專利名稱：一種呼吸道合胞病毒抗原膠體金檢測試紙條的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物檢測領(lǐng)域，具體涉及一種呼吸道合胞病毒(RSV)抗原檢測試紙條及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
70年代國內(nèi)外對RSV的診斷主要是病毒分離，但由于許多細胞對RSV不敏感，操作繁瑣復(fù)雜，時間長，因此病毒分離難以做為RSV感染的有效方法；快速檢測中，應(yīng)用多克隆抗血清IFA(間接熒光技術(shù))法檢測患者鼻咽部脫落細胞內(nèi)的呼吸道合胞病毒抗原，該方法靈敏度好，但存在非特異染色，使該方法在檢測的特異性上受到很大影響。80年代單克隆抗體問世，Bell和Kim將單克隆抗體用于IFA法檢測RSV抗原獲得滿意效果，使快速診斷的敏感性、特異性大大提高。以后還有人將IFA、EIA、ELISA三種方法對RSV進行檢測，并對實驗結(jié)果進行比較，結(jié)果表明呼吸道合胞病毒單克隆抗體用于IFA法最優(yōu)，其特異性＞95％。隨著免疫技術(shù)的不斷發(fā)展，先后出現(xiàn)了APAAP橋聯(lián)酶標法、核酸擴增法(PCR)但均存在需要昂貴的儀器、操作復(fù)雜、時間長、需專業(yè)人員等問題。

發(fā)明內(nèi)容
(一)、要解決的技術(shù)問題本發(fā)明的目的是提供一種方便、快捷檢測呼吸道合胞病毒抗原的試紙條。
本發(fā)明另一個目的是提供所述試紙條在檢測呼吸道合胞病毒抗原中的應(yīng)用。
(二)、技術(shù)方案本發(fā)明為一種檢測試紙條，它包含(1)包被抗呼吸道合胞病毒單克隆抗體和抗鼠IgG二個條帶的硝酸纖維膜；
(2)含有膠體金標記呼吸道合胞病毒單克隆抗體的玻璃纖維膜。
本發(fā)明所述的試紙條中，呼吸道合胞病毒抗體為抗呼吸道合胞病毒單克隆抗體或多克隆抗體。
本發(fā)明所述的試紙條，它還包含(1)反應(yīng)支持物；(2)吸水墊；(3)金標抗體保護膜。
本發(fā)明試紙條，其中反應(yīng)支持物選用PVC板。
本發(fā)明所述的試紙條，其中吸水墊選用濾油紙。
本發(fā)明所述的試紙條，其中金標抗體保護膜同時具有吸水功能，選用聚脂膜、玻璃纖維或濾紙纖維。
本發(fā)明所述試紙條在檢測呼吸道合胞病毒抗原中的應(yīng)用(見圖2)。留取鼻咽部分泌物，放入裝有細胞裂解液的小瓶內(nèi)，將試紙條“4”處插入瓶內(nèi)(直至觀察完結(jié)果后方可取出試紙條)，樣品中的液體吸起上行，10-15分鐘判讀結(jié)果如含有RSV抗原，則與試紙條上膠體金標記的呼吸道合胞病毒單克隆抗體形成相應(yīng)的復(fù)合物，上行與包被在硝酸纖維膜上的呼吸道合胞病毒單克隆抗體或多克隆抗體結(jié)合，形成紅色線條，即在“T”處形成紅色條帶。
無論是否含有相對應(yīng)的抗原，膠體金標記單克隆抗體繼續(xù)向上爬行與包被在膜上的抗鼠IgG形成紅色沉淀線，即在“C”處形成紅色條帶。此線是質(zhì)控線，如膠體金失效，此線就不會出現(xiàn)，說明試紙條失效。
陽性結(jié)果會出現(xiàn)2條紅色沉淀線，陰性結(jié)果出現(xiàn)1條紅色沉淀線，如不出現(xiàn)線條說明試紙條失效。
本發(fā)明的技術(shù)方案是采用純化的呼吸道合胞病毒單克隆抗體(或多克隆抗體)和抗鼠IgG分別固相于硝酸纖維膜上(NC膜)，結(jié)合膠體金標記的呼吸道合胞病毒單克隆抗體，應(yīng)用膜層析雙抗體夾心法的原理檢測鼻咽分泌物中的呼吸道合胞病毒。
(三)、有益效果用試紙條檢測呼吸道合胞病毒抗原，方便、快速、簡捷，不需特殊儀器設(shè)備、專業(yè)培訓，結(jié)果清晰易辨；操作簡單，易于推廣，適合基層大批量檢測，適合流行病學調(diào)查，對RSV引起的嬰幼兒肺炎和急性下呼吸道感染診斷起到輔助檢測作用。


圖1A本發(fā)明試紙條的正面示意圖；B本發(fā)明試紙條的側(cè)面示意圖；1吸水墊；2硝酸纖維膜(T包被呼吸道合胞病毒單克隆抗體或多克隆抗體的條帶；C包被抗鼠IgG的質(zhì)控條帶)；3含有膠體金標記呼吸道合胞病毒單克隆抗體的玻璃纖維膜；4金標抗體保護膜；5反應(yīng)支持物。
圖2檢測結(jié)果示意圖；從左至右依次為T、C兩條線顯色為陽性；C一條線顯色為陰性；T、C兩條線均未顯色為無效。
具體實施例方式
以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
實施例1 呼吸道合胞病毒抗原檢測試紙條(參見圖1)反應(yīng)支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗鼠IgG、抗呼吸道合胞病毒抗體；含有0.4cm×0.4cm膠體金標記的呼吸道合胞病毒單克隆抗體玻璃纖維膜；金標抗體保護膜為2.7cm×0.4cm的聚脂膜；即形成了呼吸道合胞病毒抗原檢測試紙條。
實施例2 呼吸道合胞病毒抗原檢測試紙條(參見圖1)反應(yīng)支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗鼠IgG、呼吸道合胞病毒抗體；含有0.4cm×0.4cm膠體金標記的呼吸道合胞病毒單克隆抗體玻璃纖維膜；金標抗體保護膜為2.7cm×0.4cm的玻璃纖維；即形成了呼吸道合胞病毒抗原檢測試紙條。
實施例3 呼吸道合胞病毒抗原檢測試紙條(參見圖1)反應(yīng)支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗鼠IgG、呼吸道合胞病毒抗體；含有0.4cm×0.4cm膠體金標記的呼吸道合胞病毒單克隆抗體玻璃纖維膜；金標抗體保護膜為2.7cm×0.4cm的濾紙纖維；即形成了呼吸道合胞病毒抗原檢測試紙條。
實施例4 檢測方法(參見圖2)留取鼻咽部分泌物，放入裝有細胞裂解液的小瓶內(nèi)，將實施例1試紙條“4”處插入瓶內(nèi)(直至觀察完結(jié)果后方可取出試紙條)，樣品中的液體吸起上行，15分鐘判讀結(jié)果如含有呼吸道合胞病毒抗原，則與試紙條上膠體金標記的呼吸道合胞病毒單克隆抗體形成相應(yīng)的復(fù)合物，上行與包被在硝酸纖維膜上的呼吸道合胞病毒抗體結(jié)合，形成紅色線條，即在“T”處形成紅色條帶。
無論是否含有相對應(yīng)的抗原，膠體金標記單克隆抗體繼續(xù)向上爬行與包被在膜上的抗鼠IgG形成紅色沉淀線，即在“C”處形成紅色條帶。此線是質(zhì)控線，如膠體金失效，此線就不會出現(xiàn)，說明試紙條失效。
陽性結(jié)果會出現(xiàn)2條紅色沉淀線，陰性結(jié)果出現(xiàn)1條紅色沉淀線，如不出現(xiàn)線條說明試紙條失效。
實驗例1 臨床檢測結(jié)果經(jīng)檢測203例患有肺炎或毛細支氣管炎的嬰幼兒患者鼻咽分泌物標本，呼吸道合胞病毒感染，出現(xiàn)兩條帶92例，占45.3％。與目前常規(guī)應(yīng)用的間接熒光法(T1)相比較，試紙條法(T2)靈敏度98.9％，特異度100％。
間接熒光法(T1)與試紙條法(T2)對比實驗統(tǒng)計表

權(quán)利要求
1.一種檢測試紙條，其特征在于，它包含(1)包被抗呼吸道合胞病毒抗體和抗鼠IgG二個條帶的硝酸纖維膜；(2)含有膠體金標記呼吸道合胞病毒單克隆抗體的玻璃纖維膜。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于抗呼吸道合胞病毒抗體為抗呼吸道合胞病毒單克隆抗體或多克隆抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，它還包含(1)反應(yīng)支持物；(2)吸水墊；(3)金標抗體保護膜。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試紙條，其中反應(yīng)支持物選用PVC板。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試紙條，其中吸水墊選用濾油紙。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試紙條，其中金標抗體保護膜選用聚脂膜、玻璃纖維或濾紙纖維。
7.權(quán)利要求1-6之任一所述試紙條在檢測呼吸道合胞病毒抗原中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種檢測試紙條，它包含(1)包被抗呼吸道合胞病毒抗體和抗鼠IgG二個條帶的硝酸纖維膜；(2)含有膠體金標記呼吸道合胞病毒單克隆抗體的玻璃纖維膜，應(yīng)用膜層析雙抗體夾心法的原理檢測鼻咽分泌物中的呼吸道合胞病毒。應(yīng)用本發(fā)明試紙條檢測，減少了許多繁瑣的程序，特異準確，且方便快捷，10－15分鐘判讀結(jié)果，不需特殊儀器也不需專業(yè)培訓，適合醫(yī)院等基層單位，適合大規(guī)模的流行病學調(diào)查及應(yīng)對突發(fā)事件。
文檔編號G01N33/569GK1963517SQ20051008685
公開日2007年5月16日 申請日期2005年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月10日
發(fā)明者劉明 申請人:北京莊笛浩禾生物醫(yī)學科技有限公司