功能化多孔硫化鋅納米微球固相萃取柱及其制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種功能化多孔硫化鋅納米微球固相萃取柱及其制備方法，固相萃取柱的基質(zhì)為功能化的多孔硫化鋅納米微球，是由原始多孔硫化鋅納米微球經(jīng)胺基化、羧基化共價(jià)化學(xué)修飾所得。該功能化多孔硫化鋅納米微球的填裝高度為(0.6～1.2)cm。主要適于植物提取液、中藥復(fù)方及生物樣品中生物堿的富集和分離。本發(fā)明固相萃取柱具有對(duì)目標(biāo)物質(zhì)回收率高(92％-105％)，制備成本低，材料易得，功能化過(guò)程簡(jiǎn)單，適應(yīng)性強(qiáng)，易于批量生產(chǎn)的特點(diǎn)，具有很好的應(yīng)用前景。
【專(zhuān)利說(shuō)明】功能化多孔硫化鋅納米微球固相萃取柱及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析化學(xué)的樣品前處理【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種功能化多孔硫化鋅納米微 球的固相萃取柱及制備方法，主要用于植物提取液、中藥復(fù)方及生物樣品中生物堿的富集 和分離。

【背景技術(shù)】
[0002] 植物提取液、各種中藥復(fù)方及生物樣品中基質(zhì)一般具有復(fù)雜性和多樣性，目標(biāo)物 的濃度通常情況下比較低，使精確分析復(fù)雜樣品中的微量物質(zhì)變得非常難。為了得到滿意 的分析測(cè)試結(jié)果，對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)富集與凈化是至關(guān)重要的。目前對(duì)樣品前處理技術(shù)的研究 也比較多，主要集中在固相萃取，液相萃取，超臨界流體萃取，超濾離心和微波萃取等。其中 固相萃取技術(shù)由于操作簡(jiǎn)單、快速、使用有機(jī)溶劑少、成本低、對(duì)環(huán)境的二次污染少等優(yōu)點(diǎn)， 已經(jīng)成為目前植物提取液、中藥復(fù)方及生物樣品中生物堿預(yù)處理和富集的主要技術(shù)手段。
[0003] 固相萃取根據(jù)吸附劑的不同可分為反相固相萃取、正相固相萃取、尚子交換固 相萃取和吸附固相萃取四種，需要根據(jù)所檢測(cè)的物質(zhì)的性質(zhì)來(lái)選擇不同吸附劑的固相 萃取柱。固相萃取法，是主要通過(guò)固相填料對(duì)樣品組分的選擇性吸附及解吸過(guò)程，對(duì)樣 品的分離、純化和富集，其主要目的在于降低樣品基質(zhì)干擾，提高檢測(cè)靈敏度。[參見(jiàn)： (a)Stevenson and D. Trends, Anal. Chem. 1999,18,154-158. (b)Landis, M. S. J. Pharm. Biomed.Anal. 2007,44,1029-1039.]
[0004] 固相萃取的性能通常與其填料的特性緊密相關(guān)。C18鍵合硅膠發(fā)展較早，其普適性 較強(qiáng)，對(duì)大多數(shù)化合物有比較好的富集，應(yīng)用比較廣泛。近年來(lái)，具有高度選擇性的固相萃 取填料的研究引起廣泛的興趣，怎樣從復(fù)雜基體中獲取較為純凈的對(duì)像分析物成為關(guān)注的 焦點(diǎn)。與此相應(yīng)的出現(xiàn)了建立在高選擇性基礎(chǔ)上的填料，免疫親和吸附劑、分子印跡吸附劑 等選擇性填料相繼被開(kāi)發(fā)與應(yīng)用。他們?cè)趹?yīng)用中表現(xiàn)出了高的選擇性，但同時(shí)也存在一定 的缺陷，對(duì)于免疫型填料，純度較高的抗體獲取難，價(jià)格也比較昂貴，而且目前針對(duì)小分子 化合物的抗體缺乏；對(duì)于分子印跡型填料，其合成與制備過(guò)程較長(zhǎng)，操作繁瑣，不易得到特 異作用位點(diǎn)含量高的聚合物，在水溶液中選擇性較差，傳質(zhì)慢。[參見(jiàn)：王洪允，江驥，胡蓓， 等.固相萃取技術(shù)進(jìn)展及在生物藥物分析中的應(yīng)用[J].藥物分析雜志，2003, 23 (3),236.]
[0005] 硫化鋅納米微球由于在光電轉(zhuǎn)換、生物傳感和光催化領(lǐng)域卓越的表現(xiàn)而備受關(guān) 注，特別是多孔硫化鋅納米微球，由于具有孔道結(jié)構(gòu)而使得具有較大的比表面積，它還具有 較強(qiáng)的機(jī)械性能和良好的生物相容性[參見(jiàn)：（a)D. Zhu，W. Li，H. -Mei Wen，J-R. Zhang and J-Jie Zhu. Anal. Methods, 2013, 5,4321. (b)P. ffu, Y. He, H.-F. Wang and X.-P. Yan, Anal. Chem. ,2010,82,1427. (c)R.M.Xing and S. H. Liu, Nanoscale, 2012,4, 3135. (d) S. K Li, Z. G ffu,ff. H Li, Y. Liu, R. F. Zhuo, D. Yan, ff. Juna and P. X Yan Cryst. Eng. Comm, 2013,15, 1571.]。但目前為止，將多孔硫化鋅納米微球作為固相萃取劑應(yīng)用于植物提取液、各種中藥 及生物樣品中生物堿的富集、分離，未見(jiàn)報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種基于功能化多孔硫化鋅納米微 球的固相萃取柱及其制備方法，能夠用于富集和分離植物提取液、中藥復(fù)方樣品中的生物 堿。
[0007] 采用的技術(shù)方案：
[0008] -種功能化多孔硫化鋅納米微球固相萃取柱，所述的固相萃取柱的基質(zhì)為功能化 的多孔硫化鋅納米微球，多孔硫化鋅納米微球直徑為50?150nm，平均孔徑為4?5nm，固 相萃取柱空管容積為1?6mL，填裝高度為0. 6?1. 2cm，空管材質(zhì)為聚烯經(jīng)。
[0009] 制備所述的功能化多孔硫化鋅納米微球的方法，由原始多孔硫化鋅納米微球經(jīng)胺 基化、羧基化共價(jià)化學(xué)修飾所得，共價(jià)化學(xué)修飾按以下步驟進(jìn)行：
[0010] (1)胺基化：在無(wú)水乙醇溶劑中加入多孔硫化鋅納米微球和β-巰基乙胺，多孔硫 化鋅納米微球與β-巰基乙胺的質(zhì)量比為2 : 1?1 : 5,多孔硫化鋅納米微球的質(zhì)量濃度 為2mg/mL?20mg/mL，混合后通隊(duì)半小時(shí)以排出空氣，然后在攪拌作用下于10?40°C條件 下反應(yīng)10?24小時(shí)，反應(yīng)完成后離心分離5min，轉(zhuǎn)速為9000轉(zhuǎn)/min，用乙醇洗滌沉淀物， 離心產(chǎn)物真空干燥，得干燥后的胺基化的多孔硫化鋅納米微球；
[0011] (2)羧基化：在二甲基甲酰胺溶劑中加入胺基化的多孔硫化鋅納米微球和平均分 子量為2000?4000的聚丙烯酸，胺基化的多孔硫化鋅納米微球和聚丙烯酸的質(zhì)量比為 1 : 1?4 : 1，胺基化的多孔硫化鋅納米微球的質(zhì)量濃度為2mg/mL?20mg/mL，混合后通 N2半小時(shí)以排出空氣，然后在攪拌作用下于100?180°C條件下反應(yīng)0. 5?2小時(shí)，反應(yīng)完 成后離心分離5min，轉(zhuǎn)速為9000轉(zhuǎn)/min，用乙醇洗滌沉淀物，離心產(chǎn)物真空干燥，得最終功 能化多孔硫化鋅納米微球。
[0012] 所述的一種功能化多孔硫化鋅納米微球固相萃取柱，制備方法為：
[0013] (1)將一片多孔性聚乙烯下篩板放入固相萃取柱空管的底部，聚乙烯篩板孔徑為 5 ?20 μ m ;
[0014] (2)將相當(dāng)于固相萃取柱空管容積三分之一到三分之二的功能化多孔硫化鋅納米 微球干法填裝入柱內(nèi)；
[0015] (3)在填裝的功能化多孔硫化鋅納米微球上放入另一片多孔性聚乙烯上篩板，聚 乙烯篩板孔徑為5?20 μ m，壓緊填料使填裝柱高度保持在0. 6?1. 2cm，制備得到固相萃 取柱。
[0016] 所述功能化多孔硫化鋅納米微球固相萃取柱用于固相萃取的方法步驟包括：在進(jìn) 行萃取之前，首先用（5?20)mL甲醇、乙睛或者相應(yīng)的緩沖溶液活化功能化多孔硫化鋅納 米微球，然后在真空泵負(fù)壓驅(qū)動(dòng)下使樣品溶液流過(guò)柱子，采用適量體積清洗液洗去基體的 雜質(zhì)，使用合適的洗脫液把分析物洗脫收集到容器中，然后進(jìn)行定量分析。
[0017] 與現(xiàn)有的固相萃取柱相比，本發(fā)明所提供的功能化多孔硫化鋅納米微球固相萃取 柱具有以下優(yōu)點(diǎn)：
[0018] (1)萃取劑用量少，萃取效率高：目前普遍使用的C18鍵合硅膠，其吸附性能較差， 萃取容量較低；而本發(fā)明的固相萃取劑由于具有多孔結(jié)構(gòu)，具有比較大的比表面積和強(qiáng)的 吸附能力，萃取容量和吸附性能得到了很大提升；
[0019] (2)環(huán)境友好：本發(fā)明的多孔硫化鋅納米微球固相萃取柱本身是環(huán)境友好的，并 且在萃取過(guò)程中，只需消耗極少量的有機(jī)溶劑，不會(huì)引入其他有毒有害物質(zhì)；
[0020] (3)穩(wěn)定性好，可再生和重復(fù)利用。吸附在多孔硫化鋅納米微球上的目標(biāo)物能容易 地用少量有機(jī)溶劑洗脫下來(lái)，鍵合的官能團(tuán)不會(huì)被破壞，可以重復(fù)利用。
[0021] (4)本發(fā)明提供一種能夠?qū)⒍喾N化學(xué)官能團(tuán)鍵合到多孔硫化鋅納米微球孔道表 面，制備出一種新型固相萃取劑。它可以用于植物提取液、中藥復(fù)方樣品中的生物堿的選 擇性富集，也可用于生物樣品中的藥物分子的預(yù)富集，并表現(xiàn)出大的穿透體積，樣品承受量 高，選擇性好，可再生重復(fù)利用的特點(diǎn)。
[0022] (5)在完成發(fā)明的過(guò)程中，選擇苦參堿和小檗堿作為研究目標(biāo)物，對(duì)所述固相萃 取柱的各項(xiàng)性能指標(biāo)進(jìn)行了反復(fù)測(cè)試。結(jié)果表明對(duì)于上述生物堿的加標(biāo)回收率均能達(dá)到 92% -105%，解吸過(guò)程簡(jiǎn)單，2mL的乙腈或者其鹽溶液就可將上述物質(zhì)洗脫下來(lái)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束 后，將固相萃取柱用乙腈、甲醇各5mL依次洗滌，無(wú)需其他操作，即可重復(fù)使用。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0023] 圖1為功能化多孔硫化鋅納米微球固相萃取柱示意圖，圖中為：固相萃取柱管1、 上篩板2、下篩板3、多孔硫化鋅納米微球填料4 ;
[0024] 圖2為合成得到的多孔硫化鋅納米微球透射電鏡圖A(TEM)和高分辨透射電鏡圖 B(HRTEM)；
[0025] 圖3為合成得到的多孔硫化鋅納米微球N2吸附-脫附曲線（BET)圖；
[0026] 圖4為功能化多孔硫化鋅納米微球紅外光譜圖；
[0027] 圖5為本發(fā)明的固相萃取柱萃取的苦參堿和小檗堿的色譜圖；
[0028] 圖6為苦參堿和小檗堿的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖。

【具體實(shí)施方式】
[0029] 以下通過(guò)實(shí)施例形式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但不應(yīng)將此 理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均 屬于本發(fā)明的范圍。
[0030] 下面結(jié)合附圖，通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳述。
[0031] 實(shí)施例1 :功能化多孔硫化鋅納米微球固相萃取填料的制備
[0032] 實(shí)驗(yàn)材料：六水硝酸鋅，批號(hào)為：B1224002,購(gòu)自上海阿拉丁試劑有限公司；阿拉 伯膠粉，批號(hào)為20120825,購(gòu)自上海阿拉丁試劑有限公司；硫代乙酰胺，批號(hào)為：20010619， 購(gòu)自上海阿拉丁試劑有限公司；β-巰基乙胺，批號(hào)為：11325054,購(gòu)自上海阿拉丁試劑有 限公司；二甲基甲酰胺，批號(hào)為：F20061110,購(gòu)自南京化學(xué)試劑有限公司；聚丙烯酸，批號(hào) 為：J1225008,購(gòu)自南京化學(xué)試劑有限公司；乙醇，批號(hào)為：14021710247,購(gòu)自南京化學(xué)試 劑有限公司。
[0033] 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備：圓底燒瓶、KQ-500DE超聲波清洗器、聚四氟乙烯反應(yīng)釜、 DHG-9143BS電熱鼓風(fēng)干燥箱、DF-101S磁力加熱攪拌器、ΑΥ120電子分析天平、TGL-16C離 心機(jī)。
[0034] 實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
[0035] (1)原始多孔硫化鋅納米微球的制備
[0036] 將1. 2g六水硝酸鋅與400mg的阿拉伯膠粉加入80mL水中溶解，超聲波分散混勻， 得到澄清溶液，再加入300mg的硫代乙酰胺混合均勻，將所得溶液放入高壓釜的反應(yīng)瓶中， 于125°C條件下反應(yīng)12h，反應(yīng)完成后離心分離（9000轉(zhuǎn)/min，5min)，用乙醇洗滌沉淀物，洗 滌3次，之后沉淀40°C下真空干燥，即得多孔硫化鋅納米微球。將所得產(chǎn)品進(jìn)行電子透射顯 微鏡進(jìn)行表征，如圖2所示。
[0037] (2)功能化多孔硫化鋅納米微球的制備
[0038] 取上述所得產(chǎn)品200mg于圓底燒瓶中同時(shí)加入磁力攪拌子，加入無(wú)水乙醇40mL， 通半小時(shí)N 2以排出空氣，之后加入200mg@ -巰基乙胺，再通N2半個(gè)小時(shí)，通完氮?dú)饧尤?封好之后在磁力攪拌器中水浴40°C條件下反應(yīng)24小時(shí)，反應(yīng)完成后離心分離（9000轉(zhuǎn)/ min, 5min)，用乙醇洗漆沉淀物，離心產(chǎn)物真空干燥，得干燥后的胺基化的多孔硫化鋅納米 微球；然后取l〇〇mg上述所得產(chǎn)品分散在40mL的二甲基甲酰胺中，加入50mg的聚丙烯酸 (平均分子量為3000)，混合后通N 2半小時(shí)以排出空氣，然后在攪拌作用下于140°C條件下 反應(yīng)2小時(shí)，反應(yīng)完成后離心分離（9000轉(zhuǎn)/min，5min)，用乙醇洗滌沉淀物，離心產(chǎn)物真空 干燥，得功能化多孔硫化鋅納米微球。將所得產(chǎn)品進(jìn)行BET測(cè)試，如圖3所示，將所得產(chǎn)品 進(jìn)行紅外表征，如圖4所示。其圖3、圖4中PZNs指原始多孔硫化鋅納米微球，NH 2-PZNs指 胺基化多孔硫化鋅納米微球，PAA-PZNs指羧基化多孔硫化鋅納米微球即最終功能化多孔硫 化鋅納米微球填料。
[0039] 實(shí)施例2 :功能化多孔硫化鋅納米微球固相萃取柱的制備
[0040] A.萃取柱的準(zhǔn)備
[0041] 1、空柱材料和規(guī)格
[0042] 現(xiàn)有的固相萃取小柱空柱規(guī)格從1?6mL不等?？罩牧蠟榫郾?，小柱上下各 有20μπι孔徑的聚乙烯篩板，上述空柱均可使用于本發(fā)明中。在下面的實(shí)驗(yàn)例中本發(fā)明采 用3mL的規(guī)格。
[0043] 2、固相萃取柱的填料
[0044] 固相萃取柱的填料為功能化多孔硫化鋅納米微球，其直徑為50?150nm，平均孔 徑4?5nm。
[0045] 3、填裝量和填裝高度的選擇
[0046] 用前述A準(zhǔn)備的材料填裝3mL固相萃取柱，如附圖1，將一片多孔性聚乙烯下篩板 3置于固相萃取柱管1底部，稱(chēng)取相當(dāng)于固相萃取柱空管容積二分之一的功能化多孔硫化 鋅納米微球填料4放入固相萃取柱管1中，然后將多孔性上篩板2放在填料上部，壓緊填料 使填裝柱高度保持在〇. 8cm，得到功能化多孔硫化鋅納米微球固相萃取柱。
[0047] 實(shí)施例3 :選擇苦參堿和小檗堿作為研究目標(biāo)物，對(duì)所述固相萃取柱的各項(xiàng)性能 指標(biāo)進(jìn)行測(cè)試。
[0048] 實(shí)驗(yàn)材料：苦參堿和小檗堿均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，苦參堿批號(hào)為 110805-200508,小檗堿批號(hào)為110713-201212 ;乙酸銨購(gòu)自上海上海阿拉丁試劑有限公 司，批號(hào)為：20070622 ;高效液相色譜純乙腈購(gòu)自Merck公司，批號(hào)：1605030-138。
[0049] 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備：Waters公司2695/2996高效液相色譜儀、AP-01P真空泵、按述實(shí) 施例2中制備的功能化多孔硫化鋅納米微球固相萃取柱。
[0050] 實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
[0051] (1)取苦參堿和小檗堿分別配成0. 1 μ g/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。先將制得的功能化 多孔硫化鋅納米微球固相萃取柱用4mL乙腈完全浸潤(rùn)填料保持5min，然后以1滴/s的速度 放掉液體，處理完后小柱處于活化狀態(tài)；搭好裝置，開(kāi)真空泵，調(diào)好真空度，以2mL/min的速 度?。?0?100) mL樣品流過(guò)萃取柱，抽濾除去溶劑成分，再用2. 5mg/mL的乙酸銨-80%乙 腈4mL洗脫固相萃取柱，可以得到不同富集倍數(shù)的洗脫液，用高效液相色譜儀進(jìn)行分析檢 測(cè)，得到色譜圖如圖5及圖6。
[0052] 高效液相色譜法測(cè)定條件如下：
[0053] 苦參堿：Waters公司2695/2996高效液相色譜儀，色譜柱為C18柱 (250_\4.6_，5以111)，流動(dòng)相 ：乙腈/水（80:20)，流速：1.0001]117/111；[11，柱溫 ：251€，紫外 檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。
[0054] 小檗堿：Waters公司2695/2996高效液相色譜儀，色譜柱為C18柱 (250_\4.6_，5以111)，流動(dòng)相 ：乙腈/0.2(%磷酸水（30:70)，流速：1.0001]117/111；[11，柱溫 ： 25°C，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。
[0055] 結(jié)果表明對(duì)于上述生物堿的加標(biāo)回收率均能達(dá)到92% -105%，解吸過(guò)程簡(jiǎn)單， 2mL的乙腈或者其鹽溶液就可將上述物質(zhì)洗脫下來(lái)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將固相萃取柱用乙腈、甲 醇各5mL依次洗滌，無(wú)需其他操作，即可重復(fù)使用。
[0056] 以上實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方 式，在所述領(lǐng)域普通技術(shù)人員所具備的知識(shí)范圍內(nèi)，本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何 修改、等同替代和改進(jìn)等，其均應(yīng)在本發(fā)明請(qǐng)求保護(hù)的技術(shù)方案范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1. 一種功能化多孔硫化鋅納米微球固相萃取柱，其特征在于所述的固相萃取柱的基質(zhì) 為功能化的多孔硫化鋅納米微球，多孔硫化鋅納米微球直徑為50?150nm，平均孔徑為4? 5nm，固相萃取柱空管容積為1?6mL，填裝高度為0. 6?1. 2cm，空管材質(zhì)為聚烯經(jīng)。
2. -種制備權(quán)利要求1所述的功能化多孔硫化鋅納米微球的方法，其特征在于由原 始多孔硫化鋅納米微球經(jīng)胺基化、羧基化共價(jià)化學(xué)修飾所得，共價(jià)化學(xué)修飾按以下步驟進(jìn) 行： ⑴胺基化：在無(wú)水乙醇溶劑中加入多孔硫化鋅納米微球和β-巰基乙胺，多孔硫化鋅 納米微球與β_巰基乙胺的質(zhì)量比為2 : 1?1 : 5,多孔硫化鋅納米微球的質(zhì)量濃度為 2mg/mL?20mg/mL，混合后通隊(duì)半小時(shí)以排出空氣，然后在攪拌作用下于10?40°C條件下 反應(yīng)10?24小時(shí)，反應(yīng)完成后離心分離5min，轉(zhuǎn)速為9000轉(zhuǎn)/min，用乙醇洗滌沉淀物，離 心產(chǎn)物真空干燥，得干燥后的胺基化的多孔硫化鋅納米微球； (2)羧基化：在二甲基甲酰胺溶劑中加入胺基化的多孔硫化鋅納米微球和平均分子量 為2000?4000的聚丙烯酸，胺基化的多孔硫化鋅納米微球和聚丙烯酸的質(zhì)量比為1 : 1? 4 : 1，胺基化的多孔硫化鋅納米微球的質(zhì)量濃度為2mg/mL?20mg/mL，混合后通隊(duì)半小時(shí) 以排出空氣，然后在攪拌作用下于100?180°C條件下反應(yīng)0. 5?2小時(shí)，反應(yīng)完成后離心 分離5min，轉(zhuǎn)速為9000轉(zhuǎn)/min，用乙醇洗滌沉淀物，離心產(chǎn)物真空干燥，得最終功能化多孔 硫化鋅納米微球。
3. 如權(quán)利要求1所述的一種功能化多孔硫化鋅納米微球固相萃取柱，其特征在于制備 方法為： (1) 將一片多孔性聚乙烯下篩板放入固相萃取柱空管的底部，聚乙烯篩板孔徑為5? 20 μ m ； (2) 將相當(dāng)于固相萃取柱空管容積三分之一到三分之二的功能化多孔硫化鋅納米微球 干法填裝入柱內(nèi)； (3) 在填裝的功能化多孔硫化鋅納米微球上放入另一片多孔性聚乙烯上篩板，聚乙烯 篩板孔徑為5?20 μ m，壓緊填料使填裝柱高度保持在0. 6?1. 2cm，制備得到固相萃取柱。
【文檔編號(hào)】B01J20/28GK104083904SQ201410314197
【公開(kāi)日】2014年10月8日 申請(qǐng)日期:2014年7月2日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月2日
【發(fā)明者】朱棟, 文紅梅, 池玉梅, 鄧海山, 康安, 韓疏影 申請(qǐng)人:南京中醫(yī)藥大學(xué)