注射用曲札茋苷中曲札茋苷的定量方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物分析領域，尤其涉及注射用曲札芪苷中曲札芪苷的定量方法。
【背景技術】
[0002] 曲札芪苷為拉薩大黃的主要脂溶性成分，是一種二苯乙烯苷類化合物。今年研究 結果表明，二苯乙烯苷類化合物具有抗氧化清除自由基、抗腫瘤、降血脂、抗動脈粥樣硬化 等生物活性。注射用曲札芪苷由昆藥集團股份有限公司生產。注射用曲札芪苷以曲札芪苷 為主藥，以羥丙基倍他環(huán)糊精為輔料，其中曲札芪苷的質量分數(shù)為16. 6667%，羥丙基倍他 環(huán)糊精的質量分數(shù)為83. 3333%。
[0003] 對藥物的質量控制需要測定藥物中有效成分的含量，但目前的檢測方法多采用 HPLC的方法，樣品需要經過前處理且HPLC的洗脫程序需要一定的時間才能完成，并且， HPLC的方法檢測曲札芪苷的含量容易受藥物中輔料成分的干擾?？梢?、HPLC法檢測注射用 曲札芪苷中曲札芪苷的含量效率較低且易受干擾。
[0004] 近紅外光譜分析技術是一種快速無損的分析技術，與傳統(tǒng)的HPLC含量測定方法 相比，它節(jié)約檢測時間，不需對樣品進行前處理，不消耗化學試劑。并可通過光纖進行遠程 分析，在工業(yè)化生產的大批量分析和過程分析上具有獨特優(yōu)勢。因此，建立一種利用近紅 外光譜分析注射用曲札芪苷中曲札芪苷含量的方法十分必要。

【發(fā)明內容】

[0005] 有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術問題在于提供注射用曲札芪苷中曲札芪苷的定量 方法。本發(fā)明提供的定量方法能夠實現(xiàn)對注射用曲札芪苷中的曲札芪苷進行快速、準確的 檢測。
[0006] 本發(fā)明提供的注射用曲札芪苷中曲札芪苷的定量方法包括以下步驟：
[0007] 步驟1 :采集注射用曲札芪苷的近紅外光譜；
[0008] 步驟2 :近紅外光譜經多元散射校正和一階導數(shù)法處理后，采用PLS法建立定量模 型，獲得注射用曲札芪苷中曲札芪苷的含量。
[0009] 在本發(fā)明的實施例中，近紅外光譜采集的波數(shù)范圍為4000cm1~10000cmi。
[0010] 在一些實施例中，近紅外光譜采集的波數(shù)范圍為4005cm1~9043cmi。
[0011] 曲札芪苷在近紅外光譜區(qū)的吸收主要集中在4005cm^90430111的波段范圍內。在 10000cm1~9043cm1波段范圍內，由于譜峰摻雜高頻噪音以及基線漂移等一些干擾因素， 這段譜區(qū)對建模所需要的特征信息貢獻不大。而在4005cm1~9043cm1波段內，曲札芪苷 樣品的譜峰所含信息量比較大，因此，需對該波段范圍內的光譜進行優(yōu)化選擇，進而得到 更好的校正模型。
[0012] 在本發(fā)明的實施例中，近紅外光譜采集的分辨率為4.Ocm、
[0013] 在本發(fā)明的實施例中，近紅外光譜采集的增益為2x。
[0014] 在本發(fā)明的實施例中，近紅外光譜以儀器內置背景為參比
[0015] 在本發(fā)明的實施例中，近紅外光譜的采集次數(shù)為2次。
[0016] 在本發(fā)明的實施例中，近紅外光譜采集的溫度為23°C~27°C。
[0017] 在一些實施例中，近紅外光譜采集的溫度為25 °C。
[0018] 在本發(fā)明的實施例中，近紅外光譜采集的片段長度為5,采集的片段間隔為5。
[0019] 在本發(fā)明的實施例中，近紅外光譜采集方法為：將注射用曲札芪苷研磨后裝入樣 品杯中，采用近紅外光譜儀進行測試，獲得近紅外光譜。
[0020] 在本發(fā)明的實施例中，注射用曲札芪苷的中水分的質量分數(shù)為1. 8%~2. 2%。
[0021] 在一些實施例中，注射用曲札芪苷的中水分的質量分數(shù)為2%。
[0022] 在本發(fā)明的實施例中，注射用曲札苗苷的檢測厚度為0. 8mm~I. 2mm。
[0023] 在本發(fā)明的實施例中，注射用曲札芪苷的檢測厚度為1. 0_。
[0024] 在本發(fā)明的實施例中，建立定量光譜所用樣品數(shù)量為61份，每份樣品檢測2次。
[0025] 在本發(fā)明的實施例中，建模所用真實值為HPLC檢測值。
[0026] HPLC法檢測注射用曲札芪苷中曲札芪苷含量的色譜條件為：
[0027] CosmosilC18色譜柱（250mmX4. 6mm，5ym);
[0028] 流動相：乙腈（A相）、質量分數(shù)為0.I%的磷酸水溶液（B相）；
[0029] 洗脫方式為梯度洗脫。
[0030] HPLC檢測的洗脫程序為：
[0031] Omin~25min，流動相A相的體積分數(shù)由15 %至30% ;
[0032] 25111；[11~30111；[11，流動相4相的體積分數(shù)由30%至40%;
[0033] 3〇111；[11~35111；[11，流動相八相的體積分數(shù)由40%至15%;
[0034] 351^11~4〇111111，流動相八相的體積分數(shù)保持15%不變。
[0035] 流動相流速為I.OmL/min。
[0036] 檢測波長為319nm。
[0037] 進樣量為IOyL。
[0038] 理論塔板數(shù)按曲札芪苷計算應不低于8000。
[0039] 采用HPLC法對注射用曲札芪苷中的曲札芪苷進行檢測，色譜圖中曲札芪苷的保 留時間為12. 4分鐘。
[0040] 經驗證，在該色譜條件下，曲札芪苷色譜峰不受輔料或空白溶劑的影響，以曲札芪 苷濃度為橫坐標以曲札芪苷峰面積為縱坐標繪得標準曲線，r值為0. 9999,說明在該色譜 條件下線性關系良好。連續(xù)進樣6針，保留時間RSD為0. 066%，峰面積RSD為0. 034%表 明該方法精密度良好。平行操作6份供試品溶液，含量RSD為1. 5%，說明該方法重復性較 好。在80%、100%、120%三個濃度范圍內，加樣回收的回收率總平均值為100. 9%，RSD為 1. 299%，表明該方法具有良好的準確度?？梢姡訦PLC檢測注射用曲札芪苷中曲札芪苷 的含量可信，以該值作為本發(fā)明檢測方法建模的真實值能夠提高本發(fā)明所建立模型的準確 度。
[0041] 在本發(fā)明的實施例中，注射用曲札芪苷樣品中，曲札芪苷的質量分數(shù)為為 4. 86%~23. 91%。
[0042] 由于儀器采集的NIR光譜除了包含樣品有關的信息之外，難免還會受其他因素干 擾而產生噪聲信號。因此需要選擇合理的光譜預處理方法消除這些干擾信號。本發(fā)明通過 過多元散射校正（MSV)和一階導數(shù)法對譜圖進行預處理。經過預處理的譜圖通過PLS法建 立定量模型。
[0043] 預處理和定量模型的建立采用TQAnalyst6. 2數(shù)據(jù)處理軟件。
[0044] 在本發(fā)明的實施例中，PLS法的建模因子數(shù)為7。
[0045] 在本發(fā)明的實施例中，采用內部交叉法對定量模型進行驗證。驗證結果表明，定量 模型中相關系數(shù)為〇. 9994,校正標準差為0. 195。
[0046] 本發(fā)明提供的注射用曲札芪苷中曲札芪苷的定量方法對采集得到的注射用曲札 芪苷的近紅外光譜進行多元散射校正和一階導數(shù)法處理后，采用PLS法建立定量模型，獲 得注射用曲札芪苷中曲札芪苷的含量。本發(fā)明提供的定量方法在建模過程中按照注射用曲 札芪苷的處方進行建模樣品的制備。因此該方法可有針對性的注射用曲札芪苷中曲札芪苷 含量的測定，具有良好的系統(tǒng)適應性。
[0047] 經過內部交叉驗證，定量模型中相關系數(shù)為0. 9994,校正標準差為0. 195,顯示該 定量模型具有良好的預測能力。以HPLC法測定的曲札芪苷的含量為真實值，對曲札芪苷定 量模型的準確性進行檢測，結果表明在p>〇. 05的條件下，預測值和真實值的t值為0. 499， 小于臨界值t(0. 05, 121) = 1. 6579說明二者的預測結果不存在顯著性差異說明該方法具 有良好的準確性。
【附圖說明】
[0048] 圖1示注射用曲札芪苷的HPLC檢測圖譜；
[0049]圖2示曲札芪苷建模樣品的原始NIR光譜圖；
[0050] 圖3示曲札芪苷建模樣品原始NIR經預處理后光譜圖；
[0051] 圖4示PLS建模因子數(shù)對RMSECV的影響；
[0052]圖5示曲札芪苷定量分析模型預測值與HPLC測定值相關圖；
[0053] 圖6示曲札芪苷定量分析模型預測值與HPLC測定值偏差圖。
【具體實施方式】
[0054] 本發(fā)明提供了注射用曲札芪苷中曲札芪苷的定量方法，本領域技術人員可以借鑒 本文內容，適當改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技 術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應用已經通過較 佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內容】
、精神和范圍內對本文的方法 和應用進行改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應用本發(fā)明技術。
[0055] 本發(fā)明采用的試劑和儀器皆為普通市售品，皆可于市場購得，其中：
[0056]UltiMate3000型液相色譜儀（美國戴安公司）；
[0057]BP221S型電子天平（sartrous公司）；
[0058]Waterse2695型液相色譜儀（美國Waters公司）；
[0059]Agilent1260液相色譜儀（美國Agilent公司）；
[0060]ANTARISII近紅外光譜儀（美國Thermo公司）；
[0061]色譜柱C18柱（250X4. 6mm, 5. 0Um)(日本NacalaiTesque公司）；
[0062] 注射用曲札芪苷（昆藥集團股份有限公司，規(guī)格：20mg/瓶，批號：21021031-01); 其中，曲札芪苷的質量分數(shù)為16. 6667% ;輔料為羥丙基