專利名稱：不含朊病毒的納米顆粒組合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包括納米顆粒的不含朊病毒的組合物、制造所述組合物的方法和使用所述組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥物。
背景技術(shù)：
朊病毒病，也被稱為傳染性海綿狀腦病(TSE)，是一組致死性、傳播性的神經(jīng)退化性疾病。TSE的具體例子包括影響綿羊和山羊的瘙癢病、牛海綿狀腦病(BSE)、傳染性的水貂腦病、貓海綿狀腦病和慢性消耗性疾病(CWD)。在人類中，TSE疾病本身可以作為庫魯病(kuru)、庫賈氏癥(Creutzfeldt-Jekobdisease) (CJD)、格斯特曼-施特勞斯納 (Gerstmann-Straussler-Scheinker)綜合征(GSS)、致死性失眠癥和庫賈氏癥變種(vCJD) 存在。作為在英國BSE流行病的結(jié)果在人類中出現(xiàn)的vCJD最可能是由于消費(fèi)源于感染BSE 或“瘋牛病”的牛的食品所造成的。(Will等(1996)Lancet 347 =921-925)由于在人類中該經(jīng)口感染的疾病的潛伏期可能超過20年，因此許多年來vCJD的真正發(fā)病率并不明顯。除了攝入感染的牛源產(chǎn)品，輸血和器官移植代表人類之間vCJD傳播的另一種模式(Brown等(1998)Transfusion 38 :810-816 ；Diringer等(1984)Archives of Virology 82 :105-109 ；ManueIidis 等(1978)Nature271 :778-779)。自從 20 世紀(jì) 90 年代中期，提出了主要關(guān)注vCJD可通過輸血或來自感染TSE個(gè)體的其他血制品傳播。這些個(gè)體在vCJD長時(shí)間的臨床前和潛伏期期間可以是無癥狀的，來自這些捐贈人的血液可以能夠傳播該疾病到接受源于該捐贈人的血液或血制品的人。迄今，在英國至少報(bào)道了 4例人類輸血獲得vCJD的病例。接受來自22個(gè)捐贈人全血的64個(gè)人，4個(gè)人發(fā)展為vCJD。在第一個(gè)事件中，接受者在接受來自仍然無癥狀的捐贈人的紅細(xì)胞7年后發(fā)病，而捐贈人直到捐贈3年后才出現(xiàn)vCJD的跡象(Llewely等Q004) Lancet363 :417-421)。在第二個(gè)事件中，捐贈人在捐贈后2年死于vCJD，而接受者在捐贈后 5年死于動脈瘤(不是vCJD) (Peden等(2004) Lancet364 :527-529)。在接受者的尸檢中， PrPsc存在于淋巴結(jié)和脾中，但腦中沒有。在第三個(gè)事件中，接受者從捐贈者輸血后7年半死于vCJD，捐贈者捐贈后20個(gè)月發(fā)展為vCJD(Wroe等Q006) Lancet368 :2061-2067)。第四個(gè)事件出現(xiàn)在接受者從在第三個(gè)病例中的相同捐贈者輸血8年半之后(Health Protection Agency-Health Protection Report, (2007) Vol 1, No 3, 26.可得自http://www. hpa. org. uk/hpr/archives/2007/news2007/news 0307. htm)。所有朊病毒病的共同特征是正常的細(xì)胞朊病毒蛋白(PrPc)轉(zhuǎn)變?yōu)楫惓５耐N型 (PrPsc)。IM3c和IM3sc之間的差異被認(rèn)為是純粹構(gòu)象上的，PrPc主要具有α螺旋結(jié)構(gòu)而PrPsc主要具有通常組裝形成聚集體的β折疊。PrPsc作為模板誘導(dǎo)正常的蛋白質(zhì)分子轉(zhuǎn)化為相同的異常同種型，其接著又使更多的IM3C轉(zhuǎn)化為IM3Sc O^rus iner等(1998)ft~OC. Natl. Acad. Sci. USA 95 :13363-13383)。該自身催化過程導(dǎo)致神經(jīng)毒PrPsc聚集體的指數(shù)形成(Aguzzi等Q007)Nat Rev Mol. Cell Biol. 8 :552-561)。朊病毒蛋白配體及其使用描述在 W004/050851、W006/010915、W004/090102 和 W006/044459 中。研究已經(jīng)顯示，在血液中最早的朊病毒傳染性的出現(xiàn)可能發(fā)生在疾病潛伏期的早期階段期間(Brown 等(2006)Blood infectivity in the transmissible spongiform enc印halopathies (在傳染性海綿狀腦病中的血液傳染性)在TurnerML，ed. 95-118第4 章)。由于在疾病癥狀開始之前可能要很長時(shí)間，隱性感染的個(gè)體可能仍被認(rèn)為是健康的有效血液捐贈者。而且，一些個(gè)體可永久地感染或短時(shí)間感染而不形成疾病。因此，確保血液源產(chǎn)品的血液源不含朊病毒是困難的——如果可能的話。已經(jīng)開發(fā)了基于白蛋白的納米顆粒組合物作為藥物遞送系統(tǒng)，用于輸送基本上不溶于水的藥物。見，例如美國專利號5，916，596 ；6, 506，405 ；6, 749，868和6，537，579以及還在美國專利公開號2005/0004002和2007/00擬838?；诎椎鞍椎募{米顆粒技術(shù)利用蛋白質(zhì)白蛋白獨(dú)特的天然性質(zhì)，以運(yùn)輸和遞送基本上不溶于水的藥物到疾病部位。這些納米顆粒容易并入機(jī)體自身的運(yùn)輸過程并能夠利用腫瘤對白蛋白的吸引，使更高濃度的活性藥物能夠遞送到目標(biāo)部位。另外，基于白蛋白的納米顆粒技術(shù)在給藥過程中通過避免對毒性化學(xué)品比如溶劑的需要提供改善藥物溶解性的能力，從而潛在地通過消除溶劑相關(guān)的副作用改善安全性。本文提到的所有出版物、專利、專利申請和公開的專利申請的公開內(nèi)容在此通過引用以它們的整體并入本文。發(fā)明簡述在一方面，本發(fā)明提供了不含朊病毒的納米顆粒組合物(比如藥學(xué)組合物)。在一些實(shí)施方式中，提供了包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中組合物基本上不含朊病毒蛋白。在一些實(shí)施方式中，組合物是無菌的。在一些實(shí)施方式中，組合物是可無菌過濾的。在一些實(shí)施方式中，組合物進(jìn)一步包括藥學(xué)上可接受的載體。在一些實(shí)施方式中，組合物具有小于大約100fg/ml的朊病毒蛋白。在一些實(shí)施方式中，組合物具有小于大約lOIU-ic/ml的朊病毒傳染性。在一些實(shí)施方式中，組合物具有小于大約lLD5(l/ml的朊病毒傳染性。在一些實(shí)施方式中，基于蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊循環(huán)擴(kuò)增(PMCA)試驗(yàn)，組合物顯示不存在朊病毒蛋白。在一些實(shí)施方式中，基于IPCR試驗(yàn)，組合物顯示不存在朊病毒蛋白。在一些實(shí)施方式中，組合物具有小于大約lOIU-ic/ml的朊病毒傳染性，并基于PMCA試驗(yàn)顯示不存在朊病毒蛋白。在一些實(shí)施方式中，組合物具有小于大約lOIU-ic/ml的朊病毒傳染性， 并基于IPRC試驗(yàn)顯示不存在朊病毒蛋白。本文描述的組合物一般基本上不含ft^sc。在一些實(shí)施方式中，組合物也基本上不含I^rPc。在一些實(shí)施方式中，在組合物中PrPsc和I^rPc的摩爾比不大于大約1 1，比如不大于大約 1 10、1 100、1 1000、1 10000 或 1 100000 的任何一個(gè)。在一些實(shí)施方式中，本文描述的組合物包含一定量(例如痕量)的在朊病毒除去
5過程中引入的物質(zhì)。例如，在一些實(shí)施方式中，提供了包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中組合物基本上不含朊病毒蛋白，和其中組合物包含一定量(例如痕量)的能夠結(jié)合朊病毒蛋白的配體。在一些實(shí)施方式中，提供了包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中組合物基本上不含朊病毒蛋白，和其中組合物包含一定量(例如痕量)的支持材料(比如本文描述的支持材料，包括樹脂)。在一些實(shí)施方式中，提供了包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中組合物基本上不含朊病毒蛋白，和其中組合物包含一定量的PRDT樹脂(例如痕量PRDT樹脂)。在一些實(shí)施方式中，提供了包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑， 其中組合物基本上不含朊病毒蛋白，和其中組合物包含一定量的DVR樹脂(例如痕量DVR 樹脂)。在一些實(shí)施方式中，在組合物中白蛋白穩(wěn)定劑的水平小于其中白蛋白沒有通過朊病毒除去過程被凈化的組合物的白蛋白穩(wěn)定劑水平。這些白蛋白穩(wěn)定劑包括，例如N-乙酰色氨酸酯和辛酸鈉。在一些實(shí)施方式中，組合物與其中白蛋白沒有通過朊病毒除去過程被凈化的組合物生物等價(jià)。在一些實(shí)施方式中，提供了包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中在組合物中的白蛋白通過包含朊病毒除去過程的方法獲得，所述朊病毒除去過程包括使初始白蛋白組合物與能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸。在一些實(shí)施方式中，朊病毒除去過程進(jìn)一步包括從所述白蛋白組合物中除去所述配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，提供了包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中在組合物中的白蛋白通過如此方法獲得，所述方法包括a)使初始白蛋白組合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸以引起在配體和朊病毒蛋白之間形成復(fù)合物，和b)從初始組合物中除去復(fù)合物。在一些實(shí)施方式中，初始白蛋白組合物是血液源產(chǎn)品。在一些實(shí)施方式中，初始白蛋白組合物是從體液(比如血液)中制備的白蛋白組合物。在一些實(shí)施方式中，白蛋白是人血清白蛋白。在一些實(shí)施方式中，配體是肽(比如在表1中提供的任何肽)。在一些實(shí)施方式中，配體是識別朊病毒蛋白的抗體。在一些實(shí)施方式中，配體是化合物(比如基于三嗪的化合物)。在一些實(shí)施方式中，配體包含氨基，比如在氨基樹脂上的氨基。配體可附著于支持材料，包括，例如柱、珠、基體、濾紙和膜。另一方面，提供了產(chǎn)生不含朊病毒的納米顆粒組合物的方法。例如，在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括使包括白蛋白溶液和有機(jī)相的混合物經(jīng)歷高剪切條件， 所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中白蛋白通過包括從初始白蛋白組合物中除去朊病毒蛋白的方法獲得。在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性齊U，所述方法包括使包括白蛋白溶液和有機(jī)相的混合物經(jīng)歷高剪切條件，所述有機(jī)相包括
6分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中白蛋白通過包括使初始白蛋白組合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸的方法獲得。在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性齊U，所述方法包括使包括白蛋白溶液和有機(jī)相的混合物經(jīng)歷高剪切條件，所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中白蛋白通過如此方法獲得， 所述方法包括a)使初始白蛋白組合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸，和b)從初始組合物中除去配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括a)從初始白蛋白組合物中除去朊病毒蛋白；b)使包括溶液和有機(jī)相的混合物經(jīng)歷高剪切條件，所述溶液包括除去朊病毒的白蛋白，所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑。在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括a)使初始白蛋白組合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸以引起在配體和朊病毒蛋白之間形成復(fù)合物，b)從白蛋白初始組合物中除去復(fù)合物；和c)使包括溶液和有機(jī)相的混合物經(jīng)歷高剪切條件，所述溶液包括除去朊病毒的白蛋白，所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑。在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括a)使白蛋白溶液和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸，b)從白蛋白溶液中除去配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)，和c)使包括所述白蛋白溶液和有機(jī)相的混合物經(jīng)歷高剪切條件，所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑。在一些實(shí)施方式中，混合物基本上不含表面活性劑?？稍谛纬杉{米顆粒期間除去朊病毒。例如，在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括a)使包括白蛋白溶液和有機(jī)相的混合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸， 所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑。在一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括b)從混合物中除去配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括C)使混合物經(jīng)歷高剪切條件。在一些實(shí)施方式中，混合物基本上不含表面活性劑。朊病毒蛋白還可在納米顆粒組合物形成之后除去。例如，在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括使包括有機(jī)相和白蛋白溶液的混合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸，所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中混合物在和配體接觸之前已經(jīng)經(jīng)歷高剪切條件。在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括a)使包括有機(jī)相和白蛋白溶液的混合物經(jīng)歷高剪切條件，所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，和b)使混合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸。在一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括c)從混合物中除去配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，混合物基本上不含表面活性劑。在一些實(shí)施方式中，提供了從懷疑包含朊病毒蛋白的包含納米顆粒的組合物中除去朊病毒蛋白的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括a)使納米顆粒組合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸，b)從納米顆粒組合物中除去配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，提供了從懷疑包含異常朊病毒蛋白的白蛋白組合物中除去朊病毒蛋白的方法，包括a)使包括白蛋白的組合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸，b)從白蛋白組合物中除去配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)，其中所述白蛋白組合物用于產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑。在一些實(shí)施方式中，提供了從包含納米顆粒的組合物中除去朊病毒蛋白的方法， 所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括a)確定在組合物中存在或不存在朊病毒蛋白，b)使組合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸，和c)從組合物中除去配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。還提供了在朊病毒除去過程期間制造的組合物。例如，在一些實(shí)施方式中，提供了包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述組合物進(jìn)一步包括能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體。在一些實(shí)施方式中，提供了包括納米顆粒和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體的混合物，所述納米顆粒包含白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述配體附著于支持材料，比如本文描述的一種或多種支持材料。在一些實(shí)施方式中，提供了裝載有包含納米顆粒的組合物的柱，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中柱包含能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體。還提供了通過本文所描述方法制造的組合物。還提供了使用本文描述的不含朊病毒組合物的方法。例如，在一些實(shí)施方式中，提供了施用包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中組合物基本上不含朊病毒蛋白。在一些實(shí)施方式中，提供了治療疾病(比如癌癥)的方法，包括施用包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中組合物基本上不含朊病毒蛋白。在一些實(shí)施方式中，提供了施用包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中在組合物中的白蛋白通過包含朊病毒除去過程的方法獲得，所述朊病毒除去過程包括使初始白蛋白組合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸。在一些實(shí)施方式中，朊病毒除去過程進(jìn)一步包括從所述白蛋白組合物中除去所述配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，提供了治療疾病(比如癌癥)的方法， 包括施用包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性齊U，其中在組合物中的白蛋白通過包含朊病毒除去過程的方法獲得，所述朊病毒除去過程包括使初始白蛋白組合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸。還提供了包括本文描述的不含朊病毒的納米顆粒組合物的試劑盒和劑型(比如小瓶，例如密封小瓶)和可用于本文描述的方法的試劑盒。還提供了進(jìn)行本文描述的一種或多種方法的系統(tǒng)(包括裝置)。本發(fā)明的這些和其他方面和優(yōu)點(diǎn)將從隨后的詳細(xì)描述和所附的權(quán)利要求變得顯而易見。應(yīng)當(dāng)理解，本文描述的各種實(shí)施方式的一種、一些或所有性質(zhì)可結(jié)合，以形成本發(fā)明的其他實(shí)施方式。附圖簡述


圖1提供了在20%或25%白蛋白中用0. 01%和0. 005%瘙癢病倉鼠腦勻漿攻擊的DVR樹脂的蛋白質(zhì)印跡和SDS-PAGE凝膠。AMN31是陽性對照樹脂。觀察到的信號是結(jié)合部分?！?PK”和“+PK”表示不存在或存在蛋白酶K消化。圖2提供了在20%或25%白蛋白中用0. 01%和0. 005%瘙癢病倉鼠腦勻漿攻擊的YVHEA和SYA樹脂的蛋白質(zhì)印跡和SDS-PAGE凝膠。AMN31是陽性對照樹脂。觀察到的信號是結(jié)合部分?！?PK”和“+PK”表示不存在或存在蛋白酶K消化。圖3提供了在20%或25%白蛋白中用0. 01%和0. 005%瘙癢病倉鼠腦勻漿攻擊的D4樹脂的蛋白質(zhì)印跡和SDS-PAGE凝膠。AMN31是陽性對照樹脂。觀察到的信號是結(jié)合部分?！?PK”和“+PK”表示不存在或存在蛋白酶K消化。圖4描繪了對于20%白蛋白通過朊病毒減少樹脂柱(PRDT(病原體除去和診斷技術(shù))柱)除去TSE的工藝流程圖。圖5顯示了在對于20%白蛋白通過PRDT柱除去TSE的研究中來自外加實(shí)驗(yàn)的色譜圖。圖6顯示了離心的20%白蛋白溶液(10倍濃縮或沒有10倍濃縮)的蛋白印跡干擾試驗(yàn)。圖7描繪了對于25%白蛋白通過朊病毒減少樹脂柱(PRDT柱)除去TSE的工藝流程圖。圖8顯示在對于25%白蛋白通過PRDT柱除去TSE的研究中來自外加實(shí)驗(yàn)的色譜圖。圖9顯示了離心的25%白蛋白溶液(10倍濃縮或沒有10倍濃縮)的蛋白印跡干擾試驗(yàn)。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了不含朊病毒的包括納米顆粒的組合物(比如藥學(xué)組合物)，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑；和制造不含朊病毒組合物的方法。一方面，本發(fā)明提供了包括納米顆粒的組合物(比如藥學(xué)組合物)，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中組合物基本上不含朊病毒蛋白。另一方面，提供了制造不含朊病毒的包括納米顆粒的組合物(比如藥學(xué)組合物) 的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑。還提供了在制造過程的方法期間制造的組合。另一方面，提供了使用不含朊病毒的包括納米顆粒的組合物(比如藥學(xué)組合物) 的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑。還提供了包括本文描述的不含朊病毒的納米顆粒組合物的試劑盒和劑型(比如小瓶，例如密封小瓶)和可用于本文描述方法的試劑盒和系統(tǒng)(包括裝置)。本文使用“不含朊病毒”是為了方便以及以便一般性地描述本發(fā)明組合物，并意圖包括本文描述的所有實(shí)施方式。本文提到“大約”數(shù)值或參數(shù)包括(和描述)涉及該數(shù)值或參數(shù)本身的實(shí)施方式。 例如描述提到“大約” X包括“X”的描述。應(yīng)該理解，本文所述的本發(fā)明的方面和實(shí)施方式包括“由各方面和實(shí)施方式組成 (consisting)”和/或“基本上由各方面和實(shí)施方式組成(consisting essentially of)”。
不含朊病毒的納米顆粒組合物本發(fā)明提供了包括納米顆粒的組合物(比如藥學(xué)組合物)，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中組合物基本上不含朊病毒蛋白。在一些實(shí)施方式中，組合物是無菌的。在一些實(shí)施方式中，組合物是可無菌過濾的。在一些實(shí)施方式中， 組合物進(jìn)一步包括藥學(xué)上可接受的載體。在一些實(shí)施方式中，在組合物中通過具有大約IOOfg/ml或更高檢測靈敏度的檢測方法檢測不到朊病毒蛋白，就是說，在使用具有大約100fg/ml或更高檢測靈敏度(例如大約50fg/ml，大約10fg/ml，大約lfg/ml，大約0. If g/ml的檢測靈敏度)的方法的試驗(yàn)中測試結(jié)果是陰性的。在組合物中的朊病毒含量可直接從組合物中確定?？蛇x地，在測定之前可處理組合物，例如濃縮或富集以便促進(jìn)在組合物中朊病毒蛋白的檢測和量化。測定組合物是否基本上不含朊病毒蛋白的一種方法是體內(nèi)傳染性試驗(yàn)。例如，體內(nèi)傳染性可由在小鼠、貂、倉鼠或山羊模型中接種測試組合物證明。傳染性可通過致死劑量(LD50)來測定，所述致死劑量，即，當(dāng)通過給定途徑(比如通過大腦內(nèi)途徑)施用時(shí)誘導(dǎo)50%暴露動物發(fā)病的劑量?？蛇x地，傳染性可通過傳染單位測定，所述傳染單位即，能夠使疾病通過給定途徑從一種實(shí)驗(yàn)動物傳播到另一種的最小傳染劑量。一般地，lOOIU-ic/ ml (通過大腦內(nèi)途徑測定的傳染單位)相當(dāng)于大約10LD50/ml和lpg/ml的朊病毒蛋白。測定組合物中的朊病毒蛋白的另一種方法是免疫聚合酶鏈反應(yīng)(IPCR)，其為如此技術(shù)，憑借該技術(shù)PCR的指數(shù)擴(kuò)增能力與通過ELISA形式的抗體檢測蛋白質(zhì)相結(jié)合，并應(yīng)用到修改的實(shí)時(shí)IPCR方法中以檢測超低水平的朊病毒蛋白。見Barletta等，J. Virology Method, 127 (2005):巧4_104。使用IPCR，重組倉鼠IM3C被檢測一直為lfg/ml并用半定量劑量反應(yīng)檢測蛋白酶K(PK)消化的瘙癢病感染的稀釋到10_8(大約10-100個(gè)傳染單位)的倉鼠腦勻漿。在一些實(shí)施方式中，通過蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊循環(huán)擴(kuò)增(PMCA)測定在組合物中的朊病毒蛋白。該方法已經(jīng)用于在血液中檢測ft^sc。適合檢測組合物中朊病毒蛋白的其他方法包括，但不限于使用時(shí)間分辨離解增強(qiáng)熒光技術(shù)的定量夾心ELISA ；雙色熒光共焦掃描 (dual-color fluorescent confocal scanning)；構(gòu)象依賴性免疫測定方法(CDI)。蛋白質(zhì)印跡、珠印跡(bead blot)、凝膠遷移率變動分析(gel-mobility shift assays)、熒光原位雜交分析(FISH)、放射性標(biāo)記或生物熒光標(biāo)記追蹤、核磁共振、電子順磁共振、停流光譜 (stopped-flow spectroscopy)、柱層析法、毛細(xì)管電泳法或其他方法也可被開發(fā)以檢測組合物中的朊病毒蛋白。在一些實(shí)施方式中，基于用于檢測朊病毒蛋白的一種試驗(yàn)(比如上述試驗(yàn)的任何一種)，組合物基本上不含朊病毒蛋白。在一些實(shí)施方式中，兩種或多種試驗(yàn)被用于分析組合物，且這些不同試驗(yàn)之間的關(guān)系用于測定組合物是否含有朊病毒蛋白。因此，在一些實(shí)施方式中，提供了包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中組合物基本上不含朊病毒蛋白。在一些實(shí)施方式中，組合物具有小于大約100fg/ml的朊病毒傳染性。在一些實(shí)施方式中，組合物具有小于大約lOIU-ic/ml的朊病毒傳染性。在一些實(shí)施方式中，組合物具有小于大約lLD50/ml的朊病毒傳染性。在一些實(shí)施方式中，基于蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊循環(huán)擴(kuò)增(PMCA)試驗(yàn)，組合物顯示不存在朊病毒蛋白。在一些實(shí)施方式中，基于IPCR試驗(yàn)，組合物顯示不存在朊病毒蛋白。在
10一些實(shí)施方式中，組合物具有小于大約lOIU-ic/ml的朊病毒傳染性，并基于PMCA試驗(yàn)，顯示不存在朊病毒蛋白。在一些實(shí)施方式中，組合物具有小于大約lOIU-ic/ml的朊病毒傳染性，并基于IPRC試驗(yàn)顯示不存咋朊病毒蛋白。在一些實(shí)施方式中，基于《就vCJD風(fēng)險(xiǎn)研究血漿源醫(yī)藥產(chǎn)品的制造過程的指南》(Guideline for the Investigation of Manufacturing Processes for Plasma-Derived Medicinal Products with Regard to vCJD Risk)中提
供的標(biāo)準(zhǔn)(CPMP5136/03)-見 http://www. emea. europa. eu/pdfs/human/bwp/513603en.
Pdf，其內(nèi)容以其整體并入本文，組合物不含朊病毒蛋白。本文描述的組合物一般基本上不含ft^sc。在一些實(shí)施方式中，組合物也基本上不含I^rPc。在一些實(shí)施方式中，在組合物中PrPsc和I^rPc的摩爾比不大于大約1 1，比如不大于大約 1 10、1 100、1 1000、1 10000 或 1 100000 的任何一個(gè)。在一些實(shí)施方式中，組合物基本上不含來自人類、牛、綿羊和嚙齒類(比如倉鼠、 小鼠和貂)的朊病毒蛋白。在一些實(shí)施方式中，組合物基本上不含H型朊病毒蛋白、L型朊病毒蛋白或二者。在一些實(shí)施方式中，組合物基本上不含細(xì)胞結(jié)合的朊病毒蛋白、游離的朊病毒蛋白或二者。本使用的術(shù)語“PrPc”指在哺乳動物體內(nèi)自然表達(dá)的天然朊病毒蛋白分子。本文所用的術(shù)語“ft^sc”指被認(rèn)為具有傳染性的構(gòu)象改變形式的分子。本文所用的“白蛋白”指天然存在的白蛋白，不包含重組產(chǎn)生的白蛋白。天然發(fā)生的白蛋白相對于重組白蛋白是有優(yōu)勢的，因?yàn)樗求w內(nèi)白蛋白受體的天然配體。在本文描述的方法中使用的白蛋白一般保留白蛋白的翻譯后修飾并因此降低了免疫原性的風(fēng)險(xiǎn)。在一些實(shí)施方式中，白蛋白從血液源的組合物中獲得。本文所用的“血液源的組合物”包括全血、紅細(xì)胞濃縮物、血漿、血清、血小板富集和血小板匱乏的餾分、血小板濃縮物、白細(xì)胞、血漿沉淀物、血漿分餾沉淀物和上清液、血漿分餾中間物、源于血液的各種其他物質(zhì)等。在一些實(shí)施方式中，白蛋白來自人。在一些實(shí)施方式中，白蛋白來自動物比如牛、綿羊和嚙齒類 (比如小鼠、倉鼠和貂)。在一些實(shí)施方式中，白蛋白從一群至少一些已經(jīng)被朊病毒感染的個(gè)體中(比如人)獲得。在一些實(shí)施方式中，白蛋白從一群至少一些被懷疑已經(jīng)被朊病毒感染的個(gè)體中(比如人)獲得。在一些實(shí)施方式中，白蛋白從大批量群的個(gè)體中獲得。在一些實(shí)施方式中，本文描述的組合物包含在朊病毒除去過程期間引入的痕量物質(zhì)。例如，在一些實(shí)施方式中，提供了包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中組合物基本上不含朊病毒蛋白，和其中組合物包含痕量的能夠結(jié)合朊病毒蛋白的配體。在一些實(shí)施方式中，提供了包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中組合物基本上不含朊病毒蛋白，和其中組合物包含痕量的支持材料(比如來自本文描述的支持材料的材料，包括樹脂)。在一些實(shí)施方式中，提供了包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中組合物基本上不含朊病毒蛋白，和其中組合物包含痕量的能夠結(jié)合朊病毒蛋白的配體和痕量的支持材料(比如來自本文描述的支持材料的材料，包括樹脂)?！昂哿俊敝咐缭谏锢枚群?或生物等效方面不影響組合物性質(zhì)的可檢測的量。在一些實(shí)施方式中，組合物與其中白蛋白沒有通過朊病毒除去過程被凈化的組合物生物等價(jià)?？山⑸锏刃?，例如通過在Cmax和AUC 二者的0. 80和1. 25之間的90% 置信區(qū)間或在AUC的0. 80和1. 25之間的90%置信區(qū)間和在Cmax的0. 70和1. 43之間的
90%置信區(qū)間。在一些實(shí)施方式中，在組合物中白蛋白穩(wěn)定劑的水平小于其中白蛋白沒有通過朊病毒除去過程被凈化的組合物的白蛋白穩(wěn)定劑水平。這些白蛋白穩(wěn)定劑包括，例如N-乙酰色氨酸酯和辛酸鈉。本文描述的組合物一般包括納米顆粒，所述納米顆粒包括基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑和白蛋白。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物包含納米顆粒，所述納米顆粒包括基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑和白蛋白。在一些實(shí)施方式中，本文描述的組合物中的納米顆粒具有不大于大約lOOOnm，包括例如不大于大約900、800、700、600、500、400、300、200、 190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、90、80、70 或 60nm 的任何一個(gè)的平均直徑。 在一些實(shí)施方式中，在組合物中所有納米顆粒的至少大約50% (例如至少大約60%、70%、 80%、90%、95%或99%的任何一個(gè))具有不大于大約lOOOnm，包括例如不大于大約900、 800、700、600、500、400、300、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、90、80、70 或60nm的任何一個(gè)的直徑。在一些實(shí)施方式中，在組合物中所有納米顆粒的至少大約50% (例如至少60 %、70 %、80 %、90 %、95 %或99 %的至少一個(gè))落在大約20到大約200nm，包括例如大約30到大約180nm的任何一個(gè)，和大約40到大約150、大約50到大約120和大約 60到大約IOOnm的任何一個(gè)的范圍內(nèi)。在一些實(shí)施方式中，組合物的納米顆粒部分中至少大約5% (包括例如至少大約 10%、15%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或 90%的任何一個(gè))的白蛋白是交聯(lián)的(例如通過一個(gè)或多個(gè)二硫鍵交聯(lián))。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒包括用白蛋白(例如人血清白蛋白)包被的基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑(比如紫杉醇)。在一些實(shí)施方式中，組合物包括納米顆粒和非納米顆粒形式二者的基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中在組合物中至少大約50%、60%、 70%、80%、90%、95%或99%的任何一個(gè)的基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑為納米顆粒形式。在一些實(shí)施方式中，按重量計(jì)，在納米顆粒中基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑構(gòu)成納米顆粒的大于大約50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%的任何一個(gè)。在一些實(shí)施方式中， 納米顆粒具有非聚合基體。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒包括基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑的核心，其基本上不含聚合材料(比如聚合基體)。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物基本上不含(比如不含)表面活性劑或有機(jī)溶劑(比如Cremophor (克列莫佛) ，TweenSO或用于施用基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑的其他有機(jī)溶劑)。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物包含小于大約20 %、15 %、10 %、 7.5%,5%,2. 5%、1%或更少的任何一個(gè)的有機(jī)溶劑。從包含白蛋白的組合物中除去朊病毒使施用更大量的白蛋白成為可能，而無需擔(dān)心朊病毒。本發(fā)明因此還考慮包含納米顆粒的組合物(比如藥學(xué)組合物)，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中白蛋白與基本上不溶于水的藥劑的重量比是大約20 1或更高，比如大約30 1或更高、大約40 1或更高、或大約50 1或更高的任何一個(gè)。示例性比率包括，例如大約20 1到大約40 1、大約40 1到大約 60 1、大約60 1到大約80 1或大約90 1到大約100 1。在一些實(shí)施方式中，
12在納米顆粒組合物中白蛋白與基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑的重量比是大約18 1或更低，比如大約15 1或更低，例如大約10 1或更低。在一些實(shí)施方式中，在組合物中白蛋白與基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑的重量比落在大約1 1到大約18 1、大約2 1 到大約15 1、大約3 1到大約13 1、大約4 1到大約12 1、大約5 1到大約 10 1的任何一個(gè)的范圍內(nèi)。在一些實(shí)施方式中，組合物的納米顆粒部分中白蛋白與基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑的重量比是大約1 2、1 3、1 4、1 5、1 6、1 7、1 8、 1 9、1 IOU IlU 12、1 13、1 14、1 15 或更低的任何一個(gè)。在一些實(shí)施方式中，顆粒組合物包含一種或多種上面的特征。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物是Abraxane 。包括其他基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑(比如多西紫杉醇和沃塔紫杉醇(ortataxel))的納米顆粒組合物也可包括一種或多種上面的特征。在一些實(shí)施方式中，提供了包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中在組合物中的白蛋白通過包含朊病毒除去過程的方法獲得，所述朊病毒除去過程包括使初始白蛋白組合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸。在一些實(shí)施方式中，朊病毒除去過程進(jìn)一步包括從所述白蛋白組合物中除去所述配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，提供了包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中在組合物中的白蛋白通過如此方法獲得，所述方法包括a)使初始包括白蛋白的組合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸以引起在配體和朊病毒蛋白之間形成復(fù)合物，和b)從初始組合物中除去復(fù)合物。下面更加詳細(xì)地描述包括白蛋白和基本上不溶于水的藥物的納米顆粒。下面更加詳細(xì)地描述從組合物(比如初始白蛋白組合物、納米顆粒組合物——所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑、或在制造納米顆粒過程中形成的中間組合物)中除去朊病毒的方法。本發(fā)明包括由本文描述的任何方法產(chǎn)生的組合物。與其中白蛋白沒有通過朊病毒除去過程凈化的組合物相比，本文描述的組合物一般已經(jīng)降低了朊病毒蛋白水平。例如在一些實(shí)施方式中，與其中白蛋白沒有通過朊病毒除去過程凈化的組合物相比，所述組合物具有小于大約50%、40%、30%、20%、10%、5%、 4%,3%,2%,1%或更少的任何一個(gè)的朊病毒蛋白。在一些實(shí)施方式中，與其中白蛋白沒有通過朊病毒除去過程凈化的組合物相比，所述組合物具有小大約1、2、2. 5、3、3. 5、4、4. 5、5、 6、7或8個(gè)對數(shù)的任何一個(gè)的朊病毒蛋白。在一些實(shí)施方式中，與其中白蛋白沒有通過朊病毒除去過程凈化的組合物相比，所述組合物具有小大約1、2、2. 5、3、3. 5、4、4. 5、5、6、7或 8個(gè)對數(shù)的任何一個(gè)的傳染性。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物與其中白蛋白沒有通過朊病毒除去過程凈化的組合物生物等價(jià)。雖然本申請關(guān)注白蛋白，但是應(yīng)當(dāng)理解也考慮在血液或血漿中通常發(fā)現(xiàn)的其他蛋白質(zhì)，其包括，但不限于，免疫球蛋白(包括IgA和IgG)、脂蛋白、載脂蛋白B、α酸糖蛋白、 β-2-巨球蛋白、甲狀腺球蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖連蛋白、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X 等。本文提供的所有關(guān)于白蛋白的相關(guān)描述，就它們用于形成納米顆粒的方面，同樣適合這些其他蛋白質(zhì)。制造不含朊病毒的納米顆粒組合物的方法
另一方面，提供了產(chǎn)生不含朊病毒的納米顆粒組合物的方法。例如，在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括使包括白蛋白溶液和有機(jī)相的混合物經(jīng)歷高剪切條件， 所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中白蛋白通過包括從初始白蛋白組合物中除去朊病毒蛋白的方法獲得。在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性齊U，所述方法包括使包括白蛋白溶液和有機(jī)相的混合物經(jīng)歷高剪切條件，所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中白蛋白通過包括使初始白蛋白組合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸的方法獲得。在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性齊IJ，所述方法包括使包括白蛋白溶液和有機(jī)相的混合物經(jīng)歷高剪切條件，所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中白蛋白通過如此方法獲得， 所述方法包括a)使初始白蛋白組合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸，和b)從初始組合物中除去配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括a)從初始白蛋白組合物中除去朊病毒蛋白；b)使包括溶液和有機(jī)相的混合物經(jīng)歷高剪切條件，所述溶液包括除去朊病毒的白蛋白，所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑。在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括a)使初始白蛋白組合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸以引起在配體和朊病毒蛋白之間形成復(fù)合物，和b)從白蛋白初始組合物除去復(fù)合物；c)使包括溶液和有機(jī)相的混合物經(jīng)歷高剪切條件，所述溶液包括除去朊病毒的白蛋白，所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑。在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括a)使白蛋白溶液和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸，b)從白蛋白溶液中除去配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)，c)使包括白蛋白溶液和有機(jī)相的混合物經(jīng)歷高剪切條件，所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑。在一些實(shí)施方式中，混合物基本上不含表面活性劑?？稍谛纬杉{米顆粒期間除去朊病毒。例如在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括a)使包括白蛋白溶液和有機(jī)相的混合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸， 所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑。在一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括b)從混合物中除去配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括C)使混合物經(jīng)歷高剪切條件。在一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括從混合物中除去有機(jī)溶劑。在一些實(shí)施方式中，混合物基本上不含表面活性劑。在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括a)使包括白蛋白溶液和有機(jī)相的混合物經(jīng)歷高剪切條件，所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑；和b)使混合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸。在一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括c)從混合物中除去配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括從混合物中除去有機(jī)溶劑。在一些實(shí)施方式中，混合物基本上不含表面活性劑。在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括使包括有機(jī)相和白蛋白溶液的混合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸，所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，其中混合物在和配體接觸之前已經(jīng)經(jīng)歷高剪切條件。在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括a)使包括有機(jī)相和白蛋白溶液的混合物經(jīng)歷高剪切條件，所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，和b)使混合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸。在一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括c)從混合物中除去配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括d)從混合物中除去水相。在一些實(shí)施方式中，混合物基本上不含表面活性劑。在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括a)使包括有機(jī)相和白蛋白溶液的混合物經(jīng)歷高剪切條件，所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，b)除去所述有機(jī)溶劑，和c)使除去有機(jī)溶劑的混合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸。在一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括d)從混合物中除去配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括d)從混合物中除去水相。在一些實(shí)施方式中，混合物基本上不含表面活性劑。在一些實(shí)施方式中，提供了產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括a)使包括有機(jī)相和白蛋白溶液的混合物經(jīng)歷高剪切條件，所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，b)除去所述有機(jī)溶劑，c)添加白蛋白到混合物，和d)使混合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸。在一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括e)從混合物中除去配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括f)從混合物中除去水相。在一些實(shí)施方式中，混合物基本上不含表面活性劑。本文描述的方法一般包括使包括有機(jī)相和白蛋白溶液的混合物經(jīng)歷高剪切條件， 所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑。在一些實(shí)施方式中， 高剪切條件是高壓勻漿作用，例如在大約3000到大約30，OOOpsi，包括例如大約6000到大約 25，OOOpsi、大約 9000 到大約 18，OOOpsi、大約 10，000 到大約 25，OOOpsi、大約 15，000 到大約25，OOOpsi范圍內(nèi)的壓力下。在一些實(shí)施方式中，有機(jī)溶劑是基本上不能和水混合的有機(jī)溶劑(比如氯仿或二氯甲烷)和可溶于水的有機(jī)溶劑(比如可溶于水的醇，包括乙醇和叔丁醇)的混合物。在一些實(shí)施方式中，基本上不能和水混合的有機(jī)溶劑和可溶于水的有機(jī)溶劑的比例(ν/ν)(例如氯仿/乙醇或氯仿/ 丁醇的比例)大約為1 9、1 8、1 7、 1 6、1 5、1 4、1 3、1 2、1 1、2 1、3 1、4 1、5 1、6 1、7 1、8 1 或 9 1 的任何一個(gè)，或比例為大約 3 7、5 7、4 6、6 4、5 5、6 5、8 5、9 5、 9.5 5、5 3、7 3、6 4 或 9. 5 0. 5 的任何一個(gè)。在一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括從混合物中除去有機(jī)相(比如在減壓情況下通過蒸發(fā)除去)。在一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括從混合物中除去水相。在一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括無菌過濾通過上述方法形成的納米顆粒。在一些實(shí)施方式中，提供了從懷疑包含朊病毒蛋白的包含納米顆粒的組合物中除去朊病毒蛋白的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括a)使納米顆粒組合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸，b)從納米顆粒組合物中除去配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，提供了從懷疑包含異常朊病毒蛋白的白蛋白組合物中除去朊病毒蛋白的方法，包括a)使包括白蛋白的組合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸，b)從白蛋白組合物中除去配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)，其中所述白蛋白組合物用于產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑。在一些實(shí)施方式中，提供了從包含納米顆粒的組合物中除去朊病毒蛋白的方法， 所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括a)確定在組合物中存在或不存在朊病毒蛋白，b)使組合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸，和c)從組合物中除去配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，本文描述方法的一個(gè)或多個(gè)步驟可以批式進(jìn)行。在一些實(shí)施方式中，本文描述方法的一個(gè)或多個(gè)步驟可以以連續(xù)方式進(jìn)行。形成納米顆粒之前除去朊病毒在包含白蛋白的納米顆粒組合物被制造之前，可從初始白蛋白組合物中除去朊病毒蛋白。一般地，方法包括使初始白蛋白組合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸，并從白蛋白組合物中除去配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。使用相同的或不同的配體，該過程可重復(fù)一次或多次。在朊病毒除去過程期間，還可同時(shí)使用兩種或多種配體。在一些實(shí)施方式中，初始白蛋白組合物是血液源的組合物。例如在一些實(shí)施方式中，初始白蛋白組合物是全血、紅細(xì)胞濃縮物、血漿、血清、血小板富集和血小板匱乏餾分、 血小板濃縮物、白細(xì)胞、血漿沉淀物、血漿分餾沉淀物和上清液、或血漿分餾中間物。在一些實(shí)施方式中，初始白蛋白組合物從人中獲得。在一些實(shí)施方式中，初始白蛋白組合物來自動物比如牛、綿羊和嚙齒類(比如小鼠、倉鼠和貂)。在一些實(shí)施方式中，初始白蛋白組合物從一群至少一些已經(jīng)被朊病毒感染的個(gè)體中(比如人)獲得。在一些實(shí)施方式中，初始白蛋白組合物從一群至少一些被懷疑已經(jīng)被朊病毒感染的個(gè)體中(比如人)獲得。在一些實(shí)施方式中，初始白蛋白組合物是從體液(比如血液)中通過本領(lǐng)域常見的任何各種方法和/或通過示差沉淀制備的白蛋白組合物，所述各種方法包括離子交換層析、親和層析、凝膠滲透層析和/或疏水層析。在一些實(shí)施方式中，初始組合物是從血液 (比如人血液)中純化的白蛋白組合物。在一些實(shí)施方式中，初始白蛋白組合物是從血清 (比如人血清)中純化的白蛋白組合物。在一些實(shí)施方式中，初始白蛋白組合物具有大約 100IU-ic/ml、90IU-ic/ml、50IU-ic/ml 或 10IU_ic/ml 的朊病毒傳染性。在一些實(shí)施方式中，初始白蛋白組合物中白蛋白的濃度為大約(w/v)，包括例如大約2^^3^^4%、5%、 6%、7%、8%、9%、10%、15%、20%、25% 或 30%。 在朊病毒除去過程期間，使配體和初始白蛋白組合物接觸并允許和在初始白蛋白組合物中的朊病毒蛋白結(jié)合。基于配體的性質(zhì)和它的對朊病毒蛋白的結(jié)合特異性，可確定并優(yōu)化適合結(jié)合的條件以促進(jìn)配體和朊病毒蛋白的結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，在大約0°C到大約39°C，包括例如大約20°C到大約25°C的溫度下進(jìn)行結(jié)合。在大約4到大約10、包括例
16如大約5到大約9、大約6到大約8、大約6. 8到大約7. 5、大約6. 9到大約7. 4或大約7的 PH下進(jìn)行結(jié)合。任選地，封閉劑(blocking agent)可用于減少與配體的非特異性結(jié)合。接觸步驟之后，從剩余的組合物中除去配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。本文所用的術(shù)語“除去”指從包含白蛋白的組合物中分離配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。根據(jù)配體和用于促進(jìn)分離的支持材料(如有的話)的性質(zhì)，可以以多種方式進(jìn)行分離。例如配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)可通過層析法(色譜法)分離出，比如，但不限于，薄層層析、柱層析和分批層析； 固體支撐和膜分離；反應(yīng)器分離；磁分離；免疫分離；膠體分離；沉降作用；沉淀作用；或離心。在一些實(shí)施方式中，配體可附著于支持材料比如珠或膜，其又允許接觸初始白蛋白組合物。在足夠引起形成朊病毒-配體復(fù)合物的條件下，固定配體的支持物被允許接觸初始白蛋白組合物。固相接著從組合物中分開，借此從樣品中除去和配體結(jié)合的朊病毒蛋白。例如，在一種示例性實(shí)施方式中，配體被固定在柱中，比如色譜柱中，樣品(比如初始白蛋白組合物)接著由于重力或在壓力下，比如在高壓液體色譜柱中經(jīng)過柱。樣品中的朊病毒蛋白將與固定在柱上的配體結(jié)合，可收集流過的樣品。使用相同的或不同的配體，該方法可重復(fù)數(shù)次以獲得期望的結(jié)果?？烧{(diào)整柱中樣品(比如初始白蛋白組合物)的流速，以使配體和樣品中朊病毒蛋白的結(jié)合最大化。在一些實(shí)施方式中，以大約0. Iml每分鐘到大約5. Oml每分鐘、大約0. Iml 每分鐘到大約2. 5ml每分鐘、大約0. Iml每分鐘到大約0. 25ml每分鐘、大約0. 25每分鐘到大約0. 5ml每分鐘、大約0. 5ml每分鐘到大約1. Oml每分鐘、大約1. Oml每分鐘到大約1. 5ml 每分鐘、大約1. 5ml每分鐘到大約2. Oml每分鐘、大約2. Oml每分鐘到大約2. 5ml每分鐘、大約2. 5ml每分鐘到大約3. Oml每分鐘、大約3. Oml每分鐘到大約3. 5ml每分鐘、大約3. 5ml 每分鐘到大約4. Oml每分鐘、大約4. Oml每分鐘到大約4. 5ml每分鐘或大約4. 5ml每分鐘到大約5. Oml每分鐘，包括例如大約0. Iml每分鐘、0. 25ml每分鐘、0. 5ml每分鐘、1. Oml每分鐘、1. 5ml每分鐘、1. 7ml每分鐘、1. 8ml每分鐘、1. 9ml每分鐘、2. Oml每分鐘、2. Iml每分鐘、2. 3ml每分鐘、2. 5ml每分鐘、2. 7ml每分鐘、3. Oml每分鐘、3. 5ml每分鐘、4. Oml每分鐘、 4. 5ml每分鐘或5. Oml每分鐘的流速進(jìn)行結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，流速為至少大約IOml 每分鐘，比如至少大約20ml每分鐘、30ml每分鐘、40ml每分鐘、50ml每分鐘的任何一個(gè)。在結(jié)合過程期間還可調(diào)整總流過體積或總流過時(shí)間以使配體和樣品(比如初始白蛋白組合物)中的朊病毒蛋白結(jié)合最大化。在一些實(shí)施方式中，總流過體積是柱體積的大約1倍到大約1000倍，包括例如柱體積的大約2倍到大約10倍、柱體積的大約10倍到大約20倍、柱體積的大約20倍到大約30倍、柱體積的大約30倍到大約40倍、柱體積的大約40倍到大約50倍、柱體積的大約50倍到大約1000倍、柱體積的大約50倍到大約500 倍、柱體積的大約100倍到大約600倍或柱體積的大約200倍到大約800倍。在一些實(shí)施方式中，總流過體積是柱體積的大約100倍。在其他實(shí)施方式中，總流過體積是柱體積的大約 500倍。在一些實(shí)施方式中，總流過時(shí)間是大約1小時(shí)到大約30小時(shí)，包括例如大約2小時(shí)到大約25小時(shí)、大約3小時(shí)到大約20小時(shí)，或大約3小時(shí)到大約17小時(shí)。在一些實(shí)施方式中，總流過時(shí)間是大約3小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、8小時(shí)、10小時(shí)、12小時(shí)、14小時(shí)、16小時(shí)、 17小時(shí)、18小時(shí)、19小時(shí)或20小時(shí)的任何一個(gè)。在一些實(shí)施方式中，總流過時(shí)間大于大約 24小時(shí)。在一些實(shí)施方式中，總流過時(shí)間小于大約8小時(shí)，包括例如7、6、5、4、3、2、1或0. 5小時(shí)的任何一個(gè)?？蛇x地，在足夠引起形成朊病毒-配體復(fù)合物的條件下，配體可首先和初始白蛋白組合物接觸。接著隨后通過使用柱，比如基于親和層析法除去朊病毒-配體復(fù)合物。為了促進(jìn)分離，配體可與結(jié)合伴侶綴合，以便配體/朊病毒復(fù)合物可通過結(jié)合伴侶，例如由使用包含識別結(jié)合伴侶的分子的親和柱除去。除了分批層析或柱層析，也考慮使用結(jié)合朊病毒蛋白的配體的許多其他構(gòu)造、修改和變化。這些變化和修改包括，但不限于分批過程、連續(xù)過程、移動床層析過程(moving bed chromatography processes)；低壓、中壓或高壓過程；或小規(guī)模、中規(guī)?；虼笠?guī)模過程。在一些實(shí)施方式中，配體在膜、纖維珠上，被浸漬入非絲織網(wǎng)中，或包含在過濾器罩 (filter housing)中的涂布纖維上。在一些實(shí)施方式中，除去步驟不顯著導(dǎo)致產(chǎn)率損失和/或白蛋白性質(zhì)和/或穩(wěn)定性的改變。在一些實(shí)施方式中，在其初始生物狀態(tài)的白蛋白的回收率基本上保持至少超過 50 %，包括例如80 %、90 %或更高水平。在一些實(shí)施方式中，從朊病毒除去過程中白蛋白的回收率高于大約80^^90^^95%或99%的任何一個(gè)。在一些實(shí)施方式中，在朊病毒除去步驟之前，調(diào)整或控制初始白蛋白組合物中白蛋白的濃度，以在該過程期間，使白蛋白的非特異性結(jié)合和損失最小化。例如白蛋白的濃度可在大約到大約50%、大約5%到大約 25%、大約5%到大約30%、大約5%到大約40%、大約5%到大約10%、大約10%到大約 15%、大約15%到大約20%、大約20%到大約25%、大約25%到大約30%等的范圍內(nèi)，包括例如大約5%、10%、15%、20%、25%或30%的白蛋白?？煞治鏊冒椎鞍捉M合物以測定朊病毒除去過程的清除率。還可分析具有結(jié)合的朊病毒蛋白的配體(直接或洗脫后)以測定清除率?；陔貌《镜鞍椎臏p少或傳染性的降低，評估朊病毒的除去。在一些實(shí)施方式中，至少大約50%，包括例如至少大約60%、70%、80%、90%、95%、99%或100%的朊病毒蛋白被從初始白蛋白組合物中除去。在一些實(shí)施方式中，除去后白蛋白組合物的傳染性比初始白蛋白組合物的傳染性至少小大約10 X、20 X、30 X、40 X、50 X、80 X、100 X、200 X、 500X、1000X、IO4X、IO5X、IO6X、IO7X、IO8X、IO9X。在一些實(shí)施方式中，連續(xù)傳染性用于測定朊病毒除去過程的清除率。制備樣品的連續(xù)稀釋物，且檢查稀釋物的傳染活性，例如在實(shí)驗(yàn)動物中。其中一半動物被感染的稀釋是感染效價(jià)。例如如果需要5倍稀釋，那么樣品可定義為具有5對數(shù)的傳染性。通過比較初始白蛋白組合物的對數(shù)傳染性和除去后白蛋白組合物的對數(shù)傳染性，技術(shù)人員可測定朊病毒除去過程的清除率。在一些實(shí)施方式中，朊病毒除去方法產(chǎn)生1、1. 1、1. 2,1. 3,1. 4,1. 5、 1. 6,1. 7,1. 8,1. 9、2、3或4、5、6、7、8、9或10對數(shù)的任何一個(gè)的傳染性降低。在一些實(shí)施方式中，基于通過本文描述用于朊病毒除去方法的下列步驟利用傳染性材料的外加實(shí)驗(yàn)(spiking experiments)，測定朊病毒除去過程的清除率。適合的外加劑包括，但不限于，腦勻漿、微粒體、細(xì)胞膜穴樣結(jié)構(gòu)域(caveolae-like domains)、純化的 PrPsc和朊病毒原纖維。在一些實(shí)施方式中，外加劑是清潔劑溶解的(比如肌氨酰溶解的)。 在一些實(shí)施方式中，在組合物中外加比例在大約0. 001%到大約5%、大約0. 001%到大約0. 25%、大約0. 001%到大約0. 1%、大約0. 001%到大約0. 005%、大約0. 005%到大約 0. 075%、大約0. 075%到大約0. 01%、大約0. 01%到大約0. 1%、大約0. 到大約0. 5%,
18大約0.5%到大約0.75%、大約0. 75 %到大約1 %、大約1 %到大約2 %、大約2 %到大約3 % 或大約3%到大約5%的范圍內(nèi)，包括例如大約0. 001%,0. 005%,0. 075%,0. 01%,0. 1%, 0. 5%,0. 75%、1%、2%、3%或 5%o在一些實(shí)施方式中，減少系數(shù)(reduction factor, RF)用于測定朊病毒除去過程的清除率?？墒褂孟铝泄接?jì)算RF RF = (V1X T1) / (V2 X T2)或Log10 [RF] = [Log10 (V1) +Log10 (T1) ] - [Log10 (V2) +Log10 (T2)]。其中V1和T1分別是初始白蛋白組合物的體積和效價(jià)(titre)，和V2和T2是除去后白蛋白組合物的體積和效價(jià)。最終計(jì)算之后減少系數(shù)可四舍五入到1位小數(shù)。在一些實(shí)施方式中，減少系數(shù)至少大約 1. 0,1. 5,2. 0,2. 5,3. 0,3. 5,4. 0,4. 5,5. 0,5. 5,6. 0,6. 5,7. 0、 7. 5或8. Ologltl傳染性的朊病毒蛋白被從初始白蛋白組合物中除去。例如在外加20%白蛋白組合物的0. 5%肌氨酰溶解的部分中朊病毒蛋白可被除去大于或等于2. 51og10的減少系數(shù)。作為另一個(gè)實(shí)例，在外加25%白蛋白組合物的0. 5%肌氨酰溶解的部分中朊病毒蛋白可被除去大于或等于2. Olog10的減少系數(shù)?？赏ㄟ^標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)印跡分析評估朊病毒的除去。例如，結(jié)合后配體可首先用消化所有I^rPc但不消化PrPsc的蛋白酶K處理。消化物接著在SDS凝膠上電泳并轉(zhuǎn)移印跡到硝化纖維或PVDF膜的片上。分離的I^rPsc帶接著使用3F4或6H4可視化。3F4與來自人、 倉鼠和貓科的氨基酸殘基109-112PrP反應(yīng)。在一種示例性實(shí)施方式中，以0. 6ug/ml的濃度進(jìn)行溫育最少一個(gè)小時(shí)，其后，過量的抗體被沖洗掉并將膜與兔抗小鼠辣根過氧化物酶綴合物(1 1000稀釋)溫育最少一個(gè)小時(shí)。用TTBS大量沖洗之后，使用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光， 使膜顯影。在一些實(shí)施方式中，根據(jù)《就vCJD風(fēng)險(xiǎn)研究血漿源醫(yī)藥產(chǎn)品的制造過程的指南》 中提供的標(biāo)準(zhǔn)(CPMP5136/03)，評估朊病毒蛋白的除去。能夠和朊病毒蛋白和支持材料結(jié)合的配體本文使用的“配體”指和朊病毒蛋白或肽結(jié)合的分子。“能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體”指在適合的條件下和朊病毒蛋白特異性結(jié)合的配體。在一些實(shí)施方式中，配體和人朊病毒蛋白特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，配體和倉鼠朊病毒蛋白特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，配體和小鼠蛋白特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，配體和來自多物種的朊病毒蛋白結(jié)合。例如在一些實(shí)施方式中，配體和人朊病毒蛋白、倉鼠朊病毒蛋白和小鼠朊病毒蛋白
纟口口。在一些實(shí)施方式中，配體利用高結(jié)合親和性和朊病毒蛋白(比如人朊病毒蛋白、 倉鼠朊病毒蛋白和/或小鼠朊病毒蛋白)結(jié)合。例如，在一些實(shí)施方式中，配體具有大于大約 107、108、109、1010 或 IO11 的任何一個(gè)的結(jié)合系數(shù)(Kassociation) 0已經(jīng)識別許多可結(jié)合朊病毒蛋白的配體，并可因此用在本發(fā)明的方法中。見，例如 W004/090102、W004/050851、W006/010915 和 W006/044459。這些包括，例如特異性識別朊病毒蛋白的肽、化合物和抗體。配體可被用于從組合物中除去所有形式的朊病毒蛋白或可被選擇性地選擇以檢測或除去單一形式的朊病毒蛋白。在一些實(shí)施方式中，用于除去朊病毒的配體是肽，比如在PCT公開申請?zhí)?W004/05051中描述的肽。例如在一些實(shí)施方式中，配體是具有在表1中顯示的SEQ ID NOs 1-232任何一個(gè)的氨基酸的肽。在一些實(shí)施方式中，配體是三肽，比如具有SEQ ID NO :48、 102、105、108、109、110、111、143、148、193、194、195、202、203、204 或 210 任何一個(gè)的氨基酸序列的肽。在一些實(shí)施方式中，配體是具有6個(gè)氨基酸的肽，比如具有SEQ ID NO 152, 153、180、181、182、183、185、186、187、188、189 或 190 任何一個(gè)的氨基酸序列的六聚體 (6-mers)。在一些實(shí)施方式中，配體具有SEQ ID NO :150或151的氨基酸序列。表1-結(jié)合朊病毒序列的氨基酸序列
KIHKFLA (SEQ ID FLLIDTA (SEQ ID YEDQWQA (SEQ ID DNPIDA (SEQ ID
NO: 1)__NO: 41)__NO: 81)__NO: 121)_
GTHDFQA (SEQ ID GFLFKFA (SEQ ID EWADDNA (SEQ IDFNEHEA (SEQ ID
NO: 2)__NO: 42)__NO: 82)__NO: 122)_
KFGSTHA (SEQ ID PWTIYIA (SEQ ID YEIDYGA~(SEQ~ID WGADGA (SEQ ID
NO: 3)__NO: 43)__NO: 83)__NO: 123)_
FVNEIEA (SEQ ID WH (SEQ ID NO: EFGYFDA (SEQID VIYSHA (SEQ ID
NO: 4)__44)__NO: 84)__NO: 124)_
GLHFKSA (SEQ ID WW (SEQ ID NO: WGDEQDA (SEQ ID HlLEEA (SEQ~ID-
NO: 5)__45)__NO: 85)__NO: 125)_
GRVLHHA (SEQ ID LW (SEQ ID NO: 46)HEEDWAA (SEQ ID PHENFA (SEQ ID NO: 6)__ NO: 86)_ NO: 126)_
20
權(quán)利要求
1.包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性齊U，其中所述組合物基本上不含朊病毒蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述組合物具有小于大約100fg/ml的朊病毒傳染性。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物具有小于大約lOIU-ic/ ml的朊病毒傳染性。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的組合物，其中基于蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊循環(huán)擴(kuò)增(PMCA) 試驗(yàn)或基于IPCR試驗(yàn)，所述組合物顯示不存在朊病毒蛋白。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的組合物，進(jìn)一步包括能夠結(jié)合朊病毒蛋白的痕量配體。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的組合物，進(jìn)一步包括痕量支持材料。
7.包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性齊U，其中在所述組合物中的白蛋白通過包括朊病毒除去過程的方法獲得，所述朊病毒除去過程包括使初始白蛋白組合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的組合物，其中所述朊病毒除去過程進(jìn)一步包括從所述白蛋白和組合物中除去所述配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其中所述配體是肽。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其中所述配體是基于三嗪的化合物。
11.產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括a)從初始白蛋白組合物中除去朊病毒蛋白；b)使包括溶液和有機(jī)相的混合物經(jīng)歷高剪切條件，所述溶液包括除去朊病毒的白蛋白，所述有機(jī)相包括分散在有機(jī)溶劑中的所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中步驟a)包括1)使初始白蛋白溶液和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中步驟a)進(jìn)一步包括 從所述白蛋白溶液中除去所述配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。
14.根據(jù)權(quán)利要求11-13任一項(xiàng)所述的方法，進(jìn)一步包括從所述混合物中除去所述有機(jī)溶劑。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述除去有機(jī)溶劑是通過蒸發(fā)作用。
16.根據(jù)權(quán)利要求12-15任一項(xiàng)所述的方法，其中所述配體是肽。
17.根據(jù)權(quán)利要求12-15任一項(xiàng)所述的方法，其中所述配體是基于三嗪的化合物。
18.根據(jù)權(quán)利要求11-17任一項(xiàng)所述的方法，其中所述初始白蛋白組合物是血液源產(chǎn)
19.產(chǎn)生包含納米顆粒的組合物的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括a)使包括有機(jī)相和白蛋白溶液的混合物經(jīng)歷高剪切條件， 所述有機(jī)相包括所述基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，和b)從所述混合物中除去朊病毒蛋白。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中步驟b)包括1)使所述混合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中步驟b)進(jìn)一步包括 從所述混合物中除去所述配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。
22.根據(jù)權(quán)利要求20或21所述的方法，其中所述配體是肽。
23.根據(jù)權(quán)利要求20或21所述的方法，其中所述配體是基于三嗪的化合物。
24.通過權(quán)利要求11-23任一項(xiàng)的方法生產(chǎn)的組合物。
25.從懷疑包含朊病毒蛋白的包含納米顆粒的組合物中除去朊病毒蛋白的方法，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性劑，所述方法包括a)使所述組合物和能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體接觸，b)從所述組合物中除去所述配體和與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述配體是肽。
27.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述配體是基于三嗪的化合物。
28.包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥學(xué)活性齊U，所述組合物進(jìn)一步包括能夠與朊病毒蛋白結(jié)合的配體。
29.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的組合物，其中所述配體是肽。
30.根據(jù)權(quán)利要求觀所述組合物，其中所述配體是基于三嗪的化合物。
31.根據(jù)權(quán)利要求1-10和M任一項(xiàng)所述的組合物用于治療疾病的用途。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的用途，其中所述疾病是癌癥。
全文摘要
公開了不含朊病毒的組合物，其包含納米顆粒，所述納米顆粒包括白蛋白和基本上不溶于水的藥物。還提供了制造不含朊病毒的組合物的方法和從該納米顆粒組合物中除去朊病毒蛋白的方法。還提供了使用該組合物的方法，以及可用于進(jìn)行該方法的試劑盒。
文檔編號G01N33/53GK102460167SQ201080026604
公開日2012年5月16日 申請日期2010年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月15日
發(fā)明者N·P·德塞, P·孫雄, V·裴科夫 申請人:阿布拉科斯生物科學(xué)有限公司