固定于作物昆蟲共育箱內(nèi)，然后移入3齡煙粉虱若蟲飼毒48h。
[0020] 所述步驟（d)中的3齡煙粉虱若蟲飼毒后趨光分離毛刷刷離煙粉虱若蟲時(shí)夾雜的 雜質(zhì)和死蟲，然后轉(zhuǎn)移部分煙粉虱若蟲進(jìn)稱量瓶，通過精密電子天平稱重，去皮計(jì)算瓶內(nèi)煙 粉虱若蟲的總重后根據(jù)瓶內(nèi)煙粉虱若蟲的數(shù)量，計(jì)算得到單頭煙粉虱若蟲的重量，以根據(jù) 待測大豆株數(shù)和接種強(qiáng)度確定飼毒煙粉虱若蟲數(shù)目，進(jìn)而計(jì)算接種所需飼毒煙粉虱若蟲重 量并稱重定量。
[0021] 所述步驟（e)中的待測大豆生長處于2~3葉期，且待測大豆按照40cm2/株的比 例留取長勢健康均勻的大豆苗。
[0022] 所述步驟（e)中的待測大豆按照50~150蟲/株的比例接種飼毒后的3齡煙粉 虱若蟲，作物昆蟲共育箱的培養(yǎng)溫度控制在27°C、光14h/暗10h共育傳毒至接種的煙粉虱 自然衰老死亡。
[0023] 本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)有如下優(yōu)點(diǎn)： 本發(fā)明通過純化篩選裝置獲得大量的大田來源的煙粉虱成蟲，進(jìn)而通過作物昆蟲共育 箱共育出大量的3齡煙粉虱若蟲，并再次通過純化篩選裝置獲得大量整齊一致的3齡煙粉 虱若蟲，然后通過3齡煙粉虱若蟲共育飼毒、待測大豆定量共育接種傳毒的方式使得待測 大豆發(fā)病，最后通過調(diào)查煙粉虱病毒病的發(fā)病情況即可準(zhǔn)確鑒定出待測大豆品種的抗病能 力。
[0024] 本發(fā)明的鑒定方法既可以去除排趨性對鑒定結(jié)果的干擾，又可以克服品種抗性鑒 定所需煙粉虱規(guī)模量獲取的難題，并且實(shí)現(xiàn)了定量而強(qiáng)化的大豆煙粉虱病毒病抗性的接種 鑒定，能夠準(zhǔn)確地評價(jià)大豆品種對大豆煙粉虱病毒病的抗性水平；該鑒定方法除了可以應(yīng) 用于大豆品種資源的發(fā)掘鑒定、品種抗性評價(jià)、抗病品種選育外，亦可以應(yīng)用于抗病基因定 位的表型鑒定和抗性遺傳規(guī)律研宄等眾多領(lǐng)域，故適宜推廣使用。
【具體實(shí)施方式】
[0025] 下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[0026] 一種大豆對煙粉虱病毒病抗性的接種鑒定方法，該接種鑒定方法步驟如下：（a)、 大田煙粉虱的獲取和分離純化：在煙粉虱爆發(fā)季節(jié)采用夜間趨光誘捕法從大田采集煙粉虱 成蟲，其中含有大量雜質(zhì)和雜蟲。針對各地氣候和種植作物的不同，采集時(shí)間因地制宜。然 后利用純化篩選裝置進(jìn)行分離篩選，為主要獲取煙粉虱成蟲，純化篩選裝置的分樣篩采用 孔徑為45目和55目的分樣篩組合，因?yàn)楹Y取調(diào)查發(fā)現(xiàn)，45~55目的分樣篩組合可有效 的屏蔽掉煙粉虱死蟲、雜質(zhì)和無(弱）趨光性昆蟲、大體型趨光性昆蟲、小體型趨光性昆蟲和 煙粉虱幼齡若蟲的干擾，有效分離出大量整齊一致的煙粉虱成蟲；（b)、3齡煙粉虱若蟲的 培育和分離篩選：將篩選獲得的煙粉虱成蟲接種到作物昆蟲共育箱內(nèi)培育的2~3葉期棉 花上共育并繁育下一代煙粉虱若蟲，作物昆蟲共育箱的培養(yǎng)溫度控制在27°C、光14h/暗 l〇h，共育兩周左右可觀察到大量煙粉虱若蟲出現(xiàn)，待多數(shù)若蟲生長到3齡期，用柔軟的毛 刷將聚集在棉花葉和莖桿上的大量煙粉虱若蟲分離進(jìn)塑料盒內(nèi)；為篩選整齊一致的3齡煙 粉虱若蟲，篩選裝置參照成蟲篩選裝置進(jìn)行調(diào)整，同樣利用若蟲的趨光性進(jìn)行分選，分樣篩 組合選擇90~120目，且由于若蟲運(yùn)動(dòng)能力較弱，此時(shí)篩選裝置翻轉(zhuǎn)90°設(shè)置將垂直的 趨光方向改變?yōu)樗椒较?，將若蟲置于黑暗一端，若蟲趨光水平爬動(dòng)，采用90~120目的 分樣篩組合能夠分離獲得大量整齊一致的3齡煙粉虱若蟲；（c)、煙粉虱若蟲飼毒：將上一 年在-20°C的冰箱中冷藏的大豆煙粉虱重災(zāi)區(qū)取材的大豆病株自然解凍，將病株根用浸水 脫脂棉包裹并用塑料布包扎結(jié)實(shí)模擬大田移栽方式垂直固定于作物昆蟲共育箱(僅通風(fēng)光 照，不播種、不通水）內(nèi)，然后移入3齡煙粉虱若蟲飼毒48h，使得3齡煙粉虱若蟲帶毒；（d) 計(jì)量煙粉虱若蟲：用柔軟的毛刷將飼毒后的3齡煙粉虱若蟲分離進(jìn)塑料盒，不設(shè)分樣篩，趨 光分離毛刷刷離3齡煙粉虱若蟲時(shí)夾雜的雜質(zhì)和死蟲，轉(zhuǎn)移部分3齡煙粉虱若蟲進(jìn)稱量瓶， 精密電子天平稱重，去皮計(jì)算瓶內(nèi)3齡煙粉虱若蟲的總重后根據(jù)瓶內(nèi)煙粉虱若蟲的數(shù)量， 計(jì)算得到單頭3齡煙粉虱若蟲的重量，以根據(jù)待測大豆株數(shù)和接種強(qiáng)度確定煙粉虱數(shù)目， 進(jìn)而計(jì)算接種所需煙粉虱重量并稱重定量；（e)、待測大豆與帶毒3齡煙粉虱若蟲定量共育 傳毒：當(dāng)步驟（b)中的作物昆蟲共育箱內(nèi)煙粉虱若蟲大量出現(xiàn)(多一齡若蟲)時(shí)，將待測大豆 品種播種在作物昆蟲共育箱內(nèi)培養(yǎng)，每箱播種一個(gè)待測大豆品種(家系)，完成步驟（c)后待 測大豆幼苗的生長會(huì)處于2~3葉期，按照40cm2/株的比例淘汰弱苗和不均勻的苗以留取 長勢健康均勻的大豆幼苗，按照50~150蟲/株的比例將飼毒后的定量3齡煙粉虱若蟲接 種到作物昆蟲共育箱內(nèi)栽培的待測大豆品種幼苗上共育傳毒，作物昆蟲共育箱的培養(yǎng)溫度 控制在27°C、光14h/暗10h共育傳毒至接種的煙粉虱自然衰老死亡；（f)、待測大豆大田顯 癥統(tǒng)計(jì)：待煙粉虱半數(shù)死亡時(shí)將待測大豆移栽至大田隔蟲網(wǎng)室，常規(guī)栽培管理，大豆顯癥后 調(diào)查株發(fā)病率，根據(jù)株發(fā)病率能夠準(zhǔn)確鑒定出待測大豆品種的抗病能力。
[0027]實(shí)施例一 2013年8月5日夜間，在大田里安裝誘蟲燈誘捕煙粉虱活體成蟲，誘捕一夜后，積蟲瓶 內(nèi)采集到大量的煙粉虱，亦含大量雜蟲，利用一種大田來源灰飛虱成蟲的純化篩選裝置（ZL 201310290925.X)進(jìn)行分離篩選，為分離出蟲齡整齊一致的純凈的煙粉虱成蟲，試驗(yàn)了不同 孔徑的分樣篩組合，肉眼觀察計(jì)數(shù)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種大豆對煙粉虱病毒病抗性的接種鑒定方法，其特征在于：所述的接種鑒定方法 步驟如下： (a) 、采用夜間趨光誘捕法從田間采集煙粉虱后通過純化篩選裝置獲取大量煙粉虱成 蟲； (b) 、將篩選獲得的煙粉虱成蟲接種到作物昆蟲共育箱內(nèi)培育的棉花上共育并繁育下 一代煙粉虱若蟲，并進(jìn)一步利用調(diào)整的純化篩選裝置分離獲取大量整齊一致的3齡煙粉虱 若蟲； (c) 、將篩選獲得的3齡煙粉虱若蟲移入栽有煙粉虱重災(zāi)區(qū)取材的大豆病株上進(jìn)行飼 毒，3齡煙粉虱若蟲飼毒后計(jì)重獲得單頭3齡煙粉虱若蟲的重量； (d) 、通過精密電子天平稱重獲得單頭3齡煙粉虱若蟲的重量，根據(jù)確定的蟲/株比例 計(jì)算所需煙粉虱總重，進(jìn)而稱重定量； (e) 、根據(jù)確定的蟲/株比例將飼毒后的定量3齡煙粉虱若蟲接種到作物昆蟲共育箱內(nèi) 栽培的待測大豆品種幼苗上共育傳毒； (f) 、待煙粉虱半數(shù)死亡時(shí)將待測大豆移栽至大田隔蟲網(wǎng)室，常規(guī)栽培管理，大豆顯癥 后調(diào)查株發(fā)病率，根據(jù)株發(fā)病率能夠準(zhǔn)確鑒定出待測大豆品種的抗病能力。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的大豆對煙粉虱病毒病抗性的接種鑒定方法，其特征在于：所 述步驟（a)中的煙粉虱收集時(shí)間為大田煙粉虱爆發(fā)季節(jié)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的大豆對煙粉虱病毒病抗性的接種鑒定方法，其特征在于：所 述步驟（a)中的純化篩選裝置使用時(shí)，采用孔徑為45目和55目的分樣篩組合可以有效分 離出大量整齊一致的煙粉虱成蟲。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的大豆對煙粉虱病毒病抗性的接種鑒定方法，其特征在于：所 述步驟（b)中的煙粉虱成蟲接種到作物昆蟲共育箱內(nèi)培育的棉花上時(shí)，與煙粉虱成蟲共育 的棉花為2~3葉期。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的大豆對煙粉虱病毒病抗性的接種鑒定方法，其特征在于： 所述步驟（b)中的作物昆蟲共育箱的培養(yǎng)溫度控制在27°C、光14h/暗10h。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的大豆對煙粉虱病毒病抗性的接種鑒定方法，其特征在于：所 述步驟（b)中的作物昆蟲共育箱內(nèi)繁育下一代煙粉虱若蟲后，此時(shí)篩選裝置翻轉(zhuǎn)90°將垂 直的趨光方向改變?yōu)樗椒较?，采用孔徑?0目和120目的分樣篩組合以有效分離獲得大 量整齊一致的3齡煙粉虱若蟲。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的大豆對煙粉虱病毒病抗性的接種鑒定方法，其特征在于：所 述步驟（c)中的大豆病株為上一年自煙粉虱重災(zāi)區(qū)取材后于-20°C的冰箱冷藏的，待病株 自然解凍后將根用浸水脫脂棉包裹并用塑料布包扎結(jié)實(shí)模擬大田移栽方式垂直固定于作 物昆蟲共育箱內(nèi)，然后移入3齡煙粉虱若蟲飼毒48h。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的大豆對煙粉虱病毒病抗性的接種鑒定方法，其特征在于：所 述步驟（d)中的3齡煙粉虱若蟲飼毒后趨光分離毛刷刷離煙粉虱若蟲時(shí)夾雜的雜質(zhì)和死 蟲，然后轉(zhuǎn)移部分煙粉虱若蟲進(jìn)稱量瓶，通過精密電子天平稱重，去皮計(jì)算瓶內(nèi)煙粉虱若蟲 的總重后根據(jù)瓶內(nèi)煙粉虱若蟲的數(shù)量，計(jì)算得到單頭煙粉虱若蟲的重量，以根據(jù)待測大豆 株數(shù)和接種強(qiáng)度確定飼毒煙粉虱若蟲數(shù)目，進(jìn)而計(jì)算接種所需飼毒煙粉虱若蟲重量并稱重 定量。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1或8所述的大豆對煙粉虱病毒病抗性的接種鑒定方法，其特征在于： 所述步驟（e)中的待測大豆生長處于2~3葉期，且待測大豆按照40cm 2/株的比例留取長 勢健康均勻的大豆苗。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的大豆對煙粉虱病毒病抗性的接種鑒定方法，其特征在于：所 述步驟（e)中的待測大豆按照50~150蟲/株的比例接種飼毒后的3齡煙粉虱若蟲，作物 昆蟲共育箱的培養(yǎng)溫度控制在27°C、光14h/暗IOh共育傳毒至接種的煙粉虱自然衰老死 亡。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種大豆對煙粉虱病毒病抗性的室內(nèi)接種鑒定方法，該方法步驟如下：（a）、獲取大田煙粉虱并分離純化出大量整齊一致的煙粉虱成蟲；（b）、繁育并分離篩選出大量整齊一致3齡煙粉虱若蟲；（c）、對獲取的3齡煙粉虱若蟲飼毒；（d）、計(jì)量煙粉虱若蟲；（e）、將待測大豆品種與帶毒3齡煙粉虱若蟲定量共育傳毒；（f）、大田顯癥統(tǒng)計(jì)：將待測大豆移栽至大田隔蟲網(wǎng)室，大田顯癥后調(diào)查統(tǒng)計(jì)大豆煙粉虱病毒病株發(fā)病率，即可準(zhǔn)確鑒定出待測大豆品種的抗病能力。本發(fā)明的室內(nèi)接種鑒定方法克服了排趨性的干擾和煙粉虱獲取規(guī)模量的難題，實(shí)現(xiàn)了定量而強(qiáng)化的大豆煙粉虱病毒病的接種鑒定，能夠準(zhǔn)確地評價(jià)大豆品種對大豆煙粉虱病毒病的抗性水平。
【IPC分類】A01G7-00, A01K67-033
【公開號(hào)】CN104620874
【申請?zhí)枴緾N201510000586
【發(fā)明人】不公告發(fā)明人
【申請人】陳丁龍
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2015年1月4日