分離并檢測羅氟司特及其中間體的方法
【專利摘要】本申請涉及分離并檢測羅氟司特及其中間體的方法，該方法通過高效液相色譜法，采用反相色譜柱，以含有離子對試劑的pH=2-7.5的緩沖液為流動相A，以甲醇或乙腈為流動相B，檢測波長為215nm，采用線性梯度洗脫方式進行分離及檢測。
【專利說明】分離并檢測羅氟司特及其中間體的方法
【技術(shù)領域】
[0001]本申請涉及藥物的分離及檢測方法，特別是涉及分離并檢測羅氟司特及其中間體的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]歐盟已于2010年7月批準由Nycomed公司制造的藥物一羅氟司特(rof Iumilast,Daxas)上市，以用于治療慢性阻塞性肺疾病(COPD)。羅氟司特為選擇性磷酸二酯酶4(PDE4)抑制劑，是十多年來首次獲得歐盟批準的新一類治療COPD的藥物。
[0003]通常需要經(jīng)過幾個關(guān)鍵的中間體合成步驟來化學合成羅氟司特。因此，羅氟司特中可能殘留有各種中間體，這會影響到羅氟司特作為藥物應用的質(zhì)量和純度。因此，建立羅氟司特及其中間體的分離檢測方法以控制其質(zhì)量和純度是非常必要的，其中化學合成羅氟司特的各個中間體及羅氟司特的結(jié)構(gòu)如下所示:
[0004]
【權(quán)利要求】
1.分離并檢測羅氟司特及其中間體的方法，所述方法通過高效液相色譜法采用線性梯度洗脫方式對羅氟司特及其中間體進行分離并檢測，其中實施高效液相色譜法的條件為:色譜柱為反相色譜柱，流動相A為含有離子對試劑的pH=2.0-7.5的緩沖液，流動相B為甲醇或乙腈,檢測波長為215nm。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述離子對試劑為烷基磺酸鹽，優(yōu)選C5-C10烷基磺酸的鈉鹽，更優(yōu)選庚烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉和癸烷磺酸鈉，最優(yōu)選癸烷磺酸鈉。
3.如權(quán)利要求1-2中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液和醋酸鹽緩沖液，優(yōu)選所述緩沖液中所含的緩沖對選自磷酸二氫鉀-磷酸、磷酸氫二鉀-磷酸、磷酸二氫鈉-磷酸、磷酸氫二鈉-磷酸和醋酸鈉-醋酸，更優(yōu)選磷酸二氫鉀-磷酸和磷酸二氫鈉-磷酸，最優(yōu)選磷酸二氫鈉-磷酸。
4.如權(quán)利要求1-3中任一權(quán)利要求所述的方法，其中在所述流動相A中所述離子對的濃度為1000ml水中含0.2g-4.0g離子對試劑。
5.如權(quán)利要求1-4中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述反相色譜柱中使用的填充劑為烷基硅烷的化學鍵合硅膠，所述烷基硅烷的化學鍵合硅膠優(yōu)選為十八烷基硅烷鍵合硅膠或辛烷基硅烷鍵合硅膠，更優(yōu)選為十八烷基硅烷鍵合硅膠。
6.如權(quán)利要求1-5中任一權(quán)利要求所述的方法，其中采用A、B兩相進行所述線性梯度洗脫，按體積百分比計算，A%+B%=100%，所述線性梯度洗脫方式為(T8min，A%由60-80%變?yōu)?35~40%，8~25min，A% 保持 35~40%，25.0lmin, A% 由 35~40% 變?yōu)?60~80%，25.01 ~40min，A%保持60~80% ;所述線性梯度洗脫方式優(yōu)選為(T8min，A%由80%變?yōu)?0%，8~25min，A%保持40%, 25.0lmin, A% 由 40% 變?yōu)?80%, 25.01 ~40min，A% 保持 80%。
7.如權(quán)利要求1-6中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述色譜柱的柱溫為20°C-35°C,優(yōu)選為25°C-35°C，更優(yōu)選為30°C。
8.如權(quán)利要求1-7中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述色譜柱的流速為0.6-1.2ml/min,優(yōu)選為 0.8-1.2ml/min,更優(yōu)選為 1.0ml/min。
9.如權(quán)利要求1-8中任一權(quán)利要求所述的方法，其中通過如下方法配制所述含離子對試劑的緩沖液:將0.8g~8.0g緩沖鹽與0.2g~4.0g離子對試劑混合，加水1000ml溶解，并調(diào)節(jié)PH值為2.0-7.5 ;優(yōu)選地，將0.8g~4.0g緩沖鹽與0.6g~2.0g離子對試劑混合，加水1000ml溶解，并調(diào)節(jié)pH值為2.0-6.0 ;更優(yōu)選地，將1.6g緩沖鹽與離子對試劑1.2g混合，加水1000ml溶解，并調(diào)節(jié)pH值為2.5。
10.如權(quán)利要求1-9中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述流動相A的pH值為2.0-6.0，更優(yōu)選為2.0-3.0，最優(yōu)選為2.5。
11.如權(quán)利要求ι-?ο中任一權(quán)利要求所述的方法，其中將羅氟司特及其中間體溶于甲醇或乙腈中以制成待測樣品的混合溶液，所述待測樣品的混合溶液的濃度為每Iml混合溶液中含羅氟司特及其中間體各0.1-1.0mg0
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其中將2μ 1-50 μ I的所述待測樣品的混合溶液注入高效液相色譜儀中。
13.如權(quán)利要求1-12中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述羅氟司特的中間體選自下列物質(zhì)中的一種或多種:3，4- 二羥基苯甲醛、3-羥基-4-( 二氟甲氧基)苯甲醛、3-(環(huán)丙基甲氧基)-4-( 二氟甲氧基)苯甲醛、3-(環(huán)丙基甲氧基)-4-( 二氟甲氧基)苯甲酸、4-氨基-3，5-二氯吡啶。
14.權(quán)利要求1-13中任一權(quán)利要求所述的方法在含有羅氟司特的藥品的質(zhì)量控制和質(zhì)量檢測中的用途。
15.如權(quán)利要求14所述的用途，其中所述含有羅氟司特的藥品為含有羅氟司特的緩釋劑、控釋劑、片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、粉劑、軟膏劑、硬膏劑、栓劑、噴霧劑、氣霧劑、粉霧劑、乳劑、混懸劑、溶液劑、 針劑、膜劑、或注射劑。
【文檔編號】G01N30/06GK103630613SQ201210299424
【公開日】2014年3月12日 申請日期:2012年8月21日 優(yōu)先權(quán)日:2012年8月21日
【發(fā)明者】易崇勤, 朱丹, 鄭少輝 申請人:北大方正集團有限公司, 方正醫(yī)藥研究院有限公司, 北大國際醫(yī)院集團有限公司