專利名稱：一種羥基檸檬酸的含量測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及羥基檸檬酸的含量測定方法，尤其涉及印度果皮精提取物及其制品中羥基檸檬酸的含量測定方法。
背景技術(shù)：
印度果皮精提取物(Garcinia Extracts)是用原產(chǎn)于印度和東南亞的Garcinia Cambogia果實(在印度還被稱為Goraka、Tamarind、Malabar等等)的干燥果皮，經(jīng)加熱提取羥基檸檬酸(Hydroxycitric Acid，HCA)，濃縮精制而成。根據(jù)國外的許多研究表明羥基檸檬酸對ATP檸檬酸裂合酶有阻滯作用。羥基檸檬酸對ATP檸檬酸裂合酶的親合力，比檸檬酸強100倍。羥基檸檬酸在達到一定濃度時，可進入肝細胞內(nèi)，阻礙ATP檸檬酸裂合酶的活性，從而抑制脂肪的合成，達到減肥的功效。印度果皮精提取物中主要含有羥基檸檬酸和其它有機酸，其中羥基檸檬酸以游離酸和內(nèi)酯體兩種形式存在，這兩種存在形式均有減肥功效，因此，印度果皮精提取物常應用于減肥食品中，如減肥茶、減肥飲料等等。
有文獻報道用高效液相色譜法直接測定印度果皮精提取物中羥基檸檬酸及其內(nèi)酯體，但該法測定減肥咖啡中羥基檸檬酸含量時，干擾峰較多，干擾峰和羥基檸檬酸及其內(nèi)酯體的分離度很差，不能進行精確的含量測定；另外，羥基檸檬酸及其內(nèi)酯體均為有效成分，而羥基檸檬酸內(nèi)酯體對照品又不易購得，分別測定羥基檸檬酸及其內(nèi)酯體難度也較大，有必要探索出雜質(zhì)干擾少而更加精確的羥基檸檬酸含量測定方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種雜質(zhì)干擾少、精確度高的羥基檸檬酸含量測定方法。該方法可精確測定印度果皮精提取物及其制品中羥基檸檬酸的含量。
本發(fā)明方法可以通過下列措施來實現(xiàn)待測樣品先用強堿溶液加熱處理，然后再用強酸溶液對其進行中和，用溶劑定容至一定體積，制成供試品溶液；羥基檸檬酸或羥基檸檬酸鹽用溶劑配制成對照品溶液；分別吸取對照品溶液和供試品溶液，注入高效液相色譜儀，測定，即得。
上述待測樣品為印度果皮精提取物，或者為以印度果皮精提取物為活性成分制成的各種制品如減肥咖啡、減肥茶、減肥飲料等。
上述用強堿溶液加熱處理中的強堿為無機堿，最佳為氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液；上述用強酸溶液對其進行中和中的強酸為無機酸，最佳為硫酸或高氯酸溶液。上述溶劑為水或流動相溶液。
上述高效液相色譜測定的條件十八烷基鍵合硅膠為固定相，含水量90％以上的酸性溶液為流動相。所述含水量90％以上的酸性溶液為水或者水-甲醇或者水-乙腈，用酸如甲酸、冰乙酸、磷酸、鹽酸、硫酸、高氯酸等將其調(diào)節(jié)至pH 1～6。所述含水量90％以上的酸性溶液最佳為水，或者水-甲醇＝99∶1，或者水-乙腈＝99∶1，用酸如甲酸、冰乙酸、磷酸、鹽酸、硫酸、高氯酸等將其調(diào)節(jié)至pH 1～6。，上述檢測波長為200～220nm，最佳為210nm。
本發(fā)明先采用強堿對印度果皮精提取物及其制品進行堿水解，使羥基檸檬酸中的游離酸和內(nèi)酯體兩種形式均轉(zhuǎn)化成游離酸的形式，且其它干擾峰在用強堿溶液加熱處理時遭到破壞，從而消除了干擾峰的干擾，然后用強酸中和過剩的堿液，用高效液相色儀進行測定。本發(fā)明方法不僅準確度高、專屬性強，能很好地將羥基檸檬酸與其它雜質(zhì)峰分開，從而能準確地測定羥基檸檬酸的含量，而且適用性廣，可廣泛應用于印度果皮精提取物及其制品的含量測定。


圖1為本發(fā)明方法之印度果皮精提取物在210nm處含量測定色譜2為本發(fā)明方法之羥基檸檬酸對照品在210nm處含量測定色譜3為對比例之印度果皮精提取物在210nm處含量測定色譜4為對比例之羥基檸檬酸對照品在210nm處含量測定色譜5為本發(fā)明方法之減肥咖啡在200nm處含量測定色譜6為本發(fā)明方法之減肥咖啡在220nm處含量測定色譜7為本發(fā)明方法之減肥咖啡在210nm處含量測定色譜圖具體實施方式
下面列舉實施例進一步詳細說明本發(fā)明，該實施例僅用于說明本發(fā)明而對本發(fā)明并沒有限制。
實施例一色譜條件與系統(tǒng)適應性 色譜柱用Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6×250mm，5μm)；流動相用6mmol/l的硫酸水溶液；流速為0.8ml/min；紫外檢測波長為210nm；柱溫為30℃；理論塔板數(shù)按羥基檸檬酸峰計算，應不低于2000。
對照品溶液的制備 精密稱取羥基檸檬酸對照品12mg，置25ml量瓶中，加適量流動相使溶解，再加流動相至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 精密稱取印度果皮精提取物100mg(北京萊福賽茵生物工程技術(shù)有限公司提供)，置100ml圓底燒瓶中，加入0.1mol/l的氫氧化鉀50ml，沸水浴加熱30分鐘，冷卻至室溫，加入1mol/l的高氯酸溶液5ml，搖勻，將此液體轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，圓底燒瓶用水洗滌3次，每次10ml，洗液并入量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液10μl，供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，測定。
結(jié)果 該印度果皮精提取物的羥基檸檬酸含量為55.74％。供試品色譜圖見圖1，對照品色譜圖見圖2。
對比例色譜條件與系統(tǒng)適應性 色譜柱用Agilent Zorbax SB-Aq柱(4.6×250mm，5μm)；流動相用6mmol/l的硫酸水溶液；流速為0.5ml/min；紫外檢測波長為210nm；柱溫為30℃；理論塔板數(shù)按羥基檸檬酸峰計算，應不低于2000。
對照品溶液的制備 精密稱取羥基檸檬酸對照品15mg，置25ml量瓶中，加適量流動相使溶解，再加流動相至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 精密稱取印度果皮精提取物100mg(北京萊福賽茵生物工程技術(shù)有限公司提供)，置100ml圓底燒瓶中，加流動相適量，超聲使溶散，再用流動相定容至刻度，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液10μl，供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，測定。
結(jié)果 由圖3和圖4可見，在此條件下，供試品色譜圖雜質(zhì)峰較多，且嚴重干擾羥基檸檬酸的測定，不能滿足定量分析的要求。
實施例二色譜條件與系統(tǒng)適應性 色譜柱用Agilent Zorbax SB-Aq柱(4.6×250mm，5μm)；流動相用6mmol/l的磷酸水溶液；流速為0.8ml/min；紫外檢測波長為220nm；柱溫為30℃；理論塔板數(shù)按羥基檸檬酸峰計算，應不低于2000。
對照品溶液的制備 精密稱取羥基檸檬酸鈣對照品15mg，置25ml量瓶中，加適量流動相使溶解，再加流動相至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 精密稱取印度果皮精提取物100mg(北京萊福賽茵生物工程技術(shù)有限公司提供)，置100ml圓底燒瓶中，加入0.1mol/l的氫氧化鈉50ml，沸水浴加熱30分鐘，冷卻至室溫，加入1mol/l的硫酸溶液5ml，搖勻，將此液體轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，圓底燒瓶用水洗滌3次，每次10ml，洗液并入量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液10ul，供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，測定(以1mg羥基檸檬酸鈣相當于0.7847mg羥基檸檬酸計算)。
結(jié)果 該印度果皮精提取物的羥基檸檬酸含量為55.24％。
實施例三色譜條件與系統(tǒng)適應性 色譜柱用Agilent Zorbax SB-Aq柱(4.6×250mm，5μm)；流動相用7mmol/l的磷酸水溶液；流速為0.8ml/min；紫外檢測波長為200nm；柱溫為30℃；理論塔板數(shù)按羥基檸檬酸峰計算，應不低于2000。
對照品溶液的制備 精密稱取羥基檸檬酸鈣對照品15mg，置25ml量瓶中，加適量流動相使溶解，再加流動相至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 精密稱取減肥咖啡300mg(天津金士力保健品有限公司提供，由速溶咖啡、印度果皮精提取物等組成)，置100ml圓底燒瓶中，加入0.1mol/l的氫氧化鈉50ml，沸水浴加熱30分鐘，冷卻至室溫，加入1mol/l的硫酸溶液5ml，搖勻，將此液體轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，圓底燒瓶用水洗滌3次，每次10ml，洗液并入量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液10μl，供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，測定(以1mg羥基檸檬酸鈣相當于0.7847mg羥基檸檬酸計算)。
結(jié)果 該減肥咖啡的羥基檸檬酸含量為16.51％。供試品色譜圖見圖5。
實施例四色譜條件與系統(tǒng)適應性 色譜柱用Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6×250mm，5μm)；流動相用6mmol/l的硫酸水溶液；流速為0.8ml/min；紫外檢測波長為220nm；柱溫為30℃；理論塔板數(shù)按羥基檸檬酸峰計算，應不低于2000。
對照品溶液的制備 精密稱取羥基檸檬酸對照品12mg，置25ml量瓶中，加適量流動相使溶解，再加流動相至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 精密稱取減肥咖啡300mg(天津金士力保健品有限公司提供，由速溶咖啡、印度果皮精提取物等組成)，置100ml圓底燒瓶中，加入0.1mol/l的氫氧化鉀50ml，沸水浴加熱30分鐘，冷卻至室溫，加入1mol/l的高氯酸溶液5ml，搖勻，將此液體轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，圓底燒瓶用水洗滌3次，每次10ml，洗液并入量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液10μl，供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，測定。
結(jié)果 該減肥咖啡的羥基檸檬酸含量為15.75％。供試品色譜圖見圖6。
實施例五色譜條件與系統(tǒng)適應性 色譜柱用Waters μ-BondapackTM C18柱(4.6×250mm，5μm)；流動相用6mmol/l的高氯酸水溶液；流速為0.8ml/min；紫外檢測波長為210nm；柱溫為30℃；理論塔板數(shù)按羥基檸檬酸峰計算，應不低于2000。
對照品溶液的制備 精密稱取羥基檸檬酸鈣對照品15mg，置25ml量瓶中，加適量流動相使溶解，再加流動相至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 精密稱取減肥咖啡150mg(天津金士力保健品有限公司提供，由速溶咖啡、印度果皮精提取物等組成)，置100ml圓底燒瓶中，加入0.1mol/l的氫氧化鈉50ml，沸水浴加熱30分鐘，冷卻至室溫，加入1mol/l的高氯酸溶液5ml，搖勻，將此液體轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，圓底燒瓶用水洗滌3次，每次10ml，洗液并入量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液10μl，供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，測定(以1mg羥基檸檬酸鈣相當于0.7847mg羥基檸檬酸計算)。
結(jié)果 該減肥咖啡的羥基檸檬酸含量為14.73％。供試品色譜圖見圖7。
權(quán)利要求
1.一種羥基檸檬酸的含量測定方法，包括將待測樣品制成供試品溶液，羥基檸檬酸或羥基檸檬酸鹽配制成對照品溶液，然后分別吸取對照品溶液和供試品溶液，注入高效液相色譜儀，測定，其特征在于所述待測樣品制成供試品溶液為待測樣品先用強堿溶液加熱處理，然后再用強酸溶液對其進行中和，用溶劑定容至一定體積，制成供試品溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于，所述強堿為無機堿，所述強酸為無機酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于，所述強堿為氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液，所述強酸為硫酸或高氯酸溶液，所述溶劑為水或流動相溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于，所述高效液相色譜測定的條件為十八烷基鍵合硅膠為固定相，含水量90％以上的酸性溶液為流動相，檢測波長為200～220nm。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的含量測定方法，其特征在于，所述流動相為水，或者水-甲醇，或者水-乙腈，再用酸將其調(diào)節(jié)至pH 1～6。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的含量測定方法，其特征在于，所述流動相為水，或者水-甲醇＝99∶1，或者水-乙腈＝99∶1，用甲酸、冰乙酸、磷酸、鹽酸、硫酸或高氯酸將其調(diào)節(jié)至pH1～6。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的含量測定方法，其特征在于，所述檢測波長為210nm。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于，待測樣品先用氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液加熱處理，然后再用硫酸或高氯酸溶液對其進行中和，用水定容至一定體積，制成供試品溶液；羥基檸檬酸或羥基檸檬酸鹽用流動相配制成對照品溶液；高效液相色譜測定的條件為十八烷基鍵合硅膠為固定相，6～7mmol/l的磷酸水溶液或者硫酸水溶液或者高氯酸水溶液為流動相，檢測波長為210nm。
9.根據(jù)權(quán)利要求1～8任一權(quán)利要求所述的含量測定方法，其特征在于，所述待測樣品為印度果皮精提取物。
10.根據(jù)權(quán)利要求1～8任一權(quán)利要求所述的含量測定方法，其特征在于，所述待測樣品為以印度果皮精提取物為活性成分制成的各種制品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種羥基檸檬酸的含量測定方法，它是將待測樣品先用強堿溶液加熱處理，然后再用強酸溶液對其進行中和，用溶劑定容至一定體積，制成供試品溶液；羥基檸檬酸或羥基檸檬酸鹽配制成對照品溶液；然后分別吸取對照品溶液和供試品溶液，注入高效液相色譜儀，測定，即得。本發(fā)明方法能準確地測定羥基檸檬酸的含量，可廣泛應用于印度果皮精提取物及其制品的含量測定。
文檔編號G01N30/88GK1924572SQ20051001496
公開日2007年3月7日 申請日期2005年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月1日
發(fā)明者李偉, 高鈞, 魏峰, 李旭 申請人:天津天士力制藥股份有限公司