專利名稱：：用細(xì)胞因子混合物對Ⅱ類人類白細(xì)胞抗原在腫瘤細(xì)胞表面上的表達(dá)進(jìn)行調(diào)節(jié)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明是關(guān)于一種方法，該方法通過用無血清且無促分裂原(mitogen)的混合物來改變腫瘤浸潤單核細(xì)胞的組成、提高CD4VCD8+比值、提高腫瘤間質(zhì)/上皮比值，并調(diào)節(jié)II類人類白細(xì)胞抗原(HumanLeucocyteAntigen,HLA)在腫瘤細(xì)胞表面上的表達(dá)，所述無血清且無促分裂原的混合物具有選自由IL-1(3、TNF-ouIFN-y、GM-CSF和白介素-2(IL-2)所組成的組中的特定細(xì)胞因子比例，IL-1(3、TNF-ouIFN-y、GM-CSF和白介素分別具有特定的比例。由細(xì)胞因子比例組成的無血清且無促分裂原的混合物包括白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧。
背景技術(shù)：
：免疫逃逸機(jī)制在腫瘤免疫中具有重要影響。通過抗原調(diào)節(jié)(antigenicmodulation)、抗原掩蔽(antigenmasking)以及產(chǎn)生封閉因子(blockingfactor)和遺傳因子或者通過存在或缺少腫瘤產(chǎn)物或生長因子，免疫原性腫瘤(neoplasm)表現(xiàn)出逃避免疫系統(tǒng)效應(yīng)器的保護(hù)。免疫逃逸的決定因素之一為II類HLA在腫瘤細(xì)胞上的表達(dá)。II類HLA分子在抗原呈遞和被CD4+T淋巴細(xì)胞識別的過程中起到重要作用。它們的表達(dá)反映了存在或者缺乏宿主免疫活性細(xì)胞消除腫瘤所必需的重要輔助因子。在人自身免疫疾病以及特定癌癥的大多數(shù)靶組織上和激活的表達(dá)IL-2受體的T淋巴細(xì)胞中，發(fā)現(xiàn)了II類HLA的表達(dá)。自身免疫疾病和特定類型癌癥的局部位置導(dǎo)致II類HLA過度表達(dá)的觀察結(jié)果暗示，組織抗原呈遞能力通過持續(xù)地使自體-抗原-反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞再活化而對自身免疫疾病長存或癌癥進(jìn)展的機(jī)制做出重要貢獻(xiàn)。自身免疫狀態(tài)例如格雷夫斯甲狀腺炎(Graves'thyroiditis)似乎使自體-抗原-反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞再活化，其中，干擾素-Y(interferon-gamma，IFN-y)誘導(dǎo)II類在甲狀腺細(xì)胞上的表達(dá)(FILdmanetal，"Molecularmechanismsinvolvedinhumanautoimmunediseases:relevanceofchronicantigenpresentationClassIIexpressionandcytokineproduction",7mmwwo/Swpp/，2:66-73(1989))。所述甲狀腺細(xì)胞然后表達(dá)II類抗原，并將它們的自體抗原呈遞至克隆自格雷夫斯氏病患者甲狀腺組織的T細(xì)胞。在癌中，當(dāng)腫瘤生長因子和腫瘤破壞因子之間的平衡有利于腫瘤時(shí)，發(fā)生免疫逃逸?？梢源俪擅庖咛右莸囊蜃影[瘤動(dòng)力學(xué)、抗原調(diào)節(jié)、抗原掩蔽和封閉因子。例如，抗原調(diào)節(jié)通過移除免疫系統(tǒng)效應(yīng)細(xì)胞將識別的靶抗原而有利于逃逸。公知的是，在免疫治療過程中，當(dāng)給予異基因抗體時(shí)，這會(huì)發(fā)生。由于特定分子結(jié)合于腫瘤細(xì)胞表面，并掩蔽所述腫瘤抗原，從而防止攻擊性淋巴細(xì)胞的吸附，因此也可以產(chǎn)生從效應(yīng)細(xì)胞逃逸的腫瘤。除抗原外的其它腫瘤產(chǎn)物也能引起免疫應(yīng)答破壞。所述產(chǎn)物包括前列腺素以及其它破壞炎癥應(yīng)答、趨化性和補(bǔ)體級聯(lián)反應(yīng)(complementcascade)的體液因素。腫瘤從免疫控制下逃逸的能力取決于免疫系統(tǒng)作用和促進(jìn)逃逸的多種因素之間的平衡。關(guān)于主要組織相容性座位(locus)，值得注意的是，在I類HLA抗原以及諸如HLA-DR、CD44禾卩ICAM-1(細(xì)胞間粘附分子-l)的其它分子的表達(dá)中的分子變化會(huì)影響腫瘤進(jìn)展(tumorprogression)。有趣的是，特定細(xì)胞表面抗原的存在或缺乏與特定類型癌癥的預(yù)后不良相關(guān)。例如，幾個(gè)小組已經(jīng)報(bào)道了I類HLA抗原在腫瘤細(xì)胞表面上的缺失與膀胱癌更多攻擊性行為有關(guān)(KleinBetal.，"HLAclassI.antigenexpressioninsolidtumors",ZsrJMe必"'32:1238-1243(1996);NouriAMetal,"InductionofMHCantigensbytumorcelllinesinresponsetointerferons",EurJCancer28(A):1110-1115(1992);Nourietal，"Defectiveexpressionofadhesionmoleculesonhumanbladdertumourandhumantumourcelllines",t/ra//"f56:6-12(1996);NouriAetal，"SelectiveandnonsILectivelossofimmunoregulatorymolecules(HLA-A,B,CantigensandLFA-3)intransitionalcellcarcinoma",5r/Cawcer62:603-606(1990))。來自于其他研究的數(shù)據(jù)表明，在靶(腫瘤)細(xì)胞上缺乏I類MHC抗原或共激分子的表達(dá)、FasL的表達(dá)、或者信號缺陷(signalingdefects)也可以使對口腔鱗狀細(xì)胞上皮癌的免疫應(yīng)答受損(Cruzetal,"LackofMHCclassIsurfaceexpressiononneoplasticcellsandpooractivationofthesecretorypathwayofcytotoxiccellsinoralsquamouscellcarcinomas",&/Ca"cer81:881-889(1999);Langetal,"ImpairmentofT-cellactivationinheadandneckcancerinsituandinvitro",爿ra^//eadiVecA:5Wg125:82-88(1999);Hoffmannetal.，"SpontaneousapoptosisofcirculatingTlymphocytesinpatientswithheadandneckcanceranditsclinicalimportance",C7/"Cawcer8:2553-2562(2002);Kussetal，"EffectorCD8+CD45RO-CD27-Tcellshavesignalingdefectsinpatientswithsquamouscellcarcinomaoftheheadandneck",5〃C薩er88:223-230(2003))。主要組織相容性復(fù)合物(MajorHistocompatibilityComplex,MHC)II類分子似乎還影響腫瘤進(jìn)展。MHC基因產(chǎn)物可以被分成兩類。I類產(chǎn)物發(fā)現(xiàn)于所有有核細(xì)胞上，而II類產(chǎn)物發(fā)現(xiàn)于免疫系統(tǒng)細(xì)胞上。HLA-DR，一種II類MHC分子，與抗原信號的加工有關(guān)，并在來自頭和頸的鱗狀上皮癌細(xì)胞的表面上表達(dá)。主要組織相容性復(fù)合物(MHC)II類分子可以在產(chǎn)生免疫信號中以及調(diào)節(jié)所述免疫激活抗原的量中起作用。當(dāng)正常細(xì)胞變成癌細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞表面的抗原也會(huì)變化。所述新的抗原或改變的抗原停下來，從而損害宿主身體，包括細(xì)胞毒性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在內(nèi)的免疫防衛(wèi)者。相反，腫瘤細(xì)胞可以通過表達(dá)特定分子而避免監(jiān)視。另一種可能的免疫逃逸的機(jī)制為細(xì)胞應(yīng)變力缺乏，不能表達(dá)共激信號。CD4+T細(xì)胞的全激活表現(xiàn)出要求兩種信號。當(dāng)通過T細(xì)胞受體(T-cellreceptor,TCR)收到第一信號時(shí)，共激信號的缺失導(dǎo)致細(xì)胞應(yīng)變力缺乏。當(dāng)惡性細(xì)胞呈遞II類MHC抗原時(shí)可能出現(xiàn)這種情況，從而在缺乏必要的共激信號的情況下導(dǎo)致細(xì)胞應(yīng)變力缺乏，結(jié)果導(dǎo)致通過CD4+T細(xì)胞的增殖無應(yīng)答性。通常，T細(xì)胞激活中的事件序列在抗原呈遞細(xì)胞(antigenpresentingcells,APCs)和抗原特異性T細(xì)胞之間具有三個(gè)不同的細(xì)胞-細(xì)胞相互作用階段，以誘導(dǎo)抗原特異性免疫應(yīng)答。第一，當(dāng)APCs和T細(xì)胞通過細(xì)胞表面配體和黏著受體既在循環(huán)組織又在淋巴組織中隨機(jī)相互作用時(shí)，發(fā)生吸附。第二，如果APCs在MHC環(huán)境中能制備、轉(zhuǎn)運(yùn)并呈遞足夠量的特異性肽抗原，將發(fā)生識別。然后抗原-MHC(或在人HLA中)復(fù)合體將被T細(xì)胞通過T細(xì)胞受體(TCR)識別。衍生自細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的內(nèi)源性肽通常由I類MHC呈遞(在人HLA-A、B或C中)，而衍生自循環(huán)蛋白的外源性產(chǎn)生的肽抗原通常由II類MHC呈遞(在人HLA-DR、DP或DQ中)。第三，T細(xì)胞已經(jīng)通過將提供T細(xì)胞的TCR與另外提高激活的信號結(jié)合而被激活之后，發(fā)生共同刺激。由激活的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的白介素-2刺激T-細(xì)胞、B-細(xì)胞和NK-細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)淋巴因子產(chǎn)生。由輔助T-細(xì)胞分泌白介素-2來應(yīng)答II類MHC相關(guān)抗原表現(xiàn)出提供了激活直接對抗腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性T細(xì)胞和NK-細(xì)胞的主要刺激。例如，與IL-2—起孵育的淋巴樣細(xì)胞能溶解腫瘤細(xì)胞。這些激活的細(xì)胞公知為淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞。在許多I期臨床試驗(yàn)中，白介素-2被系統(tǒng)給藥。已報(bào)道在患有再發(fā)不能實(shí)施手術(shù)的頭部和頸部鱗狀上皮細(xì)胞癌的患者中的白介素-2的先導(dǎo)性臨床試驗(yàn)(DeStefanietal，"Treatmentoforalcavityandoropharynxsquamouscellcarcinomawithperilymphaticinterleukin-2:clinicalandpathologiccorrelations",J/附m朋oAer19:125-133(1966))。被評價(jià)的五例中，在四名患者中腫瘤部分或完全消退，但是先前已經(jīng)接受過功能性或根本性頸淋巴清掃術(shù)的患者中沒有應(yīng)答。已經(jīng)建立理論，這是由于引流淋巴結(jié)的切除和任意局部淋巴應(yīng)答的喪失。許多病理學(xué)的狀態(tài)諸如感染、癌、自身免疫紊亂等的特征在于特定分子的不適當(dāng)表達(dá)，其中這些分子用作特殊病理或異常狀態(tài)的"標(biāo)記"。該證據(jù)支持作為免疫抑制疾病的頭頸癌的特征，其中免疫反應(yīng)性在腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞(tumorinfiltratinglymphocytes,TIL)中，然后在近側(cè)淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞(lymphnodelymphocytes,LNL)、遠(yuǎn)偵(JLNL以及外周血液淋巴細(xì)胞(peripheralbloodlymphocytes，PBL)中被最大程度地抑制。外周血液淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)與細(xì)胞免疫性相關(guān)，并似乎對患有頭頸癌的患者具有預(yù)后關(guān)聯(lián)。細(xì)胞介導(dǎo)的免疫系統(tǒng)最復(fù)雜的測定是那些監(jiān)測淋巴細(xì)胞反應(yīng)性的測定。所述測試為體外測定，并將患者的淋巴細(xì)胞暴露于多種刺激物。所述刺激物可以包括普通的回憶抗原、特異性腫瘤抗原、或者導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞總數(shù)降低的非特異性刺激物，并因此患有頭頸癌的患者中的T-細(xì)胞和B-細(xì)胞水平完全下降。此外，絕對T細(xì)胞計(jì)數(shù)隨進(jìn)行性疾病下降。頭頸癌患者中的淋巴細(xì)胞刺激也出現(xiàn)了下降。瘤內(nèi)的004+/008+比值也似乎影響頭頸癌。發(fā)現(xiàn)于T輔助細(xì)胞上的CD4+分子識別并結(jié)合發(fā)現(xiàn)于樹狀突細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和B-細(xì)胞上的II類HLA標(biāo)記，并為T輔助細(xì)胞傳遞信號以分泌更多的淋巴因子例如IL-2。發(fā)現(xiàn)于殺傷性T細(xì)胞上的CD8+分子識別并結(jié)合I類HLA標(biāo)記，并為殺傷性T細(xì)胞傳遞信號以分泌在外源細(xì)胞的膜上穿孔并直接導(dǎo)致其裂解和死亡的蛋白諸如穿孔素。對口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌成功的免疫應(yīng)答要求逆轉(zhuǎn)瘤內(nèi)細(xì)胞固有的低CD4+ZCD8+比值。值得注意的是，實(shí)體瘤中CD8+細(xì)胞對CD4+細(xì)胞的超優(yōu)勢度在口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌中并不特異。類似地，已經(jīng)報(bào)道在基底細(xì)胞癌、頸癌以及乳癌中的低CD4VCD8+比值(Rohrbachetal，"Immunologyandgrowthcharacteristicsofocularbasalcellcarcinoma",Gra^/^y爿rc/zC7/"239:35-40(2001);Santinetal，"Tumor-infiltratinglymphocytescontainhighernumbersoftype1cytokineexpressorsandDR+Tcellscomparedwithlymphocytesfromtumordraininglymphnodesandperipheralbloodinpatientswithcanceroftheuterinecervix",(7j"eco/6"co/81:424-432(2001》Murtaetal,"Lymphocytesubpopulationsinpatientswithadvancedbreastcancersubmittedtoneoadjuvantchemotherapy",r訓(xùn)on'86:403-407(2000))。另一方面，高百分比的CD4+T-細(xì)胞或高CD4VCD8+比值與黑素瘤、B-細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤、腎細(xì)胞瘤以及宮頸癌(cervicalcarcinoma)的免疫療法的較好預(yù)后或應(yīng)答相關(guān)(Hakanssonetal,"Tumour-infiltratinglymphocytesinmalignantmelanomaandresponsetointerferonalphatreatment",份JCa膨r74:670-676(1996);Anselletal,"CD4+T畫cellimmuneresponsetolargeB-cellnon-Hodgkin'slymphomapredictspatientoutcome",/C7z>7Owco/19:720-726(2001);Igarashietal,"Effectoftumor-infiltratinglymphocytesubsetsonprognosisandsusceptibilitytointerferontherapyinpatientswithrenalcellcarcinoma",C/ra/69:51-56,(2002);Sheuetal，"ReversedCD4/CD8ratiosoftumor-infiltratinglymphocytesarecorrelatedwiththeprogressionofhumancervicalcarcinoma",Ca"cer86:15371543,(1999))。通過提供CDS+細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)的輔助作用，通過激活抗原呈遞細(xì)胞并維持免疫記憶，或者在某些情況下通過細(xì)胞因子分泌或直接的細(xì)胞溶解而起到效應(yīng)子作用，CD4T-細(xì)胞在發(fā)起和保持抗腫瘤免疫性方面也起到了中心作用(Goedegebuureetal,"TheroleofCD4+tumor-infiltratinglymphocytesinhumansolidtumors",Tawwwwo/^s114:119-131(1995》，Hungetal,"ThecentralroleofCD4+Tcellsintheantitumorimmuneresponse",/五xp188:2357-2368(1998);Gaoetal，"Antigen-specificCD4+T-cellhelpisrequiredtoactivateamemoryCD8+Tcelltoafollyfunctionaltumorkillercell",C。騰rh62:6438-6441(2002))。對于頭頸癌中的局部免疫反應(yīng)性，Berlinger等人評價(jià)了來自84名患有頭頸癌的患者的淋巴結(jié)形態(tài)學(xué)圖像，并且將他們的發(fā)現(xiàn)與存活率相互關(guān)聯(lián)，其中，其淋巴結(jié)顯示有效免疫學(xué)應(yīng)答的患者具有較長的存活時(shí)間(Berlingeretal，"ImmunobiologyOtolaryngology3rded.",Philadelphia:HarcourtBraceJovanovich,Inc;741-45(1991))。另一方面，其淋巴結(jié)具有衰竭或非激活(unstimulatedpattern)圖像的患者沒有存活5年。結(jié)果清楚地顯示了局部免疫反應(yīng)性和頭部及頸部惡性腫瘤存活率之間的關(guān)系。該發(fā)現(xiàn)可歸因于暴露于特定細(xì)胞因子的腫瘤細(xì)胞表達(dá)特定的表面抗原。大多數(shù)對患有頭部及頸部惡性腫瘤的患者的全身性免疫研究已經(jīng)獲得了免疫功能降低的證據(jù)。還不知道這些變化是否是由于易罹患性狀況，或者是否是惡性腫瘤自身功能。雖然免疫治療已被認(rèn)為是癌癥治療相對特異性的途徑，其中免疫效應(yīng)器機(jī)制的激活作用用于消滅癌細(xì)胞，但是，有幾種可行的免疫策略來達(dá)到這些目的。策略之一是使用細(xì)胞因子增加抗癌免疫效應(yīng)器機(jī)制(Timaretal,"MolecularpathologyoftumormetastasisIII.Targetarrayandcombinatorialtherapies",尸aAo/Owco/iw9:49-72(2003);WhitesideTL，"Immunobiologicalandimmunotherapyofheadandneckcancer",CwrO"co/i印3:46-55(2001))。另一種可行的免疫策略使用細(xì)胞因子增加抗癌免疫效應(yīng)器機(jī)制，在外科切除口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌(OSCC)之前，引入局部IL-2治療作為新的輔助免疫生物療法。在包括頭頸癌在內(nèi)的不同的腫瘤類型中，一些治療性介入(intervention)使用重組人IL-2(rhBL-2)，而另外一些使用天然白細(xì)胞衍生的IL-2制齊i)(Barreraetal，"Combinationimmunotherapyofsquamouscellcarcinomaoftheheadandneck",Ac/z(9o/ar戸goZ//eaiiVecA5W"g126:345-351(2000);Cortesinaetal."Interleukin-2injectedaroundtumor-draininglymphnodesinheadandneckcancer",//ea<iTVecA:13:125-131(1991);DeStefanietal."Treatmentoforalcavityandoropharynxsquamouscellcarcinomawithperilymphaticinterleukin-2:clinicalandpathologiccorrelations",//www"<9//2er19:125-133(1996);Rivoltinietal，"Invivointerleukin2-inducedactivationoflymphokine-activatedkillercellsandtumorcytotoxicT-cellsincervicallymphnodesofpatientswithheadandnecktumors",C""ce尸50:5551-5557(1990))。然而，數(shù)據(jù)顯示rWL-2局部給藥的高度變化的應(yīng)答率(6-65%)(Vlocketal，"Phaselbtrialoftheeffectofperitumoralandintranodalinjectionsofinterleukin-2inpatientswithadvancedsquamouscellcarcinomaoftheheadandneck:aneasterncooperativeoncologygrouptrial",/TmmMwof/zer15:134-139(1994))。將rhlL-2局部給藥至OSCC患者的特定m期(phase)試驗(yàn)的結(jié)果是，無病存活率得到顯著提高并且增加了總存活數(shù)(DeStefanietal,"Improvedsurvivalwithperilymphaticinterleukin-2inpatientswithresectablesquamouscellcarcinomaoftheoralcavityandoropharynx",Cancer95:90-97(2002))。得自經(jīng)rhlL-2治療的頭頸癌患者的腫瘤組織的組織學(xué)檢查顯示，T-細(xì)胞亞型中的富集與病灶性壞死和臨時(shí)的嗜酸細(xì)胞性浸潤并行(Whitesideetal,"Evidenceforlocalandsystemicactivationofimmunecellsbyperitumoralinjectionsofinterleukin2inpatientswithadvancedsquamouscellcarcinomaoftheheadandneck",C露eries53:5654-5662(1993);DeStefanietal."Treatmentoforalcavityandoropharynxsquamouscellcarcinomawithperilymphaticinterleukin-2:clinicalandpathologiccorrelations",J"/m附imo^2er19:125-133(1996);Valenteetal""InfiltratingleukocytepopulationsandT-lymphocytesubsetsinheadandnecksquamouscellcarcinomafrompatientsreceivingperilymphaticinjectionsofrecombinantinteiieukin2"，McfP函o/3:702-708(1990))。其他II期臨床試驗(yàn)用包括天然IL-2在內(nèi)的自然生成的細(xì)胞因子混合物，顯示出30%至50%的應(yīng)答率(Barreraetal,"Combinationimmunotherapyofsquamouscellcarcinomaoftheheadandneck",爿rc/zOto/ar，go///ead126:345-351(2000);Haddenetal，"AtrialofIRX-2inpatientswithsquamouscellcarcinomasoftheheadandneck",/mmzmop/^maco/8:1073-1081,(2003);Menesesetal,"Histologicfindingsinpatientswithheadandnecksquamouscellcarcinomareceivingperilymphaticnaturalcytokinemixture(IRX-2)priortosurgery",Jrc/尸W/zo/丄a6Mec122:447-454(1998);Verasteguietal,"Anaturalcytokinemixture(IRX-2)andinterferencewithimmunesuppressioninduceimmunemobilizationandregressionofheadandneckcancer",//mmimop/za簡aco/79:619-627(1997》。組織病理學(xué)分析表明，所述自然細(xì)胞因子混合物(包括IL-2)根據(jù)劑量主要誘導(dǎo)腫瘤組織的T淋巴細(xì)胞浸潤并引起腫瘤破裂。其它用較低劑量LI(白細(xì)胞介素，注射劑，LI，也被公知為Multikine⑧)的II期試驗(yàn)表現(xiàn)出腫瘤細(xì)胞巢的相似的應(yīng)答率和誘導(dǎo)的CD3+/CD25+T淋巴細(xì)胞浸潤，以及癌細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期(Timaretal,"TheeffectofLeukocyteInterleukin，Injection(Multikine)treatmentontheperitumoralandintratumoralsubpopulationofmononuclearcellsandontumorepithelia:apossiblenewapproachtoaugmentingsensitivitytoradiationtherapyandchemotherapyinoralcancer畫amulticenterphaseI/IIclinicaltrial",Z^y"gascope113:2206-2217(2003))。局部給藥天然細(xì)胞因子混合物(包括IL-2)是另一條可行的治療OSCC的途徑。因此，存在測定并調(diào)節(jié)腫瘤的細(xì)胞浸潤中的關(guān)系的需求，特別是當(dāng)它們涉及用包括或誘導(dǎo)想要的免疫活性作用的天然衍生無血清和無促分裂原的混合物，使腫瘤浸潤單核細(xì)胞、提高CD4十/CD8+比值、提高腫瘤間質(zhì)/上皮比值，以及調(diào)整II類HLA在腫瘤細(xì)胞表面上的表達(dá)時(shí)。在OSCC傳統(tǒng)治療(外科手術(shù)、然后放射治療)之前，還有必要結(jié)合所述方法以及合適的劑量進(jìn)行新的免疫輔助治療，以得到所述治療的安全并有效的給藥。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明是基于一種方法，該方法通過用無血清且無促分裂原的白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧來改變腫瘤浸潤單核細(xì)胞的組成，提高CD4+ZCD8+比值、提高腫瘤間質(zhì)/上皮比值，并調(diào)節(jié)II類HLA在腫瘤細(xì)胞表面上的表達(dá)，所述無血清且無促分裂原的白細(xì)胞介素注射劑(LI)混合物或MuMkine⑧包括特定比例的細(xì)胞因子IL-ip與IL-2、TNF-a與IL-2、IFN-y與IL畫2，以及GM-CSF與IL畫2。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，所述用于改變腫瘤浸潤單核細(xì)胞的組成、提高CD4VCD8+比值、提高腫瘤間質(zhì)/上皮比值、并調(diào)節(jié)II類HLA在腫瘤細(xì)胞表面上的表達(dá)的方法涉及無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物，該無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物在約20IU至12000IU范圍內(nèi)一周給藥三次，持續(xù)兩周，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織(WorldHealthOrganization)的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中給出的白介素-2的國際單位。在另一實(shí)施方式中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物在約20IU至12000IU范圍內(nèi)一周給藥五次，持續(xù)三周，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中給出的白介素-2的國際單位。所述方法的特殊施用包括瘤周(peritumorally)給藥日總劑量的白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧，每周五(5)次，持續(xù)三(3)周。日總劑量以IL-2計(jì)可以為200、400、800、1200、1600、2400、3200、4800、8000、9600和12000IU/mL，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中給出的白介素-2的國際單位。在又一實(shí)施方式中，所述特殊應(yīng)用包括瘤周給藥半日總劑量的白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧，并淋巴管周(perilymphatically)給藥另一半日總劑量，每周五(5)次，持續(xù)三(3)周。日總劑量以IL-2計(jì)可以為200、400、800、1200、1600、2400、3200、4800、8000、9600禾卩l(xiāng)2000IU/mL，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中給出的白介素-2的國際單位。半日總劑量為瘤周劑量，其中瘤周劑量注射到腫瘤塊周圍的至少四個(gè)不同位點(diǎn)。因此，如果800IU/mL為日總劑量，400IU被瘤周注射到腫瘤塊的周圍四個(gè)不同位點(diǎn)，其中瘤周劑量的四分之一(1/4)被注射到四個(gè)位點(diǎn)中每個(gè)位點(diǎn)，由此每個(gè)位點(diǎn)接受大約以IL-2計(jì)的100IU/mL。LI被皮內(nèi)注射給藥在可視/可觸腫瘤塊的周緣邊界處。然而可以理解的是本發(fā)明將不限于四個(gè)位點(diǎn)，其中本發(fā)明可以考慮四個(gè)、或者多于或少于四個(gè)的位點(diǎn)。示范性的以IL-2計(jì)的總劑量800IU的剩余一半400IU，隨后被淋巴管周同側(cè)給藥至同樣就診的腫瘤位點(diǎn)。淋巴管周注射給藥至下頜區(qū)后面，在頸靜脈淋巴鏈的與已注射腫瘤塊同側(cè)的區(qū)域。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方式包括具有如下特定比值的細(xì)胞因子與白介素-2(IL-2)的白細(xì)胞介素注射劑(LI):IL-ip與IL-2的比值范圍為0.4-1.5，并優(yōu)選為0.7±0.1(IL-l卩/IL-2);TNF-a與IL-2的比值范圍為3.2-11.3，并優(yōu)選為9.5士1.8(TNF-oc/IL-2);IFN-y與IL-2比值范圍為1.5-10.9，并優(yōu)選為6.0±1.1(IFN-y/IL-2);以及GM-CSF與IL-2的比值范圍為2.2-4.8，并優(yōu)選為4.0士0.5(GM-CSF/IL-2)。在具體應(yīng)用中，所述無血清和無促分裂原的細(xì)胞因子制劑或藥物組合物還具有不同的細(xì)胞因子及其它生物活性小分子，其中各個(gè)所述生物活性小分子與IL-2的比值如下IL-3與IL-2的比值范圍為0.38-0.68，并優(yōu)選為0.53士0.15;IL-6與IL畫2的比值范圍為37.2-53.8，并優(yōu)選為46士5.9;IL-8與IL-2的比值范圍為261-561.5，并優(yōu)選至411±10.6;IL-la與IL-2的比值范圍為0.56-0.94，并優(yōu)選至0.75土0.19;IL-10與IL-2的比值范圍為2.82-3.22，并優(yōu)選為3.0士0.18;IL-16與IL-2的比值范圍為1.16-2.84，并優(yōu)選為1.84士0.68;G-CSF與IL-2的比值范圍為2.16-3.78，并優(yōu)選為2.97±0.81;TNF-(3與IL-2的比值范圍為1.17-2.43，并優(yōu)選為1.8士0,63;MIP-la與IL-2的比值范圍為15.7-37.16，并優(yōu)選為22.7士7.0;MIP-lp與IL-2的比值范圍為17.1-28.5，并優(yōu)選為22.8士5.7;RANTES與IL-2的比值范圍為2.3-2.7，并優(yōu)選為2.5士0.13;EGF與IL-2的比值范圍為0.267-0.283，并優(yōu)選為0.275士0.008;PGE2與IL-2的比值范圍為3.63-5.42，并優(yōu)選為4.5士0.87;和TxB2與IL-2的比值范圍為23.47-25.13，并優(yōu)選為24.3±0.83。IL-12是僅以痕量存在的，其中痕量定義為100pg/mL或者更少。在另一實(shí)施方式中，提供了用于調(diào)節(jié)II類HLA在腫瘤細(xì)胞表面上的表達(dá)的方法，該方法包括將無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物給藥至需要的患者，所述混合物包括特定比值的細(xì)胞因子，所述細(xì)胞因子選自由IL-ip、TNF-a、IFN-y、GM-CSF、白細(xì)胞介素-2(IL-2)所組成的組中，其中，所述IL-ip、TNF-a、IFN-y、GM-CSF與IL-2的特定比值為IL-1(3與IL-2的比值范圍為0.4-1.5;TNF-a與IL-2的比值范圍為3.2-11.3;IFN-y與IL-2的比值范圍為1.5-10.9;以及GM-CSF與IL-2的比值范圍為2.2-4.8。在另一實(shí)施方式中，提供了用于提高CD4VCD8+的比值的方法，該方法包括將無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物給藥至需要的患者，所述混合物包括特定比值的細(xì)胞因子，所述細(xì)胞因子選自由IL-1(3、TNF-a、IFN-y、GM-CSF、白細(xì)胞介素-2(IL-2)所組成的組中，其中，所述IL-ip、TNF-a、IFN-y、GM-CSF與IL-2的特定比值為IL-ip與IL-2的比值范圍為0.4-1.5;TNF-a與IL-2的比值范圍為3.2-11.3;IFN-y與IL-2的比值范圍為1.5-10.9;以及GM-CSF與IL-2的比值范圍為2.2-4.8。在另一實(shí)施方式中，提供了用于改變腫瘤浸潤單核細(xì)胞的組成的方法，該方法包括將無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物給藥至需要的患者，所述混合物包括特定比值的細(xì)胞因子，所述細(xì)胞因子選自由IL-ip、TNF-a、IFN-y、GM-CSF、白細(xì)胞介素-2(IL-2)所組成的組中，其中，所述IL-l卩、TNF-a、IFN，、GM-CSF與IL-2的特定比值為IL-ip與IL-2的比值范圍為0.4-1.5;TNF-a與IL-2的比值范圍為3.2-11.3;IFN-y與IL-2的比值范圍為1.5-10.9;以及GM-CSF與IL-2的比值范圍為2.2-4.8。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，提供了用于提高腫瘤間質(zhì)/上皮比值的方法，該方法包括將無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物給藥至需要的患者，所述混合物包括特定比值的細(xì)胞因子，所述細(xì)胞因子選自由IL-ip、TNF-cuIFN-Y、GM-CSF、白細(xì)胞介素-2(IL-2)所組成的組中，其中，所述IL-1(3、TNF-a、IFN-y、GM-CSF與IL-2的特定比值為IL-1(3與IL-2的比值范圍為0.4-1.5;TNF-a與IL-2的比值范圍為3.2-11.3;IFN-y與IL-2的比值范圍為1.5-10.9;以及GM-CSF與IL-2的比值范圍為2.2-4.8。本發(fā)明的其他目的和優(yōu)點(diǎn)在下列說明書中得到闡明。附圖及表格構(gòu)成公開的一部分，與說明書一起圖解并解釋本發(fā)明的原理。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，通過參考附圖和以下詳細(xì)的描述，本發(fā)明的其他方面將變得很明白。參考附圖，通過以下描述和具體實(shí)施方式，本發(fā)明將得到更詳細(xì)的解釋圖1為經(jīng)過白細(xì)胞介素(LI)注射劑預(yù)處理的口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌(OSCC)中腫瘤的免疫組織化學(xué)CD4+染色，其中的條(bar)=100|im;圖2為OSCC間質(zhì)對照樣品中T-細(xì)胞的免疫組織化學(xué)CD8+染色，其中的條(bar)=100)im;圖3為顯示CD4+和CD8+的T-細(xì)胞在間質(zhì)中的密度變化的圖表，其中，CTR=對照、未處理的(n=20)，Non-resp吒I-處理的無應(yīng)答者a(n=ll)，Resp二LI-處理的應(yīng)答者b(『6)，以及數(shù)據(jù)為平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差，*=p<0.05;圖4為顯示CD4+和CD8+的T-細(xì)胞在上皮內(nèi)的密度變化的圖表，其中，CTR=對照、未處理的(n=20)，Non-resp《I-處理的無應(yīng)答者a(n=ll)，Resp二LI-處理的應(yīng)答者b(『6)，以及數(shù)據(jù)為平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差，*=p<0.05;圖5為顯示004+/0)8+比值的圖表，其中，0111=對照、未處理的(11=20)，Non-resp《I-處理的無應(yīng)答者a(n=ll)，Resp=0-處理的應(yīng)答者b(n=6)，以及數(shù)據(jù)為平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差，*=p<0.05;圖6為顯示OSCC細(xì)胞CD25/IL-2R+在間質(zhì)和上皮內(nèi)的密度的圖表，其中，CTR二對照、未處理的(n=20)，Non-resp《I-處理的無應(yīng)答者a(n=ll)，Resp二LI-處理的應(yīng)答者b(『6)，以及數(shù)據(jù)為平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差，*=p<0.05;圖7為顯示OSCC細(xì)胞內(nèi)OX40+細(xì)胞在間質(zhì)和上皮內(nèi)的密度的圖表，其中，CTR4寸照、未處理的(n=20)，Non-resp二LI-處理的無應(yīng)答者a(n=ll)，Resp二LI-處理的應(yīng)答者b(『6)，以及數(shù)據(jù)為平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差，*=p<0.05;圖8為顯示OSCC內(nèi)CD45R0+細(xì)胞在間質(zhì)和上皮內(nèi)的密度的圖表，其中，CTR4寸照、未處理的組(n=20)，Non-resp《I-處理的無應(yīng)答者a(n=ll)，Resp二LI-處理的應(yīng)答者b(n=6)。數(shù)據(jù)為平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差；在LI處理過的組中所觀察到的變化在統(tǒng)計(jì)學(xué)上不顯著；圖9為顯示由CDla免疫反應(yīng)檢測的OSCC樣品內(nèi)樹突狀細(xì)胞密度的圖表，其中腫瘤區(qū)Rl-表面區(qū)域，R2,中瘤中心，113=腫瘤-間質(zhì)界面；其中，CTI^對照、未處理的組(n=20)，Non-resp二LI-處理的無應(yīng)答者a(n=ll)，Resp二LI-處理的應(yīng)答者b(『6)，以及數(shù)據(jù)為平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差，*=p<0.05;圖10為顯示由CD68免疫反應(yīng)檢測的OSCC樣品內(nèi)巨噬細(xì)胞在間質(zhì)和上皮中的密度的圖表，其中，CTR^對照、未處理的組(11=20)，Non-resp=LI-處理的無應(yīng)答者a(n=ll)，Resp二LI-處理的應(yīng)答者b(n=6)，以及數(shù)據(jù)為平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差，*=p<0.05;圖11為免疫組織化學(xué)染色，用髓過氧物酶免疫組織化學(xué)(紅色)，表明對照樣品上皮內(nèi)中性粒細(xì)胞的定位，其中的條(bar)=100^im;圖12為免疫組織化學(xué)染色，用髓過氧物酶免疫組織化學(xué)(紅色)，表明LI處理過的樣品上皮內(nèi)中性粒細(xì)胞的定位，其中的條(bar)=100pm;圖13為顯示OSCC樣品中中性粒細(xì)胞密度的圖表，其中，CTR^對照、未處理的組(n=20)，Non-resp二LI-處理的無應(yīng)答者a(n=ll)，Resp:LI-處理的應(yīng)答者b(『6)，以及數(shù)據(jù)為平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差，*=p<0.05;圖14為OSCC對照樣品H&E染色的石蠟切片的彩色顯微照片，顯示出OSCC對照樣品沒有任何壞死事件，其中所述的條(bar)=500pm;圖15為OSCC、LI處理過的樣品的H&E染色的石蠟切片彩色顯微照片，顯示出誘導(dǎo)的顯微上皮細(xì)胞的壞死，其中所述的條(bar)=50(Vm;圖16為未處理的對照OSCC中膠原間質(zhì)的彩色顯微照片，顯示出瘤周纖維膠原邊緣；所述的條(bar)=200pm，所述腫瘤間質(zhì)在藍(lán)色區(qū)域內(nèi)表明；圖17為LI處理過的OSCC的OSCC中膠原間質(zhì)的彩色顯微照片，顯示出癌細(xì)胞巢之間膠原纖維的積累；所述的條(bar)=200pm，所述腫瘤間質(zhì)在藍(lán)色區(qū)域內(nèi)表明；圖18為以間質(zhì)的面積百分比顯示OSCC膠原間質(zhì)的形態(tài)測定法的圖表，其中，CTR=對照、未處理的組(n=20)，Non-resp二LI-處理的無應(yīng)答者a(n=ll)，Resp-LI-處理的應(yīng)答者b(n=6)。數(shù)據(jù)為平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差，*=p<0.05。aLI-處理過的無應(yīng)答者在可觸及腫瘤的最長極以及在垂直于最長方向的最寬點(diǎn)通過體格檢査測定的，與基線腫瘤體積(面積)減少相比，LI-處理過的晚期口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌患者對治療的身體應(yīng)答<30%。bLI-處理過的應(yīng)答者二LI-處理過的晚期口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌患者按照上述a測量的腫瘤體積(面積)下降>50%。具體實(shí)施方式本發(fā)明是關(guān)于一種方法，該方法通過用無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物來改變腫瘤浸潤單核細(xì)胞的組成、提高004+化08+的比值、提高腫瘤間質(zhì)/上皮的比值，并調(diào)節(jié)II類人類白細(xì)胞抗原在腫瘤細(xì)胞表面上的表達(dá)。所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物包括具有特定比例的IL-lp與IL-2、TNF-a與IL-2、IFN-y與IL-2、以及GM-CSF與IL-2。這樣的新型細(xì)胞因子組合物之一為白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧，它們的免疫調(diào)節(jié)能力已經(jīng)得到證實(shí)。癌癥患者中免疫抑制的臨床顯著性意外地影響了腫瘤浸潤單核細(xì)胞的組成、CD4+ZCD8+的比值、腫瘤間質(zhì)/上皮的比值以及II類HLA在腫瘤細(xì)胞表面上的表達(dá)。特別是最初用LI治療頭頸癌的患者中，瘤周給藥200、400、800、1200、1600、2400、3200、4800、8000、9600以及12000IU/mL劑量的白細(xì)胞介素注射劑(LI)，每周三次(3)，持續(xù)兩周，或者每周五次(5)，持續(xù)三(3)周，改變了腫瘤浸潤單核細(xì)胞的組成、提高了CD4+ZCD8+的比值、提高了腫瘤間質(zhì)/上皮的比值，并調(diào)節(jié)了II類人類白細(xì)胞抗原在腫瘤細(xì)胞表面上的表達(dá)。在癌癥治療過程中，瘤周劑量可以通過注射以IL-2計(jì)100IU/mL至腫瘤塊周圍四個(gè)不同位點(diǎn)來完成其中400IU/mL瘤周注射的示例性800IU/mL總劑量，四個(gè)位點(diǎn)中的每一位點(diǎn)被注射四分之一(1/4)的瘤周劑量。然后將剩余的總劑量的一半同側(cè)淋巴管周給藥至同樣就診的腫瘤位點(diǎn)。淋巴管周注射給藥至下頜區(qū)后面的一個(gè)位點(diǎn)，在頸靜脈淋巴鏈的與已注射腫瘤塊同側(cè)的區(qū)域。定義IL-2——白介素2(IL-2):由CD4+輔助T淋巴細(xì)胞合成的15.5kD糖蛋白(正式公知為T細(xì)胞生長因子)。IL-2具有自分泌功能，作用于產(chǎn)生IL-2的CD4+T淋巴細(xì)胞，并作用于其他免疫系統(tǒng)細(xì)胞(包括B-淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞、NK[自然殺傷]細(xì)胞及其它)。IL-1(3——白介素1(3(IL-1(3):由激活的單核巨噬細(xì)胞合成的17kD細(xì)胞因子，在循環(huán)中發(fā)現(xiàn)三種游離形態(tài)，并介導(dǎo)炎癥應(yīng)答。它作用于CD4+T淋巴細(xì)胞以幫助它們增殖，并作為生長和分化因子作用于B-淋巴細(xì)胞。它還可以誘導(dǎo)單核吞噬細(xì)胞合成IL-6。TNF-a-腫瘤壞死因子a(TNF-(x):157個(gè)氨基酸殘基的蛋白，通過刺激單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞而合成，在循環(huán)中發(fā)現(xiàn)為微調(diào)形式(trimmericform)。TNF介導(dǎo)直接的抗腫瘤活動(dòng)，引起腫瘤細(xì)胞裂解，有助于淋巴細(xì)胞復(fù)原，誘導(dǎo)血管生成和促進(jìn)纖維增殖。IFN-y——干擾素y(IFN-y):由激活的T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞合成的21-24kD糖蛋白同型二聚體，是單核細(xì)胞強(qiáng)大的激活劑，增強(qiáng)單核細(xì)胞破壞細(xì)胞內(nèi)微生物和腫瘤細(xì)胞的能力。它具有直接的抗病毒和抗增殖活性，并因此引起許多細(xì)胞類型表達(dá)II類主要組織相容性復(fù)合體(MHC)細(xì)胞表面分子復(fù)合體，以及增強(qiáng)I類MHC的表達(dá)。GM-CSF——粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF):127個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì)，在循環(huán)中作為單體被發(fā)現(xiàn)，由巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞產(chǎn)生。它是造血細(xì)胞的生長因子，并刺激骨髓單核細(xì)胞系的生長和分化。IL-3——白介素-3(IL-3):由激活的CD4+T輔助淋巴細(xì)胞合成的20kD淋巴因子，擔(dān)當(dāng)集落刺激因子，促進(jìn)一些造血細(xì)胞的增殖，并促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的增殖和分化。IL-6——白介素-6(IL-6):由激活的T淋巴細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞以及成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的26kD細(xì)胞因子。它作用于許多細(xì)胞，但具有特定作用能夠使激活的B-淋巴細(xì)胞分化成抗體分泌漿細(xì)胞，誘導(dǎo)肝細(xì)胞形成急性期蛋白質(zhì)(在炎癥應(yīng)答時(shí))以及纖維蛋白素原。IL-8——白介素-8(IL-8):由巨噬細(xì)胞和上皮細(xì)胞產(chǎn)生的8kD蛋白質(zhì)，是一種強(qiáng)有力的用于中性粒細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的趨化因子，并有利于使中性粒細(xì)胞粘連于內(nèi)皮細(xì)胞。IL-la——白介素la(IL-la):從33kD前體分子之中裂解下來的17kD的細(xì)胞因子(類似于IL-1(3)，由激活的單核吞噬細(xì)胞產(chǎn)生，在循環(huán)中很少發(fā)現(xiàn)其游離形式，充當(dāng)膜相關(guān)物質(zhì)。其加速IL-1(3介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。IL-10——白介素-10(IL-10):由CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、激活的B淋巴細(xì)胞以及角質(zhì)化細(xì)胞產(chǎn)生的18kD多肽。它抑制巨噬細(xì)胞呈遞抗原的能力，特別是抑制向I型THl-型細(xì)胞呈遞抗原，并抑制巨噬細(xì)胞分泌IL-6和TNF的能力。IL-16——白介素-16(IL-16):由CD8+T淋巴細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞、肥大細(xì)胞和呼吸器官上皮細(xì)胞產(chǎn)生的14kD四聚體蛋白。它具有強(qiáng)有力的對CD4+T淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的化學(xué)誘導(dǎo)性質(zhì)。G-CSF——粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF):由巨噬細(xì)胞、上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的22-25kD同型二聚體糖蛋白。它增加骨髓中粒細(xì)胞的祖細(xì)胞，并持續(xù)增加血液中的中性粒細(xì)胞。它還提高中性粒細(xì)胞的提高過氧化物產(chǎn)物的能力，所述過氧化物產(chǎn)物被認(rèn)為在破壞受微生物感染的細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中起重要作用。TNF-(3——腫瘤壞死因子卩(TNF-|3):由活化的淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的25kD蛋白質(zhì)。它能殺死培養(yǎng)物中的腫瘤細(xì)胞，并剌激成纖維細(xì)胞增殖。另外它模擬TNF-a的大多數(shù)其他活動(dòng)。MIP-la——巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-la(MIP-kx):由巨噬細(xì)胞和其他細(xì)胞產(chǎn)生的66個(gè)氨基酸的單一亞基蛋白質(zhì)。它是單核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和嗜酸性細(xì)胞的化學(xué)引誘物。RANTES——由T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的8kD蛋白，是單核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和嗜酸性細(xì)胞的化學(xué)引誘物，并且促進(jìn)炎癥。EGF——表皮生長因子(EGF):53個(gè)氨基酸殘基多肽的三硫酸鹽。EGF是酪氨酸激酶家族的成員，并且具有包括刺激有絲分裂反應(yīng)和輔助創(chuàng)傷愈合在內(nèi)的多重功能。PGE2——前列腺素E2(PGE2):PGE2屬于通過環(huán)氧合酶酶促反應(yīng)得自花生四烯酸的生物活性脂類家族。它由激活的單核細(xì)胞釋放，并阻斷T淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的II類MHC表達(dá)。TxB2——促凝血素B2(TxB2):TxB2是通過前列腺素異構(gòu)化以及內(nèi)過氧化酶PGH2經(jīng)過凝血噁浣合成酶得自多不飽和脂肪酸的生物活性化合物成員。TxB2在血栓栓塞性疾病和過敏反應(yīng)起生理學(xué)作用。CD25+細(xì)胞——CD25是單鏈糖蛋白，通常是指白介素-2-受體(IL-2R)的(x鏈或Tac抗原，分子量為55kDa，存在于激活的T-細(xì)胞和B-細(xì)胞以及激活的巨噬細(xì)胞上。它起到IL-2受體的作用。與IL-2R的p-鏈一起，CD25抗原形成IL-2的高親和力受體復(fù)合物。HLA-DR+淋巴細(xì)胞——包含人白細(xì)胞抗原(HLA)-DR抗原的淋巴細(xì)胞，通過發(fā)現(xiàn)于人類中主要組織相容性座位的染色體6上淋巴細(xì)胞基因座中的固著序列(glues叫uence)測定出的一組多態(tài)糖蛋白。IU(國際單位)--種通過與比重或強(qiáng)度的國際標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較來測量生物制劑效能的單位，例如世界衛(wèi)生組織關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504。國際單位是報(bào)道生物活性單位的唯一公認(rèn)且標(biāo)準(zhǔn)化的方法，并且得自國際合作者的努力研究。U(生物活性的測量單位)——許多命名為"單位"的速記法，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室導(dǎo)出一種作為參照，因進(jìn)行工作的實(shí)驗(yàn)室而更獨(dú)特。每一"單位"在實(shí)驗(yàn)室之間不同，不像國際單位(IU)是得到全球公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)。USP-美國藥典專題文章(U.S.PharmacopeiaMonograph)。尸——"p<0.01":數(shù)理統(tǒng)計(jì)學(xué)術(shù)語，表明在預(yù)設(shè)的條件下發(fā)生一個(gè)事件的概率水平。ANOVA(變量分析)——單因素分析，如統(tǒng)計(jì)學(xué)和數(shù)學(xué)課本中所述，例如，"HandbookofStatisticalMethodsforEngineersandScientists",HarrisonM.Wadsworth,Jr.,Ed.，McGrawHill1990禾口"StatisticalOperationsAnalysisofHealthResearchData",RobertP.HirschandRichardK.Riegelman,Eds.BlackwellScienceInc.,1996。卡方(5C2)分布——考慮獨(dú)立標(biāo)準(zhǔn)正常隨機(jī)變量的平方和所產(chǎn)生的樣本變量分析。其中獨(dú)立標(biāo)準(zhǔn)正常隨機(jī)變量的平方加在一起得出自由度為n的卡方(x2)分布。白細(xì)胞介素注射劑(LI)在制備過程中，通過分級梯度離心從人類供體的"血沉棕黃層(buffycoat)"分離出單核細(xì)胞，并在培養(yǎng)基中用PHA培養(yǎng)該單核細(xì)胞以提高IL-2和得自供體白細(xì)胞的其它細(xì)胞因子的產(chǎn)量和分泌，如US5,093,479、US4,390,623、US4,388,309、US4,406,830、US4,661,447、US4,681,844禾口US4,464,355中所公開的，所有上述專利在此一并引入作為參考。隨后，無菌收獲培養(yǎng)物上清液，使之澄清，并經(jīng)受商業(yè)化病毒排除過程。然后將所述上清液通過超濾法和微量過濾法進(jìn)一步濃縮大約10倍。此時(shí)，加入U(xiǎn)SP注射用人血清白蛋白，然后將濃縮物緩沖至生理學(xué)pH，并復(fù)元至每指示物要求的靶IL-2濃度(例如400IU/mL)。接著所述濃縮物經(jīng)受第二次微過濾(0.22微米的額定過濾器)，無菌分裝至無菌血清型管形瓶(vial)并用其IL-2含量標(biāo)記。通過將放射標(biāo)記的脫氧胸腺嘧啶苷摻入到細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞系(CTLL-2)，測量產(chǎn)物效能。最終可注射劑通過ELISA進(jìn)一步測試五種標(biāo)記物細(xì)胞因子的存在IL-2、IL-ip、GM-CSF、IFN-y和TNF-a。提供的白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧冷凍在硼硅玻璃血清管形瓶中，每瓶含有2.2mL的藥，在標(biāo)記要求下以IL-2計(jì)(400IU/mL)用于瘤周、瘤內(nèi)、淋巴管周或皮下給藥。白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧經(jīng)受同一性、無菌、細(xì)菌內(nèi)毒素、pH以及總蛋白濃度的質(zhì)量控制測試。對每一瓶進(jìn)行微粒污染和外觀檢查。制劑的總蛋白含量為3mg/L，其中，提供的原料無菌且無熱原。白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧具有特定有效期，當(dāng)所述藥品在-20'C下儲(chǔ)存時(shí)，自制備之日起24個(gè)月。在LI中有三個(gè)細(xì)胞因子"家族"，它們一起對LI的獨(dú)特生物學(xué)活性非常重要。它們可以直接包括細(xì)胞毒素/細(xì)胞生長抑制和殺病毒毒素/抑制病毒生長的細(xì)胞因子諸如TNF-a和IFN-y，淋巴組織增生的細(xì)胞因子諸如IL-1和IL-2，以及趨化性細(xì)胞因子諸如IL-6、IL-8和MIP-kx。然而，應(yīng)當(dāng)明確注意的是，本發(fā)明的上述理論或者其他在本專利中表述的理論都不能限制權(quán)利要求的范圍。構(gòu)成LI的不同細(xì)胞因子和小生物分子都得自凝集素(PHA)對人外周血單核細(xì)胞的體外刺激，所述人外周血單核細(xì)胞包括T細(xì)胞、B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在菲科帕克(Ficoll-Paque)上梯度離心從供體全血中分離白細(xì)胞(包括T細(xì)胞、B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)，并經(jīng)過一系列洗滌(在生理學(xué)緩沖液介質(zhì)中)以利于淋巴細(xì)胞的分離，以及從分離的供體全血的白細(xì)胞成分中去除紅細(xì)胞、細(xì)胞碎片和其他不需要的細(xì)胞成分。白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧使用特征方案測試，并且不含有下列細(xì)胞因子和其他生物活性小分子IL-4、IL-7和IL-15、TfR、sICAM、PDGF-AB、IFN-a、EPO、LTC4、TGF-(32、堿性FGF、血管生成因子、sE-選擇蛋白、SCF和LIF。LI只含有痕量(剛剛在檢測的檢出水平之上)的IL-12禾口LTB4。白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧還可以與一種或幾種藥物可接受載體或輔劑一起在預(yù)防上或在治療上用作免疫調(diào)節(jié)組合物的成分。當(dāng)供給在預(yù)防上使用時(shí)，在任何感染或疾病的證據(jù)之前提供所述免疫調(diào)節(jié)組合物。而LI很可能以純的或者基本上純的形式給藥，藥物組合物、配方(formulation)或制劑(preparation)也可以得到應(yīng)用。本發(fā)明的既用于臨床試驗(yàn)又用于人類使用的配方含有如上所述的LI以及一種或幾種藥物上可接受的載體，并選擇性地含有其他治療成分，特別是治療免疫佐劑。所述載體必須為"可接受"，其意義是與配方中其他成分相容，并且對其受體無害。大體上，通過如下步驟制備所述配方一致并細(xì)致地使活性成分與液體載體或者細(xì)裂固體載體或者它們兩者進(jìn)行結(jié)合，然后如果必要，將產(chǎn)物制成想要的配方。這里所用的術(shù)語"藥物上可接受的載體"是指任何載體、稀釋劑、賦形劑、懸浮劑、潤滑劑、輔劑、媒介物(vehicle)、傳遞系統(tǒng)、乳化劑、崩解劑、吸收劑、防腐劑、表面活性劑、著色劑或甜味劑。所述配方可以方便地為單位劑量的形式，還可以通過公知的藥物領(lǐng)域中的任何方法制備。適合于靜脈內(nèi)給藥、肌內(nèi)給藥、皮下給藥或腹膜內(nèi)給藥、鼻給藥等的配方適宜包括活性成分的無菌水溶液，其中優(yōu)選與受體的血等滲的溶液。本發(fā)明的化合物還可以口服給藥、腸胃外給藥、通過吸入噴霧給藥、局部給藥、經(jīng)直腸給藥、口腔給藥、陰道給藥或者通過植入性藥盒給藥，在劑量配方中含有常規(guī)無毒藥物上可接受的載體、輔劑和媒介物。這里所用的術(shù)語腸胃外給藥(parenteral)包括皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、胸骨內(nèi)，以及顱內(nèi)注射或者注入技術(shù)。所述配方可以通過將固體活性成分溶解于含有生理學(xué)相溶性物質(zhì)的水中而方便地制備，所述生理學(xué)相溶性物質(zhì)比如氯化鈉(例如0.1-2.0M)、甘氨酸等，所述水具有與生理?xiàng)l件相容的緩沖的pH以產(chǎn)生水性溶液并使溶液無菌。這些可以存在于單劑或多劑容器中，例如密封的安瓿瓶或管狀瓶。本發(fā)明的化合物還能夠以無菌可注射制劑的形式給藥，例如，作為無菌可注射水懸浮液或者油懸浮液。所述懸浮液可以根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法使用合適的分散或濕潤劑以及懸浮劑而制得。所述無菌可注射制劑還可以為無菌可注射溶液或懸浮液，在無毒腸胃外可接受稀釋劑或溶劑中，例如作為在1,3-丁二醇中的溶液。在可接受的媒介物中，可以使用的溶劑為水、林格氏溶液(Ringer'ssolution)以及等滲氯化鈉溶液。此外，無菌不揮發(fā)油經(jīng)常用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為此目的，任何溫和不揮發(fā)油都可以使用，包括合成的單或雙甘油酯。諸如油酸的脂肪酸及其甘油酯衍生物，包括橄欖油和蓖麻油，特別是以它們的聚氧乙烯化的形式，可以用于可注射制劑。這些油溶液或者懸浮液還可以含有長鏈醇稀釋劑或分散劑。本發(fā)明的化合物還可以局部給藥，特別是當(dāng)說明狀態(tài)的治療涉及容易通過局部施用接近的區(qū)域或器官時(shí)，包括眼、皮膚的紊亂或者更低等的消化道。對于每一種上述區(qū)域，容易制備合適的局部配方。為了局部施用于眼或眼的用途，所述化合物可以配制成在等滲、調(diào)節(jié)pH的無菌鹽水中微粒化的懸浮液，或者優(yōu)選作為在等滲、調(diào)節(jié)pH的無菌鹽水中的溶液，可以有或沒有防腐劑諸如苯扎氯銨。Multikine⑧的眼的應(yīng)用還可以制成軟膏例如凡士林。為了局部施用于皮膚，所述化合物可以配制成含有懸浮或溶解在一種混合物中的化合物的合適的軟膏，其中所述混合物含有以下物質(zhì)中的一種或幾種礦物油、液體石蠟、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、乳化蠟和水?？蛇x地，所述化合物可以配制成含有活性化合物的合適的洗液或乳膏，所述活性化合物懸浮或溶解在以下一種或幾種物質(zhì)的混合物中礦物油、脫水山梨醇單硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蠟、十六十八醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水?？梢耘c載體材料結(jié)合產(chǎn)生單劑型的活性成分的量隨待治療宿主和特定給藥方式而變化。一些因素包括被使用的特定化合物的活性，患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別以及飲食；給藥時(shí)間、排出率、藥物合用，以及被治療的特殊疾病的嚴(yán)重度和給藥形式。藥學(xué)方法還可以用于控制活性作用的持續(xù)時(shí)間?？梢酝ㄟ^將聚合物使用至復(fù)合物或吸收肽而得到控釋制劑。受控給藥通過選擇合適的大分子(例如，聚酯、聚氨基酸、聚乙烯、吡咯烷酮、乙烯-醋酸乙烯酯、羧甲基纖維素、硫酸魚精蛋白)、大分子的濃度以及摻入方法來實(shí)現(xiàn)，以控制釋放。例如，白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧可以被摻入疏水聚合物基質(zhì)中，用于在一定天數(shù)內(nèi)控制釋放。這樣的控釋薄膜為本領(lǐng)域公知。特別優(yōu)選經(jīng)皮給藥系統(tǒng)。其他用于此目的的常用聚合物實(shí)例可以用于本發(fā)明，包括可以外部或內(nèi)部使用的非降解乙烯-醋酸乙烯酯共聚物和可降解乳酸-乙醇酸共聚物。特定水凝膠例如聚(羥乙基甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇)也可以使用，但是比其他聚合物釋放系統(tǒng)的釋放循環(huán)短，例如上面所述的?？蛇x地，除了向所述藥物中摻入聚合物顆粒外，還可以將所述材料裝入制成的微膠囊中，例如，分別通過凝膠技術(shù)或通過界面聚合作用，比如羥基甲基纖維素或明膠微膠囊以及聚甲基丙烯酸甲酯微膠囊，或者在膠體藥物給藥系統(tǒng)中，例如脂質(zhì)體、白蛋白微球體、微乳劑、納米粒和納米微囊或者在粗乳液中。為了有效治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)靶，白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧應(yīng)當(dāng)在周圍給藥時(shí)也容易穿過血腦屏障。不能穿過血腦屏障的化合物可以通過心室內(nèi)途徑或者其他合適的適于腦給藥的給藥系統(tǒng)而有效給藥。白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧還可以以試劑盒的形式單獨(dú)提供，或者如上所述的藥物組合物的形式提供。LI的給藥可以通過常規(guī)方法進(jìn)行。例如，LI能用在適當(dāng)?shù)南♂寗┲欣缟睇}水或者水，或者完全佐劑或不完全佐劑。LI可以通過任何適合于免疫系統(tǒng)激活的途徑給藥，例如靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、鼻、口腔、直腸、陰道等。如上面所記載的，白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧可以用于預(yù)防或治療目的。當(dāng)供給在預(yù)防上使用時(shí)，在任何歸因于疾病的證據(jù)或歸因于疾病的任何癥狀之前提供LI。當(dāng)供給在治療上使用時(shí)，LI在疾病或者疾病的任何癥狀發(fā)作時(shí)(或發(fā)作后)提供。LI的治療給藥起到減輕疾病和提高常規(guī)治療效果的作用。白細(xì)胞介素注射劑(LI)或MuWkine⑧的作用方式和特征白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧為天然來源天然產(chǎn)生的人細(xì)胞因子的生物活性的、毒性最小的、免疫調(diào)節(jié)混合物，所述細(xì)胞因子在上述條件下產(chǎn)生。LI能用作抗癌和抗病毒治療或者作為新輔助方法用于癌癥、傳染病以及其他應(yīng)答免疫調(diào)節(jié)的疾病狀態(tài)的廣譜應(yīng)用。動(dòng)物研究證明"混合的白介素"在體外具有免疫調(diào)節(jié)和免疫刺激活性(Haddenetat,"MixedInterleukinsandThymosinFractionVSynergisticallyInduceTLymphocyteDevelopmentinHydrocortisone-TreatedAgedMice",Ce〃./wmmo/.144:228-236(1992))。并非限制于任何一種理論，其假設(shè)局部/區(qū)域注射"混合的白介素"克服局部免疫抑制。隨后，發(fā)生對腫瘤抗原的耐受性中斷，允許產(chǎn)生有效的局部抗腫瘤免疫應(yīng)答。如Golumbek等在"TreatmentofEstablishedRenalCancerbyTumorCellsEngineeredtoSecreteInterleukin-4"，Science254:713-716(1991)中所報(bào)道的，還已公知在腫瘤區(qū)域局部滴注白介素或者將白介素基因?qū)嶋H轉(zhuǎn)染至腫瘤中顯著增加抗腫瘤免疫應(yīng)答，從而導(dǎo)致腫瘤退化。一種假設(shè)是LI作用方式涉及在LI中存在的不同細(xì)胞因子的組合活性誘導(dǎo)級聯(lián)事件。第一，在LI中存在的腫瘤壞死因子例如TNF-a攻擊腫瘤，以釋放腫瘤抗原。第二，抗原呈遞細(xì)胞(例如樹狀突細(xì)胞)將新釋放的腫瘤抗原轉(zhuǎn)運(yùn)至淋巴結(jié)。第三，在瘤周給藥和淋巴管周給藥的LI中存在的淋巴組織增生細(xì)胞因子，例如IL-1、IL-2在淋巴結(jié)中誘導(dǎo)標(biāo)記的最初腫瘤特異性T細(xì)胞多克隆擴(kuò)增。第四，LI通過趨化性因子從局部淋巴結(jié)中召集CD4+T-細(xì)胞，恢復(fù)瘤內(nèi)CD4+/CD8+細(xì)胞平衡有利于CD4+T-細(xì)胞，進(jìn)一步正調(diào)節(jié)抗腫瘤免疫應(yīng)答，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞壞死。第五，LI通過也存在于LI中的GM-CSF從循環(huán)中召集中性白細(xì)胞,，其擴(kuò)大對腫瘤細(xì)胞巢的破壞。第六，LI-衍生的細(xì)胞因子或腫瘤浸潤細(xì)胞新形成的細(xì)胞因子產(chǎn)物都誘導(dǎo)大塊局部纖維化。非常出乎意料的是，白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧在外科手術(shù)治療前的給藥導(dǎo)致在細(xì)胞周期階段的腫瘤細(xì)胞數(shù)量增加，腫瘤更快速生長和更快速復(fù)發(fā)腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)并沒有增加，否則本領(lǐng)域?qū)⒛茴A(yù)測。LI表現(xiàn)出獨(dú)特的誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期的能力，可能是由于該試驗(yàn)藥中存在的不同細(xì)胞因子的協(xié)同效應(yīng)，以及這些細(xì)胞因子在宿主免疫系統(tǒng)和腫瘤細(xì)胞中的不同作用(Timaretal，"TheeffectofLeukocyteInterleukin,Injectionontheperi-andintratumoralsubpopulationofmononuclearcellsandontumorepithelia-Apossiblenewapproachtoaugmentingsensitivitytoradiationandchemotherapyinoralcancer.Amulti-centerPhaseI/IIclinicaltrial",7Tze丄ary"gosco/e(2003))。關(guān)于在外科手術(shù)前用白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧治療的患者復(fù)發(fā)率的數(shù)據(jù)表明，在用LI治療后的24個(gè)月沒有癌癥復(fù)發(fā)。值得注意的是，一小群8名連續(xù)治療的患者中在接下來的24個(gè)月內(nèi)沒有一例復(fù)發(fā)患者。完全相反，文獻(xiàn)教導(dǎo)相似患者在治療后的18-24個(gè)月的復(fù)發(fā)率在約50%。特別地，白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧治療不會(huì)誘導(dǎo)存在于腫瘤中的淋巴樣細(xì)胞的活性增殖。相應(yīng)地，在LI治療之后，當(dāng)Ki-67+癌細(xì)胞的頻率增加時(shí)，間質(zhì)Ki-67+細(xì)胞減少。因此，LI治療誘導(dǎo)周期性腫瘤數(shù)目增加，導(dǎo)致剩余腫瘤對經(jīng)過一段時(shí)間再繼續(xù)的放射治療和/或化學(xué)治療的易感性提高。雖然用兩種天然和重組細(xì)胞因子進(jìn)行的其他研究已經(jīng)顯示在腫瘤治療的功效，但是這些研究未能教導(dǎo)誘導(dǎo)進(jìn)入細(xì)胞周期或者將LI與化療、免疫療法和放療療法協(xié)同結(jié)合的新方法(Timaretal.,"TheeffectofLeukocyteInterleukin,Injectionontheperi-andintratumoralsubpopulationofmononuclearcellsandontumorepithelia-Apossiblenewapproachtoaugmentingsensitivitytoradiationandchemotherapyinoralcancer.Amulti-centerPhaseI/IIclinicaltrial",77e丄ar戸goscope(2003))。例如，研究天然人類和重組IL-2和其他細(xì)胞因子的用途以及在局部區(qū)域的治療證明在多種位點(diǎn)的免疫增進(jìn)和抗癌活性。特別地，IL-2證明在胸膜腔、肝和膀胱中的活性，而IFN-a證明在卵巢中的活性，IFN-P證明在腦中的活性(Yasumotoetal.,"Inductionoflymphokine-activatedkillercellsbyintrapleuralinstillationsofrecombinantinterleukin-2inpatientswith,malignantpleurisyduetolungcancer",Ca"cer47:2184-7(1987);Mavilgitetal,"Splenicversushepaticarteryinfusionofinterleukin-2inpatientswithlivermetastases",/C7/"(9wco/8:319-24(1990);Pizzaetal,"Tumorregressionafterintralesionalinjectionofinterleukin-2(EL-2)inbladdercancer.Preliminaryreport",/"Zj"Ca"cer34:359-67(1984);Bereketal,"Intraperitonealrecombinanta-interferonfor"salvage"immunotherapyinstageIIIepithelialovariancancer:agynecologiconcologygroupstudy",Ca"cer45:4447-53(1985);禾口Fetteletal.,"Intratumoradministrationofbeta-interferoninrecurrentmalignantgliomas-AphaseIclinicalandlaboratorystudy",Ca"cer65:78-83(1990))。甚至進(jìn)一步IFN-Y已經(jīng)顯示出在皮膚中的活性，而TNF-a顯示出在生殖器中的活性，而多種細(xì)胞因子的混合物在頭頸中顯示活性(Edwardsetal.,"Theeffectofintralesionalinterferongammaonbasalcellcarcinomas",/」ca<ii)e，ato/22:496-500(1990);Irieetal.，"Acaseofvulvacancerrespondingtotherecombinanthumantumornecrosisfactor(PT-950)localinjectiontherapy",iVbi/m^o34:946-50(1988);禾口Pulleyetal""Intravenous,intralesionalandendolymphaticadministrationoflymphokinesinhumancancer",丄，//z5:S157-63(1986))。并且，在外科手術(shù)前的10天在頸淋巴管周或者頸淋巴管周和在下頦下給藥重組IL-2的研究表現(xiàn)出可變的壞死和淋巴細(xì)胞性浸潤(Valenteetal.，"InfiltrationleukocytepolulationsandT-lymphocytesubsetsinheadandnecksquamouscellcarcinomasfrompatientsreceivingperilymphaticinjectionsofrecombinantinterleukin-2",^Moc/PaAo/3:702-8(1990);DeStefanietal，"Treatmentoforalcavityandoropharynxsquamouscellcarcinomawithperilymphaticinterleukin-2:clinicalandpathologiccorrelations",7Vw附Mwc^/zer19:125-33(1996))。此外，已切除的腫瘤顯微檢査表明與IL-2臨床觀察有關(guān)的淋巴細(xì)胞浸潤增力口(Saitoetal,"Immunohistologyoftumortissueinlocaladministrationofrecombinantinterleukin-2inheadandneckcancer",A^Ga躍a/Ka/Zzo92:1271-6(1989))。雖然如此，上述研究中沒有一個(gè)表現(xiàn)出切除腫瘤的任何總體積變化，盡管在20名頭頸癌患者中推定高劑量重組IL-2(800,000U，持續(xù)四周[U-單位])存在兩禾中減輕(Saitoetal,"ClinicalevaluationoflocaladministrationofrIL-2inheadandneckcancer",A7)(7aMm.ATa/Zzo,921271-6(1989))。再者，上述研究已經(jīng)受限于患者數(shù)目小并受阻于缺乏病理學(xué)比較對照組。雖然最近由DeStefani等人進(jìn)行的202名OSCC患者的隨機(jī)法多中心III期研究表明，在外科手術(shù)前，將低劑量(5000U/天[11=單位])重組人IL-2淋巴管周給藥至同側(cè)橫向(ipsylateral)頸部淋巴結(jié)鏈，持續(xù)10天，結(jié)果導(dǎo)致無瘤生存率顯著(p<0.01)增長，接著導(dǎo)致更長的總存活期(p<0.03)，但是DeStefani等人沒有評價(jià)該治療方案對細(xì)胞周期的作用以及其在改善方文療和化療方面的影響。參見DeStefani等"ImprovedSurvivalWithPerilymphaticInterleukin2inPatientsWithResectableSquamousCellCarcinomaoftheOralCavityandOropharynx",C纖er95:90-97(2002)。再者，盡管教導(dǎo)5000U/天，本發(fā)明和DeStefani等也無法進(jìn)行關(guān)于DeStefani等教導(dǎo)的"高"和"低"劑量的給藥生物學(xué)比較，因?yàn)樗幬镄苡梦炊x的U(單位)測定。相反，本發(fā)明以IU(國際單位)驗(yàn)證并完成了全部USP分析方法用于測定MuMkine⑧生物活性的驗(yàn)證程序。藥物安全性、先導(dǎo)性效能和組合物白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧己經(jīng)在超過200個(gè)癌癥、HIV和HIV/HPV(人乳頭狀瘤病毒)感染的、沒有與LI給藥相關(guān)的嚴(yán)重有害事件的患者中得到測試，其制備在美國專利申請10/611,914中得到描述，其內(nèi)容在lt匕并入作為參考(Harrisetal.,"Immunologicapproachestothetreatmentofprostatecancer",(9"co/,Aug;26(4):439-7(1999);Timaretal,"TheeffectofLeukocyteInterleukin,Injectionontheperi-andintratumoralsubpopulationofmononuclearcellsandontumorepithelia-Apossiblenewapproachtoaugmentingsensitivitytoradiationandchemotherapyinoralcancer.Amulti-centerPhaseI/IIclinicaltrial",7Tze丄a^y/7gosco/e2003;Brownetal""APhaseIOpen-LabelStudyofLeukocyteInterleukin,InjectioninHIV-Iinfectedindividuals:preliminaryevidenceforimproveddelayed-typehypersensitivityresponsestorecallantigens",^4""v/ra/77zerap_y5(supplement)18,2000;Tayloretal,"ImmunotherapywithLeukocyteInterleukin,Injectionforhumanpapillomavirus(HPV)inducedcervicaldysplasiainHIVpatients",AnnualMeetingoftheInternationalSocietyforInterferonandCytokineResearch,Cleveland,OH，October2001;Tayloretal""ImmunotherapywithLeukocyteInterleukin,Injectionforhumanpapillomavirus(HPV)inducedcervicaldysplasiainHIVpatients",33rdSGOConference,Miami,FL，March(2002))。白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧在動(dòng)物毒性研究中也表現(xiàn)出安全性，比如對小鼠、大鼠、豚鼠(guineapig)和狗的研究。再者，LI經(jīng)測試并已證明了在頭頸癌和宮頸發(fā)育異常中的先導(dǎo)性效能。用白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧治療遭受頭頸癌痛苦的患者的臨床研究患者四H"^—名患者接受白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧治療，其中包括二十一名患者(平均年齡59.4歲，分布范圍40-87)患有先前未治療過的頭頸癌。選擇標(biāo)準(zhǔn)為>18歲；能夠并且愿意提供書面通知同意；組織學(xué)上確認(rèn)為口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌(位置口底部7名、舌8名、唇1名、口咽1名、頰1名以及齒齦1名)；沒有已知的遠(yuǎn)緣(內(nèi)臟的)轉(zhuǎn)移性疾病；預(yù)期壽命長于6個(gè)月。懷孕或已經(jīng)對LI給藥位點(diǎn)化療、十二指腸潰瘍或胃潰瘍或者哮喘的患者都被排除。21名LI治療患者中的19名得到評價(jià)。兩名登記受治療的患者隨后分別被證實(shí)患有懸雍垂未分化癌和口腔底部腺癌。除了組織病理學(xué)/免疫組織化學(xué)分析外，對這兩名患者給予了全過程的治療包括白細(xì)胞介素注射劑(LI)給藥。專程從匈牙利布達(dá)佩斯國家腫瘤學(xué)會(huì)的病理樣本貯藏庫，選擇本研究的病理檢査部分病歷對照，并且與得自LI治療組的樣本在腫瘤大小和位置、腫瘤時(shí)期、患者性別和年齡方面相匹配。對照組包括20名患者(平均年齡:57.5歲，分布范圍44-77)，全部經(jīng)生物活組織檢査確定口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌(位置口腔底部3名，舌12名；唇5名)?；颊邫z査在加入試驗(yàn)前患者經(jīng)歷綜合評價(jià)。他們的醫(yī)療史也得到回顧。一旦登記，進(jìn)行全面體格檢查、血液血化學(xué)診斷檢査、胸心臟放射顯影(cardiomdiogmphy)和心電圖。為了顯現(xiàn)并測量口腔腫瘤，物理測定法禾口核磁共振成像(MRI)并用。以可觸及腫瘤的最大直徑處的最長尺寸和與該最長尺寸呈直角測量口腔癌癥表面面積(PE測量法)。對于MRI，施用Tl-、T2-加權(quán)的自旋回波脂肪飽和(fastspinecho，F(xiàn)SE)、翻轉(zhuǎn)復(fù)原FSE(IRFSE)，具有釓的脂肪飽和Tl加權(quán)序列的冠狀面、軸和矢狀面掃描?？谇话┰谧罡咧睆降膮^(qū)域進(jìn)行測定。OSCC的MRI分析在每一例LI治療的之前和之后用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行。在應(yīng)答者組，LI治療減小腫瘤尺寸以及T2和IRFSE信號強(qiáng)度，對比度增強(qiáng)水平，損傷邊緣變得不明顯。在無應(yīng)答者組，MR形態(tài)學(xué)顯示出腫瘤在LI治療后沒有顯著改變。通過病例進(jìn)展的病理學(xué)/形態(tài)測定法顯示腫瘤大小增加?；颊咴诿恳浑S后就診中得到采訪，使用限定問巻詢問生活質(zhì)量(疼痛水平、舌可動(dòng)性程度等)。治療醫(yī)生在每次就診時(shí)評價(jià)毒性。治療方案白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧的給藥可以用以下任一劑量進(jìn)行200、400、800、1200、1600、2400、3200、4800、8000、9600禾fU2000IU。制劑中所用的疫苗制品的精確劑量取決于給藥途徑，以及病人的性質(zhì)，應(yīng)當(dāng)依照執(zhí)業(yè)醫(yī)生的診斷和每個(gè)病人的狀況根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)臨床技術(shù)來確定。有效量是指足以在宿主內(nèi)產(chǎn)生有用應(yīng)答的量，疫苗制品給藥至該量。病理學(xué)國家腫瘤學(xué)會(huì)(匈牙利布達(dá)佩斯)進(jìn)行性腫瘤部的中心病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了病理學(xué)評價(jià)。單個(gè)病理方案支配該研究，描述了外科手術(shù)離體標(biāo)本的固定、目測檢査、宏觀檢查和顯微檢查、組織學(xué)和免疫組織化學(xué)過程，如Timaretal,"TheeffectofLeukocyteInterleukin,Injection(Multikine)treatmentontheperitumoralandintratumoralsubpopulationofmononuclearcellsandontumorepithelia:apossiblenewapproachtoaugmentingsensitivitytoradiationtherapyandchemotherapyinoralcancer-amulticenterphaseI/IIclinicaltrial",丄ar戸goscope113:2206-2217(2003)所提供?？谇粨p傷的診斷基于可疑損傷的切除活組織檢查，選擇分類為T2-3N0-2M0的癌用于LI治療方案的免疫療法(Haddenetal，"Interleukinsandcontrasuppressioninduceimmuneregressionofheadandneckcancer",爿rc/zOto/ao/wgo/Z/eadA^c/t^/^120:395-403(1994))。在LI治療末期，外科手術(shù)前，如上所述評價(jià)臨床應(yīng)答，患者預(yù)定進(jìn)行癌癥切除。離體組織置于預(yù)先標(biāo)記的盛有福爾馬林的容器中，在石蠟中包埋組織之前固定過夜，制備薄切片用于H&E染色和免疫組織化學(xué)。對得自H&E染色的切片進(jìn)行組織學(xué)和AJCC(AmericanJointCommissionforCancer,美國癌期劃分聯(lián)合委員會(huì))分級。對3個(gè)不同腫瘤局部進(jìn)行組織病理學(xué)的分析表面(Rl)、中心(R2)和腫瘤間質(zhì)界面(R3)。還用H&E載玻片評價(jià)壞死腫瘤細(xì)胞的出現(xiàn)。在OSCC腫瘤中，通過兩種方法測定上皮組分對間質(zhì)的百分比根據(jù)Mallory(三色染色法)進(jìn)行結(jié)締組織染色，通過利用ImagePro分析軟件(MediaCybernetics,SilverSpring,MD)測量載玻片以得到癌細(xì)胞巢的面積(腫瘤上皮細(xì)胞)。分別地，包含切除組織的載玻片用泛-細(xì)胞角蛋白抗體(DAKO，Glostrup,Denmark;A1A3+CK19)進(jìn)行細(xì)胞角蛋白免疫組織化學(xué)標(biāo)記，所述泛-細(xì)胞角蛋白抗體標(biāo)記癌細(xì)胞。單核細(xì)胞浸潤的特征在石蠟包埋的腫瘤樣品切片上進(jìn)行脫石蠟和微波抗原修復(fù)后，通過使用免疫組織化學(xué)檢測存在于與腫瘤細(xì)胞巢非常接近的區(qū)域的單核細(xì)胞。使用抗下列標(biāo)記物的抗體髓過氧化酶、II類HLA(HLA-DP、DQ、DR)、CD8、CD20、CD34、CD45R0、CD68(全部來自DAKO);CD4、CD25、CD56(NovocastraLaboratoriesLtd.,NewcastleuponTyne，英國)；CDla(Immunotech,馬賽，法國)；以及CD134(PharMingen,圣地亞哥，加拿大)。所有病例的陰性對照載玻片用同種型匹配的未免疫Igs制備。免疫組織化學(xué)(IHC)的標(biāo)記用DAKOLSAB-2試劑盒完成，利用生物素化的抗小鼠/抗兔IgG連接子以及抗生蛋白鏈菌素-HRP(Streptavidin-HRP)，以顯現(xiàn)特異性結(jié)合的抗體。所用色原體為AEC(紅)標(biāo)記。切片用蘇木精復(fù)染細(xì)胞核。腫瘤樣品的評價(jià)對來自白細(xì)胞介素注射劑(LI)治療組和對照組(非LI-治療)的腫瘤樣品評價(jià)組織學(xué)的變化和浸潤的細(xì)胞T和B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞、樹狀突細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性白細(xì)胞、造血干細(xì)胞、以及T-細(xì)胞激活和記憶細(xì)胞標(biāo)記。40倍放大用于選擇區(qū)域，400倍放大用于鑒定并定量測定浸潤細(xì)胞。基于"熱點(diǎn)(hotspot)"技術(shù)測定單核細(xì)胞的密度，其意味著，在最高腫瘤-浸潤單核細(xì)胞密度區(qū)域，測量在每一研究的腫瘤區(qū)域密度。該方法最小化了組織中細(xì)胞浸潤的極端不均勻性(extremeheterogeneity)的問題。每一患者腫瘤切片的組織學(xué)評價(jià)由3名病理學(xué)家獨(dú)立進(jìn)行，并且如果出現(xiàn)不一致的情況，達(dá)成一致的決定。形態(tài)測定的測量同樣由3名病理學(xué)家進(jìn)行，完成測量而無需臨床背景和每一病例的治療結(jié)果。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用ANOVA單一因素分析和f測試分析病理學(xué)數(shù)據(jù)，并以"P"值小于0.05考慮統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。以下是能用于本發(fā)明的不同劑量的非限定性實(shí)施例，其中實(shí)施例1涉及研究的劑量。然而應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明將不以任何方式僅限于提供的劑量，在需要時(shí)其他有效的劑量可以用于治療需要的患者。實(shí)施例1以IL-2計(jì)日劑量800IU的一半進(jìn)行瘤周注射。另一半(400IU)在同一次就診時(shí)隨后淋巴管周注射。兩種注射都經(jīng)過三周的時(shí)間，每周給藥5次，達(dá)到以IL-2計(jì)12000IU的累積劑量。在可視/可觸及腫瘤塊的周圍邊緣皮內(nèi)給藥LI。淋巴管周的注射在下頜區(qū)后面區(qū)域進(jìn)行，該區(qū)域在頸淋巴鏈的與被注射的腫瘤塊同側(cè)的區(qū)域。單純靜脈內(nèi)(團(tuán)塊)注入給予環(huán)磷酰胺，在第一次LI給藥三天前注射，300mg/m2。在環(huán)磷酰胺給藥3天后開始自我口服給藥(和食品一起)吲哚美辛(25mg)，每日三次，日總劑量75mg，直至外科手術(shù)前24小時(shí)。在環(huán)磷酰胺給藥3天后開始自我給藥硫酸鋅(50mg，以元素鋅計(jì))和多種維生素補(bǔ)充物，每日一次，直至外科手術(shù)前24小時(shí)。環(huán)磷酰胺提供的注射USP(Bristol-Myers-Squibb，英國)環(huán)磷酰胺為無菌粉末，相對于每100mg環(huán)磷酰胺，無菌粉末含有45mg氯化鈉、75mg甘露醇或大約82毫克碳酸氫鈉，靜脈輸注前重新組成。吲哚美辛提供的吲哚美辛USP(Sanoft-Synthelabo，法國)為25mg片劑，用于與食物一起自我口服給藥。硫酸鋅和多種維生素由診所提供硫酸鋅(以元素鋅計(jì)50mg，R.P.SchererCorporation,Clearwater,佛羅里達(dá)，美國)和OTC多種維生素給每名病人自我給藥。實(shí)施例2以IL-2計(jì)日劑量1200IU的一半進(jìn)行瘤周注射。另一半(600IU)在同一次就診時(shí)隨后淋巴管周注射。兩種注射都經(jīng)過三周的時(shí)間，根據(jù)想要的累積劑量，每周給藥5次或者更少。在可視/可觸及腫瘤塊的周圍邊緣皮內(nèi)給藥LI。淋巴管周的注射在下頜區(qū)后面區(qū)域進(jìn)行，該區(qū)域在頸淋巴鏈的與被注射的腫瘤塊同側(cè)的區(qū)域。其余治療方案與實(shí)施例1相同。實(shí)施例3以IL-2計(jì)日劑量1600IU的一半進(jìn)行瘤周注射。另一半(800IU)在同一次就診時(shí)隨后淋巴管周注射。兩種注射都經(jīng)過三周的時(shí)間，根據(jù)想要的累積劑量每周給藥5次或者更少。在可視/可觸及腫瘤塊的周圍邊緣皮內(nèi)給藥LI。淋巴管周的注射在下頜區(qū)后面區(qū)域進(jìn)行，該區(qū)域在頸淋巴鏈的與被注射的腫瘤塊同側(cè)的區(qū)域。其余治療方案與實(shí)施例1相同。實(shí)施例4以IL-2計(jì)日劑量2400IU的一半進(jìn)行瘤周注射。另一半(1200IU)在同一次就診時(shí)隨后淋巴管周注射。兩種注射都經(jīng)過三周的時(shí)間，根據(jù)想要的累積劑量每周給藥5次或者更少。在可視/可觸及腫瘤塊的周圍邊緣皮內(nèi)給藥LI。淋巴管周的注射在下頜區(qū)后面區(qū)域進(jìn)行，該區(qū)域在頸淋巴鏈的與被注射的腫瘤塊同側(cè)的區(qū)域。其余治療方案與實(shí)施例1相同。實(shí)施例5以IL-2計(jì)日劑量3200IU的一半進(jìn)行瘤周注射。另一半(1600IU)在同一次就診時(shí)隨后淋巴管周注射。兩種注射都經(jīng)過三周的時(shí)間，根據(jù)想要的累積劑量每周給藥5次進(jìn)行或者更少。在可視/可觸及腫瘤塊的周圍邊緣皮內(nèi)給藥LI。淋巴管周的注射在下頜區(qū)后面區(qū)域進(jìn)行，該區(qū)域在頸淋巴鏈的與被注射的腫瘤塊同側(cè)的區(qū)域。其余治療方案與實(shí)施例1相同。45實(shí)施例6以IL-2計(jì)日劑量4800IU的一半進(jìn)行瘤周注射。另一半(2400IU)在同一次就診時(shí)隨后淋巴管周注射。兩種注射都經(jīng)過三周的時(shí)間，根據(jù)想要的累積劑量每周給藥5次或者更少。在可視/可觸及腫瘤塊的周圍邊緣皮內(nèi)給藥LI。淋巴管周的注射在下頜區(qū)后面區(qū)域進(jìn)行，該區(qū)域在頸淋巴鏈的與被注射的腫瘤塊同側(cè)的區(qū)域。其余治療方案與實(shí)施例1相同。實(shí)施例7以IL-2計(jì)日劑量9600IU的一半進(jìn)行瘤周注射。另一半(4800IU)在同一次就診時(shí)隨后淋巴管周注射。兩種注射都經(jīng)過三周的時(shí)間，根據(jù)想要的累積劑量每周給藥5次或者更少。在可視/可觸及腫瘤塊的周圍邊緣皮內(nèi)給藥LI。淋巴管周的注射在下頜區(qū)后面區(qū)域進(jìn)行，該區(qū)域在頸淋巴鏈的與被注射的腫瘤塊同側(cè)的區(qū)域。其余治療方案與實(shí)施例1相同。實(shí)施例8以IL-2計(jì)日劑量12000IU的一半進(jìn)行瘤周注射。另一半(6000IU)在同一次就診時(shí)隨后淋巴管周注射。兩種注射都經(jīng)過三周的時(shí)間，根據(jù)想要的累積劑量每周給藥5次或者更少。在可視/可觸及腫瘤塊的周圍邊緣皮內(nèi)給藥LI。淋巴管周的注射在下頜區(qū)后面區(qū)域進(jìn)行，該區(qū)域在頸淋巴鏈的與被注射的腫瘤塊同側(cè)的區(qū)域。其余治療方案與實(shí)施例l相同。臨床病例應(yīng)答對于實(shí)施例1以800IU/mL的日劑量注射每周給藥5次經(jīng)過三周時(shí)間達(dá)到累積劑量12000IU/mL，沒有與白細(xì)胞介素注射劑(LI)相關(guān)的系統(tǒng)或局部毒性或嚴(yán)重有害事件。在外科手術(shù)中、術(shù)后或創(chuàng)傷愈合沒有與LI相關(guān)的并發(fā)癥報(bào)道。評價(jià)了鱗狀上皮細(xì)胞癌患者組織學(xué)相匹配的原發(fā)性腫瘤樣本19(LI治療)和對照的樣本20(非LI-治療)。在LI-治療組的條件下，外科切除原發(fā)性腫瘤在14至54天之間進(jìn)行，在LI治療的末期之后-外科手術(shù)的中值時(shí)間為22天。所有LI-治療組和對照組的患者的組織學(xué)診斷結(jié)果、角質(zhì)化(Brodes評分(Brodesscores))以及惡性腫瘤國際臨床病期分類(TNM)時(shí)期如下表1所示。兩組關(guān)于角質(zhì)化或TNM時(shí)期在組織學(xué)上沒有差別。表1OSCC患者的病理學(xué)數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>*=病理上未檢測到腫瘤組織，CPC-扁平細(xì)胞癌，BI^Brodes分級，MF-多病灶，OSCO口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌，pTNM-病理確定的TNM等級。對于LI治療組內(nèi)表明為表1中的5號和14號的兩名患者，在外科手術(shù)切除的"腫瘤"塊中沒有檢測到癌組織。通過組織學(xué)作為LI治療方案的結(jié)果，所述患者被認(rèn)為是表現(xiàn)出100%的腫瘤減少的完全應(yīng)答者。在顯示為表1中7號和18號的另兩名經(jīng)LI治療的患者中，應(yīng)用顯像技術(shù)證實(shí)腫瘤體積縮小〉50%，被認(rèn)為是部分(大部分)應(yīng)答。對于表明為表1中4號、6號、9號和12號的其他四名患者，體積縮小證實(shí)為>30%，被認(rèn)為是輕微應(yīng)答。具有>40%的腫瘤體積增加的進(jìn)行性疾病只有1例(第17號)發(fā)生，而在剩余的病例中檢測到穩(wěn)定的疾病(10/19)。因此在LI治療組中的應(yīng)答率為21%，全部應(yīng)答率為42%(8/19)。LI治療在OSCC上的效果的完全藥理分析得以在LI治療無應(yīng)答亞組(穩(wěn)定疾病和進(jìn)行性疾病，n=ll)進(jìn)行以及單獨(dú)地在LI治療應(yīng)答亞組(n=6)進(jìn)行，排除2個(gè)其中不能檢測到腫瘤組織的完全應(yīng)答者。腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞CD20+B-細(xì)胞只存在于OSCC的間質(zhì)中，日劑量800IU/mL注射給藥，每周五次，持續(xù)三周，使累積劑量達(dá)實(shí)施例1的12,000IU/mL。在得自以下LI預(yù)處理的腫瘤樣本中，不考慮所存在的腫瘤面積，OSCC中的B-細(xì)胞無顯著性減少。臨床應(yīng)答沒有影響OSCC中B-細(xì)胞的圖像。如圖1-4所示，在對照組中，浸潤腫瘤和間質(zhì)的CD8+細(xì)胞的數(shù)目超過CD4+細(xì)胞。結(jié)果，004+/008+比值遠(yuǎn)小于1，約為0.5，如圖5中具體所示。在LI治療組，如圖4所示觀察到在腫瘤間質(zhì)中，CD4+T細(xì)胞密度上升和CD8+T細(xì)胞密度下降。在圖4中還顯示了在上皮內(nèi)CD4+和CD8+細(xì)胞中出現(xiàn)類似的趨勢。值得注意地是，只有在對LI治療的應(yīng)答者的條件下，所述變化是顯著的(p<0.05)。因此結(jié)果如圖5所示，與對照組相比，LI治療過的腫瘤在細(xì)胞浸潤中其CD4+ZCD8+比值高出2-8倍。由CD4VCD8+比值可以看出，雖然在對LI治療亞組應(yīng)答者中已經(jīng)檢測到最高CD4+和最低CD8+細(xì)胞內(nèi)浸潤密度，但是，與無應(yīng)答者(對LI治療)在腫瘤的腫瘤間質(zhì)區(qū)段的不同在統(tǒng)計(jì)學(xué)上仍然是顯著的(p<0.05)。如圖6和圖7所示，基于CD25和OX40(CD134)分子的表達(dá)，評價(jià)激活的T-細(xì)胞數(shù)目，揭示了在OSCC浸潤中表達(dá)這些標(biāo)記物的細(xì)胞相對低的平均密度，特別是在OX40的情況下，對照組和LI治療組的頻率方面并無顯著性差異。然而，使用可供的冷凍標(biāo)本和免疫熒光，CD25+/CD4+T細(xì)胞更常見于LI治療組中，IO位患者中的IO位具有14-61。/。的CD4+細(xì)胞，但只是偶爾在9名患者中的1名病人中檢測到。如圖8所示，CD45R0+記憶細(xì)胞的密度在對照組和LI治療組的情況下在腫瘤間質(zhì)和上皮內(nèi)之間高度相似。CD45R0+淋巴樣細(xì)胞的密度為T細(xì)胞(CD4++CD8+)的50-60%，這表明，高比例腫瘤浸潤T淋巴細(xì)胞的是記憶細(xì)胞。OSCC的間質(zhì)或腫瘤上皮瘤巢中并未發(fā)現(xiàn)CD34+造血干細(xì)胞和CD56+NK細(xì)胞，不考慮腫瘤面積或所調(diào)査的患者人群(對照或LI治療)。CDla+樹狀突細(xì)胞幾乎獨(dú)占地位于腫瘤上皮瘤巢。如圖9所示，與對照樣品(非LI-治療)相比，在LI應(yīng)答者亞組中，LI治療對在OSCC三個(gè)區(qū)域內(nèi)分布的樹狀突細(xì)胞有不同效果，表現(xiàn)為在腫瘤中心(R2)其中沒有觀察到變化，而測量到了表面(Rl)處CDla+樹狀突細(xì)胞的下降(p<0.05)，以及存在于腫瘤間質(zhì)界面(R3)處的CDla+樹狀突細(xì)胞的增加(p<0.05)。炎癥細(xì)胞中性白細(xì)胞既存在于腫瘤間質(zhì)中又存在于腫瘤上皮瘤巢，與巨噬細(xì)胞在腫瘤中的分布相似，而嗜酸性細(xì)胞僅發(fā)現(xiàn)于腫瘤間質(zhì)，日劑量800IU/mL注射給藥，每周五次，持續(xù)三周，使累積劑量達(dá)實(shí)施例1的12,000IU/mL。被切除的腫瘤樣本中的中性白細(xì)胞與巨噬細(xì)胞浸潤分別通過用髓過氧化酶和CD68標(biāo)記物染色測定。巨噬細(xì)胞密度的分析揭示了僅在LI應(yīng)答組間質(zhì)中存在的CD68+巨噬細(xì)胞的下行性調(diào)節(jié)。該趨勢甚至在LI治療組中上皮內(nèi)更加顯著(LI應(yīng)答者亞組p0.002以及LI無應(yīng)答者pO.Ol)(圖10)。另一方面，如圖11至圖13所示，LI治療情況顯示更多的中性白細(xì)胞向癌細(xì)胞巢中遷移。如圖13所示，中性白細(xì)胞密度在LI應(yīng)答者亞組的腫瘤間質(zhì)中也很顯著。在LI治療組中，由中性白細(xì)胞增加的瘤內(nèi)浸潤只在多病灶的纖維壞死情況下觀察到。發(fā)現(xiàn)嗜酸性細(xì)胞密度在兩組OSCC中高度異質(zhì)(LI治療組和對照組)。形態(tài)測定分析顯示在LI治療的患者的腫瘤間質(zhì)中的嗜酸細(xì)胞細(xì)胞群沒有顯著變化。然而，對這種情況更詳細(xì)的分析顯示，具有高嗜曙紅細(xì)胞密度的腫瘤(〉50個(gè)細(xì)胞/HPF)在LI治療組中的數(shù)目是對照組的兩倍，其中LI治療組19位患者中的9位或47%，對照組20位中的5名或25%。腫瘤壞死在外科手術(shù)得到樣本中，宏觀癌壞死座位只發(fā)生于對照組。然而，IL治療組中多病灶顯微壞死明顯更多發(fā)，如表1和表2(如下)及圖15(p<0.05)所示17名患者中的10名，與之相比對照組如表1和表2及圖14(p<0.05)所示20名患者中的4名。在這方面，應(yīng)答者亞組和無應(yīng)答者亞組(對LI治療)之間沒有顯著差異。表2OSCC病例中的壞死發(fā)生率<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>沒有評價(jià)來自治療組的兩個(gè)完全恢復(fù)的病例。CTR:對照，OSCC-口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌，無應(yīng)答者對CTR:p<0.05，無應(yīng)答者+應(yīng)答者對CTR:p<0.05(x2檢驗(yàn))腫瘤間質(zhì)/癌癥細(xì)胞巢比值白細(xì)胞介素注射劑(LI)治療在癌細(xì)胞巢與腫瘤間質(zhì)的面積百分比方面具有顯著效果。切除的組織樣本用Mallory三色染色法染色，其中癌細(xì)胞巢被標(biāo)記成粉色。腫瘤組織中間質(zhì)的比例通過圖16和圖17所示的形態(tài)測定法測定。如圖18所示，與對照組樣本相比(p<0.05)，數(shù)據(jù)表明LI治療組腫瘤組織中膠原間質(zhì)的比例顯著增加，表明癌細(xì)胞巢區(qū)域減小。OSCC樣本中纖維變性圖像分析表明，膠原纖維積聚在癌細(xì)胞巢周圍，并表現(xiàn)出上皮周圍染色。還在癌細(xì)胞巢和腫瘤間質(zhì)之間發(fā)現(xiàn)膠原纖維(圖16和圖17)。上皮周圍膠原性疾病在對照組和LI治療組腫瘤中的頻率類似，而間質(zhì)性纖維化具有高度顯著性(p<0.001)，與對照組相比(2/20或10%)，在LI治療組里更頻繁，19名患者中的12名或63%。如表3所示，無應(yīng)答者和應(yīng)答者(對LI治療)亞組在此方面沒有顯著差異。表3在OSCC腫瘤樣本中纖維化類型的發(fā)生率<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>CTR4寸照，OSCX^口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌，無應(yīng)答者對CTR:pO.Ol，應(yīng)答者對CTR:p<0.05，無應(yīng)答者+應(yīng)答者對CTR:p<0.01(f檢驗(yàn))II類HLA表達(dá)OSCC的II類HLA表達(dá)通過免疫組織化學(xué)測定。在LI治療和對照病例中，腫瘤浸潤細(xì)胞都顯示出非常強(qiáng)的HLAII表面染色。癌細(xì)胞表達(dá)是異質(zhì)性的。如表4所示，在對照組中，20個(gè)病例中包括約11個(gè)HLAII陰性樣本，其中剩下9個(gè)病例包含具有至少一個(gè)病灶或者強(qiáng)膜HLAI1表達(dá)的腫瘤。類似的圖像在LI治療組中也能觀察到(8A7HLAII陽性)。然而，在LI治療組中，HLAII陽性病例專屬于無應(yīng)答者組，而所有LI應(yīng)答病例癌細(xì)胞均為II類HLA抗原表達(dá)陰性(p<0.05)(表4)表4II類HLA在OSCC癌細(xì)胞中的表達(dá)<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>表達(dá)由免疫組織化學(xué)測定。沒有評價(jià)來自治療組的兩個(gè)完全恢復(fù)的病例。CTR二對照，OSCC-口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌，無應(yīng)答者對應(yīng)答者CTR:pO.Ol(f檢驗(yàn))討論將白細(xì)胞介素注射劑(LI)給藥至晚期原發(fā)OSCC患者，作為常規(guī)治療前的首要治療。所述常規(guī)治療例如外科手術(shù)后放射療法誘導(dǎo)浸潤免疫細(xì)胞變化而不是炎癥細(xì)胞。發(fā)現(xiàn)最低LI給藥劑量能夠激活向癌細(xì)胞巢中遷移的T細(xì)胞群的變化和浸潤的T細(xì)胞，由增加的CD25表達(dá)予以證實(shí)。然而，如結(jié)締組織與腫瘤上皮成分的比例中缺乏任何明顯變化所示，低劑量LI，以IL-2計(jì)400IU,3天/周共2周的治療方案不能導(dǎo)致腫瘤組織的大塊壞死。然而，以IL-2計(jì)800IU/天、每周五天、共三周的較高劑量給藥至OSCC患者作為開始常規(guī)治療前的首要治療，U治療的患者證明腫瘤內(nèi)浸潤C(jī)D4+T-細(xì)胞顯著增加(p<0.05)，伴行CD8+T-細(xì)胞減少(原位)。這種變化導(dǎo)致OSCC的004+/008+比值顯著不同，而對照組的特征在于低的004+/0)8+比值(<1，具有CD8+T-細(xì)胞超優(yōu)勢度)。在LI治療無應(yīng)答者和對LI治療應(yīng)答者組中，CD4+T-細(xì)胞超優(yōu)勢度都具有2-8倍增加，觀察到明顯較高的CD4VCD8+比值。值得注意的是，與無應(yīng)答者相比，LI應(yīng)答者間質(zhì)004+化08+比值得到顯著提高(p<0.05)，表明這一現(xiàn)象的臨床重要性。所述CD4+T-細(xì)胞比例促進(jìn)激活標(biāo)記物CD25。新近被激活的CD4+T-細(xì)胞的標(biāo)記物OX40的表達(dá)，已經(jīng)在包括頭頸癌在內(nèi)的幾種癌癥的TDL部分中檢測到，在T-細(xì)胞浸潤中很少見(Vettoetal.，"PresenceoftheT-cellactivationmarkerOX-40ontumorinfiltratinglymphocytesanddraininglymphnodecellsfrompatientswithmelanomaandheadandneckcancers",JiSMrg"174:258-265(1997);Ladanyietal""T-cellactivationmarkerexpressionontumor-infiltratinglymphocytesasprognosticfactorincutaneousmalignantmelanoma",Ca"cer10:521-530(2004))。Ox40表達(dá)的缺乏表明較晚階段的T-細(xì)胞激活過程。這也許是由于在LI治療組中從LI治療末期到外科手術(shù)移除腫瘤之間的14-54天、中值22天的相對較長時(shí)期。另一方面，雙重標(biāo)記研究表明大比例的CD4+和CD8+T細(xì)胞為CD45R0+，表明它們是記憶T-細(xì)胞。與這些變化平行，上皮內(nèi)的樹狀突細(xì)胞從OSCC表面轉(zhuǎn)移到腫瘤間質(zhì)界面。在先前的有關(guān)IL-2在頭頸癌的輸注局部療效的報(bào)道中，觀察到了相似的004+T淋巴細(xì)胞和樹狀突細(xì)胞選擇性作用，顯示出只低劑量IL-2給藥顯著增加CD25+細(xì)胞(Salteretal，"Thephenotypicchangesintumourinfiltratinglymphocytesandtumourcellsfollowingintra-arterialinflisionofinterleukin-2inpatientswithsquamouscellcarcinoma",J戶aAo/176:167-173(1995))。白細(xì)胞介素注射劑(LI)治療OSCC患者的特征在于顯著改變的炎癥細(xì)胞模式，表明主要是由中性白細(xì)胞以及較小程度上的嗜酸性細(xì)胞而不是由巨噬細(xì)胞介導(dǎo)急性炎癥反應(yīng)。黑素瘤患者中的其他研究表明，在接種產(chǎn)生自體腫瘤細(xì)胞的GM-CSF后，在接種位點(diǎn)和腫瘤位點(diǎn)中性白細(xì)胞的積聚占優(yōu)勢(Soifferetal，"Vaccinationwithirradiatedautologousmelanomacellsengineeredtosecretehumangranulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactorgeneratespotentantitumorimmunityinpatientswithmetastaticmelanoma",/VocA^/USA95:13141-13146(1998);Soifferetal，"Vaccinationwithirradiated,autologousmelanomacellsengineeredtosecretegranulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactorbyadenoviral-mediatedgenetransferaugmentsantitumorimmunityinpatientswithmetastaticmelanoma",/Onco/21:3343-3350(2003))。與對照相比LI治療的患者的中性白細(xì)胞浸潤增加的一種解釋為LI制品含有包括GM-CSF在內(nèi)的幾種細(xì)胞因子。與未治療的對照組相比，伴隨宿主抗腫瘤反應(yīng)的腫瘤浸潤細(xì)胞組分中的復(fù)雜變化，在LI治療的OSCC患者中檢測到癌細(xì)胞巢的多病灶壞死以及結(jié)締組織比例的增加。這些變化反映了U新輔助療法給藥增加了抗腫瘤免疫應(yīng)答對OSCC的抵抗。對OSCC成功的免疫應(yīng)答要求逆轉(zhuǎn)固有的瘤內(nèi)低CD4VCD8+比值。在實(shí)體瘤中CD8+對CD4+細(xì)胞的超優(yōu)勢度并非OSCC特有。類似的低CD4+/CD8+比值在基礎(chǔ)細(xì)胞癌、頸癌和乳癌中也已報(bào)道(Rohrbachetal,"Immunologyandgrowthcharacteristicsofocularbasalcellcarcinoma",Grae/^sAc/zC7/wExpO盧/2a/脂Z239:35-40(2001);Santinetal，"Tumor-infiltratinglymphocytescontainhighernumbersoftype1cytokineexpressorsandDR+Tcellscomparedwithlymphocytesfromtumordraininglymphnodesandperipheralbloodinpatientswithcanceroftheuterinecervix",G"eco/Owco/81:424-432(2001);Murtaetal,"Lymphocytesubpopulationsinpatientswithadvancedbreastcancersubmittedtoneoadjuvantchemotherapy",r"/won'86:403-407(2000))。高百6、比的CD4+T細(xì)胞或者高CD4+ZCD8+比值與黑素瘤、非何杰金氏淋巴瘤、腎細(xì)胞癌以及宮頸癌中良好預(yù)后或者應(yīng)答免疫療法相關(guān)(Hakanssonetal，"Tumour-infiltratinglymphocytesinmalignantmelanomaandresponsetointerferonalphatreatment",5r/Ca"cer74:670-676(1996);Anselletal，"CD4+T-cellimmuneresponsetolargeB-cellnon-Hodgkin'slymphomapredictspatientoutcome",/O"co/19:720-726(2001);Igarashietal，"Effectoftumor-infiltratinglymphocytesubsetsonprognosisandsusceptibilitytointerferontherapyinpatientswithrenalcellcarcinoma",69:51-56(2002);Sheuetal,"ReversedCD4/CD8ratiosoftumor-infiltratinglymphocytesarecorrelatedwiththeprogressionofhumancervicalcarcinoma",C""cer86:15371543(1999))。這表明了由腫瘤誘導(dǎo)的癌癥患者后天獲得性免疫狀態(tài)，是反映癌癥患者中通常缺乏免疫應(yīng)答的普通現(xiàn)象。再者，CD4+T淋巴細(xì)胞對起始和維持抗腫瘤免疫起到了中心作用，其通過對CD8+CTL提供幫助、刺激抗原呈遞細(xì)胞、以及支持免疫記憶，或者在某些情況下，通過細(xì)胞因子分泌或直接溶解細(xì)胞來履行效應(yīng)子作用(Goedegebuureetal，"TheroleofCD4+tumor-infiltratinglymphocytesinhumansolidtumors",/w扁"o/14:119-131(1995);Hungetal.,"ThecentralroleofCD4+Tcellsintheantitumorimmuneresponse",J五x/Med188:2357-2368(1998);Gaoetal,"Antigen-specificCD4+T-cellhelpisrequiredtoactivateamemoryCD8+Tcelltoaflillyfunctionaltumorkillercell",C"wcer62:6438-6441(2002))。在用白細(xì)胞介素注射劑治療口腔癌的情況下，尚不清楚哪個(gè)是引發(fā)抗腫瘤免疫反應(yīng)的特異性介導(dǎo)子(在LI中)。然而，在LI治療后，上皮內(nèi)粒細(xì)胞密度增加與微觀壞死并行，這表明，為了產(chǎn)生對于形成的腫瘤的臨床藥理可測的破壞，非特異性抗腫瘤機(jī)制激活作用(在OSCC患者中)是同等重要的。在LI治療的無應(yīng)答者亞組與應(yīng)答者亞組的腫瘤組織病理學(xué)比較，其中19個(gè)病例中的8例觀察到臨床組織病理學(xué)退化，表明從免疫細(xì)胞組成到炎癥細(xì)胞圖像的大多數(shù)被研究的免疫學(xué)參數(shù)類似。這些數(shù)據(jù)表明LI治療組同質(zhì)應(yīng)答該治療，但LI治療的抗癌作用是不同的。對此偏差可能的解釋可以是對OSCC腫瘤的免疫敏感性的個(gè)體差異性，例如不同患者體內(nèi)腫瘤抗原和/或HLA組合物和/或功能免疫應(yīng)答的損傷水平差異。對OSCC癌細(xì)胞的II類HLA表達(dá)的分析表明LI治療組和對照組表達(dá)的水平高度類似(約45。/。II類HLA抗原表達(dá)陽性)。這表明，與對照組相比，LI治療沒有誘導(dǎo)或提高腫瘤內(nèi)的HLAII分子。然而在LI治療組內(nèi)，所有HLAII陽性病例屬于無應(yīng)答者亞組特有，而所有LI應(yīng)答病例均為陰性。雖然得自小數(shù)目的病人，這一發(fā)現(xiàn)可以表明II類HLA在OSCC上的表達(dá)與疾病惡化的臨床結(jié)果相關(guān)，或者與對免疫療法的應(yīng)答能力減小相關(guān)。同樣的發(fā)現(xiàn)在惡性黑素瘤中得到報(bào)道，其中II類MHC表達(dá)構(gòu)成不良預(yù)后因素，可能由于在缺乏共刺激信號的條件下，表達(dá)腫瘤細(xì)胞的II類MHC誘導(dǎo)T細(xì)胞無反應(yīng)性(Brockeretal,"HLA-DRantigenexpressioninprimarymelanomasoftheskin",JInvestDermatol82:244-247(1984);Beckeretal,"Tumorescapemechanismsfromimmunosurveillance:inductionofunresponsivenessinaspecificMHC-restrictedCD4+humanTcellclonebytheautologousMHCclass11+melanoma",InternatImmunol5:1501-1508(1993))。如上所述在黑素瘤、頭頸癌中缺乏共激分子B7.1和B7.2的表達(dá)，II類MHC分子在頭頸癌中的表達(dá)將誘導(dǎo)免疫而授(Langetal.,"ImpairmentofT-cellactivationinheadandneckcancerinsituandinvitro",ArchOtolaryngolHeadNeckSurg125:82-88(1999))。免疫系統(tǒng)的特異性靶向作用沒有共存嘗試調(diào)整癌癥細(xì)胞靶的敏感性，可能無法產(chǎn)生對基于免疫治療的整體應(yīng)答率的改善。由白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine⑧誘導(dǎo)的免疫介導(dǎo)過程，可以在停止LI給藥以后的很長一段時(shí)間持續(xù)，可以由LI治療結(jié)束后14-54天腫瘤中觀察到的免疫組織藥理變化證明。這種新輔助療法治療方案對患有晚期原發(fā)OSCC患者的功效導(dǎo)致腫瘤塊與基線腫瘤測量相比，在42%的患者中顯著減少。OSCC的LI新輔助療法免疫治療方案為臨床上可行的控制OSCC的途徑。在此描述了本發(fā)明，很明顯本發(fā)明能夠以多種方式變化。所述變化不視為脫離本發(fā)明精神或范圍，所有所述改進(jìn)應(yīng)當(dāng)包括在所附權(quán)利要求的范圍內(nèi)。權(quán)利要求1、一種對II類人類白細(xì)胞抗原在腫瘤細(xì)胞表面上的表達(dá)進(jìn)行調(diào)節(jié)的方法，該方法包括對需要的患者給藥無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物，該無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物含有特定比值的選自由IL-1β、TNF-α、IFN-γ、GM-CSF、白介素-2IL-2所組成的組中的細(xì)胞因子，其中IL-1β、TNF-α、IFN-γ、GM-CSF與IL-2的特定比值為IL-1β與IL-2的比值范圍為0.4-1.5；TNF-α與IL-2的比值范圍為3.2-11.3；IFN-γ與IL-2的比值范圍為1.5-10.9；GM-CSF與IL-2的比值范圍為2.2-4.8。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述細(xì)胞因子的特定比值為IL-lp與IL-2的比值范圍為0.6-0.8;TNF-a與IL-2的比值范圍為7.7-10.9;IFN-y與IL-2的比值范圍為4.9-7.1;GM-CSF與IL-2的比值范圍為3.5-4.5。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物在約20IU至1600IU的范圍內(nèi)一周給藥三次，持續(xù)兩周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物在約40IU至800IU的范圍內(nèi)一周給藥三次，持續(xù)兩周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物在約35IU至75IU的范圍內(nèi)一周給藥三次，持續(xù)兩周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以55IU—周給藥三次，持續(xù)兩周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以200IU—周給藥三次，持續(xù)兩周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。8、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以400IU—周給藥三次，持續(xù)兩周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。9、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以800IU—周給藥三次，持續(xù)兩周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。10、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以1200IU—周給藥三次，持續(xù)兩周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。11、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以1600IU—周給藥三次，持續(xù)兩周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。12、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以2400IU—周給藥三次，持續(xù)兩周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。13、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以3200IU—周給藥三次，持續(xù)兩周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。14、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以4800IU—周給藥三次，持續(xù)兩周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。15、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以8000IU—周給藥三次，持續(xù)兩周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所^^出的白介素-2的國際單位。16、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以9600IU—周給藥三次，持續(xù)兩周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。17、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以12000IU—周給藥三次，持續(xù)兩周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。18、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以200IU—周給藥五次，持續(xù)三周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。19、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以400IU—周給藥五次，持續(xù)三周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。20、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以800IU—周給藥五次，持續(xù)三周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。21、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以1200IU—周給藥五次，持續(xù)三周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。22、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以1600IU—周給藥五次，持續(xù)三周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。23、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以2400IU—周給藥五次，持續(xù)三周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。24、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以3200IU—周給藥五次，持續(xù)三周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。25、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以4800IU—周給藥五次，持續(xù)三周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。26、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以8000IU—周給藥五次，持續(xù)三周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。27、根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以9600IU—周給藥五次，持續(xù)三周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。28、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物以12000IU—周給藥五次，持續(xù)三周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。29、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物在約20IU至1600IU的范圍內(nèi)一周給藥三次，持續(xù)八至二十六周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。30、根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物在約20IU至1600IU范圍內(nèi)一周給藥五次，持續(xù)八至二十六周時(shí)間，其中IU代表在世界衛(wèi)生組織的關(guān)于人IL-2的第一國際標(biāo)準(zhǔn)86/504中所給出的白介素-2的國際單位。31、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物還含有IL-3，IL-3與IL-2的比值范圍為0.38-0.68，優(yōu)選為0.53±0.15。32、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物還含有IL-6，IL-6與IL-2的比值范圍為37.2-53.8，優(yōu)選為46±5.9。33、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物還含有IL-8，IL-8與IL-2的比值范圍為261-561.5，優(yōu)選為411±10.6。34、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物還含有IL-la，IL-la與IL-2的比值范圍為0.56-0.94，優(yōu)選為0.75±0.19。35、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物還含有IL-IO，IL-10與IL-2的比值范圍為2.87-3.22，優(yōu)選為3.0±0.18。36、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物還含有IL-16,IL-16與IL-2的比值范圍為1.16-2.84，優(yōu)選為1.84±0.68。37、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物還含有G-CSF，G-CSF與IL-2的比值范圍為2.16-3.78，優(yōu)選為2.97±0.81。38、根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物還含有TNF-(3，TNF-(3與IL-2的比值范圍為1.17-2.43，優(yōu)選為1.8±0.63。39、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物還含有MIP-la，MIP-la與IL-2的比值范圍為15.7-37.16，優(yōu)選為22.7±7.0。40、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物還含有MIP-ip，MIP-l(3與IL-2的比值范圍為17.1-28.5，優(yōu)選為22.8±5.7。41、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物還含有RANTES，RANTES與IL-2的比值范圍為2.3-2.7，優(yōu)選為2.5±0.13。42、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物還含有EGF，EGF與IL-2的比值范圍為0.267-0.283，優(yōu)選為0.275±0.008。43、根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物還含有PGE2，PGE2與IL-2的比值范圍為3.63-5.42，優(yōu)選為4.5±0.87。44、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述無血清且無促分裂原的細(xì)胞因子混合物還含有TxB2，TxB2與IL-2的比值范圍為23.47-25.13，優(yōu)選為24.3±0.83。45、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，存在痕量的IL-12。46、根據(jù)權(quán)利要求45所述的方法，其中，所述痕量定義為100pg/ml或者更低。全文摘要一種方法，該方法通過用無血清且無促分裂原的混合物來改變腫瘤浸潤單核細(xì)胞的組成、提高CD4⁺/CD⁸⁺比值、提高腫瘤間質(zhì)/上皮比值，并調(diào)節(jié)II類人類白細(xì)胞抗原(HumanLeucocyteAntigen，HLA)在腫瘤細(xì)胞表面上的表達(dá)。所述無血清且無促分裂原的混合物具有特定的細(xì)胞因子比例，所述細(xì)胞因子選自由IL-1β、TNF-α、IFN-γ、GM-CSF和白介素-2(IL-2)所組成的組中，IL-1β、TNF-α、IFN-γ、GM-CSF分別與IL-2具有特定的比例。所述由細(xì)胞因子比例組成的無血清且無促分裂原的混合物包括白細(xì)胞介素注射劑(LI)或Multikine，還可以單獨(dú)使用或與其它藥物聯(lián)合使用，用于癌癥的治療，由此增加癌癥治療的成功率以及癌癥病人的無疾病存活率。文檔編號A61K45/00GK101247831SQ200680016333公開日2008年8月20日申請日期2006年5月10日優(yōu)先權(quán)日2005年5月10日發(fā)明者E·塔洛爾申請人:塞爾-賽公司