羥丙基倍他環(huán)糊精的定量檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及藥物分析領域，尤其設及徑丙基倍他環(huán)糊精的定量檢測方法。
【背景技術】
[0002] 曲札巧巧為拉薩大黃的主要脂溶性成分，是一種二苯乙締巧類化合物。今年研究 結果表明，二苯乙締巧類化合物具有抗氧化清除自由基、抗腫瘤、降血脂、抗動脈粥樣硬化 等生物活性。注射用曲札巧巧由昆明制藥集團股份有限公司生產(chǎn)。注射用曲札巧巧W曲札 巧巧為主藥，W徑丙基倍他環(huán)糊精為輔料，其中曲札巧巧的質量分數(shù)為16. 6667 %，徑丙基 倍他環(huán)糊精的質量分數(shù)為83. 3333%。
[0003] 由于主藥和輔料的穩(wěn)定性都會影響藥品的品質，因此，對注射用曲札巧巧的質量 評價需檢測曲札巧巧的含量還需要檢測徑丙基倍他環(huán)糊精的含量。但是由于注射用曲札巧 巧中組分相對復雜，且曲札巧巧的含量較大，因此對徑丙基倍他環(huán)糊精的定量較為不易。
[0004] 高效快速的高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法（HPLC-ELSD)，與普通的HPLC方法 相比，蒸發(fā)光散射器在測定沒有紫外吸收或僅在紫外末端有吸收的成分上有較大的優(yōu)勢和 較廣泛的應用。因此，應當建立利用HPLC-ELSD對注射用曲札巧巧中徑丙基倍他環(huán)糊精含 量進行測定的方法。

【發(fā)明內容】

[0005] 有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術問題在于提供徑丙基倍他環(huán)糊精的定量檢測方 法。該方法精密度、重復性、準確度皆良好，適用于對曲札巧巧中徑丙基倍他環(huán)糊精的檢測。
[0006] 本發(fā)明提供的徑丙基倍他環(huán)糊精的定量檢測方法，WHPLC-ELSD為檢測器，W水 和乙臘的混合物為流動相，根據(jù)檢測結果對徑丙基倍他環(huán)糊精定量。
[0007] 對一種物質進行定量檢測時需要對該方法進行精密度、重復性和準確度等多方面 的鑒定，對本發(fā)明提供方法的鑒定結果表明：
[0008] 精密度：同一份徑丙基倍他環(huán)糊精標準品，連續(xù)進樣六次，保留時間的相對標準偏 差為0. 095%，而峰面積的的相對標準偏差為0. 86%，小于2%，說明該方法的精密度良好。
[0009] 重復性：取徑丙基倍他環(huán)糊精供試品，由同一分析人員精密稱取6份，平行操作測 定6份供試品溶液，結果表明，含量相對標準偏差為0. 64%，在規(guī)定范圍內，說明此本發(fā)明 提供方法的重復性較好。
[0010] 準確度：在樣品中加入已知量的標準品，W本發(fā)明提供的方法對徑丙基倍他環(huán)糊 精進行定量，計算加樣回收率。在80 %、100 %、120 % =個濃度范圍內，每組濃度平行=次檢 測回收率總平均值為100. 28%，RSD為1. 206%，符合回收率要求。說明該方法具有良好的 準確度。 W11] 在本發(fā)明的實施例中，流動相中水和乙臘的體積比為（40~50) : (50~60)。
[0012] 在一些實施例中，流動相中水和乙臘的體積比為45:55。
[0013] 液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的，因此要 求流動相對樣品具有一定的溶解能力且與樣品不產(chǎn)生化學反應，其黏度要盡量小，w便得 到好的分離效果；且流動相的物化性質要與使用的檢測器相適應。其沸點不可W太低，否則 容易產(chǎn)生氣泡，導致實驗無法進行。對于徑丙基倍他環(huán)糊精而言，本發(fā)明所采用的的流動相 能夠保證更好的檢測效果，優(yōu)于其他流動相。
[0014] 在本發(fā)明的實施例中，流動相的流速為0. 8ml?min1~1. 2ml?min1。
[0015] 在一些實施例中，流動相的流速為1. 0ml?min1。
[0016] 流動相的流速過高會降低塔板數(shù)，而塔板數(shù)的降低會導致樣品分離度的降低。
[0017] 在本發(fā)明的實施例中，HPLC-ELSD的漂移管溫度為90°C~95°C。
[0018] 在一些實施例中，HPLC-ELSD的漂移管溫度為93°C。
[0019] 在本發(fā)明的實施例中，HPLC-ELSD的色譜柱為地enomenexlima畑2色譜柱。
[0020] 對本發(fā)明提供的方法而言，徑丙基倍他環(huán)糊精的極性，更適宜本發(fā)明所采用的色 譜柱。色譜柱的尺寸會對分離結果產(chǎn)生影響，其內徑會對流動相的流速產(chǎn)生影響，長度較短 的色譜柱運行時間短，柱壓較低；長度較長的色譜柱分辨率高，但運行時間增長。 陽02U 在本發(fā)明的實施例中，HPLC-ELSD的色譜柱的尺寸為4. 6mmX(100mm~250mm)， 5um〇
[0022] 在一些實施例中，HPLC-ELSD的色譜柱的尺寸為4. 6mmX250mm，5um。
[0023] 對柱溫的選擇需考慮待分離物質本身的特性，柱溫影響流動相對待測物質的溶解 度也會影響柱壓。一般情況下，提高柱溫有利于提高分離度，但溫度過高會導致柱壓過低， 不利于物質的檢出。
[0024] 在本發(fā)明的實施例中，HPLC-ELSD色譜柱的柱溫為20°C~30°C。 陽0巧]在一些實施例中，HPLC-ELSD色譜柱的柱溫為25°C。 陽0%] 在本發(fā)明的實施例中，HPLC-ELSD的洗脫方式為等度洗脫。
[0027] 在本發(fā)明的實施例中，HPLC-ELSD的載氣為氮氣，載氣流量為2.化/min~2.化/ min。
[0028] 在一些實施例中，HPLC-ELSD的載氣為氮氣，載氣流量為2.化/min。
[0029] 在本發(fā)明的實施例中，定量采用標準曲線法。
[0030] 具體的，定量方法為：根據(jù)徑丙基倍他環(huán)糊精樣品濃度與HPLC-ELSD檢測所得峰 面積繪制標準曲線，根據(jù)標準曲線獲得徑丙基倍他環(huán)糊精中有效成分的含量。
[0031] 標準曲線的繪制方法為：W徑丙基倍他環(huán)糊精的濃度為橫坐標，WHPLC-ELSD檢 測色譜圖中徑丙基倍他環(huán)糊精的峰面積為縱坐標繪制標準曲線。
[0032] 采用本發(fā)明提供的方法，徑丙基倍他環(huán)糊精的保留時間為3. 5min~3. 6min。
[0033] 在一些實施例中，進樣量為10yL。 W34] 本發(fā)明提供的方法對徑丙基倍他環(huán)糊精的定量檢測范圍為160yg/mL~ 4000yg/血。
[0035] 實驗表明，采用本發(fā)明提供的方法對注射用曲札巧巧進行檢測，其中的曲札巧巧 成分的檢出峰不會對徑丙基倍他環(huán)糊精的檢出峰產(chǎn)生干擾，說明本發(fā)明提供的方法可W用 于注射用曲札巧巧中倍他環(huán)糊精的定量檢測。
[0036] 本發(fā)明提供的方法能夠用于對注射用曲札巧巧中徑丙基倍他環(huán)糊精的定量檢測。
[0037] 在本發(fā)明的實施例中，對注射用曲札巧巧中徑丙基倍他環(huán)糊精定量時，樣品的前 處理方法為，將注射用曲札巧巧溶解于超純水后，進入HPLC-ELSD檢測，進樣量為10yL。
[0038] 本發(fā)明提供的徑丙基倍他環(huán)糊精的定量檢測方法，W HPLC-ELSD為檢測器，W水 和乙臘的混合物為流動相，根據(jù)檢測結果對徑丙基倍他環(huán)糊精定量。采用本發(fā)明提供的方 法對徑丙基倍他環(huán)糊精樣品進行定量能夠具有良好的精密度、重復性和準確度。且實驗表 明，采用該方法對注射用曲札巧巧中的徑丙基倍他環(huán)糊精進行定量檢測，徑丙基倍他環(huán)糊 精的色譜峰和曲札巧巧的色譜峰相互不產(chǎn)生干擾，采用該方法能夠實現(xiàn)對注射用曲札巧巧 中徑丙基倍他環(huán)糊精的準確定量。
【附圖說明】
[0039]圖1示本發(fā)明提供方法對不同待測液的檢測譜圖，其中，圖1-a示空白的色譜圖； 圖1-b示對照溶液的色譜圖；圖1-C示樣品溶液的色譜圖。
【具體實施方式】
[0040] 本發(fā)明提供了注射用曲札巧巧中徑丙基倍他環(huán)糊精的定量檢測方法，本領域技術 人員可W借鑒本文內容，適當改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改 動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應 用已經(jīng)通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內容】
、精神和范圍內 對本文的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應用本發(fā)明技術。
[0041] 本發(fā)明采用的儀器和試劑皆為普通市售品，皆可于市場購得。
[0042] 其中BP221S型分析天平（Sartorius公司）；
[0043] 叫tiMate3000高效液相色譜儀（美國戴安公司）；
[0044] Alltech2000型蒸發(fā)光散射檢測器（美國奧泰科技中國有限公司）；
[0045]PhenomenexLuna畑2柱（美國菲羅口公司）；
[0046] 徑丙基倍他環(huán)糊精（西安德立生物醫(yī)藥股份有限公司20121127);
[0047] 乙臘（色譜純，韓國德山藥品工業(yè)株批號：DA2J21);
[0048] 注射用曲札巧巧（昆藥集團股份有限公司批號：20121031-01)，
[0049] 注射用曲札巧巧W曲札巧巧為主藥，W徑丙基倍他環(huán)糊精為輔料，其中曲札巧巧 的質量分數(shù)為16. 6667%，徑丙基倍他環(huán)糊精的質量分數(shù)為83. 3333%;
[0050] 超純水（超純水凈化系統(tǒng)制得）。
[0051] 下面結合實施例，進一步闡述本發(fā)明： 陽0巧實施例1
[0053] 精密稱取徑丙基倍他環(huán)糊精適量加水溶解制成每1ml中含有4mg的溶液，作為 儲備液。精密量取儲備液 2ml、4ml、5ml、6ml、7. 5ml、10ml、15ml、20ml分別置 50ml、50ml、 50ml、50ml、50ml、50ml、50ml、50ml容量瓶中，分別加水稀釋，定容至刻度線，搖勻。精密量取 10y1進高效液相進行測定，色譜條件為：
[0054]色譜柱：PhenomenexLuna饑掉ym(4. 6mmX250mm)色譜柱； 陽05引流動相冰-乙臘（45: 5W二元等度洗脫；
[0056]流速：1ml?min1;
[0057] 漂移管溫度：93°C ;
[0058] 載氣流量：2.化/min;
[0059]柱溫：25°C。
[0060] 測定結果見表1:
[0061] 表1徑丙基倍他環(huán)糊精線性實驗測定結果
陽〇6引 W對照品的濃度（yg/ml)為橫坐標，W峰面積的平均值為縱坐標進行線性回歸 計算，得到線性回歸方程：Y= 2822. 8X-185098,r= 0. 9997(n= 9)。 W64] 可見，線性方程的r值為0. 9997,表明本發(fā)明提供的方法能夠具有良好的線性。檢 測范圍為 160yg/ml~4000yg/ml。 W65] 實施例2
[0066] 精密稱取徑丙基倍他環(huán)糊精適量加水溶解制成每1ml中含有4mg的溶液，作為儲 備液。精密量取儲備液7. 5ml置50ml量瓶中，定容至50mL。精密量取徑丙基倍他環(huán)糊精溶 液10y1，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進樣六次，色譜條件為：
[0067]色譜柱：PhenomenexLuna畑25ym(4. 6mmX250mm)色譜柱； W側流動相冰-乙臘（45: 二元等度洗脫；
[0069]流速：1ml?min1;
[0070] 漂移管溫度：93°C;
[0071] 載氣流量：2.化/min;