專利名稱：一種炭疽芽孢桿菌莢膜抗原膠體金檢測試紙條的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物檢測領域，具體涉及一種炭疽芽孢桿菌莢膜抗原膠體金檢測試紙條及其應用。
背景技術：
炭疽(anthrax)是由炭疽芽孢桿菌(Bacillus anthrax)引起的一種人畜共患急性傳染病。牧民、農民、皮毛和屠宰工作者易受感染。
80年代以來，在炭疽實驗診斷技術方面有了長足的發(fā)展，常用的抗體檢測方法有ELISA法、酶標-SPA法、PCR法、熒光免疫法等。
但這些檢測技術與實際需求仍有不少的差距，主要表現在需要特殊的儀器設備，并且要求專業(yè)技術人員在專業(yè)的實驗室進行檢測，操作復雜，耗時長，不適宜于現場即時檢測。

發(fā)明內容
(一)要解決的技術問題本發(fā)明的目的是提供一種方便、快捷的檢測炭疽芽孢桿菌莢膜抗原的試紙條，發(fā)明人通過在硝酸纖維膜(NC膜)上同時包被抗莢膜抗原抗體(單克隆抗體或多克隆抗體)和抗鼠IgG二條帶，并應用結合膠體金標記的抗莢膜抗原單克隆抗體，實現了用試紙條快速檢測炭疽芽孢桿菌莢膜抗原的目的，完成了本發(fā)明?？朔爽F有技術操作復雜、耗時長、需要特殊儀器和專業(yè)操作人員的不足。
(二)技術方案本發(fā)明提供了一種檢測試紙條，其特征在于，它包含(1)包被炭疽莢膜抗體(單克隆抗體或多克隆抗體)和質控抗鼠IgG二條帶的硝酸纖維膜；(2)含有膠體金標記炭疽莢膜單克隆抗體的玻璃纖維膜。
優(yōu)選的本發(fā)明所述試紙條，它還包含
(1)反應支持物；(2)吸水墊；(3)金標抗體保護膜。
其中反應支持物優(yōu)選PVC板；吸水墊優(yōu)選濾油紙；金標抗體保護膜，同時具有吸水功能，優(yōu)選用聚脂膜、玻璃纖維或濾紙纖維。
本發(fā)明還公開了所述試紙條在檢測炭疽芽孢桿菌莢膜抗原中的應用。
本發(fā)明的檢測樣本可以是皮膚損害的分泌物、痰、嘔吐物、排泄物、血液、腦脊液。
本發(fā)明的技術方案是采用純化的炭疽芽孢桿菌莢膜抗體(單抗或多抗)和抗鼠IgG分別固相于硝酸纖維膜上(NC膜)，結合膠體金標記的莢膜單抗，應用膜層析雙抗體夾心法的原理檢測樣本中炭疽芽孢桿菌。
(三)有益效果本發(fā)明的有益效果是用試紙條檢測炭疽芽孢桿菌莢膜抗原，可以提供炭疽感染的直接證據，對炭疽的診斷起到輔助檢測作用。該方法簡便、快捷、準確，不需特殊儀器設備，不需專業(yè)培訓，檢測結果清晰易辨，操作簡單，易于推廣，適合醫(yī)院等基層單位的即時檢測和大規(guī)模的流行病學調查。


圖1A本發(fā)明試紙條的正面示意圖；B本發(fā)明試紙條的側面示意圖；1吸水墊；2硝酸纖維膜(T包被炭疽芽孢桿菌莢膜抗體條帶；C包被抗鼠IgG的質控條帶)；3含有膠體金標記的莢膜抗原單抗的玻璃纖維膜；4金標抗體保護膜；5反應支持物。
圖2檢測結果示意圖；從左至右依次為T、C兩條線顯色為陽性；C一條線顯色為陰性；T、C兩條線未顯色為無效。
具體實施例方式
實施例1炭疽芽孢桿菌膠體金檢測試紙條(參見圖1)反應支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；2cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗鼠IgG、炭疽芽孢桿菌莢膜抗體；含有0.4cm×0.4cm膠體金標記的莢膜抗原單抗的玻璃纖維膜；金標抗體保護膜為2.5cm×0.4cm的聚脂膜；即形成了炭疽芽孢桿菌莢膜抗原膠體金檢測試紙條。
實施例2炭疽芽孢桿菌膠體金檢測試紙條(參見圖1)反應支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；2cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗鼠IgG、炭疽芽孢桿菌莢膜抗體；含有0.4cm×0.4cm膠體金標記的莢膜抗原單抗的玻璃纖維膜；金標抗體保護膜為2.5cm×0.4cm的玻璃纖維；即形成了炭疽芽孢桿菌莢膜抗原膠體金檢測試紙條。
實施例3炭疽芽孢桿菌膠體金檢測試紙條(參見圖1)反應支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；2cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗鼠IgG、炭疽芽孢桿菌莢膜抗體；含有0.4cm×0.4cm膠體金標記的莢膜抗原單抗的玻璃纖維膜；金標抗體保護膜為2.5cm×0.4cm的濾紙纖維；即形成了炭疽芽孢桿菌莢膜抗原膠體金檢測試紙條。
實施例4檢測方法(參見圖2)按照炭疽診斷標準國家標準(GB17015-1997)實驗室檢測的有關規(guī)定，留取皮膚損害的分泌物，放入裝有細胞裂解液的小瓶內，將實施例1試紙條“4”處插入瓶內(直至觀察完結果后方可取出試紙條)，樣品中的液體吸起上行，10-15分鐘判讀結果如樣本中含有炭疽芽孢桿菌莢膜抗原，則與試紙條上膠體金標記的莢膜抗原單克隆抗體形成相應的復合物，上行與包被在硝酸纖維膜上的莢膜抗體結合，聚集而成紅色線條，即在“T”處形成紅色條帶。
無論是否含有相對應的抗原，膠體金標記的單克隆抗體繼續(xù)向上爬行與包被在膜上的抗鼠IgG形成紅色沉淀線，即在“C”處形成紅色質控條帶。此線不出現，說明試紙條失效。
實驗例臨床檢測結果經檢測70例疑似病人的皮膚損害的分泌物，與目前應用ELISA法(T1)相比較，16例T、C兩條帶顯色，具體結果見下表。
ELISA法(T1)與試紙條法(T2)對比實驗統(tǒng)計表

權利要求
1.一種檢測試紙條，其特征在于，它包含(1)包被炭疽莢膜抗體和質控抗鼠IgG二條帶的硝酸纖維膜；(2)含有膠體金標記炭疽莢膜單克隆抗體的玻璃纖維膜。
2.根據權利要求1所述試紙條，包被在硝酸纖維膜上的炭疽莢膜抗體為單克隆抗體或多克隆抗體。
3.根據權利要求1所述試紙條，它還包含(1)反應支持物；(2)吸水墊；(3)金標抗體保護膜。
4.根據權利要求3所述試紙條，其中反應支持物選用PVC板。
5.根據權利要求3所述試紙條，其中吸水墊選用濾油紙。
6.根據權利要求3所述試紙條，其中金標抗體保護膜選用聚脂膜、玻璃纖維或濾紙纖維。
7.權利要求1-6之任一所述試紙條在檢測炭疽芽孢桿菌莢膜抗原中的應用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種能檢測炭疽芽孢桿菌莢膜抗原的膠體金檢測試紙條。它是在硝酸纖維膜(NC膜)上包被炭疽芽孢桿菌莢膜抗原抗體(單抗或多抗)及抗鼠IgG，結合膠體金標記的莢膜抗原單克隆抗體，應用膜層析雙抗體夾心法制成。本發(fā)明用于檢測標本中炭疽芽孢桿菌莢膜抗原，對炭疽感染的診斷可起到輔助作用。應用本發(fā)明試紙條檢測，減少了繁瑣的程序，方便快捷，10－15分鐘判讀結果，不需特殊儀器，也不需專業(yè)培訓，適合醫(yī)院等基層單位的即時檢測和大規(guī)模的流行病學調查。
文檔編號G01N33/558GK1963514SQ20051008685
公開日2007年5月16日 申請日期2005年11月10日 優(yōu)先權日2005年11月10日
發(fā)明者劉明 申請人:北京莊笛浩禾生物醫(yī)學科技有限公司