3’,4’-亞甲二氧基查爾酮衍生物及其制備方法和在抗腫瘤中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種3’,4’–亞甲二氧基查爾酮衍生物及其制備方法和在抗腫瘤中的應(yīng)用，屬于新化合物合成與藥物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明首次通過芳香醛和芳香酮在氫氧化鈉催化下合成出三種3’,4’–亞甲二氧基查爾酮衍生物(式I所示)，并對其進(jìn)行了體外腫瘤細(xì)胞抑制活性的測試，結(jié)果顯示這類衍生物的抗腫瘤活性優(yōu)于對照藥品5?氟尿嘧啶。本發(fā)明的提出為腫瘤治療提供了一種新的有效的技術(shù)手段，具有廣闊的應(yīng)用前景。
【專利說明】
3'，4'-亞甲二氧基查爾酮衍生物及其制備方法和在抗腫瘤中 的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種抗腫瘤藥物及其制備方法，特別涉及3'，4'_亞甲二氧基查爾酮衍 生物及其制備方法和在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，本發(fā)明屬于新化合物合成與藥物應(yīng)用技 術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 查爾酮類化合物是一類存在于甘草、紅花等藥用植物中的天然有機(jī)化合物，其分 子結(jié)構(gòu)具有較大的柔性，能與不同的受體結(jié)合，具有抗腫瘤、抑制和清除氧自由基、抗菌、抗 病毒、抗?jié)兒徒獬d攣等生物活性，因此，是一類重要的有研究價值的天然產(chǎn)物，一直受 到科研工作者的廣泛關(guān)注。
[0003] 查爾酮類化合物主要由芳香醛與芳香酮通過Claisen-Schmidt縮合反應(yīng)生成，結(jié) 構(gòu)中含有1，3_二苯基丙烯酮結(jié)構(gòu)的化合物。查爾酮類化合物的兩個苯基上有不同取代基 團(tuán)，表現(xiàn)出不同的生物活性。根據(jù)這些生物活性，已有多種新藥被開發(fā)，并在臨床廣泛應(yīng)用， 其抗腫瘤活性也逐漸成為研究熱點，作為新型抗腫瘤藥被廣泛關(guān)注。其中抗腫瘤類查爾酮 化合物多存在2羥基，未見到有抗腫瘤活性的3'，4二甲氧基查爾酮衍生物報道。
[0004] 本申請首次通過芳香醛和芳香酮在氫氧化鈉催化下合成出三種3 '，4 亞甲二氧 基查爾酮，并對其進(jìn)行了體外腫瘤細(xì)胞抑制活性的測試，結(jié)果顯示這類衍生物的抗腫瘤活 性明顯優(yōu)于對照藥品5-氟尿嘧啶。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種3'，4'_亞甲二氧基查爾酮衍生物及其制備方法，以及 該衍生物在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0006] 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)手段：
[0007] 本申請首次通過芳香醛和芳香酮在氫氧化鈉催化下合成出三種3 '，4 亞甲二氧 基查爾酮合成出3'，4'_亞甲二氧基查爾酮，并對其進(jìn)行了體外腫瘤細(xì)胞抑制活性的測試， 結(jié)果顯示這類衍生物對人肺癌細(xì)胞A549,人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620和人肝癌細(xì)胞HepG2有較強(qiáng)的 抑制活性，且抗腫瘤活性優(yōu)于對照藥品5-氟尿嘧啶。
[0008] 本發(fā)明的一種3'，4'_亞甲二氧基查爾酮類衍生物，其具有如下式I所示的結(jié)構(gòu)：
[0010 ]其中，Ri、R2以及R3分別獨立選自氫或d-3烷氧基。
[0011]在本發(fā)明中，優(yōu)選的，所述的Cl-3烷氧基為甲氧基。更優(yōu)選的，心為氫或甲氧基，辦為 甲氧基，R3為氫或甲氧基。
[0012]在本發(fā)明的具體實施例中，本發(fā)明合成了以下衍生物:3_甲氧基-3'，4'_亞甲二氧 基查爾酮、3,4-二甲氧基-3'，4'_亞甲二氧基查爾酮或2,3-二甲氧基-3'，4'_亞甲二氧基查 爾酮。
[0013] 其中，3-甲氧基-3'，4'_亞甲二氧基查爾酮的結(jié)構(gòu)式如下：
[0015] 其中，3,4-二甲氧基-3'，4'_亞甲二氧基查爾酮的結(jié)構(gòu)式如下：
[0017] 其中，2,3-二甲氧基-3'，4'_亞甲二氧基查爾酮的結(jié)構(gòu)式如下：
[0019]進(jìn)一步的，本發(fā)明還提出可一種制備所述的3'，4'_亞甲二氧基查爾酮類衍生物的 方法，包括以下步驟:式II所示的芳香醛和式III所示的芳香酮溶于無水乙醇中，在氫氧化 鈉催化下，室溫反應(yīng)48小時，反應(yīng)液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH到中性，加水析出結(jié)晶，抽濾，少量水 洗，干燥，即得式I所示的3'，4'_亞甲二氧基查爾酮類衍生物；
[0021]其中，Ri、R2以及R3分別獨立選自氫或&-3烷氧基。
[0022]更進(jìn)一步的，本發(fā)明還提出了所述的3'，4'_亞甲二氧基查爾酮類衍生物在制備抗 腫瘤藥物中的用途。
[0023] 在本發(fā)明中，優(yōu)選的，所述的腫瘤包括肝癌、結(jié)腸癌及肺癌。
[0024] 相較于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果是：
[0025] 1、本發(fā)明在處理反應(yīng)液時，采用稀鹽酸或NaOH調(diào)節(jié)pH到中性，較通常調(diào)pH3-4方 法，避免了查爾酮結(jié)構(gòu)中甲氧基破壞，產(chǎn)率提高20%左右。同時，減少鹽酸的用量，降低了合 成成本，避免了對環(huán)境的負(fù)面影響。
[0026] 2、本發(fā)明涉及的三種3'，4'_亞甲二氧基查爾酮類衍生物，有明顯的抗腫瘤細(xì)胞活 性，優(yōu)于對照藥品5-氟尿嘧啶。
【附圖說明】
[0027]圖1為3-甲氧基-3 '，4 亞甲二氧基查爾酮氫核磁共振譜圖；
[0028]圖2為3，4-二甲氧基-3 '，4 亞甲二氧基查爾酮氫核磁共振譜圖；
[0029]圖3為2,3_二甲氧基-3'，4'_亞甲二氧基查爾酮氫核磁共振譜圖。
【具體實施方式】
[0030] 下面結(jié)合具體實施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明，應(yīng)理解該實施例僅用于說明本發(fā)明而 不用于限制本發(fā)明的范圍。
[0031] 本發(fā)明所述的一類新型3'，4'_亞甲二氧基查爾酮衍生物的結(jié)構(gòu)通式如式I所示：
[0033] 其中，Ri、R2以及R3分別獨立選自氫或Ci-3烷氧基，優(yōu)選的，Ri為氫或甲氧基，R2為甲 氧基，R3為氫或甲氧基。
[0034] 本發(fā)明特別涉及如下三種衍生物的合成方法：
[0035] (1)3-甲氧基-3'，4'_亞甲二氧基查爾酮 [0036] (2)3,4_二甲氧基-3'，4'_亞甲二氧基查爾酮 [0037] (3)2,3_二甲氧基-3'，4'_亞甲二氧基查爾酮
[0038] 上述化合物的合成包括以下步驟：
[0039] 式II所示的芳香醛和式III所示的芳香酮溶于無水乙醇中，在氫氧化鈉催化下，室 溫反應(yīng)48小時，反應(yīng)液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH到中性，加水析出結(jié)晶，抽濾得到式I所示的3'，4'_ 亞甲二氧基查爾酮類衍生物，少量水洗，干燥，即得。
[0041 ]下面通過實施例具體說明合成方法。
[0042] 實施例1:3-甲氧基-3'，4'_亞甲二氧基查爾酮的制備
[0044] 具體的制備步驟如下：
[0045] 取0.816g 3,4_亞甲二氧基苯乙酮和0.60mL 3-甲氧基苯甲酸，溶于60mL無水乙醇 中，滴加 1.5mL 50 %NaOH溶液，反應(yīng)48h。反應(yīng)液用稀鹽酸調(diào)pH至中性后，加 2倍量的水析出 結(jié)晶，抽濾，得黃色固體，少量水洗。干燥，稱重，得0.948g淺黃色3-甲氧基-3 '，4 亞甲二氧 基查爾酮固體。收率為67.1 %。
[0046] 3-甲氧基-3'，4'_亞甲二氧基查爾酮氫譜如圖1所示NMR(400MHz，CDC13)S7.76 (d，J=15.6Hz，lH，CH-9)，7.66(d，J = 8.1Hz，1H，CH-5)，7.54(s，1H，CH-1)，7.47(d，J = 15.6Hz，lH，CH-8)，7.34(t，J = 7.9Hz，lH，CH-12)，7.24(d，J = 7.7Hz，lH，CH-ll)，7.15(s， 1H,CH-15) ,6.97(d,J = 8.1Hz,lH,CH-13),6.91(d,J = 8.1Hz,lH,CH-4) ,6.08(s,2H,CH2-18)，3.86(s，3H，CH30-21)。
[0047] 實施例2:3,4-二甲氧基-3'，4'_亞甲二氧基查爾酮的制備
[0049]具體的制備步驟如下：
[0050] 取0.819g 3,4_亞甲二氧基苯乙酮和0.831g 3,4_二甲氧基苯甲酸，溶于40mL無水 乙醇中，滴加1.5mL50 % NaOH溶液，反應(yīng)48h。反應(yīng)液用稀鹽酸調(diào)pH至中性后，加1倍量的水析 出結(jié)晶，抽濾，得黃色固體，少量水洗。干燥，稱重，得1.245g淺黃色3，4-二甲氧基-3 '，4 亞 甲二氧基查爾酮固體。收率為79.7%。
[0051] 3,4_二甲氧基-3'，4'_亞甲二氧基查爾酮氫譜如圖2所示NMR(400MHz，CDC1 3)S 7.76(d，J=15.5Hz，lH，CH-9)，7.66(d，J = 8.1Hz，lH，CH-5)，7.54(s，lH，CH-l)，7.36(d，J = 15.5Hz，lH，CH-8)，7.23(d，J = 8.2Hz，lH，CH-ll)，7.16(s，lH，CH-15)，6.90(d，J = 8.1Hz， 2H，CH-4，CH-12)，6.07(s，2H，CH2-18)，3.95(d，J=9.1Hz，6H，CH30-21，23).
[0052] 實施例3:2,3_二甲氧基-3'，4'_亞甲二氧基查爾酮的制備
[0054]具體的制備步驟如下
：
[0055] 取0.820g 3,4-亞甲二氧基苯乙酮和0.828g 2,3-二甲氧基苯甲醛，溶于60mL無水 乙醇中，滴加1.5mL50 % NaOH溶液，反應(yīng)48h。反應(yīng)液用稀鹽酸調(diào)pH至中性后，加1倍量的水析 出結(jié)晶，抽濾，得黃色固體，少量水洗。干燥，稱重，得0.858g淺黃色3，4-二甲氧基-3 '，4 ' -亞 甲二氧基查爾酮固體。收率為54.9%。
[0056] 3,4_二甲氧基-3'，4'_亞甲二氧基查爾酮氫譜如圖3所示NMR(400MHz，CDC13)S 8.08(d，J=15.8Hz，lH，CH-9)，7.65(d，J = 8.1Hz，lH，CH-5)，7.56(d，J=16.6Hz，2H，CH-8， CH-l)，7.27(d，J = 6.8Hz，2H，CH-ll)，7.10(t，J = 8.0Hz，lH，CH-12)，6.97(d，J = 8.1Hz，lH， CH-13)，6.90(d，J = 8.1Hz，lH，CH-4)，6.07(s，2H，CH2-18)，3.89(d，J = 3.0Hz，6H，CH30-23， 21)〇
[0057] 實施例4本發(fā)明提供的三種化合物的抗腫瘤活性測定
[0058] 1溶液的配制
[0059] 10 %FBS 培養(yǎng)液的配制：購買 HyClone RPMI Medium Modified 1640 培養(yǎng)基，每瓶 500mL，加入10 %的胎牛血清和1 %的雙抗溶液，培養(yǎng)基的配制在超凈工作臺上進(jìn)行，后放置 冰箱4 °C保存。
[0060] PBS緩沖液的配制:PBS磷酸緩沖液粉末，加入去離子水，充分溶解，高壓滅菌后放 置冰箱4 °C保存。
[0061 ] MTT溶液的配制:MTT干粉0.25g，溶于50mLroS緩沖液中，用0.22uM濾膜過濾除菌 后，放置冰箱-12 °C保存。
[0062]藥品母液配制方法：將本發(fā)明提供的三種化合物分別溶于40uL DMS0中，加入 2mLl0 % FBS，混合均勻，取400uL混合液稀釋10倍，配制成4mL 200uM濃度藥物母液。
[0063] 2會田胞
[0064]本發(fā)明抗腫瘤活性測定所用3種腫瘤細(xì)胞:人肝癌細(xì)胞HepG2,人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620 和人肺癌細(xì)胞A549。
[0065] 3抗腫瘤活性的測定
[0066] 3.1利用人肝癌細(xì)胞HepG2活性測試
[0067] HepG2細(xì)胞使用的培養(yǎng)液為含1%雙抗和10%的胎牛血清的PRMI1640細(xì)胞培養(yǎng)液， 培養(yǎng)條件為37°C、含5%C02的恒溫培養(yǎng)箱。具體步驟如下：
[0068] (1)取96孔板，邊緣孔用無菌roS充填，每孔加入100uL細(xì)胞懸液(細(xì)胞懸液濃度為 50000個/mL，每孔約5000個細(xì)胞）。
[0069 ] (2)加完細(xì)胞的96孔板放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，待貼壁后第二天給藥。
[0070] (3)將藥品母液分別稀釋不同倍數(shù)，配制成2uM、20uM、50uM、100uM濃度的藥物溶 液，加入到已貼壁細(xì)胞板的相應(yīng)孔中，調(diào)整每孔的濃度分別為1uM、10uM、25uM、50uM、100uM， 37°C恒溫培養(yǎng)箱孵育48h。
[0071] (4)藥物作用結(jié)束后，每孔加入20uL MTT(5mg/mL)，培養(yǎng)3-4h。
[0072] (5)終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加入150uL DMS0，37°C溫箱孵育10分鐘 或搖床低速振蕩10分鐘，之后用酶標(biāo)儀檢測490nm下各孔的0D值。
[0073] (6)根據(jù)0D值計算3種查爾酮和5-氟尿嘧啶的IC5〇值。
[0074] 3.2利用人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620活性測試。
[0075]操作方法同人肝癌細(xì)胞HepG2活性測試。
[0076] 3.3利用人肺癌細(xì)胞A549活性測試。
[0077]操作方法同人肝癌細(xì)胞HepG2活性測試。
[0078] 4 結(jié)果
[0079] 本發(fā)明提供的三種化合物的抗腫瘤活性測定結(jié)果如下表1所示：
[0080]表1 3'，4'_亞甲二氧基查爾酮衍生物的抗腫瘤活性測試結(jié)果
[0082]從上表結(jié)果可以看出：本發(fā)明涉及的三種3'，4'_亞甲二氧基查爾酮類衍生物，有 明顯的抗腫瘤細(xì)胞活性，且優(yōu)于對照藥品5-氟尿嘧啶。
[0083]以上這些實施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù) 人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式 進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種3'，4'-亞甲二氧基查爾酬類衍生物，其特征在于具有如下式I所示的結(jié)構(gòu)：其中，Rl、R2 W及R3分別獨立選自氨或Cl-3烷氧基。2. 如權(quán)利要求1所述的3'，4亞甲二氧基查爾酬類衍生物，其特征在于所述的Ci-3燒氧 基為甲氧基。3. 如權(quán)利要求1所述的3'，4'-亞甲二氧基查爾酬類衍生物，其特征在于Ri為氨或甲氧 基，R勸甲氧基，R3為氨或甲氧基。4. 如權(quán)利要求1或2所述的3'，4'-亞甲二氧基查爾酬類衍生物，其特征在于所述的衍生 物為：3-甲氧基-3'，4'-亞甲二氧基查爾酬、3,4-二甲氧基-3'，4'-亞甲二氧基查爾酬或2， 3-二甲氧基-3'，4'-亞甲二氧基查爾酬。5. -種制備權(quán)利要求1所述的3'，4'-亞甲二氧基查爾酬類衍生物的方法，其特征在于 包括W下步驟:式II所示的芳香醒和式III所示的芳香酬溶于無水乙醇中，在氨氧化鋼催化 下，室溫反應(yīng)48小時，反應(yīng)液用稀鹽酸調(diào)節(jié)抑到中性，加水析出結(jié)晶，抽濾，少量水洗，干燥， 即得式I所示的3'，4'-亞甲二氧基查爾酬類衍生物；其中，Ri、R2 W及R3分別獨立選自氨或Cl-3烷氧基。6. 權(quán)利要求1-4任一項所述的3'，4'-亞甲二氧基查爾酬類衍生物在制備抗腫瘤藥物中 的用途。7. 如權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于所述的腫瘤包括肝癌、結(jié)腸癌及肺癌。
【文檔編號】A61P35/00GK105968084SQ201610317210
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年5月12日
【發(fā)明人】董乃維
【申請人】哈爾濱醫(yī)科大學(xué)