'是氫或者甲基;E是-SO3 一。9. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有如下結(jié)構(gòu)的電中性的三雜配發(fā)光金屬配合物：其中X是可生物偶聯(lián)的反應(yīng)基團(tuán)，優(yōu)選是羧酸、羧酸的NHS酯、羧酸的磺化-NHS酯、亞磷 酰胺、異硫氰基、醛、胺、肼、羥基和馬來(lái)酰亞氨基，X直接(無(wú)需連接體T)或者間接(通過(guò)連接 體T)與一個(gè)芳環(huán)連接； T是含碳或者含雜原子的連接體，包括C1-C1O的烷基X1-C 1O的烯基X1-C1O的烷氧基、_ CONH-C1-Ciq-、-NHCO-C1-Ciq、-C 1-C9-CONHR1-、取代或非取代的 5-或者 6-元芳環(huán)； W和W'各自是氫或者任何不帶電荷的取代基團(tuán)，優(yōu)選是&-&〇的烷基J1-Ciq的烴基、C 1-Cio的烷氧基、-CONH-Cho、-NHCO-C1-Ciq、-Cp 9-CONHR3-、取代或非取代的5-或者6-元芳環(huán)、 羥基、氨基、腈、氰基或者鹵素； E是帶負(fù)電荷的基團(tuán)，如-s〇3-，-0S03-，-Ρ03Η-，-0Ρ0 3Η-等； Ri和R3各自是氫或者烷基。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的電中性的三雜配金屬配合物，其中X是羧酸(-C00H)或者NHS 酯；T是含酰胺的連接體或者是具有1-9個(gè)亞甲基的烷基，即-(CH2)1-S-J和W'是氫或者甲 基;E是-S〇3。11. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有如下結(jié)構(gòu)的電中性的三雜配金屬配合物：其中X是可生物偶聯(lián)的反應(yīng)基團(tuán)，優(yōu)選是羧酸、羧酸的NHS酯、羧酸的磺化-NHS酯、亞磷 酰胺、異硫氰基、醛、胺、肼、羥基和馬來(lái)酰亞氨基，X直接(無(wú)需連接體T)或者間接(通過(guò)連接 體T)與一個(gè)芳環(huán)連接； T是含碳或者含雜原子的連接體，包括C1-C1O的烷基X1-C 1O的烯基X1-C1O的烷氧基、_ CONH-C1-Ciq-、-NHCO-C1-Ciq、-C 1-C9-CONHR1-、取代或非取代的 5-或者 6-元芳環(huán)； A是含碳或者含雜原子的連接體，包括C1-Ciq的烷基X1-C iq的烯基X1-Ciq的烷氧基、_ CONH-Cho-、-NHCO-C1-Ciq-、-Cp9-CONHR 2-、取代或非取代的 5-或者 6-元芳環(huán)； E是帶負(fù)電荷的基團(tuán)，如-s〇3-、-0S03-、-Ρ03Η-、-0Ρ0 3Η-等； W和W'各自是氫或者任何不帶電荷的取代基團(tuán)，優(yōu)選是&-&〇的烷基 Cio的烷氧基、-CONH-Cho、-NHCO-C1-Ciq、-Cp9-CONHR 3-、取代或非取代的5-或者6-元芳環(huán)、 羥基、氨基、腈、氰基或者鹵素;且 R1，RdPR3各自是氫或者烷基。12. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的電中性的三雜配金屬配合物，其中X是羧酸(-COOH)或其NHS 酯；T是-CONH-C1-1Q-、-NH⑶-C1-Ciq-^C 1-9-C0NHR!-或者是具有1-9個(gè)亞甲基的烷基，即_ (CH2) ; W是氫或者-CH3; W '是氫或者-CH3; A是亞甲基，SP -CH2-; E是-S〇3-。13. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有如下結(jié)構(gòu)的電中性的三雜配金屬配合物：其中X是可生物偶聯(lián)的反應(yīng)基團(tuán)，優(yōu)選是羧酸、羧酸的NHS酯、羧酸的磺化-NHS酯、亞磷 酰胺、異硫氰基、醛、胺、肼、羥基和馬來(lái)酰亞氨基，X直接(無(wú)需連接體T)或者間接(通過(guò)連接 體T)與一個(gè)芳環(huán)連接； T是含碳或者含雜原子的連接體，包括C1-C1O的烷基X1-C 1O的烯基X1-C1O的烷氧基、_ CONH-C1-Ciq-、-NHCO-C1-Ciq、-C 1-C9-CONHR1-、取代或非取代的 5-或者 6-元芳環(huán)； A是含碳或者含雜原子的連接體，包括C1-Ciq的烷基X1-C iq的烯基X1-Ciq的烷氧基、_ CONH-Cho-、-NHCO-C1-Ciq-、-Cp9-CONHR 2-、取代或非取代的 5-或者 6-元芳環(huán)； E是帶負(fù)電荷的基團(tuán)，如-s〇3-、-0S03-、-Ρ03Η-、-0Ρ0 3Η-等； W是氫或者任何不帶電荷的取代基團(tuán)，優(yōu)選是心^^)的烷基X1-Ciq的烴基X1-C iq的烷氧 基、-C0NH-Ci-iq、-NHCO-Ci-Ciq、 -Ci-9_C0NHR3、取代或非取代的5-或者6-兀芳環(huán)、羥基、氛基、 腈、氰基或者鹵素;且 R1，RdPR3各自是氫或者烷基。14. 根據(jù)權(quán)利要求13所述的電中性的三雜配金屬配合物，其中X是羧酸(-COOH)或者NHS 酯T 是-CONH-Ch。-、-NHCO-C1-C1O-、-Cp9-CONHR 1-或具有 1-9 個(gè)亞甲基的烷 基，即-(CH2)H; W是氫或者-CH3; A是亞甲基，SP-CH2-; E是-S03-。15. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有如下結(jié)構(gòu)的電中性的三雜配金屬配合物：其中X是可生物偶聯(lián)的反應(yīng)基團(tuán)，優(yōu)選是羧酸、羧酸的NHS酯、羧酸的磺化-NHS酯、亞磷 酰胺、異硫氰基、醛、胺、肼、羥基和馬來(lái)酰亞氨基，X直接(無(wú)需連接體T)或者間接(通過(guò)連接 體T)與一個(gè)芳環(huán)連接； T是含碳或者含雜原子的連接體，包括C1-C1O的烷基X1-C 1O的烯基X1-C1O的烷氧基、_ CONH-C1-Ciq-、-NHCO-C1-Ciq、-C 1-C9-CONHR1-、取代或非取代的 5-或者 6-元芳環(huán)； W是氫或者任何不帶電荷的取代基團(tuán)，優(yōu)選是心^^)的烷基X1-Ciq的烴基X1-C iq的烷氧 基、-C0NH-Ci-iq、-NHCO-Ci-Ciq、 -Ci-9_C0NHR3_、取代或非取代的5-或者6 -兀芳環(huán)、羥基、氛基、 腈、氰基或者鹵素； A是含碳或者含雜原子的連接體，包括C1-Ciq的烷基X1-C iq的烯基X1-Ciq的烷氧基、_ CONH-Cho-、-NHCO-C1-Ciq-、-Cp9-CONHR 2-、取代或非取代的 5-或者 6-元芳環(huán)； E是帶負(fù)電荷的基團(tuán)，如-s〇3-、-0S03-、-Ρ03Η-、-0Ρ0 3Η-等;且 R1，RdPR3各自是氫或者烷基。16. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的電中性的三雜配金屬配合物，其中X是羧酸(-COOH)或者NHS 酯；T是-CONH-C1- 1Q-、-NH⑶-C1-Ciq-^C1-9-C0NHR!-或者是具有1-9個(gè)亞甲基的烷基，即_ (CH 2) H; W是氫或者-CH3; A是亞甲基，SP-CH2-; E是-S03-。17. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有如下結(jié)構(gòu)的電中性的三雜配金屬配合物：其中X是可生物偶聯(lián)的反應(yīng)基團(tuán)，優(yōu)選是羧酸、羧酸的NHS酯、羧酸的磺化-NHS酯、亞磷 酰胺、異硫氰基、醛、胺、肼、羥基和馬來(lái)酰亞氨基，X直接(無(wú)需連接體T)或者間接(通過(guò)連接 體T)與一個(gè)芳環(huán)連接； T是含碳或者含雜原子的連接體，包括C1-C1O的烷基X1-C 1O的烯基X1-C1O的烷氧基、_ CONH-C1-Ciq-、-NHCO-C1-Ciq、-C 1-C9-CONHR1-、取代或非取代的 5-或者 6-元芳環(huán)； A是含碳或者含雜原子的連接體，包括C1-Ciq的烷基X1-C iq的烯基X1-Ciq的烷氧基、- CONH-Cho-、-NHCO-C1-Ciq-、-Cp9-CONHR 2-、取代或非取代的 5-或者 6-元芳環(huán)； E是帶負(fù)電荷的基團(tuán)，如-s〇3-、-0S03-、-Ρ03Η-、-0Ρ0 3Η-等； W是氫或者任何不帶電荷的取代基團(tuán)，優(yōu)選是心^^)的烷基X1-Ciq的烴基X1-C iq的烷氧 基、-C0NH-Ci-iq、-NHCO-Ci-Ciq、 -Ci-9_C0NHR3_、取代或非取代的5-或者6 -兀芳環(huán)、羥基、氛基、 腈、氰基或者鹵素;且 W'和W"不同，選自氫或者任何不帶電荷的取代基團(tuán)，優(yōu)選是^-⑶的烷基X1-Ciq的烴 基、C1-Ciq 的烷氧基、-CONH-C1-K)、-NHCO-C1-Ciq、-&-9-C0NHR4、取代或非取代的 5-或者 6-元芳 環(huán)、羥基、氨基、腈、氰基或者鹵素;且 Ri-R4各自是氫或者烷基。18. 根據(jù)權(quán)利要求17所述的電中性的三雜配金屬配合物，其中X是羧酸（-C00H)或者羧 酸的NHS酯;T是-CONH-C1-K)-^NHCO-C 1-Ciq-^Cb-CONHR1-或者是具有1-9個(gè)亞甲基的烷基， 即-(CH 2)H; W是氫或者-CH3; A是亞甲基，SP-CH2-; E是-S03-。19. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的具有如下結(jié)構(gòu)的二雜配發(fā)光金屬配合物：其中X是可生物偶聯(lián)的反應(yīng)基團(tuán)，優(yōu)選是羧酸、羧酸的NHS酯、羧酸的磺化-NHS酯、亞磷 酰胺、異硫氰基、醛、胺、肼、羥基和馬來(lái)酰亞氨基，X直接(無(wú)需連接體T)或者間接(通過(guò)連接 體T)與一個(gè)芳環(huán)連接； T是含碳或者含雜原子的連接體，包括C1-C1O的烷基X1-C 1O的烯基X1-C1O的烷氧基、_ CONH-C1-Ciq-、-NHCO-C1-Ciq、-C 1-C9-CONHR1-、取代或非取代的 5-或者 6-元芳環(huán)； A是含碳或者含雜原子的連接體，包括C1-Ciq的烷基X1-C iq的烯基X1-Ciq的烷氧基、_ CONH-Cho-、-NHCO-C1-Ciq-、-Cp9-CONHR 2-、取代或非取代的 5-或者 6-元芳環(huán)； E是帶負(fù)電荷的基團(tuán)，如-s〇3-、-0S03-、-Ρ03Η-、-0Ρ0 3Η-等； W和W'可以相同也可以不同，獨(dú)立地選自氫或者任何不帶電荷的&-(：1()的烷基、&-&〇的 烯基、C1-Ciq 的烷氧基、-CONH-C1-K)、-NHCO-C1-Ciq、-Cp 9-CONHR3、取代或非取代的 5-或者 6-元 芳環(huán)、羥基、氨基、腈、氰基或者鹵素;且 R1，RdPR3各自是氫或者烷基。20. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的電中性的三雜配金屬配合物，其中X是羧酸(-C00H)或者NHS 酯；T是-CONH-C1-1Q-、-NH⑶-C1-Ciq-^C 1-9-C0NHR!-或者是具有1-9個(gè)亞甲基的烷基，即_ (CH2) H; W和W ' 是氫或者-CH3; A是亞甲基，SP-CH2-; E是-S03-。21. -種權(quán)利要求1-3的其中M是釕的電中性三雜配金屬配合物標(biāo)記物的合成方法，包 括以下步驟： (a)使[(對(duì)異丙基甲苯)RuC12]2與L'、L"或者L"'反應(yīng)，形成第一中間體(對(duì)異丙基甲苯） (L'）RuC12，（對(duì)異丙基甲苯）（L"）RuC12或者(對(duì)異丙基甲苯）（L"'）RuC1 2; (b) 使(對(duì)異丙基甲苯）（L'）RuC12與L"或L"'反應(yīng)，使(對(duì)異丙基甲苯）（L"）RuC12與L'或 1；''反應(yīng)，或使(對(duì)異丙基甲苯）〇；''）1^1 2與1/或1；'反應(yīng)，將第一中間體轉(zhuǎn)化為第二中間體 〇/)〇；'）1?11(：12、〇/)〇；''）1?11(：1 2、或者〇；'）〇；''）1?11(：12; (c) 使（L'）（L"）RuC12與L"'反應(yīng)，或使（L'）（L"'）RuC12與L" 反應(yīng)，或者使 RuCl2與L'反應(yīng)，將第二中間體轉(zhuǎn)化為(L'）（L"）（L" '）Ru。22. -種進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光分析的方法，由以下步驟組成： (a) 使用權(quán)利要求1-20中任一項(xiàng)的電中性金屬配合物標(biāo)記生物分子，以形成具有以下 結(jié)構(gòu)的被標(biāo)記的生物復(fù)合物， {Mn+[L，L，，L，，，]n-}m-B(V)， (Mn^L1L2L3 JnIm-B (VI), {!Τ+α?5]11-}m-B(VII),或 {Mn+[ L1L42 JnIm-B (VIII) 其中，B是具有化學(xué)、生物化學(xué)或者生物活性的物質(zhì)，優(yōu)選選自半抗原、氨基酸、核酸、核 苷、核苷酸、蛋白質(zhì)、適配子、抗體和抗原等； M選自過(guò)渡金屬，優(yōu)選是釕或者鋨； η是電荷數(shù)，大于或者等于2; m是大于或者等于1的整數(shù)； L '，L"和L" '獨(dú)立選自含氮雜環(huán)雙齒配體，優(yōu)選選自2，2 聯(lián)吡啶，1，10-菲咯啉及其取 代的同系物，其中至少有一個(gè)配體通過(guò)可生物偶聯(lián)的反應(yīng)基團(tuán)和B共價(jià)連接； L1是含氮雜環(huán)雙齒配體，優(yōu)選選自取代的2，2 聯(lián)吡啶和帶有取代基的1，10-菲咯啉，具 有至少一個(gè)通過(guò)生物偶聯(lián)基團(tuán)而與B形成的共價(jià)鍵； L2是含氮雜環(huán)雙齒配體，優(yōu)選選自取代的2，2 聯(lián)吡啶和取代的1，10-菲咯啉，其具有帶 負(fù)電荷的取代基團(tuán)，如-S03-、-0S03-、-Ρ03Η-、-0Ρ0 3Η-等，其負(fù)電荷總數(shù)等于η; L3是含氮雜環(huán)雙齒配體，優(yōu)選選自非反應(yīng)性且不帶電荷的2,2'_聯(lián)吡啶，1，10-菲咯啉以 及它們的衍生物； L4或L5是不同的含氮雜環(huán)雙齒配體，優(yōu)選選自取代的2,2'_聯(lián)吡啶和取代的1，10-菲咯 啉，其具有帶負(fù)電荷的取代基團(tuán)，如-S03_、-OSO3'-PO3H' -OPO3IT等，總的負(fù)電荷數(shù)為η/2; (b) 促使電中性金屬配合物發(fā)光;并且， (c) 測(cè)定所發(fā)出的光，將被測(cè)物濃度與在一定時(shí)間段內(nèi)發(fā)射的光強(qiáng)度或光子數(shù)相關(guān)聯(lián)。23. 根據(jù)權(quán)利要求22所述的標(biāo)記的生物復(fù)合物，其中M為釕。24. 根據(jù)權(quán)利要求22所述的標(biāo)記的生物復(fù)合物，其中L'、L"和L"'為不同的基團(tuán)。
【專利摘要】本發(fā)明涉及作為發(fā)光標(biāo)記物的電中性金屬配合物。該配合物的金屬離子的正電荷被與含氮二亞胺配體(如2,2’-聯(lián)吡啶，1,10-菲咯啉以及它們的衍生物)通過(guò)共價(jià)鍵相連的負(fù)電荷基團(tuán)中和。在增強(qiáng)電化學(xué)激發(fā)條件下的發(fā)光強(qiáng)度的同時(shí)，電中性能降低金屬配合物對(duì)被標(biāo)記生物分子的生物和/或生物化學(xué)活性的影響。這些發(fā)光金屬配合物標(biāo)記分子可用于以發(fā)光信號(hào)為檢測(cè)模式的生物分析方法(如電化學(xué)發(fā)光)的發(fā)展。
【IPC分類】G01N33/52, C09K11/07
【公開(kāi)號(hào)】CN105492575
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480045420
【發(fā)明人】周明, 余林頗
【申請(qǐng)人】聯(lián)吡啶釕科學(xué)公司
【公開(kāi)日】2016年4月13日
【申請(qǐng)日】2014年6月18日
【公告號(hào)】US20160146826, WO2014203067A1