技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及生物工程領(lǐng)域，具體涉及一種可用于野外發(fā)酵的復(fù)合微生態(tài)制劑配方及制備方法。

背景技術(shù)：
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微生態(tài)制劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用已超過(guò)20年的歷史，其歷程大致是光合細(xì)菌、芽孢桿菌、酵母菌、em菌、乳酸菌。近年來(lái)，隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖密度的不斷提高以及全球化禁抗呼聲愈來(lái)愈強(qiáng)烈，微生態(tài)制劑的調(diào)節(jié)水質(zhì)和腸道作用愈來(lái)愈明顯。乳酸菌作為一類(lèi)新型菌群脫穎而出，其中又以糞腸球菌的功能最為有特色。在乳酸菌的使用過(guò)程中，遇到的最大問(wèn)題是菌種的不耐保存和野外發(fā)酵不成功，糞腸球菌不耐保存和野外發(fā)酵擴(kuò)培困難，為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，特提出一種新的技術(shù)方案。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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本發(fā)明的目的是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的不足之處，而提供一種可用于野外發(fā)酵的復(fù)合微生態(tài)制劑配方及制備方法。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：一種可用于野外發(fā)酵的復(fù)合微生態(tài)制劑配方，其特征在于：該配方由枯草芽孢桿菌5-15億cfu/g、乳酸糞腸球菌20-50億cfu/g、一水葡萄糖100-200g/kg、統(tǒng)糠350-500g/kg及沸石粉250-350g/kg組成。

所述的乳酸糞腸球菌經(jīng)過(guò)篩選器進(jìn)行篩選，選取能在20℃的室溫下保存生存不少于1個(gè)月的菌種。

所述的乳酸糞腸球菌的制備方法如下，選取南海水域養(yǎng)殖對(duì)蝦腸道內(nèi)篩選一株乳酸糞腸球菌，將一株乳酸糞腸球菌先進(jìn)行冷凍處理，冷凍處理之后再進(jìn)行干燥處理，使其做成菌粉狀，并將菌粉利用磷脂做材料進(jìn)行包被，將包被完成的菌粉在20℃的條件下保持兩年，并在保存的過(guò)程中進(jìn)行逐月的抽檢，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)乳酸糞腸球菌的存活率。

一種可用于野外發(fā)酵的復(fù)合微生態(tài)制劑配方的制備方法，該方法通過(guò)復(fù)配枯草芽孢桿菌、乳酸糞腸球菌及培養(yǎng)基，枯草芽孢桿菌為乳酸糞腸球菌提供相對(duì)厭氧的環(huán)境，培養(yǎng)基中的纖維素類(lèi)和其他大分子成分，供乳酸糞腸球菌發(fā)酵利用。

所述的培養(yǎng)基的配方由酵母水解物100-200g/kg、一水葡萄糖200-300g/kg、黃腐酸鉀100-150g/kg、統(tǒng)糠200-300g/kg及沸石粉100-200g/kg組成。

一種可用于野外發(fā)酵的復(fù)合微生態(tài)制劑配方的驗(yàn)證方法，該方法采用正交試驗(yàn)對(duì)微生態(tài)制劑配方進(jìn)行篩選驗(yàn)證，因子1為枯草芽孢桿菌濃度，因子2為乳酸糞腸球菌濃度，因子3為培養(yǎng)基濃度，監(jiān)測(cè)發(fā)酵后液體中乳酸糞腸球菌的濃度，有機(jī)酸濃度，篩選出最適合的微生態(tài)制劑配方和培養(yǎng)基配方。

所述的培養(yǎng)基配方由酵母水解物100-200g/kg、一水葡萄糖200-300g/kg、黃腐酸鉀100-150g/kg、統(tǒng)糠200-300g/kg及沸石粉100-200g/kg組成。

本發(fā)明的有益效果為：本技術(shù)一方面解決了糞腸球菌不耐保存和野外發(fā)酵擴(kuò)培困難的問(wèn)題。在解決糞腸球菌保存問(wèn)題方面，本技術(shù)主要特點(diǎn)是篩選在常溫下保存時(shí)間長(zhǎng)的菌種和采用菌種鈍化技術(shù)來(lái)解決；野外發(fā)酵問(wèn)題則是通過(guò)制備成復(fù)合微生態(tài)制劑，以提高糞腸球菌的生存時(shí)間和創(chuàng)造優(yōu)良的生存空間來(lái)解決。

具體實(shí)施方式：

結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明：

實(shí)施例一：

一種可用于野外發(fā)酵的復(fù)合微生態(tài)制劑配方，其特征在于：該配方由枯草芽孢桿菌5億cfu/g、乳酸糞腸球菌20億cfu/g、一水葡萄糖100/kg、統(tǒng)糠350/kg及沸石粉250/kg組成。

所述的乳酸糞腸球菌經(jīng)過(guò)篩選器進(jìn)行篩選，選取能在20℃的室溫下保存生存不少于1個(gè)月的菌種。

所述的乳酸糞腸球菌的制備方法如下，選取南海水域養(yǎng)殖對(duì)蝦腸道內(nèi)篩選一株乳酸糞腸球菌，將一株乳酸糞腸球菌先進(jìn)行冷凍處理，冷凍處理之后再進(jìn)行干燥處理，使其做成菌粉狀，并將菌粉利用磷脂做材料進(jìn)行包被，將包被完成的菌粉在20℃的條件下保持兩年，并在保存的過(guò)程中進(jìn)行逐月的抽檢，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)乳酸糞腸球菌的存活率。

實(shí)施例二：

一種可用于野外發(fā)酵的復(fù)合微生態(tài)制劑配方，其特征在于：該配方由枯草芽孢桿菌10億cfu/g、乳酸糞腸球菌35億cfu/g、一水葡萄糖150g/kg、統(tǒng)糠400g/kg及沸石粉300/kg組成。

所述的乳酸糞腸球菌經(jīng)過(guò)篩選器進(jìn)行篩選，選取能在20℃的室溫下保存生存不少于1個(gè)月的菌種。

所述的乳酸糞腸球菌的制備方法如下，選取南海水域養(yǎng)殖對(duì)蝦腸道內(nèi)篩選一株乳酸糞腸球菌，將一株乳酸糞腸球菌先進(jìn)行冷凍處理，冷凍處理之后再進(jìn)行干燥處理，使其做成菌粉狀，并將菌粉利用磷脂做材料進(jìn)行包被，將包被完成的菌粉在20℃的條件下保持兩年，并在保存的過(guò)程中進(jìn)行逐月的抽檢，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)乳酸糞腸球菌的存活率。

實(shí)施例三：

一種可用于野外發(fā)酵的復(fù)合微生態(tài)制劑配方，其特征在于：該配方由枯草芽孢桿菌15億cfu/g、乳酸糞腸球菌50億cfu/g、一水葡萄糖200g/kg、統(tǒng)糠500g/kg及沸石粉350g/kg組成。

所述的乳酸糞腸球菌經(jīng)過(guò)篩選器進(jìn)行篩選，選取能在20℃的室溫下保存生存不少于1個(gè)月的菌種。

所述的乳酸糞腸球菌的制備方法如下，選取南海水域養(yǎng)殖對(duì)蝦腸道內(nèi)篩選一株乳酸糞腸球菌，將一株乳酸糞腸球菌先進(jìn)行冷凍處理，冷凍處理之后再進(jìn)行干燥處理，使其做成菌粉狀，并將菌粉利用磷脂做材料進(jìn)行包被，將包被完成的菌粉在20℃的條件下保持兩年，并在保存的過(guò)程中進(jìn)行逐月的抽檢，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)乳酸糞腸球菌的存活率。

以上三個(gè)實(shí)施例均采用以下制備方法進(jìn)行制備：

一種可用于野外發(fā)酵的復(fù)合微生態(tài)制劑配方的制備方法，該方法通過(guò)復(fù)配枯草芽孢桿菌、乳酸糞腸球菌及培養(yǎng)基，枯草芽孢桿菌為乳酸糞腸球菌提供相對(duì)厭氧的環(huán)境，培養(yǎng)基中的纖維素類(lèi)和其他大分子成分，供乳酸糞腸球菌發(fā)酵利用。

所述的培養(yǎng)基的配方由酵母水解物150g/kg、一水葡萄糖250g/kg、黃腐酸鉀130g/kg、統(tǒng)糠250g/kg及沸石粉150g/kg組成。

以上三個(gè)實(shí)施例均采用以下方法進(jìn)行驗(yàn)證：

一種可用于野外發(fā)酵的復(fù)合微生態(tài)制劑配方的驗(yàn)證方法，該方法采用正交試驗(yàn)對(duì)微生態(tài)制劑配方進(jìn)行篩選驗(yàn)證，因子1為枯草芽孢桿菌濃度，因子2為乳酸糞腸球菌濃度，因子3為培養(yǎng)基濃度，監(jiān)測(cè)發(fā)酵后液體中乳酸糞腸球菌的濃度，有機(jī)酸濃度，篩選出最適合的微生態(tài)制劑配方和培養(yǎng)基配方。

使用效果實(shí)驗(yàn)：

本研究通過(guò)100家企業(yè)連續(xù)試用1年，考察該復(fù)合微生態(tài)制劑配方各方面的效果。測(cè)試項(xiàng)目評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：非常滿意5分，滿意4分，一般3分，不滿意2分，非常不滿意1分。其中普通組為普通微生態(tài)制劑配方；

本發(fā)明優(yōu)勢(shì)在于能在野外較惡劣的養(yǎng)殖環(huán)境下將乳酸糞腸球菌簡(jiǎn)易擴(kuò)培出來(lái)，并保存較長(zhǎng)時(shí)間，為養(yǎng)殖戶提供方便、低廉的微生態(tài)制劑用于調(diào)節(jié)水質(zhì)和水生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物腸道健康，與之前的野外擴(kuò)培易長(zhǎng)霉菌、不耐保存相比，具有革命性的優(yōu)勢(shì)。

對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，可根據(jù)以上技術(shù)方案以及構(gòu)思，做出其他各種相應(yīng)的改變以及變形，而所有的這些改變和變形都應(yīng)該屬于本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。