專利名稱：利用復合酶從魚鱗中制取小分子膠原蛋白肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種小分子蛋白肽的制取方法，特別是魚鱗小分子膠原蛋白肽制取方法。
背景技術(shù)：
膠原蛋白是一種重要的功能性蛋白質(zhì)，它與細胞增生、分化、運動、免疫、關(guān)節(jié)潤 滑、傷口愈合等密切相關(guān)。由于膠原蛋白的特殊功能，其提取物已被廣泛應用于醫(yī)藥、食品、 日用化工、生物合成等工業(yè)領(lǐng)域，如制造藥用膠囊、外科手術(shù)材料、保健食品、照明明膠、化 妝品等。廣泛用于化妝品、保健品、食品和飲料作為添加劑的膠原蛋白肽來自于膠原蛋白。 魚鱗中膠原蛋白高達45%，其中含有大量的甘氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸、羥賴氨酸等，其中羥 脯氨酸和羥賴氨酸在其它蛋白中很少發(fā)現(xiàn)。據(jù)統(tǒng)計，我國淡水魚產(chǎn)量已達100多萬噸，其 中，魚鱗廢棄物約占3 % 5%，受技術(shù)和傳統(tǒng)觀念的制約，在較長的一段時間里，魚鱗并沒 有被充分利用。隨著陸地生物安全性問題的日益惡化，由水生生物中制得的膠原蛋白將具 有更廣闊的市場前景。目前，以魚鱗為原料制備膠原蛋白肽，大多采用蛋白酶水解，其使用的蛋白酶有胰 蛋白酶、胃蛋白酶、堿性蛋白酶、菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶等，其技術(shù)的關(guān)鍵是 控制水解的程度，即控制所得肽的相對分子質(zhì)量大小；其制備工藝見附圖1現(xiàn)代研究表明膠原蛋白肽的分子量越小越容易被人體吸收利用。由于一種蛋 白酶僅能作用于蛋白質(zhì)分子中一定的肽鍵，因此采用單一蛋白酶難以獲得較小分子量的膠 原蛋白肽；而用多種蛋白酶協(xié)同作用，可作用于膠原蛋白的不同位點，獲得的膠原蛋白肽 的分子量就會更小。但由于膠原蛋白肽的分子量分布很大程度上取決于幾種蛋白酶的組 合方式和比例，而現(xiàn)有文獻報道的采用其中幾種酶組合生產(chǎn)的膠原蛋白肽分子量多分布在 2000 6000Da，而低于IOOODa的尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是根據(jù)上述現(xiàn)有技術(shù)的狀況，通過多種酶的有效組合而提供一種 利用復合酶從魚鱗中制取小分子膠原蛋白肽的方法。本發(fā)明采用與現(xiàn)有技術(shù)相同的制備流程，其創(chuàng)新點在于1、加酶水解為加復合酶水解，并且a、水的加入量為干魚鱗的4 10倍；b、酶的加入重量為干魚鱗重量的0. 5% 4. 0% ；C、酶為胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶混合而成的復合酶；d、水解保持時間為5 8小時，水解時的溫度為40°C 65°C ；2、膜過濾選擇截留分子量IOOODa的膜。為了進一步增強復合酶的水解效果，本發(fā)明的復合酶中，其每個單一酶的重量百分比含量應彡20%。實際應用中，本發(fā)明可以取晾干的魚鱗，用稀鹽酸浸泡，洗至中性，再用稀氫氧化 鈉浸泡，洗至中性，加入干魚鱗4 10倍重量的水，再加入胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白 酶(總用量為干魚鱗重量的0. 5 4%，單種酶用量占總用量的比例不低于20% )，于溫度 40 65°C水解5 8小時，然后升溫到80 90°C，保溫10 30分鐘滅酶。再經(jīng)粗過濾， 截留分子量IOOODa的膜過濾，真空濃縮，冷凍干燥，即得小分子膠原蛋白肽。本發(fā)明采用由胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶三種酶混合的復合酶水解，其胃 蛋白酶主要作用于蛋白質(zhì)中酸性氨基酸和芳香族氨基酸羧基側(cè)形成的肽鍵；其胰蛋白酶主 要作用于蛋白質(zhì)中堿性氨基酸羧基側(cè)形成的肽鍵；其木瓜蛋白酶則具有較寬的底物特異 性；三者協(xié)同作用于膠原蛋白，其釋放出低聚肽的比例高，平均分子量為500 IOOODa ；能 更好的被人體吸收，轉(zhuǎn)運至人體皮膚，骨骼，頭發(fā)，指甲等各個部位。


附圖1為本發(fā)明背景技術(shù)的制備工藝流程框圖。
具體實施例方式實施實例1取晾干的魚鱗300g，用稀鹽酸浸泡24小時，洗至中性，再用稀氫氧化鈉浸泡24小 時，洗至中性，加入1200mL的水，再加入胃蛋白酶0. 3g、木瓜蛋白酶0. 5g和胰蛋白酶0. 7g， 于溫度40°C水解8小時，然后升溫到80°C，保溫30分鐘滅酶。再經(jīng)粗過濾，截留分子量 IOOODa的膜過濾，真空濃縮，冷凍干燥，即得小分子膠原蛋白肽。實施實例2取晾干的魚鱗500g，用稀鹽酸浸泡24小時，洗至中性，再用稀氫氧化鈉浸泡24小 時，洗至中性，加入5000mL的水，再加入胃蛋白酶6g、木瓜蛋白酶4g和胰蛋白酶10g，于溫 度65°C水解5小時，然后升溫到90°C，保溫10分鐘滅酶。再經(jīng)粗過濾，截留分子量IOOODa 的膜過濾，真空濃縮，冷凍干燥，即得小分子膠原蛋白肽。實施實例3取晾干的魚鱗lOOOg，用稀鹽酸浸泡24小時，洗至中性，再用稀氫氧化鈉浸泡24小 時，洗至中性，加入5000mL的水，再加入胃蛋白酶10g、木瓜蛋白酶6g和胰蛋白酶4g，于溫 度50°C水解6小時，然后升溫到85°C，保溫20分鐘滅酶。再經(jīng)粗過濾，截留分子量IOOODa 的膜過濾，真空濃縮，冷凍干燥，即得小分子膠原蛋白肽。
權(quán)利要求
一種利用復合酶從魚鱗中制取小分子膠原蛋白肽的方法，包含有加酶水解和膜過濾等步驟，其特征在于1)所述的加酶水解為加復合酶水解，并且a、水的加入重量為干魚鱗的4～10倍；b、復合酶的加入重量為干魚鱗重量的0.5％～4.0％；c、復合酶為胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的混合物；d、水解保持時間為5～8小時，水解時的溫度為40℃～65℃；2)所述的膜過濾選擇截留分子量1000Da的膜。
2.如權(quán)利要求1所述的一種利用復合酶從魚鱗中制取小分子膠原蛋白肽的方法，其特 征在于所述的復合酶中，其每個單一酶的重量百分比含量應> 20%。
全文摘要
本發(fā)明公開了利用復合酶從魚鱗中制取小分子膠原蛋白肽的方法。該方法以魚鱗為原料，經(jīng)過脫灰脫脂處理后，再加入由胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶混合而成的復合酶進行水解，滅酶后經(jīng)粗過濾、膜過濾、真空濃縮、冷凍干燥，即得小分子膠原蛋白肽。該膠原蛋白肽平均分子量為500～1000Da，易于被人體吸收利用，可用于化妝品、保健品、食品、飲料等工業(yè)方面，有顯著的經(jīng)濟效益和社會效益。
文檔編號C12P21/06GK101899491SQ20101018135
公開日2010年12月1日 申請日期2010年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月18日
發(fā)明者王勇 申請人:武漢艾詩妮娜生物科技有限公司