專利名稱：一種金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及的是檢測試紙，具體的是一種金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙。
背景技術：
金黃色葡萄球菌aureus是人類的一種重要病原菌，隸屬于葡萄球菌屬知70C0CCM)，有“嗜肉菌〃的別稱， 是革蘭氏陽性菌的代表，可引起許多嚴重感染。金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在，空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的機會很多。美國疾病控制中心報告，由金黃色葡萄球菌引起的感染占第二位，僅次于大腸桿菌。金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛(wèi)生難題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒，占整個細菌性食物中毒的33%，加拿大則更多，占到45%，我國每年發(fā)生的此類中毒事件也非常多。而目前尚無一種非常有效、快速的檢測培養(yǎng)物中金黃色葡萄球菌的方法，通用的方法為將培養(yǎng)物在適當的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，看目標菌種是否出現(xiàn)，該方法耗時長，非常不方便。金黃色葡萄球菌A蛋白(Staphylococal Protein A, SPA)是一種從金黃色葡萄球菌細胞壁分離的蛋白質。早在1940年，Vevwey發(fā)現(xiàn)在某些金黃色葡萄球菌中，含有一種物質，在雙向擴散試驗中能與正常人血清形成沉淀。Jensen也發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象，并將其命名為A抗原。直到1963年Lofkvist等分離了該抗原，并證明它是一種蛋白質。為與A與糖相區(qū)另ij，Grov將其命名為金黃色葡萄球菌A蛋白，簡稱SPA或蛋白A。由于SPA的一些免疫特性，它已發(fā)展成為免疫學上一種極為有用的工具。因此，可根據SPA的免疫特性發(fā)明一種檢測金黃色葡萄球菌是否存在的裝置。
發(fā)明內容本實用新型的發(fā)明目的是針對上述問題提供一種金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙，解決目前檢測金黃色葡萄球菌是否存在的方法耗時長，非常不方便的問題。本實用新型通過以下技術方案來實現(xiàn)一種金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙，該試紙包括塑料底板、微孔濾膜、玻璃纖維素膜、硝酸纖維素膜、濾紙，塑料底板上依次貼有微孔濾膜、玻璃纖維素膜、硝酸纖維素膜和濾紙；所述的玻璃纖維素膜上有膠體金顆粒標記的SPA單克隆抗體I，硝酸纖維素膜上有SPA單克隆抗體II條帶。上述的硝酸纖維素膜上還有羊抗鼠IgG條帶，SPA單克隆抗體II條帶和羊抗鼠IgG條帶平行設置，且SPA單克隆抗體II條帶位于膠體金顆粒標記的SPA單克隆抗體I和羊抗鼠IgG條帶之間。采用上述技術方案的積極效果本實用新型利用抗原抗體反應和免疫層析技術的原理，將SPA單克隆抗體制備到試紙上，通過SPA單克隆抗體會與金黃色葡萄球菌A蛋白結合的特性，通過膠體金顆粒顯色，檢測出SPA的存在，進而證明金黃色葡萄球菌的存在；同時，增加了羊抗鼠IgG條帶，可以靈敏地檢測出本實用新型是否失效，方便使用。


[0009]圖I是本實用新型的俯視圖；圖2是本實用新型的裝配示意圖。圖中1塑料底板、2微孔濾膜、3玻璃纖維素膜、4硝酸纖維素膜、5濾紙、6 SPA單克隆抗體II條帶、7羊抗鼠IgG條帶。
具體實施方式

以下結合附圖對本實用新型作進一步說明圖I是本實用新型的俯視圖，圖2是本實用新型的裝配示意圖，結合圖I、圖2所示，一種金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙，該試紙包括塑料底板I、微孔濾膜2、玻璃纖維素膜3、硝酸纖維素膜4、濾紙5，塑料底板I上依次貼有微孔濾膜2、玻璃纖維素膜3、硝酸纖維素膜4和濾紙5。微孔濾膜2是用于加樣的，濾紙5主要用于吸取多余液體。玻璃纖維素膜3上有膠體金顆粒標記的SPA單克隆抗體I，利用抗原抗體反應，如果待測溶液中含有SPA的話，SPA會和膠體金顆粒標記的SPA單克隆抗體I相結合。硝酸纖維素膜4上有SPA單克隆抗體II條帶6,由于SPA單克隆抗體II被噴涂成條帶狀,這樣SPA與膠體金顆粒標記的SPA單克隆抗體I結合后形成的復合物會繼續(xù)和SPA單克隆抗體II相結合，從而在SPA單克隆抗體II條帶6處發(fā)生沉積，產生顯色，從而判斷待測溶液中是否含有SPA。為了能夠隨時檢測出試紙是否失效，在SPA單克隆抗體II條帶6不顯色的情況下判斷出是因為待測溶液中不含有SPA，還是由于試紙失效導致膠體金顆粒標記的SPA單克隆抗體I消失，在硝酸纖維素膜4上還設置有羊抗鼠IgG條帶7，SPA單克隆抗體II條帶6和羊抗鼠IgG條帶7平行設置，且SPA單克隆抗體II條帶6位于膠體金顆粒標記的SPA單克隆抗體I和羊抗鼠IgG條帶7之間。因為SPA單克隆抗體I和SPA單克隆抗體II均來源于小鼠，因此羊抗鼠IgG是可以和SPA單克隆抗體I和SPA單克隆抗體II相互結合的，由于SPA單克隆抗體I還標記有膠體金顆粒，當標記有膠體金顆粒的SPA單克隆抗體I和羊抗鼠IgG相結合時，會在羊抗鼠IgG條帶7處發(fā)生沉積，從而顯色。在正常情況上，試紙上有一定量的標記有膠體金顆粒的SPA單克隆抗體I，不管待測液體中是否含有SPA，標記有膠體金顆粒的SPA單克隆抗體I都會和羊抗鼠IgG相結合，從而使羊抗鼠IgG條帶7處顯色；如果試紙已經失效了，即沒有標記有膠體金顆粒的SPA單克隆抗體I時，羊抗鼠IgG條帶7也就不會發(fā)生顯色反應了，此時，提醒實驗人員需要重新更換試紙進行檢測。當該試紙條用來檢測樣品時，把預處理過的樣品滴于該試紙條的微孔濾膜2處，樣品由于毛細作用進行側向層析，經過玻璃纖維素膜3，若樣品中有SPA，其會與膠體金標記的SPA單克隆抗體I結合，形成Ag-Ab I -膠體金復合物。然后繼續(xù)滲移，與硝酸纖維素膜4上固定的SPA單克隆抗體II結合，形成Ab II -Ag-Ab I -膠體金復合物，從而在SPA單克隆抗體II條帶6處發(fā)生沉積，呈肉眼可見的條帶。然后繼續(xù)滲移，由于SPA單克隆抗體I和SPA單克隆抗體II均來源于小鼠，當遇到羊抗鼠IgG條帶7時，會和羊抗鼠IgG發(fā)生結合，膠體金標記的SPA單克隆抗體I在羊抗鼠IgG條帶7處呈現(xiàn)肉眼可見的條帶。若樣品中沒有SPA，則不會形成Ag-Ab I -膠體金復合物，從而不會和SPA單克隆抗體II結合，SPA單克隆抗體II條帶6不顯色。但是，無論樣品中是否有SPA，膠體金標記的SPA單克隆抗體I均會在毛細作用下滲移到羊抗鼠IgG條帶7處，同羊抗鼠IgG結合，使羊抗鼠IgG條帶7顯色。檢測中，如果SPA單克隆抗體II條帶6和羊抗鼠IgG條帶7均顯色，證明待測溶液中含有SPA，進而證明金黃色葡萄球菌的存在；如果SPA單克隆抗體II條帶6不顯色，羊抗鼠IgG條帶7顯色，證明待測溶液中不含有SPA，也就不含有金黃色葡萄球菌；如果SPA單 克隆抗體II條帶6和羊抗鼠IgG條帶7均不顯色，證明試紙條已經失效，需要重新更換試紙進行檢測。
權利要求1.一種金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙，其特征在于該試紙包括塑料底板(I)、微孔濾膜(2)、玻璃纖維素膜(3)、硝酸纖維素膜(4)、濾紙(5)，塑料底板(I)上依次貼有微孔濾膜(2)、玻璃纖維素膜(3)、硝酸纖維素膜(4)和濾紙(5);所述的玻璃纖維素膜(3)上有膠體金顆粒標記的SPA單克隆抗體I，硝酸纖維素膜(4)上有SPA單克隆抗體II條帶(6)。
2.根據權利要求I所述的一種金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙，其特征在于所述的硝酸纖維素膜(4)上還有羊抗鼠IgG條帶(7)，SPA單克隆抗體II條帶(6)和羊抗鼠IgG條帶(7)平行設置，且SPA單克隆抗體II條帶(6)位于膠體金顆粒標記的SPA單克隆抗體I和羊抗鼠IgG條帶(7)之間。
專利摘要本實用新型涉及的是一種金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙，該試紙包括塑料底板(1)、微孔濾膜(2)、玻璃纖維素膜(3)、硝酸纖維素膜(4)、濾紙(5)，塑料底板(1)上依次貼有微孔濾膜(2)、玻璃纖維素膜(3)、硝酸纖維素膜(4)和濾紙(5)；所述的玻璃纖維素膜(3)上有膠體金顆粒標記的SPA單克隆抗體Ⅰ，硝酸纖維素膜(4)上有SPA單克隆抗體Ⅱ條帶(6)。本實用新型利用抗原抗體反應和免疫層析技術的原理，將SPA單克隆抗體制備到試紙上，通過SPA單克隆抗體會與SPA結合的特性，通過膠體金顆粒顯色，檢測出SPA的存在，進而判斷金黃色葡萄球菌是否存在，方便使用。
文檔編號G01N33/569GK202512119SQ20122016652
公開日2012年10月31日 申請日期2012年4月19日 優(yōu)先權日2012年4月19日
發(fā)明者盧杰, 盧珍, 韓鋒玉 申請人:大慶醫(yī)學高等?？茖W校