢驗(yàn)物，而組C和E給藥來自批次AT-1084-91B的檢驗(yàn)物。組D動(dòng)物給藥批次AT-1084-88B，一種由高類脂/藥物比構(gòu)成的批次。在每個(gè)給藥組中，每只動(dòng)物的總血漿GW1843濃度示于表12-16。在每個(gè)給藥組中，對(duì)于每只動(dòng)物的幾個(gè)計(jì)算的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的評(píng)估值示于表17-21中，所述藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)通過非-間隔分析確定。對(duì)所有5組的清除率[劑量(μg/kg)/AUC(0-inf)(μg.hr/mL)]進(jìn)行單向ANOVA。該檢驗(yàn)揭示在組間存在明顯差異(p＜0.0001)。進(jìn)行7個(gè)后檢驗(yàn)(在組A和B，A和C，B和C，B和D，B和E，C和D，以及C和E之間)，結(jié)果討論如下。相同NX1843制劑的兩個(gè)獨(dú)立批次的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的內(nèi)-研究分析(intra-study analysis)在等大小(～220克)大鼠中比較NX1843相同標(biāo)準(zhǔn)脂質(zhì)體制劑的兩個(gè)獨(dú)立批次。組B動(dòng)物給藥批次SMC-1092-09，而組C動(dòng)物給藥批次AT-1084-91B。組B獲得的血漿最后半衰期(10.6±1.10小時(shí))與組C獲得的最后半衰期(11.7±0.535小時(shí))沒有明顯差異。盡管組B獲得的AUC(0-inf)(253±28.4μg.hr/mL)似乎少于組C獲得的AUC(0-inf)(347±51.2μg.hr/mL)，但是在清除率的單向ANOVA分析后進(jìn)行的后檢驗(yàn)表明，組B和組C之間在清除率上無統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的差異(p＝0.0606)。
盡管該血漿清除率結(jié)果也可被認(rèn)為“或多或少顯著”，但GW1843的相同脂質(zhì)體封裝制劑(NX1843)的獨(dú)立批次的相似內(nèi)-研究比較卻提供了不一致的結(jié)果(實(shí)施例4)。在本研究中，雄性Sprague-Dawley大鼠的一組給藥1mg/kg的批次SMC-1092-09，而雄性Sprague-Dawley大鼠的另一組給藥1mg/kg的批次SMC-991-96。在兩組中所分析的包括血漿清除率的任何一種血漿藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)上，本研究未顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異(p＝0.6623)。
表22歸納了從NX1843的標(biāo)準(zhǔn)制劑的三個(gè)獨(dú)立的批次的兩項(xiàng)研究中獲得的總GW1843血漿藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)(實(shí)施例4和5)。在給藥1mg/kg靜脈內(nèi)藥丸劑量的檢驗(yàn)物后，所有這些數(shù)據(jù)已從等重的雄性Sprague-Dawley大鼠進(jìn)行測(cè)定?？偟恼f來，根據(jù)這些數(shù)據(jù)，在相同脂質(zhì)體制劑的不同批次之間未觀察到總GW1843血漿藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)上的批次之間的差異。獲自在等重大鼠中以GW1843標(biāo)準(zhǔn)脂質(zhì)體制劑(NX1843)的相同批次進(jìn)行的兩項(xiàng)研究的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的內(nèi)-研究分析在本研究中，大鼠(組B)給藥1mg/kg靜脈內(nèi)藥丸劑量的批次SMC-1092-09。在實(shí)施例4中，相似重量的一組大鼠也給藥1mg/kg靜脈內(nèi)藥丸劑量的批次SMC-1092-09。對(duì)于在本實(shí)施例和實(shí)施例4(研究R990198-138E)中給藥該批次的檢驗(yàn)物的大鼠所獲得的總GW1843血漿藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)示于表22中。未檢測(cè)到研究之間存在明顯差異。對(duì)于在本實(shí)施例(研究R2000007-138E)中組B所獲得血漿最后半衰期(10.6±1.10小時(shí))與在實(shí)施例4(研究R990198-138E)中對(duì)于SMC-1092-09組獲得的最后半衰期(12.2±0.06小時(shí))無明顯差異。另外，對(duì)于在本實(shí)施例中組B獲得的血漿清除率(3.99±0.417mL/hr.kg)與在實(shí)施例4(研究R990198-138E)中對(duì)于SMC-1092-09組獲得的血漿清除率(3.65±0.283mL/hr.kg)無明顯差異。高的固有pH和高的類脂/藥物比率制劑在約220克動(dòng)物中檢測(cè)兩種備選的脂質(zhì)體GW1843制劑的藥物動(dòng)力學(xué)分布。組A給藥含高固有pH的制劑，而組D給藥含增加的類脂/藥物比率的制劑。為了比較，同樣由～220克動(dòng)物組成的組B和C給藥兩個(gè)獨(dú)立批次的GW1843的標(biāo)準(zhǔn)脂質(zhì)體制劑(NX1843)。
對(duì)于高固有pH組和給藥標(biāo)準(zhǔn)制劑的兩組觀察的血漿藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)之間無明顯差異。值得注意的是，組A的最后半衰期(9.83±0.215小時(shí))與組B(10.6±1.10小時(shí))或組C(11.7±0.535小時(shí))觀察的最后半衰期無明顯差異。另外，組A的AUC(0-inf)(283±23.7μg.hr/mL)在組B(253±28.4μg.hr/mL)和組C(347±51.2μg.hr/mL)獲得的AUC(0-inf)之間。接著對(duì)于清除率的單向ANOVA分析的后檢驗(yàn)表明在組A(3.56±0.295mL/hr.kg)和組B(3.50±0.589mL/hr.kg)之間或在組A和組C(2.94±0.489mL/hr.kg)之間，在清除率方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)上的明顯差異。
觀察高類脂/藥物比率組(組D)和給藥標(biāo)準(zhǔn)制劑的兩組(組B和C)的血漿藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)之間存在明顯差異。值得注意的是，組D的最后半衰期(11.7±1.88小時(shí))與組B(10.6±1.10小時(shí))或組C(11.7±0.535小時(shí))觀察的最后半衰期無明顯差異。然而，組D獲得的AUC(0-inf)(169±28.8μg.hr/mL)似乎小于組B(253±28.4μg.hr/mL)或組C(347±51.2μg.hr/mL)獲得的AUC(0-inf)。接著清除率的單向ANOVA分析進(jìn)行的后檢驗(yàn)表明在組D和組B之間(p＝0.0038)和組D和組C之間(p＝0.0005)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的明顯差異。在大/小大鼠中NX1843藥物動(dòng)力學(xué)在雄性Sprague-Dawley大鼠中進(jìn)行的先前藥物動(dòng)力學(xué)研究的檢驗(yàn)(實(shí)施例2，3和實(shí)施例4)揭示，給藥1mg/kg靜脈內(nèi)藥丸劑量的脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843)后，總GW1843血漿清除率(mL/hr.kg)可能隨著動(dòng)物重量而改變。為了檢驗(yàn)該假設(shè)，在本研究中給藥兩組雄性Sprague-Dawley大鼠1mg/kg靜脈內(nèi)藥丸劑量的相同批次的NX1843(組C和E)。動(dòng)物重量在組之間不同，使得組C中動(dòng)物平均重226克，而在組E中平均重409克。獲得藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的檢驗(yàn)揭示可能存在差異。例如，組E動(dòng)物的血漿最后半衰期(14.0±2.03小時(shí))比組C動(dòng)物(11.7±0.535小時(shí))長。另外，組E動(dòng)物的Cmax(25.2±1.33μg/mL)比組C動(dòng)物(20.4±1.23μg/mL)大。這些差異也反映在組C和E之間在AUC(0-inf)方面的差異。組E動(dòng)物具有549±58.0μg.hr/mL的AUC(0-inf)，而組C動(dòng)物具有347±51.2μg.hr/mL的AUC(0-inf)。然而，組C和組E之間的清除率的單向ANOVA分析表明僅“或多或少明顯”的結(jié)果(p＝0.0522)?？墒钱?dāng)結(jié)合以來自先前實(shí)施例(研究號(hào)R990164-138E和R990198-138E)的結(jié)果時(shí)，大和小動(dòng)物之間的差異變得明顯。表23表示獲自兩個(gè)獨(dú)立的批次的NX1843的相同制劑的血漿藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的結(jié)合結(jié)果，所述NX1843的相同制劑在大和小動(dòng)物中均進(jìn)行了研究。在大動(dòng)物的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)具有相似的清除率值，1.93±0.207mL/hr.kg和1.84±0.191mL/hr.kg。然而，在較小動(dòng)物中，在兩個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)中獲得了更高的清除率(3.50±0.589mL/hr.kg和2.94±0.489mL/hr.kg)。因此，從結(jié)合的數(shù)據(jù)可以清楚看出當(dāng)由μg/kg要素決定時(shí)，清除率的值不同。然而，如果使用總劑量(mL/hr)確定清除率，則對(duì)于大和小動(dòng)物而言，獲得的清除率值是相似的。用總劑量方法再計(jì)算示于表23中的清除率值，對(duì)于由約220克動(dòng)物組成的兩個(gè)研究給出了0.73mL/hr和0.65mL/hr的清除率，對(duì)于由約400克動(dòng)物組成的兩個(gè)研究提供0.75mL/hr和0.74mL/hr的清除率。
在等大小動(dòng)物中，在脂質(zhì)體封裝的GW1843制劑(批次SMC-1092-09)的血漿清除率(mL/hr.kg)之間未觀察到統(tǒng)計(jì)學(xué)上明顯的差異，所述脂質(zhì)體制劑在本實(shí)施例和在實(shí)施例4中獲得。
在等大小動(dòng)物中，在相同脂質(zhì)體封裝GW1843制劑(NX1843)的兩個(gè)獨(dú)立的批次(SMC-1092-09和AT-1084-91B)之間未觀察到在血漿清除率(mL/hr.kg)方面存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的明顯差異。
基于動(dòng)物重量觀察標(biāo)準(zhǔn)制劑的血漿清除率(mL/hr.kg)的差異。這個(gè)結(jié)論是基于在本實(shí)施例中大和小動(dòng)物批次AT-1084-91B的比較和基于在本實(shí)施例和實(shí)施例4中小動(dòng)物批次SMC-1092-09的比較，以及基于在實(shí)施例4中小動(dòng)物和實(shí)施例3中的大動(dòng)物批次SMC-996-91的比較。因此，在實(shí)施例4中為解釋PK差異提供的假設(shè)已得到驗(yàn)證。
當(dāng)以[總劑量(μg)/AUC(0-inf)(μg.hr/M1)]＝mL/hr計(jì)算時(shí)，血漿清除率在大和小大鼠間似乎是不變的。
在等大小的動(dòng)物中，高類脂/藥物比率制劑(批次AT-1084-88B)比標(biāo)準(zhǔn)制劑(批次SMC-1092-09和AT-1084-91B)或高固有pH制劑(批次AT-1084-97B)清除得更快，但從血漿清除仍比游離GW1843(實(shí)施例2和3)明顯慢得多。
在等大小動(dòng)物中，高固有pH制劑(批次AT-1084-97B)具有與標(biāo)準(zhǔn)制劑(批次SMC-1092-09和AT-1084-91B)相似的血漿清除率。因此，該制劑從血漿清除同樣比游離GW1843(實(shí)施例2和3)明顯慢得多。實(shí)施例6單一靜脈內(nèi)藥丸給藥后血漿藥物動(dòng)力學(xué)本實(shí)施例的目的是擴(kuò)展備選的脂質(zhì)體封裝的GW1843制劑的分析。在此處檢驗(yàn)了由4∶1HSPC/膽甾醇摩爾比組成的制劑。其它制劑由2∶1摩爾比組成。已知膽甾醇穩(wěn)定脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)，因此期望增加的HSPC/膽甾醇比率可增加血漿清除率。結(jié)果使用NX1843批次號(hào)AT-1105-32(表1A)。
重244.57-257.19克的雄性Sprageu-Dawley大鼠用于此研究。根據(jù)動(dòng)物福利和養(yǎng)護(hù)準(zhǔn)則(NRC Publication Guide for the Care and Use of LaboratoryAnimals，1996)，在Boulder，Colorado進(jìn)行存活階段的研究。在處理前及期間允許動(dòng)物自由進(jìn)食及飲水。
稱重各個(gè)動(dòng)物，并以1mg/kg體重的劑量通過靜脈內(nèi)藥丸(bonus)給藥到尾靜脈。
在給藥后10，30和90分鐘和4，8，24，32，48，和72小時(shí)獲得EDTA-血樣(0.5mL)。當(dāng)動(dòng)物在麻醉(isoflurane)狀態(tài)下取樣，并將EDTA-血樣立即加工成血漿，并將血漿樣品保存于-20℃直至分析用。
如實(shí)施例3確定GW1843在血漿中的總濃度。
如實(shí)施例3所述評(píng)估靜脈內(nèi)給藥脂質(zhì)體封裝的GW1843后總GW1843的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
通過在相同實(shí)驗(yàn)中獲得的數(shù)據(jù)的不成對(duì)t-檢驗(yàn)進(jìn)行處理組的比較。認(rèn)為小于0.05的p值是有意義的。使用GraphPad Instat 1.0版本(GraphPad軟件)進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果每個(gè)動(dòng)物的總GW1843血漿濃度歸納于表24中。脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843)4∶1HSPC/膽甾醇摩爾比制劑的幾個(gè)計(jì)算的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的評(píng)估值于表25中提供。
評(píng)估總GW1843在血漿中的最大獲得濃度(Cmax)，范圍為14.4μg/mL(大鼠#2)-17.2μg/mL(大鼠#3)。所有四只動(dòng)物的平均Cmax為15.8μg/mL。評(píng)估的(平均值±SD)最后半衰期(Elim.t1/2)為9.92±1.98小時(shí)，其完全在標(biāo)準(zhǔn)的脂質(zhì)體封裝的GW1843制劑觀察的范圍內(nèi)?？侴W1843血漿濃度對(duì)時(shí)間曲線[AUC(0-inf)]下的面積為213±22.8hr.μg/mL。曲線下的面積稍微小于對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)的脂質(zhì)體制劑觀察到的面積，范圍為251-342hr.μg/mL。這反映在4∶1HSPC/膽甾醇制劑獲得血漿清除率值(4.47±0.472mL/(hr.kg))。在用幾乎相等大小的動(dòng)物進(jìn)行的4個(gè)實(shí)驗(yàn)中，對(duì)于三個(gè)不同批次的標(biāo)準(zhǔn)制劑獲得的平均清除率值的范圍為3.50-3.99mL/(hr.kg)。
先前的研究已表明在mL/(hr.kg)基礎(chǔ)上的血漿清除率隨著動(dòng)物重量的增加而降低(實(shí)施例5)。在本研究中動(dòng)物的平均重量為250克，而標(biāo)準(zhǔn)脂質(zhì)體封裝的GW1843制劑的比較研究是用平均重220克(對(duì)于四項(xiàng)研究，動(dòng)物的平均重量范圍為215-224克)的大鼠進(jìn)行的。因此，在本研究中使用具有約220克重量的動(dòng)物有可能增加觀察到的差異。
由4∶1類脂/膽甾醇比率組成的NX1843制劑(批次AT-1105-32)從血漿中清除比標(biāo)準(zhǔn)脂質(zhì)體制劑稍快些。AT-1105-32的清除率為4.74±0.472mL/(hr.kg)。在4個(gè)實(shí)驗(yàn)中(實(shí)施例4和5)，對(duì)于三個(gè)不同批次的標(biāo)準(zhǔn)制劑，在幾乎等大小的動(dòng)物中獲得的平均清除率值的范圍為3.50-3.99mL/(hr.kg)。該制劑(批次AT-1105-32)從血漿中清除仍然明顯比游離GW1843更慢些(參見實(shí)施例2和3)。
從實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算抗-腫瘤活性的方法如下抑制和消退計(jì)算通常用于評(píng)估實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)％T/C＝100×1-(T/C)T＝對(duì)于處理組的(平均)時(shí)間，以天計(jì)，以達(dá)到切去大小(cutoff size)(2克)C＝對(duì)于對(duì)照組的(平均)時(shí)間，以天計(jì)，以達(dá)到切去大小(2克)％T/C值少于10％是有明顯活性的表現(xiàn)；和％T/C值小于或等于20％是有中等活性的表現(xiàn)。％腫瘤生長抑制％TGI＝100(Wc-Wt)/Wc＝100(1-Wt/Wc)Wc是在時(shí)間x對(duì)照組的平均腫瘤重量Wt是在時(shí)間x處理組的平均腫瘤重量如果各組間起始腫瘤尺寸很大，對(duì)照和處理組在腫瘤生長的相對(duì)差異(RW)被用作校正最初的差異。
RW＝Wi/Wo，其中wi是在時(shí)間x的平均腫瘤重量，Wo是最初平均腫瘤重量。
％消退＝100(Wo-Wi)/Wo；其中Wo是處理開始處理組的平均腫瘤重量，Wi＝處理后某組在某一時(shí)間x的平均腫瘤重量。常常，時(shí)間x＝給藥最終治療劑量后24-48小時(shí)。
生長延遲測(cè)量用于評(píng)估實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)于sc正在生長腫瘤的腫瘤細(xì)胞死亡計(jì)算log10細(xì)胞死亡(總量)＝[T-C值(以天計(jì))/(3.32)(Td)其中T-C＝處理和對(duì)照腫瘤達(dá)到確定的終點(diǎn)的時(shí)間差，以天計(jì)；Td是來自最佳擬合(best-fit)直線的腫瘤體積倍增時(shí)間，以天計(jì)，所述最佳擬合直線來自對(duì)照腫瘤指數(shù)生長(100-800mh范圍)的log-線性生長曲線圖。通過從T-C值中減去處理期間的持續(xù)時(shí)間，然后被3.32×Td除來提供T-C值到凈log10腫瘤細(xì)胞死亡的轉(zhuǎn)換。HCT-8，TK-/-異種移植模型最初的實(shí)驗(yàn)，稱為NMX-427檢驗(yàn)GW1843U89在兩個(gè)不同的劑量水平50和100mg/kg/天×17天的影響。對(duì)照組僅給藥載體。實(shí)驗(yàn)證實(shí)在兩個(gè)給藥組之間幾乎無差異，兩個(gè)藥物組與對(duì)照組均存在顯著差異，兩個(gè)藥物組對(duì)于50和100mg/kg組分別具有3.0和3.3的log細(xì)胞殺滅值。存在兩種持久治愈，其中一種在每個(gè)給藥組中保持至第57天實(shí)驗(yàn)的終止。通過總體重降低測(cè)量的副作用毒性在兩個(gè)藥物處理組中均最小，在對(duì)照組中最大。這可反映腫瘤誘導(dǎo)的惡病質(zhì)，一種被某些積極生長的腫瘤所誘導(dǎo)的結(jié)果。
第二個(gè)異種移植比較了脂質(zhì)體配制的GW1843U89(表1A；NA-1022-59A)與游離藥物的抗-腫瘤功效，所述GW1843U89每隔一天給藥7.5mg/kg，游離藥物每天給藥25和50mg/kg。脂質(zhì)體藥物的量僅允許14天的定量(7劑)。提供的游離藥物的總量為350mg/kg和700mg/kg，而在NX1843組，提供的總藥量為52.5mg/kg。表26歸納了清楚地證實(shí)脂質(zhì)體藥物比游離藥物更有效的結(jié)果，所述脂質(zhì)體藥物需要的總藥量更少，可以更低頻率的時(shí)間表給藥。與25和50mg/kg游離藥物組相比，脂質(zhì)體藥物的作用證實(shí)游離藥物有更強(qiáng)的功效，其具有83％消退和4.6的log細(xì)胞殺滅值，而25和50mg/kg游離藥物組不發(fā)生腫瘤消退，并且分別為1.5和3.5的log細(xì)胞殺滅值。圖2表示腫瘤生長曲線，并證實(shí)游離藥物的用藥反應(yīng)效果，和用NX1843組更延遲的腫瘤派生(outgrowth)。藥物對(duì)體重的相對(duì)作用示于圖3。在所有藥物組中體重的降低是短暫并且可逆的，不超過10％。
用NX1843進(jìn)行用藥時(shí)間表研究(表1A；SMC-991-96)，其中HCT-8產(chǎn)生腫瘤的裸鼠按下述劑量和時(shí)間表靜脈內(nèi)給藥25mg/kg；數(shù)量傳送1，8；15mg/kg；QD(1，3，5)×2；7.5mg/kg；QD(1-5)×2。除了這些給藥組，在第1-5天以100mg/kg給藥游離藥物，并且在第二周重復(fù)。在本實(shí)驗(yàn)中還包括如下在第1和8天以100mg/kg給藥5-fluorourcil(SFU)；在第1天和8天以6mg/kg給藥喜樹堿類似物的脂質(zhì)體制劑(NX211)；在第1天和8天分別給藥6mg/kg和100mg/kg的NX211+5FU；第1，8天給藥6mg/kg的NX211+第1-5×2天給藥100mg/kg的游離GW1843；和在第1，8天給藥6mg/kg和25mg/kg的NX211+NX1843。結(jié)果示于表27中。所有3個(gè)NX1843給藥組證實(shí)每組具有3.9-4.2范圍的log細(xì)胞殺滅(LCK)值，1/8持久治愈的相等功效。當(dāng)NX211結(jié)合以NX1843或GW1843時(shí)，總的腫瘤作用相似，具有3.4的LCK值。然而，存在由NX211+NX1843結(jié)合產(chǎn)生的2/8持久治愈。單獨(dú)5-FU、單獨(dú)NX211和單獨(dú)GW1843給藥組抑制腫瘤生長的功效均較小，LCK值分別為1.5，1.9和2.4。功效最小的給藥組為單獨(dú)5-FU，單獨(dú)NX211，和5-FU+NX211結(jié)合。游離GW1843給藥組在限制腫瘤生長方面稍微好些，但對(duì)腫瘤消退和腫瘤生長的總抑制最有效的是NX1843給藥組，產(chǎn)生5/32的持久治愈。體重降低是短暫并且可逆的，并且不超過20％。然而，包含藥物的NX211和5-FU組表現(xiàn)最大的體重降低值。
另一個(gè)補(bǔ)充以NX1843的實(shí)驗(yàn)是用藥反應(yīng)研究，即對(duì)HCT-8產(chǎn)生腫瘤的小鼠在第1和8天靜脈內(nèi)以下述劑量給藥NX184325，20，15，10，5mg/kg。除了最低組，所有給藥組中最初的腫瘤皺縮是相似的，所述最低組是與抑制92-99％腫瘤生長的其余4組相比，其抑制約80％的腫瘤生長。在任何一個(gè)給藥組中均對(duì)體重?zé)o明顯影響，并產(chǎn)生7/32的治愈。在圖4和表28中可見，用藥依賴的腫瘤反應(yīng)是明顯的。
在NX1843脂質(zhì)體制劑中產(chǎn)生幾種改變，然后在HCT-8異種移植模型中檢驗(yàn)以確定是否可確定功效方面的明顯差異。所述改變包括HSPC∶膽甾醇從4∶1-2∶1，相對(duì)固有酸度從pH5-9的范圍。結(jié)果示于表29中。
本研究證實(shí)當(dāng)在HCT-8異種移植模型中比較NX1843的不同制劑時(shí)，在抗腫瘤功效方面未看到明顯差異。在不同制劑檢測(cè)之間的藥物動(dòng)力學(xué)差異也最小，并且無明顯差異。
在SCID小鼠Molt4白血病模型中進(jìn)一步檢驗(yàn)NX1843。在該模型中，發(fā)病率和死亡率是測(cè)量的終點(diǎn)。通過靜脈內(nèi)注射移植1×107腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生腫瘤，等待4天，然后啟動(dòng)處理。處理組由25mg/kgNX1843+/-胸苷磷酸化酶(Tpase)組成。Tpase處理將小鼠循環(huán)的胸苷水平降低至人的水平(50-100nM)。對(duì)照組僅給藥D5W。結(jié)果示于圖5，并證實(shí)不考慮Tpase處理，NX1843增加了成活率。
根據(jù)具體舉例說明的實(shí)施方案，以描述了此處所要求的本發(fā)明。然而，上述說明書不是意圖將本發(fā)明限制在舉例說明的實(shí)施方案上，并且熟練的技術(shù)人員可在本發(fā)明的范圍和精神內(nèi)進(jìn)行更改，所述本發(fā)明如在上述說明書中所描述。本發(fā)明包括替換，更改和相等物，這些可包括在如后附的權(quán)利要求所定義的本發(fā)明的正確的精神和范圍內(nèi)。表1A.在不同的HSPC∶膽甾醇摩爾比，和不同的pH和水化時(shí)藥物溶液的濃度下制備的GW1843脂質(zhì)體制劑
表1B.附加的GW1843脂質(zhì)體制劑
表1C.含不同賦形劑的脂質(zhì)體制劑
表1D.含不同賦形劑的脂質(zhì)體制劑的中值粒徑穩(wěn)定性(2-8℃)
表2.對(duì)大鼠單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg后，大鼠中GW1843血漿濃度
表3.對(duì)大鼠單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg后，通過GW1843非間隔分析確定的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)
表4.對(duì)雄性Sprague-Dawley大鼠單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg的游離GW1843后，GW1843血漿濃度
*實(shí)際在0.267小時(shí)取樣。**在確定的LLQ(0.1μg/M1)下的數(shù)據(jù)。通過外推法獲得的值。表5.對(duì)雄性Sprague-Dawley大鼠單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg的脂質(zhì)體封裝GW1843(NX1843；SMC-991-96)后，總GW1843血漿濃度
表6.對(duì)雄性Sprague-Dawley大鼠單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg的游離GW1843后，GW1843血漿藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)(非-間隔分析)
表7.對(duì)雄性Sprague-Dawley大鼠單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg的脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843；SMC-991-96)后，GW1843血漿藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)(非-間隔分析)
表8.對(duì)雄性Sprague-Dawley大鼠靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg的脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843)批次SMC-1092-09后，總GW1843血漿濃度
BLOQ-量化的下限表9.對(duì)雄性Sprague-Dawley大鼠靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg的脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843)批次SMC-991-96后，總GW1843血漿濃度
*在0.517分鐘取的樣品BLOQ-量化的下限表10.對(duì)雄性Sprague-Dawley大鼠單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg的脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843)批次SMC-1092-09后，GW1843血漿藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)(非-間隔分析)
表11.對(duì)雄性Sprague-Dawley大鼠單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg的脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843)批次SMC-991-96后，GW1843血漿藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)(非-間隔分析)
表12.對(duì)雄性Sprague-Dawley大鼠(組A)單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843)制劑后，所述制劑具有高的固有pH(批次AT-1084-97B)，總GW1843血漿濃度
BLOQ-量化的下限NS-無樣品*在1.583小時(shí)取的樣品**在1.550小時(shí)取的樣品+三個(gè)確定的值的平均值和SD表13.對(duì)雄性Sprague-Dawley大鼠(組B)單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843)的標(biāo)準(zhǔn)制劑(批次SMC-1092-09)后，總GW1843血漿濃度
BLOQ-量化的下限表14.對(duì)雄性Sprague-Dawley大鼠(組C)單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843)的標(biāo)準(zhǔn)制劑(批次AT-1084-91B)后，總GW1843血漿濃度
BLOQ-量化的下限*在0.500小時(shí)取的樣品**在0.583小時(shí)取的樣品表15.對(duì)雄性Sprague-Dawley大鼠(組D)單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843)制劑后，所述制劑具有高類脂藥物比率(批次AT-1084-88B)，總GW1843血漿濃度
NS-無樣品*在1.533小時(shí)取的樣品表16.對(duì)雄性Sprague-Dawley大鼠(組E)單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843)的制劑(批次AT-1084-91B)后，總GW1843血漿濃度
ND-無數(shù)據(jù)*在1.533小時(shí)取的樣品+二個(gè)確定的數(shù)據(jù)點(diǎn)的平均值和SD表17.對(duì)雄性Sprague-Dawley大鼠(組A)單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843)制劑后，所述制劑具有高的固有pH(批次AT-1084-97B)，總GW1843血漿藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)(非-間隔分析)
表18.對(duì)雄性Sprague-Dawley大鼠(組B)單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg標(biāo)準(zhǔn)脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843)制劑(批次SMC-1092-09)后，總GW1843血漿藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)(非-間隔分析)
表19.對(duì)雄性Sprague-Dawley大鼠(組C)單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg標(biāo)準(zhǔn)脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843)制劑(批次AT-1084-91B)后，總GW1843血漿藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)(非-間隔分析)
表20.對(duì)雄性Sprague-Dawley大鼠(組D)單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843)制劑后，所述制劑具有高類脂藥物比率(批次AT-1084-88B)后，總GW1843血漿藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)(非-間隔分析)
表21.對(duì)0.4kg雄性Sprague-Dawley大鼠(組E)單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg標(biāo)準(zhǔn)脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843)制劑(批次AT-1084-91B)后，總GW1843血漿藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)(非-間隔分析)
表22.對(duì)220克雄性Sprague-Dawley大鼠單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg標(biāo)準(zhǔn)脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843)制劑后獲得的總GW1843血漿藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的歸納表(非-間隔分析)
表23.對(duì)小(220克)對(duì)大(400克)雄性Sprague-Dawley大鼠單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg標(biāo)準(zhǔn)脂質(zhì)體封裝的GW1843(NX1843)制劑后獲得的總GW1843血漿藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的歸納表(非-間隔分析)
表24.對(duì)雄性Sprague-Dawley大鼠單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg脂質(zhì)體封裝的GW1843(HSPC/膽甾醇摩爾比為4∶1)后，總GW1843血漿濃度
BLOQ-量化的下限*在0.517小時(shí)取的樣品+在24.23小時(shí)取的樣品表25.對(duì)雄性Sprague-Dawley大鼠單一靜脈內(nèi)藥丸給藥1mg/kg脂質(zhì)體封裝的GW1843(HSPC/膽甾醇摩爾比為4∶1)后，通過非-間隔分析獲得的總GW1843血漿藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)
表26.NX1843和游離藥物的比較結(jié)果歸納
表27.比較對(duì)結(jié)合以5-FU，NX211和GW1843的腫瘤反應(yīng)的NX1843劑量-一覽表的歸納
表28.用NX1843進(jìn)行的劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)的歸納
％TGI和％消退是在第26天測(cè)定的，治愈是在第60天確定的。表29.在HCT-8異種移植模型中，比較10mg/kg劑量的NX1843制劑QD1，8的抗腫瘤功效結(jié)果
縱列變更分析證實(shí)批次之間無明顯差異，p＝0.2985。
權(quán)利要求
1.一種脂質(zhì)體，其包含至少一種磷脂酰膽堿、膽甾醇和苯并喹唑啉胸苷酸合成酶抑制劑。
2.權(quán)利要求的脂質(zhì)體，其中所述磷脂酰膽堿選自二硬脂酰磷脂酰膽堿，氫化大豆磷脂酰膽堿，大豆磷脂酰膽堿，卵磷脂酰膽堿，氫化卵磷脂酰膽堿，二棕櫚酰磷脂酰膽堿，二油酰磷脂酰膽堿，二反油酰磷脂酰膽堿，和二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿。
3.權(quán)利要求2的脂質(zhì)體，其中所述磷脂酰膽堿是氫化大豆磷脂酰膽堿。
4.權(quán)利要求2的脂質(zhì)體，其中所述磷脂酰膽堿是大豆磷脂酰膽堿。
5.權(quán)利要求2的脂質(zhì)體，其中所述磷脂酰膽堿是二油酰磷脂酰膽堿。
6.權(quán)利要求2的脂質(zhì)體，其中所述磷脂酰膽堿是二反油酰磷脂酰膽堿。
7.權(quán)利要求2的脂質(zhì)體，其中所述脂質(zhì)體進(jìn)一步包含磷脂酰甘油。
8.權(quán)利要求3的脂質(zhì)體，其中所述苯并喹唑啉胸苷酸合成酶抑制劑是GW1843。
9.權(quán)利要求4的脂質(zhì)體，其中所述苯并喹唑啉胸苷酸合成酶抑制劑是GW1843。
10.權(quán)利要求5的脂質(zhì)體，其中所述苯并喹唑啉胸苷酸合成酶抑制劑是GW1843。
11.權(quán)利要求6的脂質(zhì)體，其中所述苯并喹唑啉胸苷酸合成酶抑制劑是GW1843。
12.權(quán)利要求7的脂質(zhì)體，其中所述苯并喹唑啉胸苷酸合成酶抑制劑是GW1843。
13.權(quán)利要求12的脂質(zhì)體，其中所述氫化大豆磷脂酰膽堿、膽甾醇和磷脂酰甘油處于約2∶1∶0.1的摩爾比。
14.權(quán)利要求8的脂質(zhì)體，其中氫化大豆磷脂酰膽堿對(duì)膽甾醇的摩爾比約為5∶1-2∶15。
15.權(quán)利要求14的脂質(zhì)體，其中所述摩爾比是約2∶1。
16.權(quán)利要求14的脂質(zhì)體，其中所述摩爾比是約4∶1。
17.權(quán)利要求15的脂質(zhì)體，其中所述脂質(zhì)體是單層并且小于100nm。
18.權(quán)利要求17的脂質(zhì)體，其中所述的氫化大豆磷脂酰膽堿對(duì)GW1843的摩爾比是約5∶1-75∶1。
19.權(quán)利要求9的脂質(zhì)體，其中所述摩爾比是約2∶1。
20.權(quán)利要求10的脂質(zhì)體，其中所述摩爾比是約2∶1。
21.權(quán)利要求11的脂質(zhì)體，其中所述摩爾比是約2∶1。
22.權(quán)利要求17的脂質(zhì)體，其中所述氫化大豆磷脂酰膽堿對(duì)GW1843的摩爾比約為8∶1-20∶1。
23.一種脂質(zhì)體，其包含封裝于脂質(zhì)體中的苯并喹唑啉胸苷酸合成酶抑制劑(BTSI)，其中所述脂質(zhì)體由氫化大豆磷脂酰膽堿(HSPC)和膽甾醇組成，并且其中HSPC∶膽甾醇的摩爾比是約2∶1，其中HSPC∶BTSI摩爾比為8∶1-20∶1，其中所述脂質(zhì)體是具有小于100nm尺寸的單層。
24.權(quán)利要求23的脂質(zhì)體，其中所述BTSI是GW1843。
25.一種用包括下述步驟的方法生產(chǎn)的權(quán)利要求1的組合物a)形成由磷脂酰膽堿和膽甾醇組成的類脂膜或粉末；b)用水溶液水合所述類脂膜或粉末，所述水溶液包含苯并喹唑啉胸苷酸合成酶抑制劑(BTSI)；c)提供能量從而獲得脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體是單層并且小于100nmd)對(duì)水溶液交叉-過濾以除去未封裝的BTSI，從而獲得包含BTSI的脂質(zhì)體。
26.權(quán)利要求25的組合物，其中所述磷脂酰膽堿選自二硬脂酰磷脂酰膽堿，氫化大豆磷脂酰膽堿，大豆磷脂酰膽堿，卵磷脂酰膽堿，氫化卵磷脂酰膽堿，二棕櫚酰磷脂酰膽堿，二油酰磷脂酰膽堿，二反油酰磷脂酰膽堿，和二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿。
27.權(quán)利要求26的組合物，其中所述磷脂酰膽堿是氫化大豆磷脂酰膽堿。
28.權(quán)利要求26的組合物，其中所述磷脂酰膽堿是大豆磷脂酰膽堿。
29.權(quán)利要求26的組合物，其中所述磷脂酰膽堿是二油酰磷脂酰膽堿。
30.權(quán)利要求26的組合物，其中所述磷脂酰膽堿是二反油酰磷脂酰膽堿。
31.權(quán)利要求26的組合物，其中所述脂質(zhì)體進(jìn)一步包含磷脂酰甘油。
32.權(quán)利要求25的組合物，其中所述能量是通過均化器提供的。
33.權(quán)利要求27的組合物，其中所述BTSI是GW1843。
34.權(quán)利要求28的組合物，其中所述BTSI是GW1843。
35.權(quán)利要求29的組合物，其中所述BTSI是GW1843。
36.權(quán)利要求30的組合物，其中所述BTSI是GW1843。
37.權(quán)利要求31的組合物，其中所述BTSI是GW1843。
38.權(quán)利要求27的組合物，其中氫化大豆磷脂酰膽堿對(duì)膽甾醇的摩爾比是約5∶1-2∶1.5。
39.權(quán)利要求38的組合物，其中所述摩爾比是約2∶1。
40.權(quán)利要求38的組合物，其中所述摩爾比是約4∶1。
41.權(quán)利要求39的組合物，其中所述脂質(zhì)體是單層并且小于100nm。
42.權(quán)利要求41的組合物，其中所述氫化大豆磷脂酰膽堿對(duì)GW1843的摩爾比是約5∶1-75∶1。
43.權(quán)利要求42的組合物，其中所述氫化大豆磷脂酰膽堿與GW1843的摩爾比是約8∶1-20∶1。
44.權(quán)利要求25的組合物，其中所述BTSI是GW1843，其中所述磷脂酰膽堿是氫化大豆磷脂酰膽堿(HSPC)，其中所述HSPC∶膽甾醇的摩爾比約為2∶1，其中HSPC∶BTSI的摩爾比是8∶1-20∶1。
45.一種制備包含苯并喹唑啉胸苷酸合成酶抑制劑(BTSI)的方法，所述方法包括a)形成由磷脂酰膽堿和膽甾醇組成的類脂膜或粉末；b)用水溶液水合所述類脂膜或粉末，所述水溶液包含BTSI；c)提供能量從而獲得脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體是單層并且小于100nm；d)對(duì)水溶液交叉-過濾以去除未封裝的BTSI，從而獲得包含BTSI的脂質(zhì)體。
46.權(quán)利要求45的方法，其中所述磷脂酰膽堿選自二硬脂酰磷脂酰膽堿，氫化大豆磷脂酰膽堿，大豆磷脂酰膽堿，卵磷脂酰膽堿，氫化卵磷脂酰膽堿，二棕櫚酰磷脂酰膽堿，二油酰磷脂酰膽堿，二反油酰磷脂酰膽堿，和二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿。
47.權(quán)利要求46的方法，其中所述磷脂酰膽堿是氫化大豆磷脂酰膽堿。
48.權(quán)利要求46的方法，其中所述磷脂酰膽堿是大豆磷脂酰膽堿。
49.權(quán)利要求46的方法，其中所述磷脂酰膽堿是二油酰磷脂酰膽堿。
50.權(quán)利要求46的方法，其中所述磷脂酰膽堿是二反油酰磷脂酰膽堿。
51.權(quán)利要求46的方法，其中所述脂質(zhì)體進(jìn)一步包含磷脂酰甘油。
52.權(quán)利要求45的方法，其中所述能量是通過均化器提供的。
53.權(quán)利要求47的方法，其中所述BTSI是GW1843。
54.權(quán)利要求48的方法，其中所述BTSI是GW1843。
55.權(quán)利要求49的方法，其中所述BTSI是GW1843。
56.權(quán)利要求50的方法，其中所述BTSI是GW1843。
57.權(quán)利要求51的方法，其中所述BTSI是GW1843。
58.權(quán)利要求47的方法，其中氫化大豆磷脂酰膽堿與膽甾醇的摩爾比是約5∶1-2∶1.5。
59.權(quán)利要求58的方法，其中所述摩爾比是約2∶1。
60.權(quán)利要求58的方法，其中所述摩爾比是約4∶1。
61.權(quán)利要求59的方法，其中所述脂質(zhì)體是單層并且小于100nm。
62.權(quán)利要求61的方法，其中所述氫化大豆磷脂酰膽堿與GW1843的摩爾比是約5∶1-75∶1。
63.權(quán)利要求62的方法，其中所述氫化大豆磷脂酰膽堿與GW1843的摩爾比是約8∶1-20∶1。
64.權(quán)利要求45的方法，其中所述BTSI是GW1843，其中所述磷脂酰膽堿是氫化大豆磷脂酰膽堿(HSPC)，其中所述HSPC∶膽甾醇的摩爾比是約2∶1，其中HSPC∶BTSI摩爾比是8∶1-20∶1。
65.一種抑制腫瘤生長的方法，其包括對(duì)腫瘤給藥治療或有效量的權(quán)利要求1的組合物。
66.權(quán)利要求65的方法，其中所述腫瘤是耐藥的或藥物敏感的。
67.權(quán)利要求65的方法，其中所述腫瘤是癌癥，所述癌癥選自卵巢癌，肺癌，結(jié)腸直腸癌，乳腺癌，頭和頸癌，前列腺癌，子宮癌，成膠質(zhì)細(xì)胞瘤和肉瘤。
68.權(quán)利要求67的方法，其中所述磷脂酰膽堿選自二硬脂酰磷脂酰膽堿，氫化大豆磷脂酰膽堿，大豆磷脂酰膽堿，卵磷脂酰膽堿，氫化卵磷脂酰膽堿，二棕櫚酰磷脂酰膽堿，二油酰磷脂酰膽堿，二反油酰磷脂酰膽堿，和二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿。
69.權(quán)利要求68的方法，其中所述磷脂酰膽堿是氫化大豆磷脂酰膽堿。
70.權(quán)利要求68的方法，其中所述磷脂酰膽堿是大豆磷脂酰膽堿。
71.權(quán)利要求68的方法，其中所述磷脂酰膽堿是二油酰磷脂酰膽堿。
72.權(quán)利要求68的方法，其中所述磷脂酰膽堿是二反油酰磷脂酰膽堿。
73.權(quán)利要求68的方法，其中所述脂質(zhì)體進(jìn)一步包含磷脂酰甘油。
74.權(quán)利要求69的方法，其中所述苯并喹唑啉胸苷酸合成酶抑制劑是GW1843。
75.權(quán)利要求70的方法，其中所述苯并喹唑啉胸苷酸合成酶抑制劑是GW1843。
76.權(quán)利要求71的方法，其中所述苯并喹唑啉胸苷酸合成酶抑制劑是GW1843。
77.權(quán)利要求72的方法，其中所述苯并喹唑啉胸苷酸合成酶抑制劑是GW1843。
78.權(quán)利要求73的方法，其中所述苯并喹唑啉胸苷酸合成酶抑制劑是GW1843。
79.權(quán)利要求78的方法，其中所述氫化大豆磷脂酰膽堿、膽甾醇和磷脂酰甘油的摩爾比是約2∶1∶0.1。
80.權(quán)利要求74的方法，其中氫化大豆磷脂酰膽堿與膽甾醇的摩爾比是約5∶1-2∶15。
81.權(quán)利要求80的方法，其中所述摩爾比是約2∶1。
82.權(quán)利要求80的方法，其中所述摩爾比是約4∶1。
83.權(quán)利要求81的方法，其中所述脂質(zhì)體是單層并且小于100nm。
84.權(quán)利要求83的方法，其中所述氫化大豆磷脂酰膽堿與GW1843的摩爾比是約5∶1-75∶1。
85.權(quán)利要求75的方法，其中所述摩爾比是約2∶1。
86.權(quán)利要求76的方法，其中所述摩爾比是約2∶1。
87.權(quán)利要求77的方法，其中所述摩爾比是約2∶1。
88.權(quán)利要求83的方法，其中所述氫化大豆磷脂酰膽堿與GW1843的摩爾比是約8∶1-20∶1。
全文摘要
提供了脂質(zhì)體封裝的苯并喹唑啉胸苷酸合成酶抑制劑制劑。與游離藥物相比，脂質(zhì)體作為抗腫瘤制劑具有改良的藥物動(dòng)力學(xué)和增強(qiáng)的功效。所述制劑包括脂質(zhì)體，其包含至少一種磷脂酰膽堿，膽甾醇，和苯并喹唑啉胸苷酸合成酶抑制劑。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1446080SQ01813943
公開日2003年10月1日 申請(qǐng)日期2001年6月6日 優(yōu)先權(quán)日2000年6月9日
發(fā)明者克勞丁·S·阿什瓦爾, 章蘇明, 戴維·L·埃默森, 胡寧, 杰勒德·M·詹森 申請(qǐng)人:Osi藥物公司