專(zhuān)利名稱：一種elisa標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種ELISA標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法，屬于生物體外診斷試劑技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)實(shí)驗(yàn)因其靈敏度高，樣本容易獲得，操作簡(jiǎn)便已成為國(guó)際公認(rèn)的蛋白定量金標(biāo)準(zhǔn)。ELISA試劑盒制備的關(guān)鍵技術(shù)之一就是標(biāo)準(zhǔn)品的制備。目前，ELISA標(biāo)準(zhǔn)品的保存方法有甘油-20度保存法和真空冷凍干燥法。甘油低溫保存，蛋白活性通?？杀３?個(gè)月至I年。常規(guī)真空冷凍干燥，蛋白活性能夠保持兩年，但這不能滿足ELISA試劑盒長(zhǎng)期保存的需要，標(biāo)準(zhǔn)品需要更長(zhǎng)的蛋白活性保持時(shí)間。近年來(lái)，傳統(tǒng)ELISA標(biāo)準(zhǔn)品的制備過(guò)程大都使用真空冷凍干燥法，但沒(méi)有使用專(zhuān)門(mén)用于ELISA標(biāo)準(zhǔn)品制備的凍存液，也沒(méi)有先使用凍存液再通過(guò)真空冷凍干燥法來(lái)制備ELISA標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種能使ELISA標(biāo)準(zhǔn)品在4度保存3年以上，蛋白活性保持在99. 5%以上，蛋白活性變異在1%以內(nèi)的ELISA標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法。本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是該ELISA標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法包括以下步驟
a、在磷酸根摩爾濃度為O. Olmol/L, Tween20體積分?jǐn)?shù)為1%。4訴7· 2-7. 4的PBST緩沖液中加入BSA和海藻糖，使BSA的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為O. 5-10%,海藻糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%_30%，得到凍存液。b、將所述凍存液用微孔濾膜抽濾，得到抽濾凍存液；
C、將標(biāo)準(zhǔn)蛋白用所述抽濾凍存液稀釋至目的濃度，得到標(biāo)準(zhǔn)濃度蛋白溶液；
d、將上述標(biāo)準(zhǔn)濃度蛋白溶液移至聚丙烯塑料管，用鋁箔紙封口后-80度過(guò)夜；
e、過(guò)夜后在鋁箔紙上扎小孔，真空冷凍干燥，至完全干燥，得到ELISA標(biāo)準(zhǔn)品。作為優(yōu)選，所述a步中PBST緩沖液pH=7. 3，BSA的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%，所述海藻糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%。作為優(yōu)選，所述b步中微孔濾膜的直徑大小為O. 22um。作為優(yōu)選，所述d步中聚丙烯塑料管規(guī)格為2ml，每管存放IOOul標(biāo)準(zhǔn)濃度蛋白溶液。作為優(yōu)選，所述e步中在鋁箔紙上扎3個(gè)小孔，IOpa以內(nèi)真空冷凍干燥8小時(shí)。本發(fā)明標(biāo)準(zhǔn)蛋白在進(jìn)行常規(guī)的冷凍步驟前先用所述凍存液進(jìn)行溶解，在凍存液的保護(hù)下，再通過(guò)真空冷凍干燥對(duì)標(biāo)準(zhǔn)蛋白進(jìn)行固化保存，可以保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)蛋白，使蛋白活性穩(wěn)定。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有的優(yōu)點(diǎn)是用該凍存液對(duì)ELISA標(biāo)準(zhǔn)蛋白進(jìn)行真空冷凍干燥后制得的標(biāo)準(zhǔn)品可以在4度條件下保存，保存時(shí)間更長(zhǎng)，蛋白活性保持水平更高，蛋白活性變異更少。增加了 ELISA試劑盒的保存時(shí)間和穩(wěn)定性，減少了 ELISA試劑盒因標(biāo)準(zhǔn)品活性降低或喪失而報(bào)廢，減少經(jīng)濟(jì)損失。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的解釋而本發(fā)明并不局限于以下實(shí)施例。實(shí)施例1 :以Human IL-6標(biāo)準(zhǔn)蛋白為例，采用本發(fā)明所述ELISA標(biāo)準(zhǔn)品的制備方的步驟如下
a、在磷酸根摩爾濃度為O. 01 mol/L, Tween20體積分?jǐn)?shù)為1%。，pH=7. 3的PBST緩沖液中加入BSA和海藻糖，使BSA的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%，海藻糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%，得到ELISA標(biāo)準(zhǔn)品凍存液。b、將所述凍存液用O. 22um微孔濾膜抽濾，得到抽濾凍存液；
C、將Human IL-6標(biāo)準(zhǔn)蛋白用所述抽濾凍存液稀釋至目的濃度，得到Human IL-6標(biāo)準(zhǔn)濃度蛋白溶液；
d、將上述HumanIL-6標(biāo)準(zhǔn)濃度蛋白溶液移至2ml的聚丙烯塑料管，每管存放IOOul，用鋁箔紙封口后-80度過(guò)夜；
e、過(guò)夜后用注射器針頭在鋁箔紙上扎3個(gè)小孔，IOpa以內(nèi)真空冷凍干燥8小時(shí)，至完全干燥，得到Human IL-6標(biāo)準(zhǔn)品；
f、除去鋁箔紙，擰緊管蓋，貼標(biāo)簽，4度保存。上述Human IL-6標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)過(guò)37度加速試驗(yàn)，可以保存28天。根據(jù)阿倫尼烏斯公式結(jié)論，37度保存I天相當(dāng)于4度保存48天,因此得出本實(shí)施例Human IL-6預(yù)包被酶標(biāo)板在4度可保存3年以上。實(shí)施例2 以實(shí)施例1中制得的Human IL-6標(biāo)準(zhǔn)品為例進(jìn)行蛋白活性與平行性實(shí)驗(yàn)，凍干后與凍干前相比，蛋白活性保持在99. 5%以上。20個(gè)Human IL-6標(biāo)準(zhǔn)品，活性變異在1%以內(nèi)。其他實(shí)施例以Human IL-6標(biāo)準(zhǔn)蛋白為例制成Human IL-6標(biāo)準(zhǔn)品后進(jìn)行保存時(shí)
間測(cè)試，所述凍存液中BSA和海藻糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)是以下表格中的配比，步驟與實(shí)施例1相
同，不同配比對(duì)應(yīng)的37度加速試驗(yàn)測(cè)得的保存天數(shù)如下表
BSA j海藻糖j保存天數(shù)(37度) —
O. 5% 5%_23 天_
1% 10% 一 24 天-
3% 15% 一 25 天_
5% 20% 一 26 天_
8% 25% 一 27 天_
10% 130% 丨28^~
根據(jù)阿倫尼烏斯公式結(jié)論，37度保存I天相當(dāng)于4度保存48天，表中37度時(shí)最低可保
持23天，因此得出本發(fā)明所述方法制得的Human IL-6標(biāo)準(zhǔn)品在4度可保存3年以上。此外，需要說(shuō)明的是，本說(shuō)明書(shū)中所描述的具體實(shí)施例，其配比、工藝所取名稱等可以不同。凡依本發(fā)明專(zhuān)利構(gòu)思所述的構(gòu)造、特征及原理所做的等效或簡(jiǎn)單變化，均包括于本發(fā)明專(zhuān)利的保護(hù)范圍內(nèi)。本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對(duì)所描述的具體實(shí)施例做各種各樣的修改或補(bǔ)充或采用類(lèi)似的方式替代，只要不偏離本發(fā)明的結(jié)構(gòu)或者超越本權(quán)利要求書(shū)所定義的范圍，均應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。雖然本發(fā)明已以實(shí)施例公開(kāi)如上，但并非用以限定本發(fā)明的保護(hù)范圍，任何熟悉該項(xiàng)技術(shù)的技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明的構(gòu)思和范圍內(nèi)所作的更動(dòng)與潤(rùn)飾，均應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種ELISA標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法，其特征在于包括以下步驟 a、在磷酸根摩爾濃度為O.Olmol/L, Tween20體積分?jǐn)?shù)為1%。4訴7· 2-7. 4的PBST緩沖液中加入BSA和海藻糖，使BSA的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為O. 5-10%,海藻糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%_30%，得到凍存液； b、將所述凍存液用微孔濾膜抽濾，得到抽濾凍存液； C、將標(biāo)準(zhǔn)蛋白用所述抽濾凍存液稀釋至目的濃度，得到標(biāo)準(zhǔn)濃度蛋白溶液； d、將所述標(biāo)準(zhǔn)濃度蛋白溶液移至聚丙烯塑料管，用鋁箔紙封口后-80度過(guò)夜； e、過(guò)夜后在鋁箔紙上扎小孔，真空冷凍干燥，至完全干燥，得到ELISA標(biāo)準(zhǔn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述ELISA標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法，其特征在于所述a步中PBST緩沖液pH=7. 3，BSA的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%，所述海藻糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述ELISA標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法，其特征在于所述b步中微孔濾膜的直徑大小為O. 22um。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述ELISA標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法，其特征在于所述d步中聚丙烯塑料管規(guī)格為2ml，每管存放IOOul標(biāo)準(zhǔn)濃度蛋白溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述ELISA標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法，其特征在于所述e步中在鋁箔紙上扎3個(gè)小孔，IOpa以內(nèi)真空冷凍干燥8小時(shí)。
全文摘要
本發(fā)明是一種ELISA標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法，屬診斷試劑技術(shù)領(lǐng)域，包括以下步驟a、在磷酸根摩爾濃度為0.01mol/L，Tween20體積分?jǐn)?shù)為1‰，pH=7.2-7.4的PBST緩沖液中加入BSA和海藻糖，使BSA的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5-10%，海藻糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%-30%，得到凍存液；b、將所述凍存液用微孔濾膜抽濾，得到抽濾凍存液；c、將標(biāo)準(zhǔn)蛋白用所述抽濾凍存液稀釋至目的濃度，得到標(biāo)準(zhǔn)濃度蛋白溶液；d、將上述標(biāo)準(zhǔn)濃度蛋白溶液移至聚丙烯塑料管，用鋁箔紙封口后-80度過(guò)夜；e、過(guò)夜后在鋁箔紙上扎小孔，真空冷凍干燥，至完全干燥，得到ELISA標(biāo)準(zhǔn)品。本發(fā)明能使ELISA標(biāo)準(zhǔn)品在4度保存3年以上。
文檔編號(hào)G01N33/68GK103063847SQ201210560899
公開(kāi)日2013年4月24日 申請(qǐng)日期2012年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月21日
發(fā)明者袁志波 申請(qǐng)人:杭州茂天賽科技有限公司