專利名稱：短短小芽孢桿菌tw泡騰顆粒劑及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于防治水稻紋枯病的短短小芽孢桿菌TW泡騰顆粒制劑及制備方法。
背景技術(shù)：
由植物病原真菌立枯絲核菌O^hizoctonia solani)引起的水稻紋枯病(Rice sheathblight)是當(dāng)前為害我國水稻的主要病害。該病常年可造成5% 45%的產(chǎn)量損失， 高發(fā)年份減產(chǎn)70%，甚至絕收。目前，水稻紋枯病的防治以農(nóng)用抗生素井R霉素為主，但是 井岡霉素從70年代廣泛使用至今，抗藥性增強(qiáng)，用藥量也逐步增大，一旦紋枯病爆發(fā)很難 用井R霉素在短期內(nèi)控制紋枯病的危害。特別是目前農(nóng)民施藥方式多采用低水量細(xì)噴霧的 方法，受藥部位主要是水稻的葉面和頸部，而水稻發(fā)病多在植株莖桿部位，因而不能達(dá)到發(fā) 病部位，以致對(duì)病害的控制效果不理想。近年來，開發(fā)出一些生防細(xì)菌和真菌制劑用于防治 稻病，但現(xiàn)有的真菌制劑難以保存，有效期太短；而且藥效難以到達(dá)水稻植株莖桿部位，防 治效果不夠理想。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用于防治水稻紋枯病的短短小芽孢桿菌TW泡騰顆粒劑 及其制備方法，能使活體生防菌有效到達(dá)水稻發(fā)病部位。短短小芽孢桿菌TW，其拉丁文屬名為Brevikicillus brevis，保藏號(hào)為CCTCC NO :M207014(見 ZL200710021509. 4)。本發(fā)明所述短短小芽孢桿菌TW泡騰顆粒劑由以下方法制得(1)生防活體菌液的獲得挑取在LB固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)好的短短小芽孢桿菌TW菌株單菌落斑，于 5mlPDA(馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基)液體培養(yǎng)液中，30°C振蕩培養(yǎng)16h，得一級(jí)種子培養(yǎng) 液；將所得一級(jí)種子培養(yǎng)液加入400ml PDA液體培養(yǎng)液中，30°C振蕩培養(yǎng)16h，得二級(jí) 種子培養(yǎng)液；在發(fā)酵罐中，將所得二級(jí)種子培養(yǎng)液接種于以下發(fā)酵培養(yǎng)液中大豆粉100g、玉米粉100g、淀粉100g、蔗糖25g、酵母粉25g、碳酸鈣20g和 MnSO4L 0g，補(bǔ)水至20L，攪拌混合；設(shè)置發(fā)酵條件為溶氧100%，PH 7. 0-7. 2，30°C下發(fā)酵48h，得細(xì)菌發(fā)酵液；(2)泡騰制劑的制備將細(xì)菌發(fā)酵液與蔗糖按1 2(ml/g)比例混合均勻，得混合物Α;將混合物A與聚 乙烯醇、一水檸檬酸、酒石酸鉀和碳酸氫鈉，按重量比60 5 5 10 20混合，得混合 物B ；將混合物B在球形造粒機(jī)KP-350上過篩造粒(篩目大小視產(chǎn)品用途而選擇)，經(jīng)60°C汽流烘1. 5-池，控制水份重量含量為3-5%，得短短小芽孢桿菌TW菌株的泡騰顆粒劑， 無菌包裝。本短短小芽孢桿菌TW菌株泡騰顆粒劑能有效懸浮于水面，后迅速嘣解，釋放活體 生防菌，使生防菌附著于水稻植株莖桿與水面接觸面，進(jìn)而有效切斷或空間占領(lǐng)水稻立枯 絲核病菌對(duì)水稻莖桿的初侵，大大提高了生防微生物的防治效果。本泡騰顆粒劑在水中的懸浮率為100%，嘣解率為95%，水稻紋枯病的防治效果 均達(dá)80%以上，顯著高于同類活體菌劑，與抗生素農(nóng)藥井R霉素的防治效果相當(dāng)，而成本是 抗生素制劑的1/4，且泡騰顆粒菌劑施用方便，成本低。本泡騰顆粒劑可在常溫下保存2-3 年，大大高于當(dāng)前粉劑或水劑產(chǎn)品的6個(gè)月的貨架期；
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1短短小芽孢桿菌TW泡騰顆粒劑的制備(1)生防活體菌液的獲得用無菌芽簽挑取事先在LB固體培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)好的短短小芽孢桿菌TW菌株單 菌落斑，接種于裝有5ml PDA液體培養(yǎng)液的容積為20ml的三角瓶中，于30°C、200rpm條件 下振蕩培養(yǎng)16h，過夜，將上步所得培養(yǎng)液5ml全部接種于裝有400ml PDA培養(yǎng)液的容積為 IOOOml的三角瓶中，200rpm、30°C條件下振蕩培養(yǎng)16h。在容積為30L的發(fā)酵罐(型號(hào)為鎮(zhèn) 江東方GUS-30)中，將所得的400ml培養(yǎng)液接種于20L發(fā)酵培養(yǎng)液中，發(fā)酵培養(yǎng)液中固容物 含量為大豆粉100g、玉米粉100g、淀粉100g、蔗糖25g、酵母粉25g、碳酸鈣20g、MnS041.0g， 其余為水。設(shè)置發(fā)酵條件為溶氧100%，pH 7. 0-7. 2，攪拌速度為350rpm，發(fā)酵溫度30°C， 發(fā)酵時(shí)間48h ；得細(xì)菌發(fā)酵液。(2)泡騰制劑的制備將發(fā)酵好的發(fā)酵液按如下方法加工成泡騰顆粒菌劑先將細(xì)菌發(fā)酵液與蔗糖按 1 2(ml/g) (V/ff)比例混合均勻，得混合物Α;再把混合物Α、聚乙烯醇、一水檸檬酸、酒石 酸鉀和碳酸氫鈉，按60 5 5 10 20 (W/W)混合，得混合物B ；將混合物B在球形造 粒機(jī)KP-350上過篩造粒(篩目大小視產(chǎn)品用途而選擇)，再經(jīng)60°C汽流烘1.5-2h，水份含 量控制在3-5%之間，無菌包裝，成品活菌總濃度約為lX109 lX101(lCfu/g。實(shí)施例2短短小芽孢桿菌TW泡騰制劑對(duì)水稻紋枯病的田間防治試驗(yàn)本試驗(yàn)地點(diǎn)江蘇省濱海縣。試驗(yàn)地條件水稻品種為武運(yùn)粳3號(hào)，移栽方式為小苗機(jī)插，按常規(guī)田間管理。試驗(yàn)處理方法于水稻分蘗末期，分為三組(每組小區(qū)面積為40m2)試驗(yàn)組每畝用短短小芽孢桿菌TW泡騰制劑500g，與細(xì)土 20kg混合均勻撒施。對(duì)照藥劑組每畝用5%井R霉素水劑500ml噴霧防治，畝用水量50kg?？瞻讓?duì)照組用清水噴霧。試驗(yàn)設(shè)4次重復(fù)。30天后進(jìn)行病害調(diào)查，每小區(qū)五點(diǎn)取樣，共取樣25穴。病害嚴(yán) 重度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為0級(jí)不發(fā)病；1級(jí)基部葉片、葉鞘發(fā)??；2級(jí)倒第三葉以下各葉葉鞘或葉片發(fā)病；
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3級(jí)倒第二葉以下各葉葉鞘或葉片發(fā)??；4級(jí)劍葉葉鞘或葉片發(fā)病。水稻分蘗結(jié)束，計(jì)數(shù)各定點(diǎn)小區(qū)病害調(diào)查穴的基本苗數(shù)(方法為水稻分蘗結(jié)束， 即農(nóng)事操作的烤田結(jié)束后計(jì)數(shù))病情指數(shù)={ Σ (各級(jí)植株數(shù)X級(jí)值)/(調(diào)查總株數(shù)X4)} XlOO ；防治效果％ =(對(duì)照病情指數(shù)增長值)-(各處理防治后病情指數(shù)值-各處理基數(shù) 病情指數(shù)值)/對(duì)照病情指數(shù)增長值。田間試驗(yàn)結(jié)果見表1。表1短短小芽孢桿菌TW泡騰制劑對(duì)水稻紋枯病的田間防治試驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種短短小芽孢桿菌TW泡騰顆粒劑，其特征是由以下方法制得(1)生防活體菌液的獲得挑取在LB固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)好的短短小芽孢桿菌TW菌株單菌落斑，于5ml的PDA液 體培養(yǎng)液中，30°C振蕩培養(yǎng)16h，得一級(jí)種子培養(yǎng)液；將所得一級(jí)種子培養(yǎng)液加入400ml的PDA液體培養(yǎng)液中，30°C振蕩培養(yǎng)16h，得二級(jí)種 子培養(yǎng)液；將所得二級(jí)種子培養(yǎng)液接種于以下發(fā)酵培養(yǎng)液中大豆粉100g、玉米粉100g、淀粉100g、蔗糖25g、酵母粉25g、碳酸鈣20g和MnSO4L Og, 補(bǔ)水至20L，攪拌混合；設(shè)置發(fā)酵條件為溶氧100%，pH 7. 0-7. 2，30°C下發(fā)酵48h，得細(xì)菌發(fā)酵液；(2)泡騰制劑的制備將細(xì)菌發(fā)酵液與蔗糖按1 2(ml/g)比例混合均勻，得混合物Α;將混合物A與聚乙烯 醇、一水檸檬酸、酒石酸鉀和碳酸氫鈉，按重量比60 5 5 10 20混合，得混合物B;將混合物B在球形造粒機(jī)上過篩造粒，經(jīng)60°C汽流烘1. 5-池，得短短小芽孢桿菌TW菌 株的泡騰顆粒劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的短短小芽孢桿菌TW泡騰顆粒劑，其特征是控制水份重量含量 為 3-5% ο
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的短短小芽孢桿菌TW泡騰顆粒劑作為水稻紋枯病防治藥物的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種短短小芽孢桿菌TW泡騰顆粒劑，由短短小芽孢桿菌TW菌株單菌落斑PDA液體培養(yǎng)液與大豆粉、玉米粉、淀粉、蔗糖、酵母粉、碳酸鈣和MnSO4加水混合，溶氧100％，pH 7.0-7.2，30℃下發(fā)酵所得細(xì)菌發(fā)酵液與蔗糖、聚乙烯醇、一水檸檬酸、酒石酸鉀和碳酸氫鈉按比例混合，過篩造粒，經(jīng)60℃汽流烘干而成，成品活菌總濃度約為1×109～1×1010cfu/g。本劑能有效懸浮于水面，后迅速嘣解，釋放活體生防菌，使生防菌附著于水稻植株莖桿與水面接觸面，有效切斷或空間占領(lǐng)水稻立枯絲核病菌對(duì)水稻莖桿的初侵，對(duì)水稻紋枯病的防治效果均達(dá)80％以上，本泡騰顆粒劑施用方便，成本低，可在常溫保存2-3年。
文檔編號(hào)A01N25/12GK102125059SQ201010572008
公開日2011年7月20日 申請(qǐng)日期2010年12月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月3日
發(fā)明者溫學(xué)標(biāo), 趙福兵 申請(qǐng)人:江蘇蘇濱生物農(nóng)化有限公司