專利名稱：?jiǎn)蝹€(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原a或b檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分子生物學(xué)、免疫學(xué)檢測(cè)方法，特別涉及單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法。
背景技術(shù)：
隨著醫(yī)學(xué)領(lǐng)域科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，能夠移植的臟器不斷增加，隨之進(jìn)行臟器移植的病人越來(lái)越多。臟器移植病人的免疫狀態(tài)決定移植的成功與否及合并癥是否發(fā)生，當(dāng)病人出現(xiàn)排斥反應(yīng)時(shí)應(yīng)能及時(shí)處理，否則易導(dǎo)致移植失敗，藥物用量過(guò)小不能達(dá)到控制排斥反應(yīng)的目的，如果藥物用量過(guò)大，則易使免疫抑制過(guò)度，細(xì)菌病毒感染，腫瘤發(fā)生。而目前尚未有能夠準(zhǔn)確檢測(cè)臟器移植病人免疫狀態(tài)的任何方法，因此，臟器移植的病人所有抗免疫抗排斥的用藥量，均是根據(jù)估值或經(jīng)驗(yàn)確定，無(wú)法根據(jù)病人的自身情況準(zhǔn)確確定用藥量。在目前這種狀態(tài)下，直接影響臟器移植的成功率、移植后病人的壽命及病人身體的健康狀況等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法，它可以通過(guò)檢測(cè)臟器移植病人的外周血單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B的信使核糖核酸表達(dá)強(qiáng)度，以達(dá)到根據(jù)該強(qiáng)度的高低，確定病人用藥量，以此提高臟器移植的成功率及病人的身體健康狀況等。
本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的，通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法，取臟器移植病人外周血，分離淋巴細(xì)胞，提取淋巴細(xì)胞總模板核糖核酸，對(duì)外周血淋巴細(xì)胞總模板核糖核酸進(jìn)行鑒定，對(duì)人白細(xì)胞抗原A或人白細(xì)胞抗原B特異性引物進(jìn)行篩選得出人白細(xì)胞抗原A的上游引物5’-CTACCCTGCGGAGATCAC-3’，下游引物5’-AGAGAACCAGGCCAGCAAT-3’，或人白細(xì)胞抗原B的上游引物5’-CACACTGACCTGGCAGCGGGAT-3’；下游引物5’-AGAGCCCTGGGCACTGTCGCT-3’，進(jìn)行一步法—管擴(kuò)增體系，以β-肌動(dòng)蛋白作為內(nèi)參照，其上游引物5’-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3’、下游引物5’-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3’，反應(yīng)體系20-30ul，其中逆轉(zhuǎn)錄酶0.2-1.5ul，耐熱擴(kuò)增酶0.1-0.4ul，脫氧核苷酸0.1-0.5ul，氯化鎂1-4ul，緩沖液1-6ul，余量是去核糖核酸酶的雙蒸水，目的片段人白細(xì)胞抗原A的上下游引物或人白細(xì)胞抗原B的上下游引物各0.4-2ul，以β-肌動(dòng)蛋白作為內(nèi)參照，上游引物5’-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3’、下游引物5’-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3’各0.1-1ul，模板核糖核酸4-20ul，多聚酶鏈反應(yīng)儀反應(yīng)參數(shù)為40-42℃ 20-40min，90-96℃ 2-5min，90-96℃ 0.5-3min，52-60℃ 0.5-3min，70-75℃ 0.5-3min，3-10個(gè)循環(huán)；90-96℃ 5-30sec，60-65℃ 10-60sec，30-45個(gè)循環(huán)，70-75℃ 3-15min，然后對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳掃描及序列分析，最后采用與上述引物相對(duì)應(yīng)的熒光探針檢測(cè)人白細(xì)胞抗原A或人白細(xì)胞抗原B信使核糖核酸表達(dá)強(qiáng)度的高低。
所述的單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法，其一步法—管擴(kuò)增體系中各參數(shù)可以是，以β-肌動(dòng)蛋白作為內(nèi)參照，其上游引物5’-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3’、下游引物5’-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3’，反應(yīng)體系25ul，其中逆轉(zhuǎn)錄酶1ul、耐熱擴(kuò)增酶0.2ul，脫氧核苷酸0.2ul，氯化鎂2.5ul，緩沖液2.5ul，其余是去核糖核酸酶的雙蒸水，多聚酶鏈反應(yīng)儀反應(yīng)參數(shù)為42℃ 30min，95℃ 3min，94℃ 1min，57℃1min，72℃ 1min，5個(gè)循環(huán)；94℃ 10sec，62℃ 30sec，33個(gè)循環(huán)，72℃ 5min。
所述的單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法，對(duì)人白細(xì)胞抗原A的特異性引物進(jìn)行篩選得出人白細(xì)胞抗原A的上游引物5’-GGAGAGGAGCAGAGATACAC-3’，下游引物5’-AGAACCAGGCCAGCAATG-3’。
所述的單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法，對(duì)人白細(xì)胞抗原A的特異性引物進(jìn)行篩選得出人白細(xì)胞抗原A的上游引物5’-GGAGAGGAGCAGAGATACAC-3’，下游引物5’-ACCAGGCCAGCAATGATG-3’。
所述的單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法，對(duì)人白細(xì)胞抗原A的特異性引物進(jìn)行篩選得出人白細(xì)胞抗原A的上游引物5’-TGGAGAGGAGCAGAGATACACC-3’，下游引物5’-TCACGGCAGCGACCACAG-3’。
所述的單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法，對(duì)人白細(xì)胞抗原A的特異性引物進(jìn)行篩選得出人白細(xì)胞抗原A的上游引物5’-CCCATCTCTGACCATGAG-3’，下游引物5’-GGTGTATCTCTGCTCCTC-3’。
所述的單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法，對(duì)人白細(xì)胞抗原B的特異性引物進(jìn)行篩選得出入白細(xì)胞抗原B的上游引物5’-GGGCAGCTGTGGTGCCT-3’，下游引物5’-CACTGTCGCTGCACGCAGCCT-3’。
所述的單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法，對(duì)人白細(xì)胞抗原B的特異性引物進(jìn)行篩選得出人白細(xì)胞抗原B的上游引物5’-CTGCCGAAGCCCCTCACCCTCT-3’，下游引物5’-AGGACCAGACCCAGGACA-3’。
所述的單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法，對(duì)人白細(xì)胞抗原B的特異性引物進(jìn)行篩選得出人白細(xì)胞抗原B的上游引物5’-GCCGTCTTCCCAGTCCACCGT-3’，下游引物5’-ATGCCCACGATGGGGACGGT-3’。
本發(fā)明的積極效果在于為臟器移植病人免疫狀態(tài)的強(qiáng)弱提供了一種準(zhǔn)確的檢測(cè)方法，使醫(yī)生可以根據(jù)臟器移植病人自身的免疫狀態(tài)確定抗排斥的藥量，從而避免了因用藥量過(guò)大或過(guò)小產(chǎn)生的移植失敗、細(xì)菌病毒感染、腫瘤發(fā)生等嚴(yán)重后果。采用本發(fā)明的檢測(cè)方法，能夠準(zhǔn)確掌握臟器移植病人免疫狀態(tài)的強(qiáng)弱，提高臟器移植成功率及病人的身體健康狀況。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的檢測(cè)方法如下首先取外周血淋巴細(xì)胞(PBL)進(jìn)行分離無(wú)菌抽取移植病人外周血2ml，EDTA-K2防凝。3000rpm/min離心10min(普通離心機(jī))，4小時(shí)內(nèi)完成。
以無(wú)菌吸管仔細(xì)吸取白細(xì)胞層，稀釋后緩慢加入盛有2ml淋巴細(xì)胞分離液的無(wú)菌管中，3000rpm/min離心25min(普通離心機(jī))。
以無(wú)菌吸管小心吸取單個(gè)核細(xì)胞至一滅菌Ependoff管中，5000rpm/min離心4min(普通離心機(jī))吸棄上清液(-80℃可長(zhǎng)期保存)。
對(duì)淋巴細(xì)胞總模板核糖核酸(RNA)進(jìn)行提取，(以下均為冰上操作，所有器材預(yù)先用去核糖核酸酶的雙蒸水處理)取出凍存的淋巴細(xì)胞加入50ulTE溶解沉淀，然后加入150ul白細(xì)胞裂解液(深圳匹基生物公司生產(chǎn))，反復(fù)吹打至細(xì)胞完全裂解。在裂解的細(xì)胞混合液中加入50ul氯仿抽提RNA，冰浴5-7min，15000rpm/min離心10min(高速冷凍離心機(jī))。
離心后可見(jiàn)混合液分為三層，吸取最上層無(wú)色水相，加入等體積的異丙醇沉淀RNA，-20℃放置20-60min，13000rpm/min離心10min(4℃，高速冷凍離心機(jī))。
棄去上清液(注意離心方向)，加入300ul預(yù)致冷的75％乙醇(去核糖核酸酶的雙蒸水配制)，13000rpm/min(4℃，高速冷凍離心機(jī))離心10min去鹽，輕棄上清(注意離心方向)，吸水紙上吸干。
13000rpm/min離心(高速冷凍離心機(jī))10秒鐘，將管壁殘余液體甩至底部，以無(wú)菌吸頭吸干殘液，加入適量的去核糖核酸酶的雙蒸水溶解RNA。
對(duì)外周血淋巴細(xì)胞總RNA進(jìn)行鑒定提取的外周血淋巴細(xì)胞總RNA，在UA-2450紫外分光光度計(jì)上測(cè)定260nm和280nm波長(zhǎng)下RNA的吸光度，將提取的RNA在1.5％低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠變性電泳，可見(jiàn)5s，18s，28s三條清晰條帶，表明所提RNA濃度較純，且RNA完整無(wú)裂解，可用于逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)。
選取人白細(xì)胞抗原A(HLA-A)或人白細(xì)胞抗原B(HLA-B)特異性引物提取的RNA以不同的引物，即人白細(xì)胞抗原A上游引物5’-CTACCCTGCGGAGATCAC-3’，下游引物5’-AGAGAACCAGGCCAGCAAT-3’，這是本發(fā)明方法人白細(xì)胞抗原A較好的一對(duì)引物，以下各對(duì)引物均可等同使用，并可達(dá)到本發(fā)明所述的檢測(cè)效果，上游引物5’-GGAGAGGAGCAGAGATACAC-3’，下游引物5’-AGAACCAGGCCAGCAATG-3’。或上游引物5’-TGGAGAGGAGCAGAGATACACC-3’，下游引物5’-TCACGGCAGCGACCACAG-3’?；蛏嫌我?’-CCCATCTCTGACCATGAG-3’，下游引物5’-GGTGTATCTCTGCTCCTC-3’。本發(fā)明人白細(xì)胞抗原B的特異性引物即上游引物5’-GGGCAGCTGTGGTGCCT-3’，下游引物5’-CACTGTCGCTGCACGCAGCCT-3’，這是本發(fā)明方法人白細(xì)胞抗原B中較好的一對(duì)引物，以下各對(duì)引物均可達(dá)到本發(fā)明所述檢測(cè)效果。或上游引物5’-CTGCCGAAGCCCCTCACCCTCT-3’，下游引物5’-AGGACCAGACCCAGGACA-3’，或上游引物5’-GCCGTCTTCCCAGTCCACCGT-3’，下游引物5’-ATGCCCACGATGGGGACGGT-3’，組合置于RT-PCR反應(yīng)體系中擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物以2％瓊脂糖凝膠電泳，篩選與預(yù)期279bp片段相吻合的特異性引物。
采用一步法—管擴(kuò)增體系以β-肌動(dòng)蛋白作為內(nèi)參照，反應(yīng)體系25ul，其中逆轉(zhuǎn)錄酶1ul，耐熱擴(kuò)增酶0.2ul、脫氧核苷酸0.2ul、氯化鎂2.5ul，緩沖液2.5ul，余量是去核糖核酸酶的雙蒸水。
目的片段人白細(xì)胞抗原A或人白細(xì)胞抗原B的上下游引物各1ul，內(nèi)參照以上游引物5’-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3’、下游引物5’-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3’各0.3ulRNA10ul多聚酶鏈反應(yīng)儀的反應(yīng)參數(shù)42℃ 30min，95℃ 3min，94℃ 1min，57℃ 1min，72℃ 1min，5個(gè)循環(huán)；94℃ 10sec，62℃ 30sec，33個(gè)循環(huán)，72℃ 5min。
或以β-肌動(dòng)蛋白作為內(nèi)參照，反應(yīng)體系20ul，其中逆轉(zhuǎn)錄酶0.2ul，耐熱擴(kuò)增酶0.1ul、脫氧核苷酸0.1ul、氯化鎂1ul，緩沖液1ul，余量是去核糖核酸酶的雙蒸水。
目的片段人白細(xì)胞抗原A或人白細(xì)胞抗原B的上下游引物各0.4ul內(nèi)參照以上游引物5’-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3’、下游引物5’-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3’各1ulRNA10ul，多聚酶鏈反應(yīng)儀的反應(yīng)參數(shù)40℃ 20min，90℃ 2min，90℃ 0.5min，52℃ 0.5min，70℃ 0.5min，3個(gè)循環(huán)；90℃ 5sec，60℃ 10sec，30個(gè)循環(huán)，70℃ 3min。
或以β-肌動(dòng)蛋白作為內(nèi)參照，反應(yīng)體系30ul，其中逆轉(zhuǎn)錄酶0.5ul，耐熱擴(kuò)增酶0.4ul、脫氧核苷酸1.5ul、氯化鎂4ul，緩沖液6ul，余量是去核糖核酸酶的雙蒸水。
目的片段人白細(xì)胞抗原A或人白細(xì)胞抗原B上下游引物各2ul，內(nèi)參照上游引物5’-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3’、下游引物5’-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3’各1ul，RNA20ul，多聚酶鏈反應(yīng)儀的反應(yīng)參數(shù)42℃ 40min，96℃ 5min，96℃3min，60℃ 3min，75℃ 3min，10個(gè)循環(huán)；96℃ 30sec，65℃60sec，45個(gè)循環(huán)，75℃ 15min。
將上述擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳掃描及序列分析多聚酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增產(chǎn)物2％瓊脂糖凝膠電泳后，在凝膠成像系統(tǒng)上掃描分析。HLA-A或HLA-B互補(bǔ)脫氧核糖核酸在全自動(dòng)測(cè)序抗原儀上測(cè)序，并用Blastn服務(wù)器對(duì)序列進(jìn)行查詢和比較。采用與本發(fā)明上述引物相對(duì)應(yīng)的熒光探針檢測(cè)HLA-A或HLA-B信使核糖核酸表達(dá)強(qiáng)度，這個(gè)強(qiáng)度的高低，與臟器移植病人免疫狀態(tài)相對(duì)應(yīng)，以此確定臟器移植病人免疫狀態(tài)的強(qiáng)弱，為抗排斥用藥量提供了準(zhǔn)確的依據(jù)。
權(quán)利要求
1.單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法，取臟器移植病人外周血，分離淋巴細(xì)胞，提取淋巴細(xì)胞總模板核糖核酸，對(duì)外周血淋巴細(xì)胞總模板核糖核酸進(jìn)行鑒定，其特征在于對(duì)人白細(xì)胞抗原A或人白細(xì)胞抗原B特異性引物進(jìn)行篩選得出人白細(xì)胞抗原A的上游引物5’-CTACCCTGCGGAGATCAC-3’，下游引物5’-AGAGAACCAGGCCAGCAAT-3’，或人白細(xì)胞抗原B的上游引物5’-CACACTGACCTGGCAGCGGGAT-3’；下游引物5’-AGAGCCCTGGGCACTGTCGCT-3’，然后進(jìn)行一步法一管擴(kuò)增體系，以β-肌動(dòng)蛋白作為內(nèi)參照，其上游引物5’-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3’、下游引物5’-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3’，反應(yīng)體系20-30ul，其中逆轉(zhuǎn)錄酶0.2-1.5ul，耐熱擴(kuò)增酶0.1-0.4ul，脫氧核苷酸0.1-0.5ul，氯化鎂1-4ul，緩沖液1-6ul，余量是去核糖核酸酶的雙蒸水，目的片段人白細(xì)胞抗原A的上下游引物或人白細(xì)胞抗原B的上下游引物各0.4-2ul，內(nèi)參照上游引物5’-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3’、下游引物5’-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3’各01.-1ul，模板核糖核酸4-20ul，多聚酶鏈反應(yīng)儀反應(yīng)參數(shù)為40-42℃20-40min，90-96℃2-5min，90-96℃0.5-3min，52-60℃0.5-3min，70-75℃0.5-3min，3-10個(gè)循環(huán)；90-96℃5-30sec，60-65℃10-60sec，30-45個(gè)循環(huán)，70-75℃3-15min，然后對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳掃描及序列分析，最后采用與上述引物相對(duì)應(yīng)的熒光探針檢測(cè)人白細(xì)胞抗原A或人白細(xì)胞抗原B信使核糖核酸表達(dá)強(qiáng)度的高低。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法，其特征在于一步法-管擴(kuò)增體系中各參數(shù)是，以β-肌動(dòng)蛋白作為內(nèi)參照，其上游引物5’-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3’、下游引物5’-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3’，反應(yīng)體系25ul，其中逆轉(zhuǎn)錄酶1ul、耐熱擴(kuò)增酶0.2ul，脫氧核苷酸0.2ul，氯化鎂2.5ul，緩沖液2.5ul，其余是去核糖核酸酶的雙蒸水，多聚酶鏈反應(yīng)儀反應(yīng)參數(shù)為42℃30min，95℃3min，94℃1min，57℃1min，72℃1min，5個(gè)循環(huán)；94℃10sec，62℃30sec，33個(gè)循環(huán)，72℃5min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法，其特征在于對(duì)人白細(xì)胞抗原A的特異性引物進(jìn)行篩選得出人白細(xì)胞抗原A的上游引物5’-GGAGAGGAGCAGAGATACAC-3’，下游引物5’-AGAACCAGGCCAGCAATG-3’。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法，其特征在于對(duì)人白細(xì)胞抗原A的特異性引物進(jìn)行篩選得出人白細(xì)胞抗原A的上游引物5’-GGAGAGGAGCAGAGATACAC-3’，下游引物5’-ACCAGGCCAGCAATGATG-3’。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法，其特征在于對(duì)人白細(xì)胞抗原A的特異性引物進(jìn)行篩選得出人白細(xì)胞抗原A的上游引物5’-TGGAGAGGAGCAGAGATACACC-3’，下游引物5’-TCACGGCAGCGACCACAG-3’。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法，其特征在于對(duì)人白細(xì)胞抗原A的特異性引物進(jìn)行篩選得出人白細(xì)胞抗原A的上游引物5’-CCCATCTCTGACCATGAG-3’，下游引物5’-GGTGTATCTCTGCTCCTC-3’。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法，其特征在于對(duì)人白細(xì)胞抗原B的特異性引物進(jìn)行篩選得出人白細(xì)胞抗原B的上游引物5’-GGGCAGCTGTGGTGCCT-3’，下游引物5’-CACTGTCGCTGCACGCAGCCT-3’。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法，其特征在于對(duì)人白細(xì)胞抗原B的特異性引物進(jìn)行篩選得出人白細(xì)胞抗原B的上游引物5’-CTGCCGAAGCCCCTCACCCTCT-3’，下游引物5’-AGGACCAGACCCAGGACA-3’。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法，其特征在于對(duì)人白細(xì)胞抗原B的特異性引物進(jìn)行篩選得出人白細(xì)胞抗原B的上游引物5’-GCCGTCTTCCCAGTCCACCGT-3’，下游引物5’-ATGCCCACGATGGGGACGGT-3’。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B檢測(cè)移植病人免疫狀態(tài)的方法，取臟器移植病人外周血，分離淋巴細(xì)胞，提取淋巴細(xì)胞總模板核糖核酸，對(duì)外周血淋巴細(xì)胞總模板核糖核酸進(jìn)行鑒定，對(duì)人白細(xì)胞抗原A或人白細(xì)胞抗原B特異性引物進(jìn)行篩選，然后進(jìn)行一步法一管擴(kuò)增體系，以上、下游引物作為內(nèi)參照，然后對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳掃描及序列分析，最后采用與上述引物相對(duì)應(yīng)的熒光探針檢測(cè)人白細(xì)胞抗原A或人白細(xì)胞抗原B抗原表達(dá)強(qiáng)度的高低。它可以通過(guò)檢測(cè)臟器移植病人的外周血單個(gè)核細(xì)胞人白細(xì)胞抗原A或B的抗原表達(dá)強(qiáng)度，以達(dá)到根據(jù)該強(qiáng)度的高低，確定病人用藥量，以此提高臟器移植的成功率及病人的身體健康狀況等。
文檔編號(hào)G01N33/53GK1710423SQ20041007585
公開(kāi)日2005年12月21日 申請(qǐng)日期2004年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月30日
發(fā)明者鄒雄, 張義, 楊曉靜, 秦緒珍, 莊學(xué)偉, 單寧寧, 王洪春 申請(qǐng)人:山東大學(xué)齊魯醫(yī)院