專利名稱：復合酶法水解豬血生產(chǎn)血肽素的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提出的血漿蛋白復合酶法水解生產(chǎn)血肽素的方法及其應用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域 科技發(fā)明。
2背景技術(shù)：
自1993年以來，我國肉類產(chǎn)量一直處于世界第一位，生豬產(chǎn)量接近世界總產(chǎn)量的一半， 從產(chǎn)血量來看，牛的總出血量為活牛重的4.2%，豬為3.5%，羊為3.2%，目前我國的 動物血液總產(chǎn)量超過1.2乂10、，但利用率很低，資源浪費十分嚴重。
豬血液回收利用比較先進的國家是歐州各國，丹麥、瑞典兩國每年生產(chǎn)血粉達IO，OOO 一 15,000噸，瑞典屠宰血液利用率100%,歐洲其他國家的利用率平均約為90%，我國大 中型肉聯(lián)廠及冷凍廠基本上都將豬血利用起來，利用率大約45%，動物血液是一種寶貴的 資源，但多年來我國一直未得到充分的開發(fā)利用，新鮮血液中除80%左右的水分外，蛋白 質(zhì)含量大于17%，礦物質(zhì)(鉀、鈉、鎂、磷)多以無機鹽的形式存在，100g血液中鐵的含量 高達40rag以上。
本發(fā)明采用哺乳動物血液為原料，利用生物技術(shù)將血液中的大分子蛋白質(zhì)物質(zhì)控制降 解為小肽和氨基酸(混合物稱為血肽素，該低聚物混合體具有較好的可溶性)，同時最大限 度保留了血液中的有機鐵、銅、維生素等全價營養(yǎng)素，它含有18種氨基酸，以氨計蛋白質(zhì) 含量大于70%，有機鐵素含量大于2000mg/kg，另含少量銅、鋅、鈣等元素；血肽素產(chǎn) 品是采用生物技術(shù)生產(chǎn)的一種全天然組分和高附加值的產(chǎn)品，可以提供易于人體吸收的有 機鐵及血紅蛋白降解多肽和氨基酸等營養(yǎng)因子，是預防和改善缺鐵性貧血和營養(yǎng)性貧血的 食療佳品，缺鐵性貧血是一個世界性問題，在我國也十分普遍，以嬰兒、學齡前兒童、育 齡婦女和青少年中較為常見，日前國內(nèi)對合理利用動物血液改善缺鐵貧血現(xiàn)象的呼聲很高， 血肽素產(chǎn)品的推出對改善缺鐵性貧血人群的健康狀況，提高生活質(zhì)量和工作效率將起到積 極的作用。
血球蛋白質(zhì)分子的空間結(jié)構(gòu)為球形，故稱血球蛋白，分子的基團和鍵被緊緊包裹在球 形空間結(jié)構(gòu)的內(nèi)部，這樣就造成水解的難度，就是強酸、強堿水解都很難水解完全，這些 原因造成目前市場上還沒有成功生產(chǎn)血肽素的產(chǎn)品，基于這些情況，本發(fā)明解決了三個方 面的問題(1)、采用氧化還原法將亞鐵氧化成高鐵離子，反應的同時加入試劑改變血球蛋 白分子的空間結(jié)構(gòu)，使其球形結(jié)構(gòu)展開利于酶分子的活性基團的接住水解；(2)、本發(fā)明采 用了氧化脫色、水解一步到位法，縮減了工藝，降低了生產(chǎn)成本；(3)、本發(fā)明采用了復合
酶法水解使得水解徹底，產(chǎn)品得率、質(zhì)量高。
3
發(fā)明內(nèi)容
pH值不大于2.5時，亞鐵血紅素與珠蛋白的結(jié)合最疏松，而珠蛋白的pl大于3.0，首
3先調(diào)整血液pH值3.0使亞鐵血紅素與珠蛋白結(jié)合疏松，利于分離，在此種情況下加入一定 比例的乙醇反應，使得乙醇與珠蛋白中的一些基團反應，形成凝膠狀態(tài)，此時加入HA將分 離出的亞鐵血紅素中的亞鐵氧化成三鐵離子，這樣容易顏色由血紅色變成淡黃色，這樣水解后的產(chǎn)品色 澤好。
經(jīng)過上述工藝處理后，添加復合酶法水解血紅蛋白，目前水解各種蛋白大都采用強酸強 堿水解，水解時間長，部分氨基酸被破壞，中和后產(chǎn)生大量的NaCl很難完全去除，本發(fā)明 采用復合酶法協(xié)同水解，解決了單酶水解成度低的難題，又解決了強酸強堿水解破壞氨基酸 的難題。
具體實施例方式
(1) 、取新鮮豬血加入0.6%—1.0%的檸檬酸三鈉，攪拌均勻使其充分溶解，4000—
5000rmp離心20分鐘，收集沉淀；向沉淀中加入l: 1的蒸餾水使紅細胞溶脹、破碎，為了
達到血紅細胞充分破碎，每隔30分鐘高速攪拌一次10分鐘，4個小時后將此血液與血漿混 合。
(2) 、將上述混合液用6NHC1調(diào)整pH為2. 0—3. 0，調(diào)整好pH后向血液中加入等體積 的95%的乙醇，邊加邊攪拌，溶液開始變粘稠后加入2.8% (血液體積計)的仏02攪拌均勻， 靜止30分鐘，此時亞鐵血紅素變成三鐵血紅素，溶液由以前的鮮紅色變成淡黃色并形成膠 狀，血紅蛋白的球形結(jié)構(gòu)展開利于下一步水解。
(3) 、向溶液中加入3: 1的20%氫氧化鈉，8(TC保溫2小時。
(4) 、調(diào)節(jié)pH7.6-7.8，分別加入木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶(枯草芽胞桿菌 產(chǎn))200-400U/ml、 350-550U/ml、 550-700U/ml (以血液體積計)，37。C ±0. 5。C保溫4h以上。
(5) 、將上述水解液調(diào)整pH為2. 0-3. 0，加入450U/ml的胃蛋白酶(以血液體積計)， 37。C土0.5。C水解4h以上。
(6) 、將上述酶解完全的酶解液加熱煮沸5分鐘滅酶，然后進行噴霧干燥得淡黃色血肽 素產(chǎn)品。
權(quán)利要求
1、向溶血血液中加入92％以上的等體積食用級乙醇，使血球蛋白分子的球形結(jié)構(gòu)展開，利于酶分子與其基團接觸水解。
2、 向上述液中加入11202使亞鐵離子氧化成三價鐵離子，使得溶液的顏色由鮮紅色變成 淡黃色，達到絳色的目的，產(chǎn)品顏色為淡黃色。
3、 復合酶法水解過程中，酶的種類以及配比，水解時間、溫度控制等要素:木瓜蛋白酶、 胰蛋白酶、堿性蛋白酶(枯草芽胞桿菌產(chǎn))分別加入200-400U/ml、 350-550U/ml 、 550-700U/ml (以血液體積計)，水解溫度為35—39。C， pH7. 2-7. 8，水解時間3—5h。
4、 將上述水解液調(diào)整pH2.0-3.0之間，加入450U/ml的胃蛋白酶(以血液體積計)，35 一39。C水解4h以上，此時血液中蛋白質(zhì)水解率達到95°/。以上。
全文摘要
復合酶法水解豬血生產(chǎn)血肽素屬生化技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明涉及血球蛋白空間結(jié)構(gòu)展開和分子鏈斷裂水解。主要過程為鮮血離心提取紅細胞，溶脹后與血漿混合，調(diào)整pH 2-3，加等量95％乙醇和2.8％H₂O₂，加氫氧化鈉80℃保溫2h，調(diào)pH8加木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶等37℃酶解4h后調(diào)節(jié)pH3.0，加胃蛋白酶37℃酶解4h，滅酶干燥得血肽素產(chǎn)品。本技術(shù)含血球蛋白內(nèi)部基團展開、亞鐵血紅素氧化、復合酶水解等，水解率90％以上，解決了常規(guī)工藝血球蛋白水解難，過程復雜難題；本方法生產(chǎn)的血肽素產(chǎn)品肽含量達60％以上，同時保存了血液中AgI免疫功能因子等，有增強機體免疫的功能，適合屠宰場等血綜合加工。
文檔編號C12P21/06GK101509030SQ20091005865
公開日2009年8月19日 申請日期2009年3月20日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月20日 公開號200910058656.8
發(fā)明者凱 伍, 剛 孫, 戢長明, 游敬剛, 潘紅梅, 功 陳 申請人:四川省食品發(fā)酵工業(yè)研究設計院;四川四海食品股份有限公司 被以下專利引用 (1),